Name: דגם אנוקסיה רעב לאיסכמיה / reperfusion ב ג elegans (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-11T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: למדו כיצד ליצור דגם אנוקסיה ורעב ב-C. elegans לחקירת איסכמיה וריפרפוז'ן. השיטה מאפשרת הערכת תמותה, תגובות התנהגותיות ושינויים נוירונליים במיקרוסקופ פלואורסצנטי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

איורים 1 ו -2 היו שפורסמו בעבר בביולוגיה ורפואה ברדיקלים חופשיים (Queliconi et al. 5) ויש לי זכויות יוצרים שנערכו על ידי Elsevier. עבודה זו נתמכה על ידי Fundação דה Amparo א Pesquisa לעשות Estado דה סאו פאולו (FAPESP), Instituto Nacional de Ciencia דואר Tecnologia דה Processos חיזורם Biomedicina, Nucleo דה Apoio א Pesquisa דה Processos חיזורם Biomedicina, USPHS NS064945 (קן), וUSPHS GM087483 (KN ). מנגל הוא דוקטורנט נתמך על ידי מענק FAPESP.

1. ג elegans צמיחה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את צלחות 35 מ&quot;מ צמיחה נמטודות מדיה (NGM) אגר זרע עם OP50 חיידקים, כמו לכל שיטות טיפוח סטנדרטיות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסנכרן סי אלגנס ידי הצבת 6 מבוגרים הרה להולדת על צלחת NGM seeded. הסר את המבוגרים לאחר ~ 100 ביצים כבר הונחו (~ שעה 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הצלחות במשך 3 ימים ב20 מעלות צלזיוס, ובשלב התולעים פיתחו לשלב בוגר צעיר והם אופטימליים לניסוי זה. פרוטוקולים אלטרנטיביים לסינכרון ג elegans מתוארים במקומות אחרים 10. </li></ol> 2. חומרים לAS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיץ M9 (22 מ&quot;מ KH 2 PO 4, 42 מ&quot;מ Na 2 HPO 4, 86 mM NaCl, 1 mM MgSO 4) צריך להיות מטוהר של חמצן על ידי equilibrating עם N 2 (יכול לשמש גם ארגון) במהלך 30 דקות לפני הניסוי וכל זמן מוקף בקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חור קטן (3 מ&quot;מרחב) במכסה של 1.5 מיליליטר microcentrifuge צינורות שבתולעים יוצבו במהלך AS. החור מאפשר חילוף גזים ללא שמירה על המכסה פתוח, כמו זה יכול להוביל לאידוי תקשורת מוגזם. </li></ol> 3. אנוקסיה / רעב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל את כל הניסויים לפחות בשלושה עותקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מיליליטר של RT, חיץ M9 מחומצן לכל צלחת 35 מ&quot;מ המכילה תולעים בוגרות צעירות גדלו כפי שתואר לעיל. להיות זהיר, כדי למנוע הסרת חיידקים מהצלחת (להוסיף M9 לקצוות שבו חיידקים לא זורעים). לאחר ~ 1 דקות התולעים צריכים להיות שוחים בM9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל קצה פיפטה 1 מיליליטר עם ארגון ה-BSA על ידי pipetting וגירוש פתרון BSA 1% סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להטות את הצלחת המכילה את התולעים בחיץ M9 בזהירות, להסיר M9 מאותו המקום שבו הוא הוסיף, ולמקם את ההשעיה בmicrocentrifuge הצינורות שהוכנו מראש. תן לנוח בקרח עד התולעים ירדו לחלק התחתון של הצינורות (~ 1-2 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הסכום המקסימאלי של M9 האפשרי מבלי להפריע לתולעים מהצינור (שעזב סביב 100 μl), להוסיף 1 מיליליטר של M9 וקר-מטוהר החמצן ובמקום צינור על קרח עד התולעים ליישב לתחתית שוב. חזור על 3x השלב האחרון. בכביסה האחרונה, להסיר M9 עד ~ 100 μl נשאר בצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצינורות עם התולעים בM9 deoxygenated בתוך תא חוסר חמצן / anoxic (ראה הוראות שלהלן, סעיף 3.6.1), או לחלופין, למכל אטום מותאם אישית (ראו הוראות שלהלן, סעיף 3.6.2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם קאמרי anoxic / חוסר חמצן מסחרי הוא לשמש, להשאיר כמה M9 מטוהר בתוך החדר לפני שמתחיל שלב 3.5 וחזור על שלב 3.5 פעם התולעים בתוך החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם קאמרי מותאם אישית הוא לשמש, תיאור מפורט של איך ליצור מנגנון עלות נמוכה מוצג בסוף הפרוטוקול זה ותואר על ידי קבוצה אחרת בעבר 11. בקצרה: <ol&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות שני חורים במכסת 250 מיכל מיליליטר טאפרוור מהסוג ולהוסיף מחברים צינור אליהם. אחד ישמש להזריק את תערובת הגז ואילו השני יהיה יציאת הגז לתוך אמבט מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את התולעים אל תוך החדר ולאטום את החדר באמצעות המכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גז עם N 2 זרימה מתמדת (100 מיליליטר / דקה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את המכל בתוך אמבט מים ב26 ° C. ודא שצינור היציאה הוא שקוע היטב במים ולכן אין החזרי אוויר ושאין דליפות במערכת (לכאורה על ידי בועות הנובעות מהחדר עצמו). </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התולעים ב26 מעלות צלזיוס למשך 20 שעה. </li></ol> 4. Reperfusion המדומה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי 20 שעות בתנאי AS, הסר את הצינורות מתא הדגירה לאוויר חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה ג elegans עם טיפ מצופה-BSA (כמו בשלב 3.3) על גבי OP50 זורעים 35 מ&quot;מ צלחת NGM. דגירה הצלחות ב 20 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות.