Name: בדיקה דרוזופילה Olfaction עם Assay Y-מבוך (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: למדו לבדוק תגובות ריח בדרוזופילה melanogaster באמצעות מבחן מבוך Y פשוט. שיטה זו מאפשרת הערכת העדפות לריחנים שונים ותורמת להבנת מנגנוני עיבוד חושי בחרקים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ל4 ביקורות בעילום שם לעבודה שלהם כדי לשפר את כתב היד. אנו מודים למרכז הלאומי de la משוכלל ונדיר Scientifique לתמיכה הכספית שלה לMBG וי.ג., ואוניברסיטת דה בורגון והמשרד הצרפתי למחקר ל- MMS. מחקר במעבדה י.ג. ממומן על ידי המועצה האירופית למחקר (ERC החל גרנט, GliSFCo-311,403), Nationale de la משוכלל ונדיר סוכנות הידיעות (ANR-JCJC, GGCB-2010), Conseil האזורי דה בורגון (פייבר), וCNRS.

1. לפני שמתחיל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מניית התייחסות isogenized נושאות פנוטיפים התנהגותיים יציבים וחזקים. אין חוק כללי לבחירת המניה זו, שכן כל הבקרות האפשריות עשויות לשאת אללים רקע הטרוגנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בלחץ שליטה זו להכלאה לאחור כל מניות אחרות הדרושים לצעדים מאוחר יותר. צעד backcrossing זה מיוצג בדרך כלל על ידי לפחות 5 צלבים רצופים של נקבות בתולה יחידה (כדי לאפשר מעבר מעל בין כרומוזומים הומולוגיים אפשרי) ל2-3 זכרים התייחסות isogenic 5. שלב זה חשוב לhomogenize הרקע הגנטי בין מניות זבוב השונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על מניות דרוזופילה על קמח תירס סטנדרטי (9%), שמרים (10%), ובינוני אגר (1.5%) השלים עם (0.4% para-הידרוקסי-נזואט תיל) אנטיביוטיקה במחזור אור / חושך 12-HR ב25 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג ניסויי chemosensory בחדר בטמפרטורה מבוקרת (25 מעלות צלזיוס) תחת אור אדום רחוק(כדי למנוע את תרומתם של רמזים חזותיים, ולהתמקד באותות chemosensory). באופן קבוע לחדש את האוויר מהחדר כדי לאוורר את האזור שבין כל ניסוי. </li></ol> 2. תגובת חוש הריח באמצעות assay Y-מבוך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרעיב את הזבובים ל16-18 שעות ב25 מעלות צלזיוס בצינורות זכוכית המכילים מגבת נייר רטובה לפני הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצטרפות מחבר Y-צורה לשתי צלוחיות זכוכית ובקבוקון קטן מפלסטיק (בקבוקון טעינה). השתמש 1 טיפים פיפטה מיליליטר שעוברים דרך פקקי הקצף לקשר את המחבר לשלושה בקבוקונים, וכדי להשיג Y-מבוך סגור היטב. חותכים את הקצוות הצרים של שני טיפים פיפטה (~ 2 מ&quot;מ קוטר, כדי להימנע מכל החזרה של הזבוב ברגע שהוא עשה את ההחלטה שלו) כדי ליצור שני בקבוקונים &quot;מלכודת&quot;, וסופו של דבר גדול של פיפטה קצה אחד כדי ליצור את &quot;ההעמסה&quot; צינור (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רק לפני חיבור בקבוקוני &quot;מלכודת&quot; (איור 1), במקום אחד ~ 6 נייר סינון בקוטר מ&quot;מכל בקבוקון. הוסף 40 μl של פתרון odorant על נייר מסנן אחד, ו40 μl של מקביל הממס על נייר הסינון השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג את עשרה 4 עד 9 זבובים בן יומו לתוך הבקבוקון &quot;טעינה&quot;. אל תשתמש בהרדמה 2 CO בהעברה זו, שכן יש לו השפעה חזקה על התנהגות 10. במקום זאת להשתמש בקירור קצר על קרח. מניפולציה נכונה של זבובים מורדמים חשובה להגביל את הלחץ על הנושאים עד כמה שניתן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע סדרה של בדיקות Y-מבוך ב ° C25 תחת אור מרחיק האדום (שימוש בנורות LED להגביל מקור חימום אפשרי), כדי למנוע גירויים חזותיים ככל האפשר. היזהר חלופיים האוריינטציות של Y-המבוכים (צינור odorant המכיל בצד השמאל, או בצד הימין, וצינור טעינה בחזית או בגב; תרשים 1C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר לכמה שעות לזבובים להיכנס בבקבוקון המכיל מלכודת odorant או הממס. לספור זבובים לאחר 24 שעות כדי להגדיל את participatiעל עד יותר מ 80% ולספק את ערך מדד חוש הריח המרבי (Simonnet, תקשורת אישית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את מדד חוש הריח וכתוצאה מכך שימוש בנוסחה הבאה: (מספר בצינור הריח - מספר בצינור הממס) / מספר כולל של זבובים טעונים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההגדרה לשטוף Y-מבוך כדלקמן: להשרות את פירקה ההגדרה בMD RBS 35 לילה. לשטוף ביסודיות עם מים ברז. לבסוף לשטוף עם מים deionized ולתת להתייבש. </li></ol> 3. ניתוח סטטיסטי של נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע מבחן t, ניתוח שונה חד כיווני או אנובה דו כיוונית בהתאם לנתונים ומשתנים. </li></ol>

