Name: הכתמה histochemical של Thaliana ארבידופסיס תא המשני בוול אלמנטים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-13T23:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 39 s
Description: למד שיטות הכתמה היסטוכימית לחקר רכיבי דופן התא המשנית ב-Arabidopsis thaliana. הטכניקה כוללת הטמעה, חיתוך וצביעה למיקרוסקופיה, ומסייעת לחוקרים לחקור הרכב דופן התא בצמחים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו אסירי תודה לסבין ראסל לסיוע בעריכה. עבודה זו הייתה חלק מDOE Bioenergy וינט המכון (http://www.jbei.org) נתמכת על ידי משרד אנרגיה האמריקאי, משרד מדע, המשרד למחקר ביולוגי וסביבתי, באמצעות חוזה DE-AC02-05CH11231 בין לורנס ברקלי מעבדה לאומית ומשרד אנרגיה האמריקאי.

<ol><li>Boerjan, W., Ralph, J., Baucher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lignin+biosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+plant+biology%22%5BJournal%5D)">Lignin biosynthesis.</a> Annual review of plant biology. 54, 519-546 (2003).</li>
<li>Vanholme, R., Demedts, B., Morreel, K., Ralph, J., Boerjan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lignin+biosynthesis+and+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+physiology%22%5BJournal%5D)">Lignin biosynthesis and structure.</a> Plant physiology. 153, 895-905 (2010).</li>
<li>Humphreys, J. M., Chapple, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rewriting+the+lignin+roadmap%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+plant+biology%22%5BJournal%5D)">Rewriting the lignin roadmap.</a> Current opinion in plant biology. 5, 224-229 (2002).</li>
<li>Adler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lignin+chemistry%E2%80%94past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Wood+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Lignin chemistry—past, present and future.</a> Wood Sci. Technol. 11, 169-218 (1977).</li>
<li>Brien, T. P., Feder, N., McCully, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polychromatic+Staining+of+Plant+Cell+Walls+by+Toluidine+Blue%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Polychromatic Staining of Plant Cell Walls by Toluidine Blue.</a> 59, 368-373 (1964).</li>
<li>Mori, B., Bellani, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+staining+for+cellulosic+and+modified+plant+cell+walls%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+%26+histochemistry%3A+official+publication+of+the+Biological+Stain+Commission%22%5BJournal%5D)">Differential staining for cellulosic and modified plant cell walls.</a> Biotechnic & histochemistry: official publication of the Biological Stain Commission. 71, 71-72 (1996).</li>
<li>Maeda, H., Ishida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+of+binding+of+hexopyranosyl+polysaccharides+with+fluorescent+brightener%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+biochemistry%22%5BJournal%5D)">Specificity of binding of hexopyranosyl polysaccharides with fluorescent brightener.</a> Journal of biochemistry. 62, 276-278 (1967).</li>
<li>Wood, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+in+the+interaction+of+direct+dyes+with+polysaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydrate+Research%22%5BJournal%5D)">Specificity in the interaction of direct dyes with polysaccharides.</a> Carbohydrate Research. 85, 271-287 (1980).</li>
<li>Hughes, J., McCully, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+an+optical+brightener+in+the+study+of+plant+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+technology%22%5BJournal%5D)">The use of an optical brightener in the study of plant structure.</a> Stain technology. 50, 319-329 (1975).</li>
<li>Verbelen, J. P., Kerstens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+confocal+microscopy+and+congo+red+fluorescence%3A+a+simple+and+rapid+method+to+determine+the+mean+cellulose+fibril+orientation+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+microscopy%22%5BJournal%5D)">Polarization confocal microscopy and congo red fluorescence: a simple and rapid method to determine the mean cellulose fibril orientation in plants.</a> Journal of microscopy. 198, 101-107 (2000).</li>
<li>Anderson, C. T., Carroll, A., Akhmetova, L., Somerville, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+cellulose+reorientation+during+cell+wall+expansion+in+Arabidopsis+roots%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+physiology%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of cellulose reorientation during cell wall expansion in Arabidopsis roots.</a> Plant physiology. 152, 787-796 (2010).</li>