אחרי זה, התולעים יהיו מוכנים להיות קלע. </li></ol> 5. זיהוי המלח נגד תולעים בשידור חי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות איסוף פלטינה, בקלילות לגעת בחלק העליון של הראש של התולעת. תולעים חיים יעברו לאחור לאחר שנגע. אם התולעים nonresponsive, להבקיע מת. לעתים, תולעת לא תזוז אחורה, אך עשוי להפגין תנועת ראש מצד לצד קל. אמנם לא מבחינה טכנית מת, התולעים האלה הם כמעט בטוחים לפוג תוך מספר שעות, וצריכים להיות הבקיע כמת. אם מחכה יותר מדי זמן כדי לצבור התולעים, בקיעה פנימית של צאצאים יכולה להתרחש ו&quot; שקיות של תולעים &quot;אלה יכולים להיקרע, מה שהופך את איתור הפגרים קשים מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את שני תולעי החיים ומתים מהצלחת כפי שהם נספרים להימנע מספירה כפולה. ניתן להעביר את התולעים חיים לצלחת נפרדת כדי לבצע מבחני התנהגותיים. כמות תולעי חיים ביחס לסך הכל מיוצגת כ% מתולעים ששרדו (איור 1 א </strong&gt;). </li></ol> 6. לגעת Assay תגובה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיאור מפורט של פרוטוקול זה הוצג בהארט, אן ג, ed. התנהגות (3 יולי 2006), WormBook, ed. ג elegans מחקר הקהילה, WormBook, doi/10.1895/wormbook.1.87.1, http://www.wormbook.org. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבקיע למגע תגובה, לזהות תולעים שנעים וקל לגעת בצד של הראש של התולעת (בסמוך לחלק האמצעי של הלוע) עם בחירת עפעף (איור 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם התולעת נעה אחורה, ציון מגיב כמו, אם לא, ציון nonresponsive כ( איור 1). חזור על שלב 10-15x זה עבור כל תולעת עם 10 מרווחי שניות. לחקור לפחות 10 תולעים בכל קבוצה יש את הנתונים מדויקים. אותו assay יכול לשמש כדי להעריך קדימה שינויי locomotory הבאים במגע קל לקיר הגוף האחורי. הקפד שלא לגעת בראש או זנב של התולעת, שכן זה מעורר התנהגות מובחנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, בשנתזנים של חברה בקרה גנטית [N2 בריסטול wild-type לMEC מוטציה חיובית, (mechanosensory) לשלילי - למשל CB1338 MEC-3 (e1338) IV] לכייל את הכוח שעם לגעת בתולעים. מדי קשה של גירוי יהיה לעורר תגובה התנהגותית במוטנטים MEC, מעט מדי לא לעורר השפעה בבקרת N2 wildtype. </li></ol></li></ol> 7. עצבי שינויים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להמחיש פוסט כשינויים עצביים, השתמש מתח המבטא GFP בתאי עצב MEC להגיב בנגיעה 4,5. יש נוירונים אלה תהליכים ארוכים שרצים לאורך קיר הגוף ובקיע מומים מורפולוגיים. בנוסף, המידע המורפולוגיים יכול להיות משולב עם מדדי התנהגותיים של תפקוד עצבי, כפי שתואר לעיל. זן אחד שיכול לשמש למטרה זו הוא TU2583, אשר זמין מג מרכז לגנטיקת elegans ומכיל transgene המשולב uIs25 להביע GFP לכאן ולכאןמ &#39;אמרגן MEC-18, או לחלופין TU2562, המכיל MEC-3 :: GFP היתוך משולב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את כרית agarose. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממסים 2% agarose במים, מביא ל1x M9 עם מלאי 10x, ולתחזק את הפתרון ב70 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים ירידה (~ 20 μl) של פתרון זה בשקופית זכוכית (25 מ&quot;מ x 75 מ&quot;מ) שהושמה בין שתי שקופיות אחרות, כל אחד מהם יש חתיכת קלטת אחת בצד התחתון שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח שקופיות זכוכית סופיות בניצב הראשון על גבי פתרון agarose 2%, ולתת לו להתקרר ב RT. זה אמור ליצור משטח שהוא בעובי של הקלטת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את השקופית העליונה ולהוסיף 10 μl של M9 המכיל tetramisole 0.1%, אשר יהיה לשתק את התולעים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר חלק (~ 10) לחיות תולעים על 2% שקופיות agarose. מניחים coverslip עליהם ולדמיין את ה-GFP באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי תחת מטרת 100X עם התאורה המתאימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פגוםנוירונים יציגו מחרוזת cytosolic קרום של דפוס פנינים בתהליכים, המורכבת מ&quot;פונקטום המרובים (איור 2 א), ו / או מומים שבו התהליכים מופיעים להיות שבורים (איור 2). רוזן &quot;פונקטום וליקויים בשני נוירונים לכל תולעת, תוך שימוש בסך של לפחות 10 תולעים. </li></ol> 8. תוצרת מעבדת Hypoxic קאמרי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגנון טאפרוור, מיכל סגר, אטום ניתן retrofit כתא anoxic. תשמור על עצמך כדי לבחור מיכל שהוא קטן כמו אפשרי. מיכל קטן יוצר סביבת חוסר חמצן מהיר יותר וקל יותר להשתלב באמבט המים (איור 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות שני חורים על המכסה (ניתן לעשות זאת עם מברג או על ידי חימום מלקחיים ומאלצים לתוך המכסה) והכנס את מחבר פלסטיק או מתכת שמתאים לצינורות (איור 5 א). השתמש בדבק שיכול להיות ממוקם מתחת למים, וגם מקבל קשה לאחר ייבוש, הימנעות תנועה שלהמחבר ולכן צמצום האפשרות של זליגה (איור 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המכל צריך להיות ממוקם בתוך אמבט המים, כך שהוא שקוע לחלוטין (איור 4). לטבול את המכל, השתמש במשקל בקבוק או במשקל צלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחד מחיבורי הצינור ישמש להציג את תערובת גז והצינור האחר יפעל כהקלה בלחץ, ולכן הוא צריך להישאר מתחת למים, כך שהמכל מסוגרת מהסביבה החיצונית (איור 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרכב האוויר יכול להיות מווסת על ידי שימוש בגז בהתאמה אישית, בקרי זרימה המוניים או כל מנגנון שמערבב את הגזים הרצויים. זרימת הגז צריכה להיות מבוקרת, כמו זרימה גבוהה יכולה ליצור אידוי מוגזם. לדוגמא, במכל מיליליטר 250, 100 מיליליטר / דקה של גז תספק מרחב טוב לתולעים ושטף מתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אורכו של הצינור צריך להישמר עד למינימום, כפי שהם יכולים להיות חדירים לגז,llowing הכניסה של O 2. חשוב להימנע משימוש בסיליקון, Tygon צינורות כחומרים אלה הם חדירים לחילוף גזים. אנחנו מעדיפים צינורות פוליפרופילן או ניילון. זכוכית או צינורות מתכת לשמור על הגזים טובים, אבל גם יותר קשים לעבוד איתו. </li></ol>

