Name: הערכה של תפקוד כלי דם בחולים עם מחלת כליות כרונית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: למד הערכת תפקוד כלי דם בחולי מחלת כליות כרונית באמצעות מדידת התרחבות עורק הזרוע ומהירות גל הדופק האורטי. שיטה זו מאפשרת לחקור תפקוד אנדותל וקשיחות עורקית במחקר קרדיולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים נינה Bispham לקבלת הסיוע הטכני שלה. עבודה זו נתמכה על ידי איגוד הלב האמריקאי (12POST11920023), ו-NIH (K23DK088833, K23DK087859).

פרוטוקול זה עוקב אחר הקווים המנחים של המועצה לביקורת מרובה המוסדית קולורדו (COMIRB). 1. הכנה לבחינות למושב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משתתפים צריכים לעקוב הגבלות אלו למדידות מדויקות ביותר: 12 שעה מהר ממזון וקפאין, 12 איפוק שעה מפעילות גופנית, 12 איפוק שעות מעישון, אם&gt; 4 איפוק מתרופות רלוונטי, זמן מחצית החיים במידת האפשר (לא יכול להיות ריאלי ב אוכלוסייה כגון חולי CKD), ונשים לפני גיל המעבר צריכה להיבדק בימים 1-7 של המחזור החודשי כדי למזער את השפעות הורמונליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 500 מיליליטר של חיץ הניתוק על ידי הוספת 2 מיליליטר של 0.5 M חומצת ethylenediaminetetraacetic (EDTA), 0.05 גרם של הפרין (180 יחידות USP / מ&quot;ג), ו2.5 גרם של אלבומין בסרום שור ל476.8 מיליליטר של בופר פוספט (PBS) בשעה ה-pH של 7.4. זה יכול להיות מאוחסן על 4 מעלות צלזיוס במשך כמה חודשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל אולטרסאונד, מחשב, והמודינמית לא פולשניתתחנת עבודה (NIHem; ציוד נוקשות עורקים). לחבר את כבלי פלט אולטרסאונד לתיבת הדק R-גל המחשב. </li></ol> 2. איסוף ועיבוד של תאי אנדותל כלי הדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחות או רופא מיומנים מבצעת את האיסוף (שלבים 2.2-2.5, 2.7) וחוקר אוסף ומעבד את החוטים (שלבים 2.6, 2.8-2.19) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את אתר antecubital עם אקטואלי חיטוי, להחיל חוסם עורק, אתר וריד, וcannulate עם קטטר G 18. הנח מתאם heplock בסוף הרביעי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים על כפפות סטריליות ולשים וילונות fenestrated סטרילי על האתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים 2 J-חוטים בווילאות. משוך את הקשת של &quot;J&quot; ליישר את צורת &quot;J&quot; משני החוטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Uncap heplock ולהאכיל את J-חוט לתוך וריד כ 8 סנטימטר. לדחוף קדימה ואחורה מספר פעמים לפני הסרת החוט. הימנע דם ברוטו על החוט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספרי תיל לחיתוך החוטים, כדי שיתאימוצינור חרוטי 50 מיליליטר המכיל ~ 30 מיליליטר של חיץ דיסוציאציה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 2.5 לחוט שני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 2.6 לחוט שני. להחזיר צינור למעבדה רטובה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלב את החוטים עם זוג המלקחיים ולהחזיק את החוטים בתוך הצינור, אך מעל לפתרון. עבור 10 דקות, השתמש pipetter ממונע כדי לאסוף את חיץ הניתוק שוב ושוב מצינור חרוטי 50 מיליליטר ולשחרר אותו, כך שהוא רץ במורד אורך החוטים כדי לשטוף ולרטוט חוטים, ואז להתנער מנוזלים עודפים מחוטים לתוך צינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה במשך 7 דקות ב XG 400 ו4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את פתרון פורמלדהיד בצינור נייר מכוסה על ידי שילוב של 100 פתרון מיליליטר פורמלין + 900 מיליליטר PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להסיר את הצינור מצנטריפוגות, הפעל את משאבת הוואקום, למקם את קצה פיפטה בסוף צינור יניקה