ניטור Juxtacellular והלוקליזציה של Single נוירונים בתוך מבנים מוחיים תת-קליפת המוח של התראה, חולדות-מרוסן ראש

המטרה הכוללת של הליך זה היא לנטר ולמקם את הפעילות של נוירונים בודדים בתוך מבני המוח התת-קורטיקליים של חולדות מרוסנות ראש ערניות. זה מושג על ידי התאקלמות החולדה לריסון הגוף בגרב בד. השלב השני הוא השתלה כירורגית של מכשיר משענת ראש ותא הקלטה כך שניתן יהיה לשמור על החולדה במישור הסטריאוטקסי במהלך מספר מפגשי הקלטה עוקבים.

לאחר מכן, החולדה מוכנסת לג'יג מתאים לביצוע הניסויים ההתנהגותיים והאלקטרופיזיולוגיים ומבוצעות הקלטות עצביות תאיות סמוכות. תהליך זה מאפשר בידוד חד משמעי של יחידות בודדות. השלב האחרון הוא לסמן את המיקום האנטומי של אתר ההקלטה בצבע כחול של שיקגו סקיי כך שניתן יהיה לדמיין אותו בפוסט הוק הוא טוטולוגיה.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות נפוצות כמו הקלטה חוץ-תאית עם מיקרו אלקטרודות מתכת הוא שניתן לבודד קוצים מיחידות בודדות באופן חד משמעי וכי ניתן לחשוף את אתר ההקלטה בהיסטולוגיה פוסט-הוק. כדי להתחיל בהליך זה, יש להרדים את החיה בזריקת קטמין קסילזין. בדוק את רפלקס נסיגת הבוהן כדי לקבוע את מישור ההרדמה ולשמור על ההרדמה על ידי מתן הרדמה נוספת

במידת הצורך יש לגלח את הראש ולחטא את אתר הניתוח ביוד פובידון. לאחר מכן, הניחו את החולדה במסגרת אחיזה סטריאוטקסית ואבטחו את ראשה עם מוטות אוזניים. בצע חתך עם אזמל לאורך קו האמצע של הגולגולת מנקודת האמצע בין העיניים לחלק האחורי של האוזניים.

לאחר מכן הסר רצועת עור של שניים עד שלושה מילימטרים משני צידי החתך. מגרדים את הפריאוסטאום כדי לחשוף את הגולגולת המשתרעת לרכסים הרוחביים. לאחר מכן מכסים את הגולגולת החשופה בשכבה דקה של דבק סופר.

לאחר מכן קדחו חור קטן מיד מאחורי המקום שבו תפר הבגמה פוגש את הרכס הצדדי בזווית של 30 עד 45 מעלות לתוך הגולגולת. לאחר מכן הברג מכונה תחתונה שטוחה אפס 80. הברג לחור בזווית של 30 עד 45 מעלות, והיזהר לא להבריג עמוק מדי כדי למנוע נזק לרקמת המוח הבסיסית.

חזור על הליך זה עבור שישה ברגים נוספים בתצורה זו. לאחר מכן, מרחו דבק סופר על בסיס כל הברגים. כעת מניח מחט מזרק במניפולטור המס הסטריאו.

עשה שקע בגולגולת עם המחט כדי לסמן מיקום התייחסות מתאים. ואז סמן את השקע בטוש קבוע. לאחר מכן, בצע כריתת גולגולת שבמרכזה הקואורדינטה הרצויה והשאיר את חומר הדורה שלם.

כסו את הגולגולת בנוזל עמוד שדרה מוחי מלאכותי שונה. לאחר מכן, חותכים צינור צנטריפוגה של 0.2 מיליליטר לאורך של ארבעה עד חמישה מילימטרים וחותכים את המכסה. הנח את הצינור על הגולגולת ומרכז אותו מעל הגולגולת.

לאחר מכן מרחו מלט דנטלי סביב תחתית הצינור כדי לאטום את בסיס הצינור לגולגולת. והיזהר לא לדלוף שום מלט לתוך הגולגולת החשופה. כעת קדחו חור קטן נוסף בצלחת הגולגולת הנגדית.

הכנס בזהירות את חוט הייחוס שהולחם למחבר סיכה. לאחר מכן, יש למרוח דבק סופר על החור בו הוכנס החוט כדי לשמור על הסיכה והחוט במקומם. לאחר מכן מערבבים את שני החלקים של ערכת ג'ל הסיליקון במנות שוות.

המתן שתי דקות ומלא את צינור הצנטריפוגה בג'ל. כשליש מלא, חבר את לוחית הראש למוט משענת הראש. כאן המוט הוצמד למהדק עמוד בזווית ישרה בזווית גובה של 45 מעלות.