<li>Liljegren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phloroglucinol+Stain+for+Lignin%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Phloroglucinol Stain for Lignin.</a> Cold Spring Harbor Protocols. , (2010).</li>
<li>Nakano, J., Meshitsuka, G., lin, S., Dence, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNakano%2C+J+%22The+Detection+of+Lignin+Methods+in+Lignin+Chemistry%22">The Detection of Lignin Methods in Lignin Chemistry</a>. , Springer-Verlag. Berlin. (1992).</li>
<li>Sibout, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CINNAMYL+ALCOHOL+DEHYDROGENASE-C+and+-D+are+the+primary+genes+involved+in+lignin+biosynthesis+in+the+floral+stem+of+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+cell%22%5BJournal%5D)">CINNAMYL ALCOHOL DEHYDROGENASE-C and -D are the primary genes involved in lignin biosynthesis in the floral stem of Arabidopsis.</a> The Plant cell. 17, 2059-2076 (2005).</li>
<li>Teather, R. M., Wood, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Congo+red-polysaccharide+interactions+in+enumeration+and+characterization+of+cellulolytic+bacteria+from+the+bovine+rumen%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+environmental+microbiology%22%5BJournal%5D)">Use of Congo red-polysaccharide interactions in enumeration and characterization of cellulolytic bacteria from the bovine rumen.</a> Applied and environmental microbiology. 43, 777-780 (1982).</li>
<li>Yeung, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beginner%27s+guide+to+the+study+of+plant+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+19th+Workshop%2FConference+of+the+Association+for+Biology+Laboratory+Education+%28ABLE%22%5BJournal%5D)">A beginner's guide to the study of plant structure.</a> Proceedings of the 19th Workshop/Conference of the Association for Biology Laboratory Education (ABLE. 19, 365-36 (1998).</li>
<li>Turner, S. R., Somerville, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collapsed+xylem+phenotype+of+Arabidopsis+identifies+mutants+deficient+in+cellulose+deposition+in+the+secondary+cell+wall%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Online%22%5BJournal%5D)">Collapsed xylem phenotype of Arabidopsis identifies mutants deficient in cellulose deposition in the secondary cell wall).</a> The Plant Cell Online. 9, 689-701 (1997).</li>
<li>Iiyama, K., Pant, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+the+M%C3%A4ule+colour+reaction.+Introduction+of+methylated+syringyl+nuclei+into+softwood+lignin%5BTitle%5D)+AND+%22Wood+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of the Mäule colour reaction. Introduction of methylated syringyl nuclei into softwood lignin.</a> Wood Sci. Technol. 22, 167-175 (1988).</li>
<li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+secondary+cell+wall+deposition+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+biotechnology+journal%22%5BJournal%5D)">Engineering secondary cell wall deposition in plants.</a> Plant biotechnology journal. 11, 325-335 (2013).</li>
<li>Zhong, R., Ripperger, A., Ye, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+deposition+of+lignin+in+the+pith+of+stems+of+two+Arabidopsis+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+physiology%22%5BJournal%5D)">Ectopic deposition of lignin in the pith of stems of two Arabidopsis mutants.</a> Plant physiology. 123, 59-70 (2000).</li>
<li>Chapple, C. C., Vogt, T., Ellis, B. E., Somerville, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Arabidopsis+mutant+defective+in+the+general+phenylpropanoid+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+cell%22%5BJournal%5D)">An Arabidopsis mutant defective in the general phenylpropanoid pathway.</a> The Plant cell. 4, 1413-1424 (1992).</li>
<li>Fagard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PROCUSTE1+Encodes+a+Cellulose+Synthase+Required+for+Normal+Cell+Elongation+Specifically+in+Roots+and+Dark-Grown+Hypocotyls+of+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Online%22%5BJournal%5D)">PROCUSTE1 Encodes a Cellulose Synthase Required for Normal Cell Elongation Specifically in Roots and Dark-Grown Hypocotyls of Arabidopsis.</a> The Plant Cell Online. 12, 2409-2423 (2000).</li>
</ol>

למחברים אין סכסוכים כספיים לחשוף.