<ol><li>Mombaerts, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+ligands+for+odorant%2C+vomeronasal+and+taste+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors.</a> Nat. Rev. Neurosci. 5, 263-278 (2004).</li>
<li>Silbering, A. F., Benton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionotropic+and+metabotropic+mechanisms+in+chemoreception%3A+%27chance+or+design%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Ionotropic and metabotropic mechanisms in chemoreception: 'chance or design.</a> EMBO Rep. 11, 173-179 (2010).</li>
<li>Ziegler, A. B., Berthelot-Grosjean, M., Grosjean, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+smell+of+love+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The smell of love in Drosophila.</a> Front. Physiol. 4, (2013).</li>
<li>Silbering, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complementary+function+and+integrated+wiring+of+the+evolutionarily+distinct+Drosophila+olfactory+subsystems%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Complementary function and integrated wiring of the evolutionarily distinct Drosophila olfactory subsystems.</a> J. Neurosci. 31, 13357-13375 (2011).</li>
<li>Grosjean, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+olfactory+receptor+for+food-derived+odours+promotes+male+courtship+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophila.</a> Nature. 478, 236-240 (2011).</li>
<li>Woodard, C., Huang, T., Sun, H., Helfand, S. L., Carlson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+olfactory+behavior+in+Drosophila%3A+a+new+screen+yields+the+ota+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of olfactory behavior in Drosophila: a new screen yields the ota mutants.</a> Genetics. 123, 315-326 (1989).</li>
<li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li>
<li>Budick, S. A., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Free-flight+responses+of+Drosophila+melanogaster+to+attractive+odors%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Free-flight responses of Drosophila melanogaster to attractive odors.</a> The Journal of Experimental Biology. 209, 3001-3017 (2006).</li>
<li>Martin, F., Charro, M. J., Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+affecting+the+cAMP+transduction+pathway+modify+olfaction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Mutations affecting the cAMP transduction pathway modify olfaction in Drosophila.</a> J. Comp. Physiol. A. 187, 359-370 (2001).</li>
<li>Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthetising+Drosophila+for+behavioural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Anaesthetising Drosophila for behavioural studies.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).</li>
<li>Ai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid+sensing+by+the+Drosophila+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Acid sensing by the Drosophila olfactory system.</a> Nature. 468, 691-695 (2010).</li>
<li>Becher, P. G., Bengtsson, M., Hansson, B. S., Witzgall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flying+the+fly%3A+long-range+flight+behavior+of+Drosophila+melanogaster+to+attractive+odors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Flying the fly: long-range flight behavior of Drosophila melanogaster to attractive odors.</a> J. Chem. Ecol. 36, 599-607 (2010).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