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li>
<li>Maine, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+gene+function+in+Caenorhabditis+elegans+using+RNA-mediated+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Briefings+Funct.+Genom.+Proteom%22%5BJournal%5D)">Studying gene function in Caenorhabditis elegans using RNA-mediated interference.</a> Briefings Funct. Genom. Proteom. 7 (3), 184-194 (2008).</li>
<li>Vanden Hoek,, L, T., Shao, Z., Li, C., Zak, R., Schumacker, P. T., Becker, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reperfusion+injury+on+cardiac+myocytes+after+simulated+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Reperfusion injury on cardiac myocytes after simulated ischemia.</a> Am. J. Physiol. 270 (4), 1334-1341 (1996).</li>
<li>Ba Scott,, Avidan, M. S., Crowder, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+hypoxic+death+in+C.+elegans+by+the+insulin%2FIGF+receptor+homolog+DAF-2%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Regulation of hypoxic death in C. elegans by the insulin/IGF receptor homolog DAF-2.</a> Science. 296 (5577), 2388-2391 (2002).</li>
<li>Queliconi, B. B., Marazzi, T. B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicarbonate+modulates+oxidative+and+functional+damage+in+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Rad.+Biol.+Med%22%5BJournal%5D)">Bicarbonate modulates oxidative and functional damage in ischemia-reperfusion.</a> Free Rad. Biol. Med. 55, 46-53 (2013).</li>
<li>Wojtovich, A. P., DiStefano, P., Sherman, T., Brookes, P. S., Nehrke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+ATP-sensitive+potassium+channel+activity+and+hypoxic+preconditioning+are+independent+of+an+inwardly+rectifying+potassium+channel+subunit+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial ATP-sensitive potassium channel activity and hypoxic preconditioning are independent of an inwardly rectifying potassium channel subunit in Caenorhabditis elegans.</a> FEBS Lett. 586 (4), 428-434 (2012).</li>
<li>Dasgupta, N., Patel, A. M., Scott, B. A., Crowder, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxic+Preconditioning+Requires+the+Apoptosis+Protein+CED-4+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Hypoxic Preconditioning Requires the Apoptosis Protein CED-4 in C. elegans.</a> Curr. Biol. 17 (22), 1954-1959 (2007).</li>
<li>Jia, B., Crowder, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volatile+anesthetic+preconditioning+present+in+the+invertebrate+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Volatile anesthetic preconditioning present in the invertebrate Caenorhabditis elegans.</a> Anesthesiology. 108 (3), 426-433 (2008).</li>
<li>Wojtovich, A. P., Sherman, T. A., Nadtochiy, S. M., Urciuoli, W. R., Brookes, P. S., Nehrke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SLO-2+is+cytoprotective+and+contributes+to+mitochondrial+potassium+transport%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">SLO-2 is cytoprotective and contributes to mitochondrial potassium transport.</a> PloS One. 6 (12), e28287(2011).</li>
<li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cerón, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Caenorhabditis+elegans+methods%3A+synchronization+and+observation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> J. Vis. Exp. (64), e4019(2012).</li>
<li>Fawcett, E. M., Horsman, J. W., Miller, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creating+defined+gaseous+environments+to+study+the+effects+of+hypoxia+on+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Creating defined gaseous environments to study the effects of hypoxia on C. elegans.</a> J. Vis. Exp. (65), e4088(2012).</li>
<li>Butler, J. A., Mishur, R. J., Bokov, A. F., Hakala, K. W., Weintraub, S. T., Rea, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+the+anaerobic+response+of+C.+elegans+using+GC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Profiling the anaerobic response of C. elegans using GC-MS.</a> PLoS One. 7 (9), 10-1371 (2012).</li>
<li>Padilla, P. A., Nystul, T. G., Zager, R. A., Johnson, A. C., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dephosphorylation+of+cell+cycle-regulated+proteins+correlates+with+anoxia-induced+suspended+animation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Dephosphorylation of cell cycle-regulated proteins correlates with anoxia-induced suspended animation in Caenorhabditis elegans.</a> Mol. Biol. Cell. 13 (5), 1473-1483 (2002).</li>
<li>Jiang, H., Guo, R., Powell-Coffman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Caenorhabditis+elegans+hif-1+gene+encodes+a+bHLH-PAS+protein+that+is+required+for+adaptation+to+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">The Caenorhabditis elegans hif-1 gene encodes a bHLH-PAS protein that is required for adaptation to hypoxia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (14), 7916-7921 (2001).</li>
<li>Twumasi-Boateng, K., Wang, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+age-dependent+reversal+in+the+protective+capacities+of+JNK+signaling+shortens+Caenorhabditis+elegans+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">An age-dependent reversal in the protective capacities of JNK signaling shortens Caenorhabditis elegans lifespan.</a> Aging Cell. 11 (4), 659-667 (2012).</li>
<li>Wang, Y., Chen, J., Wei, G., He, H., Zhu, X., Xiao, T., Yuan, J., Dong, B., He, S. S. kogerbøG., Chen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Caenorhabditis+elegans+intermediate-size+transcriptome+shows+high+degree+of+stage-specific+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">The Caenorhabditis elegans intermediate-size transcriptome shows high degree of stage-specific expression.</a> Nucleic Acids Res. 39 (12), 5203-5214 (2011).</li>
<li>Perry, C. N., Huang, C., Liu, W., Magee, N., Carreira, R. S., Gottlieb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenotransplantation+of+mitochondrial+electron+transfer+enzyme%2C+Ndi1%2C+in+myocardial+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Xenotransplantation of mitochondrial electron transfer enzyme, Ndi1, in myocardial reperfusion injury.</a> PloS One. 6 (2), e16288(2011).</li>
<li>Chai, Y., Li, W., Feng, G., Yang, Y., Wang, X., Ou, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+Imaging+of+Cellular+Dynamics+During+Caenorhabditis+elegans+Postembryonic+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">Live Imaging of Cellular Dynamics During Caenorhabditis elegans Postembryonic Development.</a> Nature Protoc. 7 (12), 2090-2102 (2012).</li>
<li>Nehrke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reduction+in+intestinal+cell+pHi+due+to+loss+of+the+Caenorhabditis+elegans+Na%2B%2FH%2B+exchanger+NHX-2+increases+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">A reduction in intestinal cell pHi due to loss of the Caenorhabditis elegans Na+/H+ exchanger NHX-2 increases life span.</a> J. Biol. Chem. 278 (45), 44657-44666 (1074).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