סעיפי גזע thaliana א נמצאים בשימוש נרחב כדי ללמוד את הארגון של התאים בדופן התא משני ולבחון באופן איכותי את ההבדלים בין סוג בר וצמחים מהונדסים. הטכניקות הנפוצות עבור חתך הדגימות הן יד חיתוך ישיר; או כאשר דגימות מוטבעות בagarose או מקבע, חתך יכול להיעשות עם vibratome או microtome. בניגוד לחיתוך יד, שני האחרונים אפשר לצמצם את הסיכון של ייצור הבדלים מדויקים בין דגימות שיהיו פשוט נגרמים על ידי הכנת מדגם רעה שנגרמה על ידי הבדלי עובי בין דגימות ומשטחים לא ישרים. כל השיטות האלה י...

דופן תא הצמח מחזיקה שפע של מידע בתוך מרכיביה השונים: ליגנין, תאית, hemicelluloses (xylan, glucuronoxylan,, arabinoxylan, גלוקן מעורב הצמדה, או glucomannan xyloglucan), ופקטין. טכניקות היסטולוגית לספק רמזים חזותיים חשובים בחקר הבדלים בתוך קירות תא המשניים ברמות ארגוניות וסלולריות. טכניקות היסטולוגית שונות פותחו וניתן למצוא בספרות, אבל בטכניקות אלה יכולים להיות מאתגרות ולמתחילים זמן רב משום שפרוטוקולים מפורטים מאוד עם הוראות חזותיות פשוטות הם לעתים רחוקות, אם בכלל זמין. מטרתו של מחקר זה היא לספק קווים מנחים פשוטים לטכניקות צביעה היסטולוגית כדי להשיג תמונות באיכות גבוהה. חתך רקמת הגזע הוא הצעד הראשון בהדמיה של קירות תא וצורות תא. למרות סעיפי יד לחתוך הם זולים וייקחו פחות זמן להתכונן, שימוש בvibratome מציע עקביות ומניב תמונות באיכות גבוהה. באמצעות vibratome מאפשר ייצור באיכות נתונים טוב יותר על ידי יצירה גם קטעים עם אותו העובי, אשר מסייע להפיק תמונות חדות ומפחית באופן משמעותי את הסיכון לייצור הבדלים מדויקים בין דגימות שיהיו פשוט נגרמים על ידי הכנת מדגם רעה. שימוש רפים לתקן דגימות טריות יכול להיות אתגר למתחילים ועדיין עשויה להיות זמן רב אפילו למומחים כאשר ניתוח צריך להיעשות במהירות. בנוסף, הוא הופך להיות בלתי אפשרי למדוד כל פעילות ביולוגית עם המדגם כאשר הוא כבר מוטבע בשרף. טכניקה פשוטה אחת שמעסיקה agarose ועובש תוצרת בית היא מועילה להטבעת רקמות גזע, וזה גם יכול להיות מנוצל ביישומים אחרים הדורשים נתיחה של רקמות רכות. בהשוואה להטבעת דגימות בשרף, בשיטה זו יש יתרון של שמירה על רקמות חיים והפחתת מניפולציה מדגם. חתך רקמות באמצעות vibratome הוא מאוד מדויק ומייצר homogenחלקי היחידות הארגוניות, אשר, בהתאם למטרת המחקר, לאחר מכן ניתן להשתמש בכמה טכניקות צביעה שונות. שיטות הפשוטות כדי להמחיש ליגנין וארומטיים אחרים להעסיק אור אולטרה סגול (UV). עירור של מולקולות המבוססים על ארומטיים על ידי אור UV הוא טכניקה ישנה, ​​אבל הוא עדיין אחד מהגישות המהירות ביותר להדמיה של ליגנין. עם זאת, להדמיה UV היא למעשה לא אידיאלית לגילוי ליגנין, כי אור UV ילהיב ארומטיים אחרים. ליגנין מורכב בעיקר משלושה אבני בניין, monolignols (כהלים hydroxycinnamyl: אלכוהול coniferyl, אלכוהול sinapyl, ואלכוהול p-coumaryl) 1-3. כתם Phloroglucinol יכול לספק רמזים להיקף cinnamaldehydes הווה בעצה, סיבים, ורקמות קנה הנשימה 4. Phloroglucinol הוא אינדיקטור טוב של cinnamaldehydes הכללי ויכול להבדיל בין cinnamaldehydes וארומטיים אחרים. ניתן לאתרם מונומרים אלכוהול sinapylומובחן על ידי השימוש בכתם מאולה. O הכחול Toluidine הוא צבע צבעוני, ולכן יש לו את היכולת להכתים אלמנטים שונים של תא הקיר בצבעים שונים 5,6. השימוש העיקרי של O הכחול toluidine הוא לזהות פקטין וליגנין 5,6. היתרון של שימוש בO הכחול toluidine הוא שאלמנטים רבים של דופן התא ניתן דמיינו בצעד אחד. שני calcofluor הלבן ואדום קונגו הם קלים לעבוד איתו והוא יכול לשמש כדי לחזות תאית. תאית כתמים הלבנים Calcofluor, callose, וβ-glucans אינו להחליף או להחליף בחולשה האחר 6-9, ואילו כתמים אדומים קונגו ישירות לβ-(1 → 4)-glucans ובמיוחד לתאית 10,11. מטרתו של מחקר זה היא לספק קווים מנחים פשוטים לשימוש בטכניקות הצביעה כאמור לקבלת תמונות באיכות גבוהה מא thaliana גבעולים.