פרוטוקול Y-המבוך שלנו מבוסס על פרוטוקול שתואר לעיל 9. עם זאת, אנחנו מציגים שני הבדלים עיקריים. ראשית, עלינו להשתמש בטיפי פיפטה צרים כדי למנוע את הזבובים מלשוב ברגע שהם יחליטו להיכנס בבקבוקון המכיל ממס או הממס בתוספת odorant. טיפים צרים אלה הם שימושיים גם כדי להגביל את הדיפוזיה odorant בY-המבוך. שנית, אנו משתמשים בבקבוקון טעינה קטן יותר כדי לאלץ את הזבובים להיכנס בY-המבוך. חשוב לי השתתפות גבוהה של זבובים אלו (80% ל100% לאחר 24 שעות; Simonnet, תקשורת אישית). <p class=...

Chemoreception דרך טעם או חוש ריח הוא שיטה חושית מפתח להישרדות של בעלי חיים. זה נותן רמזים חיוניים נחוצים לצורך זיהוי של סכנה או מקורות מזון, כמו גם לאינטראקציות חברתיות. זה גם עוזר בעלי חיים למצוא בן זוג לצורך הרבייה שלהם. במשך יותר מ 20 שנים, מחקר אינטנסיבי, כולל פרס נובל עבודה על ידי ריצ&#39;רד אקסל ולינדה באק ב2004 &quot;על תגליותיהם של קולטנים odorant והארגון של מערכת חוש הריח&quot;, בוצע כדי לחשוף את הבסיס המולקולרי ותאי של לחוש ריח 1,2. אחד מהמודלים של בעלי החיים האהובים למדענים לנתח את תפיסת ריח הוא ד melanogaster. חרק זה חולק אסטרטגיה דומה קידוד ריח תאית ומולקולרית ביונקים. הקהילה המדעית משתמשת בפרדיגמות התנהגותיים מגוונות כדי ללמוד את התפקיד של ניחוחי בזבוב הפירות הזה. בדיקות אלה כוללות מבחני מולטי כגון courtshiבדיקות עמ &#39;שבו שיטות שונות חושיות, כוללים לחוש ריח, חשובות לעורר חיזור זכר 3. מבחני אחרים יש גם פותחו כדי להתמודד עם התפקיד של ניחוחי ליתר דיוק; אלה כוללים T-מבוכים, Y-מבוכים, מבחני מלכודת, זירות ארבעה שדה ו4,5,6,7,8 רוח מנהרות. במאמר זה אנו מציגים assay פשוט הותאם Y-מבוך, המספק תשובות חוש הריח חזקות באמצעות ד melanogaster. ההגדרה שלנו משתמשת קצה טיפים בניגוד לשיטה שתוארה לעיל 9. לפיכך, יש Y-המבוך שלנו שני יתרונות. ראשית, זה ימנע כל החזר במערכת פעם אחת הזבוב עשה את הבחירה שלה. שנית, שהוא מגביל את חילופי הניחוח בכל תחומי ה-Y המבוך. היתרון האחרון הוא חשוב מאז דרוזופילה רגישה מאוד לזרימת אוויר המשמש לעתים קרובות כדי למנוע הרוויה odorant. כדי להתאים את ניסיוני הגדרה עם זרימת אוויר יהיה זמן וצרכנות עלות. לכן, assay Y-המבוך שלנו מייצג EFficient ודרך מהירה לבדוק את ביצועי חוש הריח של דרוזופילה.