ולהשאיר ~ 400 מיליליטר בצינור, שאיבת אבק משאר מבלי להפריע גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסה בנייר כסף ופתרון פורמלדהיד 1 מיליליטר פיפטה לתוךהצינור כדי לתקן את המדגם. אל resuspend. דגירה של 10 דקות בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 8 שקופיות על ידי תיוג בנושא ומידע ביקור הלימוד וציור סגלגל בכל שקופית עם עט פאפ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 15 מיליליטר PBS, resuspend, ו צנטריפוגות במשך 5 דקות ב XG 400 ו4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 2.15, להוסיף 12 מיליליטר PBS, resuspend, ו צנטריפוגות במשך 6 דקות ב XG 400 ו4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להסיר את הצינור מצנטריפוגות, הפעל את משאבת הוואקום, למקם את קצה פיפטה בסוף צינור יניקה ולהשאיר ~ 2 מיליליטר בצינור, שאיבת אבק משאר מבלי להפריע גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend ופיפטה אופן שווה על פני 8 השקופיות באזורים הסגלגלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום בחממה ב 37 מעלות צלזיוס למשך 5 שעות ולאחר מכן לאחסן ב-80 ° C עד מוכן לניתוח (דגימות תהיה בסדר במשך שנים רבות). </li></ol> 3. הערכת FMD התואר הראשון וaPWV <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש שינוי נושא המחקר לתוך מכנסיים קצרים חד פעמיות ויש לי שעותim / פרקדן השקר שלה בחדר שקט ואפלולי, אקלים מבוקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצב את המספר המתאים של א.ק.ג. לאולטרסאונד הספציפי ומכשיר קשיות עורקים (הליך זה משתמש לא פולשנית המודינמית Workstation [NIHem] כדי למדוד את הנוקשות עורקים, אשר דורשת 4 אלקטרודות), ושרוול למדידת לחץ דם על נושא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי 20 דקות, מתחיל קריאות לחץ דם. לבצע לפחות 3, וחזור עד שמדידות הן בתוך 5 מ&quot;מ כספית, מנוחה 2 דקות בין כל קריאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין tonometry ידי מישוש את דופק עורק זרוע וצבת tonometer להקליט גל זרוע באמצעות התוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור לעורקי רדיאלי, הירך וצוואר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את המרחק לכל אחד מהאתרים הללו מחריץ supersternal באמצעות סרט מדידה (זרוע, רדיאלי ותרדמה) ושליט מותאם אישית / קליפר (הירך). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב התרדמה-זרוע, עורק התרדמה-רדיאלי, ותרדמה-הירך (aPWV) באמצעות התוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקוםשרוול דם זרוע לחץ דיסטלי רק לתהליך olecranon ולהקליט לפחות 10 מחזורי לב של תמונות בסיסיות עורק זרוע אולטרסאונד ומדידות זרימת דם מהירות, עם תוכנת כלי דם מוגדרת לעורר מצב. זרוע מכאנית יכולה לשמש כדי לייצב את הבדיקה אולטרסאונד אם תרצה בכך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנפח שרוול למדידת לחץ דם בזרוע 250 מ&quot;מ כספית ולהתחיל טיימר. הדרך את המשתתף להישאר מאוד עדיין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין מהירויות הקלטה עם סט תוכנות כלי דם כדי לגרום למצב שבו שעון העצר קורא 4:45. טריגר לשחרר את השרוול בשעה 5:00 ולשנות את אולטרסאונד כדי להקליט B-מצב תמונות (קוטר) כאשר השעון קורא 05:10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להמשיך את ההקלטה עד שהשעון קורא 7:00. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיא לפחות 10 מחזורי לב של תמונות אולטרסאונד עורק זרוע בסיסיות עם תוכנת כלי דם מוגדרת לעורר מצב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את לחץ הדם של הנבדק. אם לחץ דם סיסטולי&gt; 100 מ&quot;מ כספית, הנח 0.4 מ&quot;ג ניטרוגליצרין sublingual תחת הנושא &amp;# 39; של לשון ולהתחיל טיימר, אלא אם לחולה יש הוראה נגד אחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתחיל בהקלטת B-מצב (תמונות קוטר) כאשר השעון קורא 03:00 עם תוכנת כלי הדם מוגדרת לעורר מצב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעצור את ההקלטה כאשר השעון קורא 8:00. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על לחץ דם עד שהוא חוזר לנקודת התחלה </li></ol> 4. הכנת תאים האנושי טבור הווריד האנדותל (HUVEC) בקרת שקופיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדול HUVECs למעבר 5-6 ו ~ confluency 80%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypsinize עם 3 מיליליטר של טריפסין או כל מה שנדרש למנה / הבקבוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנטרל טריפסין באמצעות נפח שווה של תמיסת נטרול טריפסין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב XG 200 ל~ 5 דקות ולהסיר טריפסין ופתרון נטרול על ידי ואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend ב~ 10 מיליליטר PBS לשטוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב XG 200 ~ 5 דקות. הסר PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר PBS ולתקן בשנת 1800 PBS + 200 פורמלדהיד μl μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend ב PBS (~ 10 מיליליטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב XG 200 ~5 דקות. הסר PBS, resuspend בנפח מתאים להוסיף ~ 200 μl לכל שקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופיות חנות ב -80 ° C עד מוכן לניתוח (דגימות תהיה בסדר במשך שנים רבות). </li></ol> 5. צביעת תאי אנדותל כלי הדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח שקופיות מתוך -80 מקפיא מעלות צלזיוס ולחכות 5 דקות בטמפרטורת חדר (בהליך זה הוא לאפיית 10 שקופיות, כולל שקופית אחת שליטת HUVEC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנגב את עודפי מים עם משימה עדינה לנגב (לא לגעת במרכז השקופית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re-מימה השקופיות על ידי הוספת PBS שינה לכל שקופית ולהשאיר אותם ל10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד השקופיות עומדות, להכין 5% בסרום חמור ופתרונות אחרים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 5% בסרום חמור על ידי הוספת 300 μl של סרום חמור ל5,700 μl של PBS שינו (לpH של 7.4) לתקופה של עד 10 שקופיות (להגדיל סכום זה ליותר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את הנוגדן הראשוני של העניין ב1,000 μl של סרום 5%. לדוגמא, nitrotyrosine וNADPHמונואמין (1:300 ו1:1,500) יכולים לשמש כסמנים של סטרס חמצונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן AF568 המשני על ידי דילול 5 μl של AF568 ל -1,500 μll של סרום 5%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן VE cadherin על ידי דילול 2 μl של VE cadherin ל1,000 μl של סרום 5%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן AF488 על ידי דילול 5 μl של VE cadherin ל1,000 μl של סרום 5%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור AF568, VE cadherin וAF488 תחת נייר כסף בתהליך כולו ולאחר מכן למקם על נדנדה ב4 ° C מקרר בעת הכנת שקופיות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 10 דקות של התייבשות, מגלשות יבשות עם משימה עדינה לנגב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5% בסרום חמור ל60 דקות ומניח חתיכת סרט פרפין פלסטיק מעל האזור המוקף בעיגול כדי להבטיח כיסוי של כימי מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את סרט פרפין פלסטיק ומגלשות יבשות עם משימה עדינה לנגב. אין לשטוף. הוספת