<table><tbody><tr>מספר CAS של <td>Agarose</td><td>EMD</td><td>MERC2125</td><td>: 9012-36-6</td></tr><tr><td>Phloroglucinol</td><td>Sigma</td><td>P 3502</td><td>1,3,5-trihydroxybenzene [מספר CAS: 108-73-6]</td></tr> <tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>EMD</td><td>HX0603-75</td><td>מספר CAS: 7647-01-0</td></tr><tr><td>אמוניום הידרוקסיד</td><td>EMD</td><td>AX1303-6</td><td>מספר CAS: 1336-21-6</td></tr><tr><td>טולדין כחול O</td><td>Sigma</td><td>T3260</td><td>בלוטן כלוריד, טולוניום כלוריד [מספר CAS 92-31-9]&nbsp;</td></tr><tr><td>אשלגן פרמנגנט</td><td>סיגמא</td><td>223468</td><td>מספר CAS 7722-64-7&nbsp;</td></tr><tr><td>אתנול 190 הוכחה</td><td>KOPTEC</td><td>V1401</td><td>מספר CAS: 64-17-5</td></tr><tr><td>קונגו אדום</td><td>סיגמא&nbsp;</td><td>C6277</td><td>דיסודיום 3,3'-[[1,1'-ביפניל]-4,4'-דילביס(אזו)]ביס(4-אמינונפתלין 1-סולפונאט) [מספר CAS 573-58-0]</td></tr><tr><td>מבהיר פלואורסצנטי 28 / Calcofluor White Stain</td><td>Sigma</td><td>F3543&nbsp;</td><td>4,4'-Bis[[4-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-6-anilino-1,3,5-triazin-2-yl]amino]stilbene-2,2'-disulphonic acid [CAS מספר 4404-43-7]&nbsp;</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td></td><td>Leica מיקרוטום להב רוטט VT1000S</td><td>http://www.leicabiosystems.com/products/sectioning/vibrating-blade-microtomes/details/product/leica-vt1000-s/</td></tr> <tr><td>חברת סכיני גילוח אמריקאית לבטיחות</td><td>פריט # 60-0139-0000&nbsp;</td><td></td><td>להב קצה כפול מפלדת אל-חלד (Personna Super)</td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה עם מכסה בורג (2 מ"ל)</td><td>VWR</td><td>16466-044</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה (0.6 מ"ל)</td><td>Axygen Scientific</td><td>MCT-060-C</td><td></td></tr><tr><td>Mitt</td><td>Bel-Art</td><td>3800000000</td><td>SCIENCEWARE&nbsp; מגן ידיים חם כפפה</td></tr><tr><td>דבק רקמות</td><td>טד פלה בע"</td>מ <td>10033</td><td>חנות ב 4 מעלות; C או 20 מעלות; C לאחסון של 3 חודשים או יותר</td></tr><tr><td>מיקרוגל</td><td>Panasonic</td><td>NN-SD762S</td><td>PELCO Pro CA 44 דבק רקמות מיידי&nbsp;</td></tr><tr><td>מצלמה עם שבב CCD ללא תריס מכני&nbsp;</td><td>Hamamatsu</td><td>C4742-95</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה צבעונית במהירות גבוהה&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>תוכנת מצלמת QImaging</td><td>MicroPublisher 5.0 RTV</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>&nbsp; מכשירים מולקולריים</td><td>MetaMorph גרסה 7.7.0.0</td><td></td></tr><tr><td>דמיון אנליזה&nbsp;</td><td>אדובי&nbsp;</td><td>משקפי Photoshop CS4</td><td></td></tr><tr><td>Micro Cover, מרובעים, מס' 1</td><td>VWR</td><td>48366-067</td><td>22 x 22 מ"מ (7/8 x 7/8 אינץ') משקפי כיסוי עמידים בפני קורוזיה ועבים ושטוחים באופן אחיד. עובי מס '1 הוא 0.13 עד 0.17 מ"מ.</td></tr><tr><td>מיקרו שקופיות חלביות, 1 מ"מ</td><td>VWR</td><td>48312-003</td><td>75 x 25 מ"מ - 1 מ"מ</td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Alcan אריזה</td><td>BRNDPM998</td><td></td></tr><tr><td>קוביית מסנן TX2 Leica</td><td></td><td>11513851/11513885</td><td>מסנן המשמש לניתוח אדום קונגו עם מעבר פס של 560/40.</td></tr></tbody></table>