<table><tbody><tr><td>צינור פוליסטירן דרוזופילה</td><td>VWR אירופה</td><td>734-2255</td><td>30 x 25 מ"מ&nbsp; מבוך</td></tr><tr><td>Y צינור בורוסיליקט דרוזופילה</td><td>דיז'ון verre</td><td></td><td>95 X 25 מ"מ </td></tr><tr><td>פקק קצף</td><td>מבוך Y Dutscher</td><td>999038</td><td> </td></tr><tr><td>מחבר בצורת</td> Y <td>Europrix</td><td>11020605</td><td> מבוך Y</td></tr><tr><td>100-1,000 ומיקרו; l קצות פיפטה</td><td>קורנינג</td><td>4868</td><td>חבר את קצות הפיפטה הבאים למחבר בצורת Y. חותכים 2 קצות פיפטה ב-65 מ"מ מהקצה הרחב, ומחברים את הקצה הצר (עם &sim; פתח 2 מ"מ) ל-2 בקבוקוני בדיקה. פתחים אלה יגבילו את פניות הפרסה ברגע שהזבובים ייכנסו לצינורות המכילים את הריחות. חותכים קצה פיפטה אחד ב-35 מ"מ מהקצה הרחב, ומחברים אותו לבקבוקון הטעינה. y-maze</td></tr><tr><td>נורת לד אדומה</td><td>רחוקה Rubin-Lacaque</td><td>0RB180238</td><td>625-630 ננומטר</td></tr><tr><td>חומצה אצטית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>45725</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פנילקטית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P16621</td><td></td></tr><tr><td>טעמי שמרים רגישים שטרסבורג</td><td>1018880464</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קמח</td> <td>תירסeurogerm</td><td>Farine de ma&iuml; s</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Kalys</td><td>HP-697-25</td><td></td></tr><tr><td>מתיל הידרוקסי 4 בנזואט</td><td>VWR בינלאומי</td><td>25605293</td><td></td></tr></tbody></table>

בדיקה<em&gt; דרוזופילה</em&gt; olfaction עם assay y-מבוך

Testing Drosophila Olfaction with a Y-maze Assay

גילוי אותות מהסביבה הוא חיוני לבעלי חיים כדי להבטיח את הישרדותם. למטרה זו, הם משתמשים ברמזים סביבתיים כגון ראייה, mechanoreception, שמיעה, וchemoperception דרך טעם, באמצעות מגע ישיר או דרך חוש ריח, המייצג את התגובה למולקולה נדיפים הפועלת בטווח ארוך יותר. מולקולות כימיות נדיפים הן אותות חשובים מאוד עבור רוב בעלי החיים בזיהוי של סכנה, מקור למזון, או לתקשורת בין אנשים. melanogaster דרוזופילה הוא אחד המודלים הביולוגיים הנפוצים ביותר למדענים לחקור את הבסיס התאי ומולקולרי של חוש ריח. על מנת להדגיש את יכולות חוש הריח של חרק קטן זה, אנו מתארים פרוטוקול בחירה שונה המבוסס על בדיקת Y-המבוך קלסי בשימוש עם עכברים. נתונים המתקבלים עם Y-מבוכים לתת מידע בעל ערך כדי להבין טוב יותר כיצד בעלי חיים מתמודדים עם הסביבה תמיד המשתנה שלהם. אנחנו מציגים את פרוטוקול צעד אחר צעד כדי ללמוד אתהשפעה של ניחוחי על תגובת גישוש לטוס באמצעות assay Y-המבוך הזה.