כפי שכבר בשימוש נרחב בג elegans למודל פציעת IR. כמה נקודות מפתח צריכה להיות מודגשות לפרוטוקול זה: סי אלגנס הם עמיד למגוון רחב של פציעות, המצדיק את הצורך ב3 עלבונות נלווים (חום, רעב ואנוקסיה) כדי להשיג מוות באמצעות מערכת זו. אנוקסיה לבד לא הורגת את התולעים בחלון זה זמן 14. יתר על כן, עלייה בטמפרטורה היא לחץ נוסף, ולכן חשוב לעקוב מקרוב. לאמיתו של דבר, רעב אינו תורם באופן משמעותי לתואר של תמותה שנצפתה 7, כשלעצמה, אבל זה נראה להפחית שונות בין משכפל ניסיוני. בהתחשב בכך שלא יכול להיות שונה משמעותי מיום ליום, שזה חשוב ביותר כדי להשוות דגימות להפעיל ישירות במקביל, ולחזור על ניסויים על פני ימים רבים. באופן כללי, תוצאות נמדדות בשלוש צלחות נפרדות של 50-100 תולעים / תנאי ניסוי ואלה הםn בממוצע ונחשב כלשכפל ניסיוני אחד. באופן כללי, בין שבעה לתשעה משכפל נראה מספיק כדי להשיג או לשלול את מובהקות סטטיסטיות. השלב ההתפתחותי של התולעים המשמשים בניסוי גם צריך להיות במעקב צמוד כמו הרגישות של שלבים שונים לניזק משתנה באופן משמעותי 15,16. השימוש של צעירים הוא סטנדרטי, ותולעי שלב זחל (L3 וL4) נראים עמיד יותר להשפעות המזיקות של AS (נתונים שלא פורסמו). פרוטוקול זה מציג שתי דרכים לביצוע הניסויים, אחד באמצעות מנגנון מתוצרת מעבדה (באמצעות מכולות טאפרוור מסוג וקלט גז 11) ואחרים באמצעות תא חוסר חמצן מסחרי 4,6. ניתן להשיג אנוקסיה באמצעים אחרים שצורכים את החמצן, כפי שתואר במקומות אחרים 13,17. השימוש בטכניקות חלופיות כדי ליצור סביבת חוסר חמצן יכול לשנות את הזמן כמו הדגירה דרושהכדי ליצור את הכמות הרצויה של מוות. מיקוד ~ הישרדות 20% הוא נקודת מוצא אידיאלית ללימוד התערבויות מגן, בעוד 80% הוא באופן דומה אידיאליים עבור התערבויות שתחמרנה את ההשפעות המזיקות של AS. עוד אזהרה חשובה היא הזמן שבו תולעים מתים / חיים עשרות הצופה. אם הזמן לניתוח מורחב מעבר 24 שעות, הנתונים עלולות להטעות שכן תולעים מתים הפכו קשים יותר ויותר לזהות. זה יכול להיות בגלל פגרי תולעת הופכים שקופים יחסית לאורך זמן, אלא גם לעובדה שעוברים מופרים יכולים להתפתח לצאצאים לאחר המוות הפנימי של הפגרים ולשבש אותם כפי שהן עולות. הניתוח של מורפולוגיה עצבית יכול להיות שונה כדי לבחון את דפוסי ביטוי חלבון 18, פיצול גרעיני 4 ופרמטרים נוספים 19 ידי החלפת זן תולעת המבטא את סמן מקודד גנטי המתאים. אזהרה סופית אחת היא שההדמיה שלצריכים לעשות תהליכים עצביים פחות מ 30 דקות לאחר הצבת התולעים בשקופית. בעלי חיים נשמרים תחת הרדמה בשקופיות לתקופות ארוכות יותר יכולות להציג נזק כעצמאי. התאם את כמות בעלי חיים לכל שקופית על פי הזמן הדרוש כדי לעקוב ולנתח אותם.