הכתמה histochemical של<em&gt; thaliana ארבידופסיס</em&gt; תא המשני בוול אלמנטים

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Arabidopsis thaliana הוא אורגניזם מודל המשמש בדרך כלל להבנה ומניפולציה של תהליכים תאיים שונים בצמחים, והוא נמצא בשימוש נרחב בחקר היווצרות דופן תא משנית. שקיעת דופן תא משנית מתרחשת לאחר הנחת דופן התא הראשונית, תהליך המתבצע אך ורק על ידי תאים מיוחדים כגון אלה היוצרים רקמות כלי וסיבים. רוב דפנות התאים המשניות מורכבות מתאית (40-50%), המיצלולוז (25-30%) וליגנין (20-30%). בודדו מספר מוטציות המשפיעות על ביוסינתזה משנית של דופן התא, והמוטציות המתאימות עשויות להפגין או לא להפגין שינויים ברורים בהרכב הביוכימי או פנוטיפים חזותיים מכיוון שניתן להסוות מוטציות אלה על ידי תגובות מפצה. הליכי צביעה שימשו באופן היסטורי כדי להראות הבדלים על בסיס תאי. שיטות אלה הן אך ורק אמצעי ניתוח חזותיים; עם זאת, יש חשיבות רבה לתפקידם בניתוח מהיר וביקורתי. אדום קונגו ולבן קלקופלואור הם כתמים המשמשים לזיהוי פוליסכרידים, בעוד ש-Mäule ו-phloroglucinol משמשים בדרך כלל לקביעת הבדלים בליגנין, וכחול טולואידין O משמש לצביעה דיפרנציאלית של פוליסכרידים וליגנין. הטכניקות הפשוטות לכאורה של חתך, צביעה והדמיה יכולות להוות אתגר למתחילים. החל מהכנת דגימה באמצעות מודל A. thaliana, מחקר זה מפרט את הפרוטוקולים של מגוון מתודולוגיות צביעה שניתן ליישם בקלות לתצפית על ארגון תאים ורקמות בדפנות תאים משניות של צמחים.

גזע הטבעה וחתך: השימוש בתבנית פלסטיק תוצרת בית כדי להטביע את הגבעולים ב -7% הוכיחו agarose להיות מהיר וקל (איור 1). שני חלקים (A ו-B; איור 1) של מערכת הבקבוקון המוטבע לעשות את זה פשוט כדי לשחרר בקלות את הגבעול המשובץ בagarose כagarose אינו מקל על חלקי הבקבוקון שהם אינרטי, שמירה על המערכת נקייה. ניתן לעשות שימוש חוזר הבקבוקונים מספר פעמים במשך שנים. הנוחות של אחסון הגזע המוטבע גם עושה את השלבים הבאים קלים יותר. על מנת לחסוך בזמן כלשהו, ​​בדו...