1D איור מראה שתי תגובות נציג באמצעות assay Y-המבוך הזה. זכרים קנטון-S מאוד להימנע 10% חומצה אצטית מדוללת במים מזוקקים, ואילו הם לא להימנע 10% חומצת phenylacetic באופן משמעותי. מבחני אלה מבוססים על 10 זכרים ללשכפל מונחים ביחד בבקבוקוני הטעינה. פרוטוקול זה יכול לפעמים לגרום לשגיאה סטנדרטית גדולה של הממוצע. במידת הצורך, ניתן להפחית על חסרון זה באמצעות 20 זכרים למשכפל במקום רק 10. מבחינה מתמטית, בחירתו של אדם אחד יש לו משקל נמוך יותר על ערך המדד לגודל מדגם גדול יותר. ...

אנו מציגים מבחן אמריקאי כדי לחשוף את ההשפעה של ניחוחי על התנהגות דרוזופילה באמצעות assay Y-מבוך.

בדיקה<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Olfaction עם Assay Y-מבוך

Detecting signals from the environment is essential for animals to ensure their survival. To this aim, they use environmental cues such as vision, ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לספק בדיקת מבוך Y פשוטה לבחינת חוש הריח ב-Drosophila melanogaster. הדבר מושג תחילה על ידי הרעבת הזבובים למשך 16 עד 18 שעות, כדי להגביר את המוטיבציה שלהם לחקור סביבות חדשות עם גירויים נדיפים. השלב השני של הפרוצדורה הוא הרכבת מערך מבוך ה-Y המכיל את מקורות הריח על נייר סינון, כגון חומצה אצטית בממס לעומת ממס לבדו.השלב השלישי הוא העברה מהירה ועדינה של הזבובים למבחנה המכילה את המצע. לאחר מספר שעות, השלב הסופי הוא רישום מיקומם של הזבובים במבוך. בסופו של דבר, התוצאות יכולות להראות תגובה לחומר הריח על סמך הנתונים שהתקבלו ממבוך ה-Y.העלנו לראשונה את הרעיון לשיטה זו כאשר החלטנו לפתח שיטה פשוטה וזולה לבדיקת התגובה הריחית של זבובים. יתרון של טכניקה זו על פני אפשרויות אחרות הוא שהיא מאפשרת לזבובים לקבל החלטה ללא לחץ רב מדי. את הפרוצדורה תדגים מייגן סימון, סטודנטית לדוקטורט מהמעבדה שלי. עבור פרוטוקול זה, הכינו זן זבובים שונה (isogenized) עם פנוטיפים התנהגותיים יציבים וחזקים. כל מלאי כזה ישמש כביקורת ייחוס לבדיקה הריחית; עבור כל זן גנטי שישמש בניסוי, בצעו הכלאה חוזרת (back cross) של הזן אל זן הייחוס למשך חמישה דורות.הצמידו נקבות בודדות מזן ניסויי למספר זכרים איזוגניים עבור כל הצלבה חוזרת. עבור ניסויי ריח, תחזקו את ה-drosophila על מצע קמח תירס סטנדרטי עם אנטיביוטיקה תחת מחזור אור של 1212, ובטמפרטורה של 25 °C.יש לבצע את הניסויים תמיד בטמפרטורה של 25 °C ותחת תאורה בספקטרום האדום הרחוק, שאינו נראה עבור Drosophila. כמו כן, חייבת להיות אפשרות לאוורר את החדר באופן מלא בין הניסויים לפני ביצוע הבדיקה בבוקר למחרת. בסוף היום, העבירו קבוצות של 10 עד 20 קווי ניסוי לבקבוקוני זכוכית עם לחות המסופקת באמצעות מגבת רטובה.