נוגדן ראשוני ל60 דקות ומניחים חתיכת סרט פרפין פלסטיק מעל האזור המוקף בעיגול כדי להבטיחכיסוי מלא של החומר הכימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את סרט פרפין פלסטיק, לשטוף עם PBS שינו מבקבוק להשפריץ ולספוג בעמודות שקופיות עבור 5 דקות. בעוד שקופיות שריה, להעביר אותם לחדר חשוך. לעבוד בחושך במשך כל השלבים הנותרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגלשות יבשים עם Kimwipes, להוסיף AF568 (נוגדנים משני) ל45 דקות ומניחה חתיכת סרט פרפין פלסטיק מעל האזור המוקף בעיגול כדי להבטיח כיסוי של כימי מלא. כסה מהאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את סרט פרפין פלסטיק במכל הפסולת הביולוגית המסוכן. יש לשטוף עם PBS שינו מבקבוק שפריץ, ולאחר מכן לטבול בטורים למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגלשות יבשים עם Kimwipes, לאחר מכן להוסיף VE cadherin ל60 דקות ומניחים חתיכת סרט פרפין פלסטיק מעל האזור המוקף בעיגול כדי להבטיח כיסוי של כימי מלא. כסה מהאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את סרט פרפין פלסטיק במכל הפסולת הביולוגית המסוכן. יש לשטוף עם PBS שינו מבקבוק שפריץ, ולאחר מכן לטבול בטורים למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגלשות יבשים עםמשימה עדינה לנגב, להוסיף AF488 ל30 דקות ומניח חתיכת סרט פרפין פלסטיק מעל האזור המוקף בעיגול כדי להבטיח כיסוי של כימי מלא. כסה מהאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את סרט פרפין פלסטיק במכל הפסולת הביולוגית המסוכן. יש לשטוף עם PBS שינו מבקבוק שפריץ, ולאחר מכן לטבול בטורים למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגלשות יבשים עם משימה עדינה לנגב ולאפשר שקופיות להתייבש במשך 20 דקות. כסה מהאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף טיפה אחת בלבד של fluoroshield הרכבה בינונית עם 4 &#39;, hydrochloride 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) לכל שקופית ולכסות כל אחת עם להחליק את מכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח שקופיות ב4 ° C מקרר מכוסים בנייר כסף. הדמיה צריכה להסתיים בתוך 48 שעה. </li></ol> 6. הדמיה וניתוח של תאי אנדותל כלי הדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מיקרוסקופ הדמיה תאי האנדותל מוכתמים על פי מפרט של המיקרוסקופ הספציפי. טכנאי עיוור אחת צריך לנתח כל חלבון מסוים לעטלףch של תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרוק את השקופיות באופן שיטתי. לזהות תאי אנדותל ידי מכתים חיובי עבור VE cadherin ולאשר יושרה גרעינית על ידי מכתים חיובי עבור DAPI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונה 30 תאים לכל שקופית לניתוח מאוחר יותר. חזור על פעולה עבור כל שקופית בתצווי המוכתם, כולל HUVEC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתח את עוצמת הצביעה לנוגדן הראשוני של עניין באמצעות תוכנה איכותית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למזער את ההשפעה של בלבול האפשרית של הבדלים בעוצמת צביעה בין פגישות צביעה שונות, ערכי דו&quot;ח כיחס בין ביטוי חלבון בתאי האנדותל שנאספו לאותו ביטוי החלבון בHUVEC. </li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

קבלת תוצאות מדויקות לFMD התואר הראשון וaPWV דורשת רכישת תמונות אולטרסאונד באיכות גבוהה וצורות גל לחץ, בהתאמה. מרכזי לכך הוא הכשרה מתאימה והמשיכה ושימוש בכל טכניקה על ידי המפעיל 44. בנוסף, זה קריטי כדי לשלוט על כמה שמשתנים חיצוניים שעשויים להשפיע על התוצאות ככל האפשר על ידי תקנון מושב הבדיקות (למשל, מהירה לפני 12 שעות, חדר מבוקר אקלים, וכו &#39;) 44,45. כאמור, השימוש בתוכנת R-גל מסחרי מגודרת רכישה ותוכנת קצה איתור מומלץ ביותר כדי ל...