סי אלגנס הוא נמטודות שאומצה באופן נרחב כאורגניזם מודל אוקריוטים תאיים מאז השקתו ב -1 ברנר. זהו מודל זול, פשוט, ותכליתי, המאפשר קישורים קלים בין שינויים ופנוטיפי הגנטיים משנים 2. איסכמיה מאופיינת בחוסר של חומרים מזינים ואספקת חמצן לרקמות, ואחריו reperfusion, כאשר פרץ של מיני חמצן תגובתי מיוצר 3 ורוב הנזק מתרחש. ב2002, מודל של איסכמיה / reperfusion (IR) בג elegans פותח 4 מעורב הגשה כל התולעת לאנוקסיה, מחסור באבות מזון ועומס חום למשך כ 20 שעה אחרי 24 שעות בתנאים רגילים. למרות שמודל זה הוא מבחינה טכנית אנוקסיה רעבה (AS) מצב, מוות של תאים מתרחש באמצעות מנגנונים הנשמרים ביונקים, לרבות נזק שנגרם על ידי חמצון במהלך reperfusion &lt;sup&gt; 5. יתר על כן, בדומה לIR יונקים, נזקים הנגרמים על ידי AS ב C. elegans ניתן למנוע על ידי נפשית מראש איסכמי 6,7 או 8,9 נפשית מראש חומר הרדמה. הפרוטוקולים שלהלן מדגימים כיצד לחקות IR בג elegans באמצעות מודל AS, איך להבקיע מומים מורפולוגיים והתנהגותיים הנובעים מAS, ואיך להתאים את הפרוטוקול באופן שמאפשר לניסוי שיבוצע בהשקעה ראשונית נמוכה באמצעות חלופה קאמרית בקלות-נבנה בהזמנה אישית .

<table><tbody><tr><td>N2&nbsp; זן</td><td>CGC</td><td></td><td>זן מסוג Wild. http://www.cbs.umn.edu/CGC/</td></tr><tr><td>TU2583 uIs25 (Pmec-18::GFP)</td><td>CGC</td><td>TU2583</td><td>טרנסגן פלואורסצנטי משולב המשמש לתיוג נוירוני מגע.
http://www.cbs.umn.edu/CGC/< לאדם></td></tr><tr><td>CB1338 mec-3 (e1338)IV</td><td>CGC</td><td>CB1338</td><td>מוטציה קנונית mec-3 שאינה רגישה למגע.
http://www.cbs.umn.edu/CGC/< לאדם></td></tr><tr><td>צינור מיקרוצנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>0030 120.086</td><td></td></tr><tr><td>ניקון Eclipse TE2000-U מיקרוסקופ&nbsp;</td><td>Nikon USA</td><td>TE2000-U</td><td></td></tr><tr><td>חממה בטמפרטורה נמוכה</td><td>שלדון ייצור בע"מ</td><td>דגם 2005</td><td></td></tr><tr><td>קיסם</td><td></td><td></td> ריסים <td>ניתן להכין קיסם ריסים על ידי הצמדת ריס לקיסם עץ, ולאחר מכן הצמדת הקיסם לפיפטה מזכוכית של פסטר (<חזק>איור 3</חזק>).</td></tr><tr><td>תא היפוקסי</td><td>Coy</td><td>8307030</td><td>תא כפפות היפוקסי מצויד בזרז פלדיום ובקר CO2.</td></tr></tbody></table>