הרכב דופן התא של הצמח משתנה בין סוגי הרקמות ויכול לכלול ליגנין, תאית, המיצלולוז ופקטין. טכניקות צביעה שונות פותחו כדי להמחיש הבדלים ברמת סוג התא. מאמר זה הוא אוסף של טכניקות צביעת דופן תאים נפוצות.

הכתמה histochemical של<em&gt; Thaliana ארבידופסיס</em&gt; תא המשני בוול אלמנטים

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא להדגים צביעה היסטוכימית של רכיבי הדופן התאית השניונית של ANA בצמח Arabidopsis. הדבר משיג תחילה על ידי הטמעת גבעול הצמח ב-aros. לאחר מכן, הגבעול המוטמע ב-aros מוצא מהתבנית ומועבר לדיסקיות דגימה, אשר נחתכים לאחר מכן לחתכים רוחביים של הגבעול באמצעות vibrato.בשלב הבא, הפרוסות עוברות הליכות שונות של צביעה היסטוכימית. לבסוף, נעזרים במיקרוסקופיה כדי להראות את השינויים הדיפרנציאליים ברכיבי הדופן התאית השניונית שהתקבלו מהצביעה ההיסטוכימית. שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בנושא הדופן התאית, כגון שינויים ברקמות המקולריות בגבעולים של צמחים.בדרך כלל, אנשים שאינם בקיאים בשיטה זו יתקשו בביצועה, כיוון ששלבים פשוטים אך קריטיים המוזכרים בפרוטוקולים כאן לא תועדו ביסודיות או הוצגו באופן פשוט בעבר. כדי להתחיל, הכינו תבנית ביתית להטבעת הגבעולים באמצעות מבחנות פלסטיק. ראשית, השתמשו בלהב תער כדי לחתוך את התחתית הקונוית של מבחנת מיקרו-צנטריפוגה עם פקק הברגה בנפח 2 mL.רכיב זה מכונה חלק A, הכולל נקב של מחט מזרק, חור במכסה הפ menutup הגדול מעט מקוטר הגבעול שיוטמע. לאחר מכן, גזרו חצי סנטימטר מתחתיתו של מבחנה למיקרו-צנטריפוגה בנפח 0.6 מיליליטר. רכיב זה יכונה חלק B. הוסיפו את החלק הגזור של חצי הסנטימטר ממבחנת המיקרו-צנטריפוגה בנפח 0.6 מיליליטר לתוך מבחנת המיקרו-צנטריפוגה ב

histochemical-staining-arabidopsis-thaliana-secondary-cell-wall

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון זה אנו מתארים את טכניקת הצביעה של ויזנר להכתמת הליגנין הקיים בתאי צמח מיוחדים. טכניקת צביעה זו מסייעת לדמיין את דפנות התא המיושרות בגבעולי Arabidopsis thaliana ומסייעת לכמת את הליגניפיקציה בדפנות התא של סוגים שונים של תאים.

צביעת ויזנר להדמיית ליגנין: טכניקה להכתמת משקעי ליגנין הנמצאים בגבעולים של Arabidopsis thaliana

בסרטון זה, אנו מתארים את טכניקת הצביעה של Maule להכתמת ליגנין מזרק הקיים בתאי הצמח המתמחים. טכניקת צביעה זו מסייעת לאפיין את התפלגות הליגנין בסיבים הקסילם והאינטרפשקולריים.

צביעת מאולה לליגנין: טכניקה לאפיון התפלגות ליגנין בקטעי גזע Arabidopsis thaliana

בסרטון זה, אנו מדגימים את שיטת הצביעה האדומה של קונגו כדי לדמיין משקעי תאית בקטעי גזע Arabidopsis thaliana .

צביעה אדומה של קונגו: טכניקה להמחשת משקעי תאית בקטעי גזע צמחיים

בסרטון זה, אנו מתארים הליך צביעה כדי לדמיין שקיעת תאית בתוך דפנות התא של Arabidopsis thaliana, צמח דיקוט, באמצעות calcofluor לבן, אשר נקשר במיוחד גלוקנים הקשורים β, מציג פלואורסצנטיות תחת אור UV.