מחלת כליות כרונית (CKD) היא חשש עיקרי בריאות הציבור שהגיע לממדי מגפה, המשפיעים ~ 11.5% מהאוכלוסייה בארצות הברית לבדה 1. הסיכון למוות לב וכלי דם או אירוע לב וכלי דם בחולים עם מחלת כליות כרונית הוא גדל באופן משמעותי בהשוואה לאוכלוסייה הכללית 2-4. למרות שמטופלים עם מחלת כליות כרונית תערוכת שכיחות גבוהה של גורמי סיכון הקרדיווסקולריים מסורתיים, זה רק מסביר חלק משכיחותם המוגבר למחלות לב וכלי דם (CVD) 5. תפקוד לקוי של כלי דם הוא גורם חשוב לא מסורתי סיכון למחל לב זוכה להכרה מוגברת בתחום נפרולוגיה 6-9. בעוד רבים שינויים צפויים לתרום להתפתחות של בעיות בתפקוד עורקים, בקרב אלה של הדאגה הגדולה ביותר הם הפיתוח של תפקוד האנדותל בכלי דם, שהוערך ביותר בכינויו התרחבות לקוי האנדותל תלוי (EDD), והתקשות של laעורקים אלסטיים rge 10. טכניקות שונות קיימות כדי להעריך EDD ונוקשות עורק אלסטי גדולים, אך הנפוץ ביותר הן התרחבות בתיווך זרימת עורק זרוע FMD תואר ראשון ומהירות של אב העורקים גל דופק (aPWV), בהתאמה. טכניקה הנפוצה נוספת כדי להעריך EDD מודדת את זרימת דם בזרוע בתגובה לסוכנים תרופתיים כגון אצטילכולין באמצעות plethysmography חסימה ורידית 11,12. עם זאת, במתודולוגיה זו דורשת צנתור של עורק הזרוע, שהוא יותר פולשנית מאשר FMD התואר הראשון ועשויים להיות התווית בחולים עם מחלת כליות כרונית. טכניקה חלופית כדי להעריך את קשיחות עורקים היא למדוד את העמידה המקומית עורקים (ההופכי של נוקשות) של העורק הראשי, אם כי זה לא כמו בשימוש או תוקף עם נקודות קצה קליניות כaPWV 13 באופן נרחב. חולים עם מחלת כליות כרונית להדגים שני FMD BA לקוי 14-16 והגדיל את מהירות גל דופק אב העורקים APWV 13,17,18, עוד קודם לצורך בדיאליזה. חשוב לציין מנקודת מבט קלינית, שניהם של אמצעים אלה לא פולשנית של תפקוד לקוי של כלי דם הם מנבאים בלתי תלויים לאירועי לב וכלי דם בעתיד ובתמותה הן בחולים עם מחלת כליות כרונית 19-21, כמו גם באוכלוסיות אחרות 22-26. ניתן ליישם את הטכניקות הללו ללימוד אוכלוסיות שונות בסיכון של CVD, לרבות חולים עם מחלת כליות כרונית. המנגנונים המדויקים שבו תפקוד לקוי של עורקים מתפתח במחלת הכליות כרונית הם הבינו באופן חלקי; עם זאת, זמינות ביולוגית תחמוצת חנקן מופחתת (NO) הוא תורם קריטי 27-30 ומנגנון משותף של שני EDD לקוי וקשיחות העורק מוגבר 10,31. במחלת הכליות כרונית, סטרס חמצוני מוגבר ותורם לירידה בזמינות הביולוגית NO 32-34. סטרס חמצונים מוגדר כזמינות ביולוגית מוגזמת של מיני חמצן תגובתי (ROS) ביחס להגנה נוגדת חמצון. גירויים פיסיולוגיים, including איתות דלקתית, לקדם מערכות אנזימי חמצון כדי לייצר ROS, כולל אניון סופראוקסיד (O 2 ● -) (לדוגמא, אנזים מונואמין NADPH חמצון). 