דגם אנוקסיה רעב לאיסכמיה / reperfusion ב<em&gt; ג elegans</em

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

פרוטוקולים לאנוקסיה / רעב בסי אלגנס אורגניזם מודל הגנטי לדמות איסכמיה / reperfusion. תולעים מופרדים מחיידקים שבמזון והניחו מתחת לאנוקסיה 20 שעה (איסכמיה מדומה), ולאחר מכן עברו לאווירה נורמלית עם אוכל (reperfusion המדומה). תוצאות פרדיגמה ניסוייות זה במותו גדל ונזק עצבי, וטכניקות מוצגות להעריך כדאיות האורגניזם, שינויים במורפולוגיה של תהליכי מגע של תאי עצב, כמו גם מגע רגיש, המייצג את הפלט ההתנהגותי של תפקוד עצבי. לבסוף, שיטה לבניית חממות חוסר חמצן באמצעות מיכלי אחסון מטבח המשותף מתוארת. התוספת של יחידת בקרת זרימה המונית מאפשרת לשינויים שנעשו בתערובת הגז בחממות המותאמת אישית, ואמבט מים במחזור מאפשר לשניהם בקרת הטמפרטורה ועושה את זה קל לזהות דליפות. שיטה זו מספקת אלטרנטיבה בעלות נמוכה לאופן מסחרייחידות זמינות.

הכפפת ג elegans ל20 שעות של AS ב26 מעלות צלזיוס בתא דגירה תוצרת מעבדה מותאמת אישית כפי שתואר (סעיף 3.6.2) הביא לתמותה משמעותית (איור 1 א) 5. דימות פלואורסצנטי הבאה של &quot;פונקטום והפסקות בתהליכים עצביים ה-GFP שכותרת של ניצולים אישרה את נוכחותו של מומים מורפולוגיים (איור 2). הניצולים גם הגיבו היטב לקיר גוף מגע קל (איור 1). מודל זה כבר בשימוש על ידי מספר קבוצות כדי ללמוד איך נטייה גנטית, התערבות תרופות, ופלסטיות מטבולית משפיעה על תוצאות AS תלויות 4-6,8,9,12,13. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51231/51231fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51231/51231fig1.jpg" /> איור 1. ג elegans הישרדות ומגע תגובה לאחרAS.) אחוז מהתולעים כי תערוכת 24 לאחר כשעת הישרדות. זן N2 הוא הרקע הגנטי הסוג בר, וKWN85 מכיל transgene משולב שמתייג נוירונים MEC עם GFP. ב &#39;) בתגובה למגע גירויים של החיים ג elegans (הזנים N2) לאחר AS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51231/51231fig1highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51231/51231fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51231/51231fig2.jpg" /> איור 2. מומים (PLML וPLMR) לגעת שינויי נוירון לאחר AS. נוירון מגע כגון תהליכים והפסקות (א) או ההצטברות של אגרגטים GFP בתהליכים (ב &#39;) והמפותלים היו במעקב שבנותרו בחיים בהרדמה ג eleg<html> ans לאחר AS. <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51231/51231fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51231/51231fig3.jpg" /> איור 3. איסוף ריס. איסוף עפעף מורכב. בהבלעה, פירוט של הריסים דבוקים לעץ הקיסם. <img alt="איור 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51231/51231fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51231/51231fig4.jpg" /> איור 4. קאמרי חוסר חמצן בתוך אמבט המים מתוצרת מעבדה. מיכל סגור מוכן להתחיל את הניסוי. חצים מצביעים על כניסת הגז ויציאה ומשקל הבקבוק משמש כדי למנוע ממנו צף. 231fig5.jpg &quot;/&gt; איור 5. פרטים של הצד הפנימי וחיצוני של מכסה מיכל. א) בצד חיצוני של מיכסה מיכל, המציין את הצינור ומחבר שלו מחובר לצד חיצוני של מיכסה מיכל חור. שנעשה בעבר ב &#39;), המציין את מחבר הצינור מחובר לחור שנעשה בעבר.

פרוטוקול מתואר המשתמש אנוקסיה / רעב בג elegans למודל איסכמיה / reperfusion. תוצאות תפקודיות כוללות תמותה מוגברת, ליקויים גלויים בתהליכים עצביים-GFP שכותרתו, ותגובות התנהגותיות לקויים הדורשות תפקוד עצבי.