צביעה לבנה Calcofluor: שיטה פשוטה להדמיית פלואורסצנטיות הנגרמת על ידי UV של משקעי תאית בדפנות התא של קטעי גזע צמח דיקוט

סרטון זה מדגים טכניקת צביעה חיסונית ללוקליזציה של חלבוני אראבינוגלקטן (AGPs) ופקטין ברקמות צמחים. חלקי רקמת צמח קבועים ומשובצים שרף מוכתמים בנוגדנים ראשוניים ומשניים פלואורסצנטיים ספציפיים ל-AGP ופקטין ובצבע פלואורסצנטי קושר תאית כדי לחשוף את הקולוקליזציה הספציפית לרקמה שלהם בדופן התא.

אימונולוקליזציה של חלבונים Arabinogalactan ו Pectins ברקמת הצמח

אנו מספקים כאן פרוטוקול יעיל ואמין עבור immunostaining, הקרינה הכלאה באתר, מכתים DNA ואחרי הדמיה בביציות thaliana ארבידופסיס כל הר כמותיים, ברזולוציה גבוהה. שיטה זו השתמשה בהצלחה כדי לנתח שינויי הכרומטין ואדריכלות גרעינית.

שיטה יעילה לניתוח כמותי, תא בודד של הכרומטין שינוי ואדריכלות גרעינית בהר שלם-ביציות ב<em&gt; ארבידופסיס</em

ב פרוטוקול זה, אנחנו מתארים טכניקות ניתוח ראוי תודרנית פרחים, siliques, כמה טכניקות ניקוי בסיסי, ונבחר מכתים נהלי כולה-הר תצפיות מבני הרבייה.

כולה-הר ניקוי, כתמים של תודרנית פרח איברים, Siliques

המטרה של פרוטוקול זה היא להראות כיצד לטעון את ה-CFDA לאתרים שונים של החלקים התחתונים של Arabidopsis. לאחר מכן אנו מציגים את דפוס ההתפלגות שהתקבל של CF ב נצרי.

שירי תנועה של CFDA מעקב טעון ברקמות הכיור התחתון של Arabidopsis

פרוטוקול זה מתאר בפירוט כיצד החומר הצמחי לאימונולוקליזציה של חלבונים ופקטינים ערבינוגלקטניים קבוע, מוטבע בשרף אקרילי הידרופילי, חתוכה ומורכבת על מגלשות זכוכית. אנו מראים אפיטופים הקשורים לקיר התא יזוהו עם נוגדנים ספציפיים.

אימונולוקליזציה פלואורסצנטית של חלבונים ערבינוגלקטניים ופקטינים בחומת התא של רקמות הצמח

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה אופטימלית לתצפית היסטולוגית של גלים המושרים על ידי פלזמודיופורה brassicae. מקטעי ויברטומים של היפוקוטיל מנוקים לפני הדמיה פלואורסצנטית כדי לחקור את המעורבות של גורמי שעתוק ופיטוהורמונים במהלך התקדמות המחלה. פרוטוקול זה מתגבר על מגבלות הטמעת הרגם, ומאפשר הדמיה של חלבונים פלואורסצנטיים בצמחים.

שילוב של מיקרוסקופיית ניקוי ופלואורסצנציה להדמיית שינויים בביטוי גנים ותגובות פיזיולוגיות לפלסמודיופורה brassicae

פרוטוקול זה מתאר הכנת דגימות שלמות של שכבת תאי האנדוספרם בזרעי Arabidopsis thaliana . השיטה דורשת רק ציוד מעבדה נפוץ, כגון מחט הזרקה ומלקחיים מדויקים, ומאפשרת הדמיה של תאים חיים פלואורסצנטיים ברזולוציה גבוהה של תאי אנדוספרם בזרעים מתפתחים ובוגרים כאחד.

הכנת רקמה שלמה לאנליזה מיקרוסקופית של שכבת תאי האנדוספרם בזרעי ארבידופסיס מתפתחים ובוגרים

למד שיטות הכתמה היסטוכימית לחקר רכיבי דופן התא המשנית ב-Arabidopsis thaliana. הטכניקה כוללת הטמעה, חיתוך וצביעה למיקרוסקופיה, ומסייעת לחוקרים לחקור הרכב דופן התא בצמחים.

הכתמה histochemical של

גלה סרטונים נוספים