יש לבחון את הזבובים בתוך 16 עד 18 שעות, אחרת הם עלולים למות כתוצאה מהתייבשות או הרעבה למחרת. הרכיבו את מבוך ה-Y. התחילו בחיבור מחבר בצורת Y לשתי מבחנות זכוכית באמצעות מחברי ספוג עם קצות פיפטה גזוזים, המהווים את התעלות; צורתם המצומצמת הופכת מעברים אלו למעברים חד-כיווניים.הענף השלישי של ה-Y מחובר לצינור טעינה העשוי מהחלק הרחב של קצה פיפט, והוא מאפשר מעבר מבקבוקון הטעינה אל נקודת הבחירה של המבוך. מעבר לכל אחת מהמנהרות המצטמצמות נמצא בקבוקון זכוכית, שאחד מהם חייב להיות טעון בחומר ריח. אלו הם בולוסים של 40 µL שספוגים בריבועי נייר סופג בגודל 28 mm.יש להחליט באופן אקראי איזה מהשניים מכיל את חומר הריח כדי לבצע את הבדיקה ראשונה. קהלו את הזבובים על קרח למשך זמן קצר, כדי להאט אותם. פעולה זו צריכה להתבצע תחת אור אדום רחוק מנורות LED ובטמפרטורה של 25 °C; העבירו בעדינות את קבוצת הזבובים אל מבחורת הטעינה וטענו את מבוך ה-Y בזבובים למבחן.אין להשתמש בהרדמה בגז. קריטי להעביר את הזבובים לבקבוק הטעינה במהירות ובזהירות. זהו למעשה השלב הקשה ביותר בניסוי זה, כיוון שעל הזבובים להתעורר במהירות לפני שיתפשטו זבובים אחרים במסת ה-Y.יש לאפשר לזבובים לחקור את המבוך במשך 24 שעות, כך שמספר מרבי של זבובים יעברו לאחד משני המבחנות הזכוכית. מספר הזבובים הנוכחים במבחנות השונות משמש לחישוב המדד הריחני (olfactory index). יש להחיל שיטות סטטיסטיות סטנדרטיות על ערך זה, שנאסף מהתנהגותם של עד 10 זבובים.אם 10 קבוצות זבובים אינן מספקות תוצאות עקביות, ניתן לבצע את הניסויים עם 20 קבוצות זבובים. כדי לנקות את רכיבי המבוך, השרו אותם כשהם מפורקים ב-RBS 35 MD למשך לילה. לאחר מכן שטפו אותם במי ברז ובשטיפה סופית ב-DI water לפני ייבוש באוויר.תגובות סטנדרטיות לחומר ריח. שימוש במבוך Y כולל משיכה, אדישות או הימנעות. לדוגמה, זבובים מסוג cantons נמנעים באופן חזק מ-10% acetic acid, בעוד שהם אינם נמנעים מ-10% pheno acetic acid.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור כי בדיקת גל זו מייצגת סביבה מלאכותית עבור הזבובים. ניתן להשתמש בפרוצדורה זו כשיטה מקדימה, ולאחריה ניתן לבצע בדיקות זירה (arena) או בדיקות פנימיות כדי לאשש את התגובות הריחניות של הזבובים בתנאים השונים. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לבחון בפשטות תגובות ריחניות של *Drosophila melanogaster* באמצעות בדיקת ה-SW.