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא לדמות איסכמיה ורפרפוזיה ב-sea elegance. דבר זה מושג על ידי העברת sea elegance למבחנה מיקרוסקופית ושטיפת החיידקים החוצה. השלב השני הוא יצירת סביבה אנוקסית.באמצעות תא היפוקסיה שהוכן במעבדה, החיות נחשפות לאנוקסיה למשך 20 שעות ולאחר מכן מועברות לתנאים אירוביים לאחר 24 שעות. השלב הסופי הוא ספירת בעלי החיים המתים ובדיקת התגובה למגע. שינויים נוירונליים נבחנים גם באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית.בסופו של דבר, הרעבה תחת אנוקסיה ב-C. elegans משמשת ליצירת תנאים דומים לאלו הנראים באיסכמיה, פגיעה באאוקריוטים עליונים, במודל גנטי פשוט וגמיש יותר. היתרונות של טכניקות אלו על שיטות קודמות של השחזרת איסכמיה בתאים או בלבבות מבודדים הם ש-C. elegans הוא מודל גנטי חזק מאוד וכן אורגניזם שקוף. אורגניזמים אלו מאפשרים שימוש במגוון נוזלים וטכניקות שונות. בנוסף לכך, אנו מראים לכם כיצד להשתמש בתא היפוקסיה וסביבה מעבדה פשוט, שיעלה רק כמה דולרים, במקום להשתמש בתא היפוקסיה או בתא סביבתי יקר.באופן כללי, חוקרים העוסקים בנושא זה צריכים להיות מודעים למספר נקודות מפתח, כגון ניקוי התמיסות (purging the buffers), הקפדה רבה על דירוג התולעים, ושמירה על טמפרטורה ורמות חמצן קבועות. כל הנקודות הללו עשויות לשנות את תוצאות הניסוי. כדי להכין תא היפוקסיה מותאם אישית, ניתן להתאים מיכל אטום מסוג Tupperware כך שישמש כתא אנוקסי. יש לבחור במיכל הקטן ביותר האפשרי, שכן מיכל קטן יוצר סביבה היפוקסית במהירות רבה יותר וקל יותר להכניסו לאמבט המים.בצעו שני חורים במכסה בגודל המתאים למחבר פלסטיק או מתכת שמתאים לצנרת; קבעו את המחבר במקומו באמצעות דבק העמיד במים שמתקשה לאחר הייבוש, כדי למנוע תזוזה של המחבר ובכך להפחית את הסיכוי לדליפה. לחלופין, ניתן להשתמש באטם ניאופרן כדי לסייע באיטום המחבר למכל. הניחו את המכל בתוך אמבט המים כך שיהיה טבול לחלוטין.כדי לשקוע את המכל, השתמשו במשקולת לבקבוקים או במשקולת צלילה. אחד מחיבורי הצינור ישמש להחדרת תערובת גזים, והצינור השני ישמש כשסתום לשחרור לחץ.לכן, יש להשאירו תחת המים כדי שהמכל יהיה אטום מהסביבה החיצונית. כדי להתחיל בגידול של c elegance כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט, הכינו M nine buffer ונקו את החמצן על ידי איזון עם חנקן 30 דקות לפני הניסוי, תוך שמירה על התמיסה מוקפת בקרח. צרו חור קטן במכסה של מבחנות מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 milliliter שבהן יוכנסו התולעים במהלך הרעבת האנוקסיה.החור מאפשר חילוף גזים מבלי להשאיר את המכסה פתוח, דבר שעלול להוביל לאידוי מוגבר של המצע. הוסיפו 1 ml של תמיסת באפר M9 מחומצנת בטמפרטורת החדר לכל צלחת של 35 mm המכילה תולעים בוגרות צעירות. יש להיזהר כדי להימנע מהסרת חיידקים מהצלחת.לאחר כדקה, התולעים צריכות לשחות ב-M nine. לאחר מכן, יש לצפות קצה של פיפט של 1 מיליליטר ב-bovine serum albumin או BSA, על ידי שאיבה והוצאה של תמיסת 1%BSA סטרילית. יש להטות בזהירות את הצלחת המכילה את התולעים בבופר M nine ולהסיר את ה-M nine מאותה נקודה שבה הוא הוסף.לאחר מכן, העבירו את התוסיף למבחנות מיקרו-צנטריפוגה שהוכנו מראש. הניחו לדגימות לנוח בקרח עד שהתולעים ישקעו לתחתית המבחנות. הסירו את הכמות המקסימלית האפשרית של M9 מהמבחנה, מבלי להפריע לתולעים.לאחר מכן, הוסיפו 1 mL של M9 מקורר על קרח ומנוקה מחמצן, והניחו את המבחנה על קרח עד שהתולעים שוקעות לתחתית. חזרו על שלב שטיפה זה שלוש פעמים. בשטיפה האחרונה, הסירו את ה-M9 עד שנותרו במבחנה כ-100 µL.כעת העבירו את המבחנות עם התולעים בבופר M9 נטול חמצן אל התא ואטמו את התא באמצעות המכסה עם זרימת חנקן קבועה של 100 milliliters per minute. הניחו את המיכל בתוך מקלח מים בטמפרטורה של 26 degrees Celsius. ודאו שצינור היציאה טבול היטב במים כדי למנוע חזרת אוויר ושאין דליפות במערכת.המשיכו להדגיר את התולעים בטמפרטורה של 26 °C למשך 20 שעות. לאחר ההדגירה, העבירו באמצעות פיפט עם טיפ מצופה BSA את ה-sea elegance לצלחת nematode growth media בקוטר 35 מילימטר. הדגירו את הצלחות בטמפרטורה של 20 °C למשך 24 שעות. לאחר מכן, התולעים יהיו מוכנות לדירוג.באמצעות פיקת פלטינה, גע בעדינות בחלקו העליון של ראש התולעת החיה. תולעים יזוזו לאחור לאחר המגע; אם התולעים אינן מגיבות, סמן אותן כמתות. לעיתים תולעת לא תזוז לאחור, אך עשויה להפגין תנועה קלה של הראש מצד לצד; למרות שאינן מתות מבחינה טכנית, תולעים אלו צפויות למות בתוך שעות ויש לסמן אותן כמתות.חזור על שלב זה 10 עד 15 פעמים עבור כל תולעת במרווחי זמן של עשר שניות. בדוק לפחות 10 תולעות בכל קבוצה כדי לקבל נתונים מדויקים להדמיות של שינויים עצביים לאחר הרעבה ואנוקסיה. השתמש במאבב המבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק או GFP בנוירוני mech המגיבים למגע.הנח טיפה של תמיסת 2%ARO על למסת זכוכית שהוצבה בין שתי למסות אחרות שעל צדם התחתון מודבק פיס נייר דבק בודד. הנח למסת זכוכית סופית בצורה מאוזנת (ניצבת) לראשונה מעל תמיסת ה-2%ARO והנח לה להתקרר בטמפרטורת החדר. פעולה זו אמורה ליצור שכבה בעוביו של נייר הדבק.לאחר מכן, הסר את השקופית העליונה והוסף 10 µL של M9 המכיל 0.1% tetra aole, אשר יקבע את התולעים. העבר כ-10 תולעים חיות אל שקופית ה-2% aro והנח מעליהן זכוכית כיסוי. הדמ את ה-GFP באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה תחת עדשה של 100x עם תאורה מתאימה.נוירונים פגומים יציגו דגם של "מחרוזת פנינים" בממברנה הציטוזולית בתהליכים (processes), המורכב ממספר נקודות (punctum) ו/או פגמים שבהם התהליכים נראים שבורים. ספרו את הנקודות והפגמים בשני הנוירונים עבור כל תולעת, תוך שימוש בבסך של לפחות 10 תולעים. חשיפת *C. elegans* ל-20 שעות של אנוקסיה והרעבה ב-26 °C בתא דגירה מותאם אישית שהוכן במעבדה הובילה לתמותה משמעותית.השורדים הגיבו באופן לקוי גם למגע קל בדופן הגוף. הדמיה פלואורסצנטית עוקבת של נקודות ושברים בתהליכים העצביים של השורדים, המסומנים ב-GFP, איששה את קיומם של מומים מורפולוגיים. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה כיצד להוביל לאיסכמיה.תצפית בתאי היפוקסיה שיוצרו במעבדה, כאשר עליך להיות מסוגל למדוד מוות וכן שינויים נוירולוגיים ב-Caenorhabditis elegans. מודל זה שימש קבוצות רבות כדי לחקור כיצד התערבויות תזונתיות ומטבוליזם יכולים להשפיע על חיים ומוות בתנאי היפוקסיה.