לאחר מכן, חבר את מוט האחיזה לזרוע מניפולטור המס הסטריאו באמצעות מהדק העמוד כך שהמוט יהיה מקביל למוטות האוזניים, הורד את המוט והצלחת כך שהצלחת תהיה אחורית של תפר הלמבדה וקדמית לבורג ה-coddle mos. לאחר מכן אחוז בבורג הראש הקדמי בזווית של כ-45 מעלות בעזרת מהדק כך שראש הבורג פונה כלפי מטה ולכיוון זנב החיה. לאחר מכן, הורד את הבורג כדי לגעת בגולגולת.

לאחר מכן, אבטח את הבורג והצלחת במקומם בעזרת אקריליק דנטלי. מרחו שכבה של מלט דנטלי סביב קצוות האקריליק הדנטלי כדי להצמיד את העור לשתל. לאחר שהתייבש המלט, תקעו כמה חורים במכסה צינור הצנטריפוגה והניחו את המכסה על הצינור.

כעת הסר את המהדק. הסר בזהירות את מוט אחיזת הראש מהסטריאו. לאחר מכן הסר את לוחית הראש מהבר.

בסוף, הסר את החיה מהתקפות הסטריאו ובצע טיפול וניטור לאחר הניתוח. בהליך זה, פולו פיפטה עם צינורות נימי קוורץ על מיקרו פיפטה לייזר פחמן דו חמצני קוטבי. לאחר מכן אבטח את הפיפטה במקומה תחת מיקרוסקופ ניגודיות הפרעות דיפרנציאליות המצויד במטרה למרחק עבודה ארוך.

הזיזו לאט גוש זכוכית לשדה הראייה בעזרת קצה פיפטה. בעזרת מניפולטור המיקרו של הבמה, שברו את קצה הפיפטה על ידי נגיעה עדינה בכוס. חזור על ההליך עד לקצה הפיפטה.

הקוטר החיצוני הוא בין מיקרומטר לשלושה מיקרומטרים. לאחר מכן, הכינו את מי המלח החוץ-תאיים והוסיפו 2% כחול שמיים של שיקגו. בעזרת מזרק עם מחט בגודל 30, מלאו את הקצה האחורי של הפיפטה בתמיסה.

לאחר מכן הניחו את החולדה בגרב הבד והעבירו את גרב הבד לצינור קשיח על ג'יג ניסיוני מתאים. חבר את לוחית ריסון הראש על החולדה לחלק המתאים בג'יג. לאחר מכן, הניחו אום 8 32 על בורג הריסון של הראש המושתל על החולדה.

לאחר מכן, הברג מוט נירוסטה מושחל לבורג הראש. לאחר מכן, פתח את תא ההקלטה והסר את ג'ל הסיליקון. נקו את הגולגולת בעזרת מלקחיים עדינים.

אם הרקמה צמחה מחדש בגולגולת, השתמש בהרדמה איזו פלואור במהלך תהליך זה במידת הצורך. לאחר מכן, חבר את הפיפטה למניפולטור המיקרו הממונע. העבר את הפיפטה למיקום ההקלטה הרצוי בציר הצדדי הקדמי, האחורי והמדיאלי.

לאחר מכן קדם את הפיפטה בגחון דרך הדורה עד שהיא נמצאת כ-500 מיקרומטר גב למיקום ההקלטה המיועד. קדם לאט את הפיפטה תוך האזנה לאירועי זינוק על צג שמע של המתח המוגבר שהוקלט. לאחר זיהוי אירועי זינוק, המשך להזיז את הפיפטה כ-0 עד 100 מיקרומטר עד שסטיות המתח החיוביות גדולות מכ-500 מיקרו-וולט.

כדי לתייג את אתר ההקלטה, הגדר את מקור הזרם לארבעה מיקרו-אמפר שלילי עם שני פולסים שניים במחזור עבודה של 50% והעביר את הזרם למשך ארבע דקות ליונופור, הזריק כחול שמיים של שיקגו דרך הפיפטה. לאחר הניסוי, יש לחלחל את החיה על פי הנוהג המקובל. לאחר מכן חתכו את המוח וצבעו לפי הצורך כדי לזהות את המיקום האנטומי של אתר ההקלטה המוצג.

הנה פעילות הדגימה של יחידת תלמוס VPM כאשר חולדה מקציפים באופן פעיל. להלן היסטוגרמה של זמני ספייק מיושרים לשלב המיידי של תנועת הוויברה. יש יותר קוצים בשלב הנסיגה של ההקצפה.

לאחר ההקלטה, מיקומה של יחידה זו סומן באמצעות אפורזיס של צבע כחול שמיים של שיקגו. כפי שמוצג כאן, הרקמה מוכתמת נגד לפעילות ציטוכרום אוקסידאז כדי לחשוף את הגבולות הנוירו-אנטומיים של VPM thalamus us. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע טכניקות כירורגיות ואלקטרופיזיולוגיות השומרות על ראש החיה במישור הסטריאוטקסי, ומבודדות באופן חד משמעי את פעילות הזינוק של נוירונים בודדים.