testing-drosophila-olfaction-with-a-y-maze-assay

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

במאמר זה וידאו, אנו מתארים שיטה חדשה המאפשרת בנייה של הדרגתיים odorant בגיאומטריות ויציב לשליטה. אנו בקצרה להמחיש כיצד הדרגתיים אלה יכולים לשמש מסך פגמים חוש הריח (תתרנות מלאה או חלקית) ו ללמוד תכונות מהותיות יותר של התנהגות chemotaxis.

ברזולוציה גבוהה מדידה של התנהגות ריח מונחה על הזחלים תסיסנית

מבחני התנהגות למדידת פונקציות של תנועה, למידה, ויכולות...

Assaying של תנועה, למידה, וזיכרון גירעונות תסיסנית מודלים של ניוון מוחיים

תסיסנית melanogaster היא מערכת גנטית התנהגותית מודל צייתן, שבו נעשה שימוש כדי להבין את הבסיס המולקולרי התאי של תהליכים ביולוגיים רבים חשובים יותר ממאה שנים 1. תסיסנית נוצלה היטב כדי לקבל תובנות לתוך הבסיס הגנטי של ההתנהגות במהירות הבזק.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

לזבובי פירות יש מערכת ריח מורכבת, הם יכולים להבחין במאות ריחות ולהשתמש בחוש הריח שלהם כדי לכוון החלטות התנהגותיות. סרטון זה מתאר את בדיקת האולפקטומטר הארבע-כיוונית, שיטה לחקר תגובות התנהגותיות של חוש הריח בזבובים. סרטון הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לטפל בזבובי בדיקה ומהם השלבים הקריטיים בעת ביצוע הבדיקה.

בדיקת אולפקטומטר ארבע-כיוונית: שיטה להערכת תגובות מרומזות ריח בדרוזופילה

סרטון זה מתאר שיטה לבדיקת התנהגות גישוש חוש הריח בזבוב הפירות, הנקראת מבוך Y. סרטון הפרוטוקול המוצג מדגים כיצד להגדיר ולנהל את הבדיקה.

דרוזופילה Y-maze Assay: שיטה להערכת תגובות חוש הריח בזבובים

השיטה למדידה למבוגרים זיכרון אסוציאטיבי דרוזופילה מתוארת. Assay מבוסס על היכולת של הזבוב לשייך ריח מוצג עם (שוק חשמלי) חיזוק שלילי ולאחר מכן לאחזר את המידע הזה במועד מאוחר יותר, ומאפשר זיכרון כדי להימדד.

דרוזופילה מבוגרים חוש הריח הלם למידה

Olfactometer אנכי, T-מבוך מתואר לassaying התגובה התנהגותית של פרוקי רגליים. Olfactometer מאפשר הנסיין למדוד בחירות שבוצעו על ידי נבדקים, כאשר נתון שני שדות ריח פוטנציאליים. שניהם המשיכה ולדחייה מodorants ניתן למדוד במכשיר זה.

Assay בחירה האנכי T-מבוך לתגובת פרוקי רגליים לodorants

במאמר זה וידאו, אנו מתארים assay אוטומטי כדי למדוד את ההשפעה של רעב או שובע על התנהגות חיפוש מזון תלויה בריח הפירות המבוגרים לעוף melanogaster דרוזופילה.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות ההימנעות של אנשים לחוצים. פרדיגמה זו היא עוצמתית אך ידידותית למשתמש וניתן להשתמש בה כדי להעריך את ההשפעה של גנים וסביבה על סוג אחד של אינטראקציה חברתית ב-Drosophila melanogaster.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב Melanogaster דרוזופילה

אנו מתארים כאן הגדרה התנהגותית ושיטת ניתוח נתונים לבדיקת תגובות הריח של עד 100 זבובי חומץ (Drosophila melanogaster). ניתן להשתמש במערכת זו עם גירוי ריח יחיד או מרובה, וניתנת להתאמה להפעלה אופטוגנטית או להשתקה של תת-קבוצות עצביות.

התנהגויות חוש הריח assayed ידי מעקב ממוחשב של<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתוך אולפקטומטר ארבעה-רביע

הפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD) קשורה להתנהגות חברתית ותקשורתית לקויה ולהופעתה של התנהגות חזרתית. לצורך חקר הקשר בין גנים אוטסיים וליקויים התנהגותיים במודל דרוזופילה , מתוארות במאמר זה חמש פרדיגמות התנהגותיות להערכת ריווח חברתי, תוקפנות, חיזור, טיפוח והתנהגות הרגלה.

פרדיגמות להערכה התנהגותית במודל דרוזופילה של הפרעת הספקטרום האוטיסטי

למדו לבדוק תגובות ריח בדרוזופילה melanogaster באמצעות מבחן מבוך Y פשוט. שיטה זו מאפשרת הערכת העדפות לריחנים שונים ותורמת להבנת מנגנוני עיבוד חושי בחרקים.

בדיקה

גלה סרטונים נוספים