an-anoxia-starvation-model-for-ischemiareperfusion-in-c-elegans

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

נייר עמדה זה מפרט כיצד להשתמש רציפה הזרימה לתאי חוסר חמצן כדי ליצור אווירה עם ריכוזים מוגדרים של...

יצירת סביבות גזיים מוגדרים כדי לחקור את ההשפעות של היפוקסיה על<em&gt; ג elegans</em

השתמש של מיקרוסקופיה מעבר זמן לדמיין אנימצית מושעה anoxia מושרה ב<em&gt; ג elegans</em&gt; עוברים

אנו מתארים שיטות ללמוד היבטים של amylopathies...

<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; מערכת מודל לחקר Amylopathy

כדי לחקור את הקשר בין הומאוסטזיס חלבון, מתח והזדקנות, עקבנו אחר שינויים בקיפול החלבון על ידי מעקב אחר תפקוד לקוי של חלבון, לוקליזציה של חלבון בתא ויציבות החלבון ברמת האורגניזם, התא והחלבון, תוך שימוש במטזואן Caenorhabditis elegans הניתן לטיפול גנטי כמערכת מודל.

שימוש ב-Caenorhabditis elegans כמערכת מודל לחקר הומאוסטזיס חלבון באורגניזם רב-תאי

כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של reperfusion איסכמיה מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה. מודל זה של פגיעת איסכמיה-רה-פרפוזיה במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion הוקמה כדי לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. אנו יש מאתרים ומפסיקים את עורק המוח התיכון נכון ולא נכון עורק תרדמני, להחזיר את זרימת הדם לאחר 10 או 40 דקות של איסכמיה.

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

כאן, אנו מאפיינים את התגובות הסלולר מדגיש התגובה התאית ב-נמטודות C. אלגיה על ידי מדידת ההפעלה של כתבים פלורסנט ההמרה ולומר רגישות ללחץ פיזיולוגי.

מדידות התגובות הפיזיולוגיות של הלחץ בג. אלגיה

כאן, אנו מציגים ומתארים נרחב נגיש מתודולוגיות ניצול כמה דגמים נמטודות צדדי, כולל היפרפעיל יון ערוץ המושרה נמק וחלבון הנגרמת המושרה נוירורעילות, כדי לפקח ולנתח את בסיס הסלולר והמולקולריים של מחלות ניווניות הקשורים גיל.

דוגמנות גיל הקשורים מחלות ניווניות בתוך האלאים

הדמיה ג elegans עוברים באמצעות מיקרוסקופ Epifluorescent ותוכנות קוד פתוח

בסיסי<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; שיטות: סנכרון תצפית

למדו כיצד ליצור דגם אנוקסיה ורעב ב-C. elegans לחקירת איסכמיה וריפרפוז'ן. השיטה מאפשרת הערכת תמותה, תגובות התנהגותיות ושינויים נוירונליים במיקרוסקופ פלואורסצנטי.

דגם אנוקסיה רעב לאיסכמיה / reperfusion ב

גלה סרטונים נוספים