35. ייצור של סופראוקסיד סופו של דבר מוביל למפחית את הזמינות הביולוגית של תחמוצת חנקן (NO). פגומה אין זמינות ביולוגית עשויה בתורו תורמת להתפתחות של מחלת כליות כרונית, כמו בעיות בתפקוד האנדותל הוא מנבא בלתי תלוי של מחלת כליות כרונית אירוע 36. זה עולה בקנה אחד עם הנתונים של בעלי החיים מצביעים על כך שעיכוב אינס גורם יתר לחץ דם (מערכתי וגלומרולרי), איסכמיה גלומרולרי, טרשת פקעיות כליה, ולפציעתם tubulo-ביניים 37. ואכן, אין זמינות ביולוגית מופחת מופיעה הכרחית להתפתחות וההתקדמות של מחלת כליות ניסיונית המחקה מחלות אנושיות, מה שמרמז תפקיד מפתח לתפקוד האנדותל בCKD אדם 38,39. סמנים של סטרס חמצוני כלי דם ניתן להעריך בvascular תאי האנדותל שנאספו מנושאי מחקר אנושיים, תוך שימוש בטכניקה שפותחה במקור על ידי קולומבו et al. 40 והותאמה אטמים ואח&#39; 41-43. באמצעות 2 J-חוטים סטריליים, תאים שנאספו מוריד antecubital, התאושש, קבוע, ומאוחר יותר זוהה בודאות כתאי האנדותל ונותח לביטוי של חלבונים של עניין באמצעות immunofluorescence. אנו מספקים כאן דיון של מתודולוגיה זו, שניתן להשתמש לתואר ראשון FMD מדד); ב) למדוד aPWV; ג) למדוד ביטוי חלבון תא האנדותל בכלי דם של סמנים של סטרס חמצונים. הדגש הוא על חולים עם מחלת כליות כרונית, שאינו דורש דיאליזה כרונית.

<table><tbody><tr><td>J-wire</td><td>St. Jude</td><td>404584</td><td>2 לכל קולקציה</td></tr><tr><td>מכנסיים חד פעמיים (MediShorts)</td> <td>Quick Medical</td><td>4507</td><td></td></tr><tr><td>תחנת עבודה המודינמית לא פולשנית (NIHem)</td> <td>הנדסת לב וכלי דם</td><td>N/A</td><td>כולל סרגל מותאם אישית.&nbsp; מערכת חלופית היא Sphygmocor</td></tr><tr><td>Ultrasound</td><td>G.E.</td><td>דגם: Vivid7 Dimension</td><td>אנו משתמשים ב-GE, אך ישנן חברות ודגמים רבים</td></tr><tr><td>של תוכנת כלי דם (Vascular Imager)&nbsp;</td><td>יישומי הדמיה רפואית</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>תיבת טריגר גל R יישומי</td><td>הדמיה רפואית</td><td>N/A</td><td>בהתאמה אישית</td></tr><tr><td>מערכת ניפוח שרוול מהיר</td><td>דגם Hokanson</td><td>: Hokanson E20</td><td></td></tr><tr><td>שרוול לחץ דם בזרוע</td><td>Hokanson</td><td>N/A</td><td>שרוול מותאם אישית עם שלפוחית השתן 6.5 x 34 ס"מ&nbsp;</td></tr><tr><td>HUVECs</td><td>Invitrogren</td><td>C-015-5C</td><td></td></tr><tr><td>סרום חמור</td><td>ג'קסון</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>עט פאפ</td><td>מוצרי מחקר בינלאומיים</td><td>195505</td><td></td></tr><tr><td>VE Cadherin</td><td>Abcam</td><td>ab33168</td><td></td></tr><tr><td>AF568</td><td>Life Technologies</td><td>A11011</td><td>תלוי במפרט של microscpe&nbsp;</td></tr><tr><td>AF488</td><td>Life Technologies</td><td>A11034</td><td>תלוי במפרטים של microscpe&nbsp;</td></tr><tr><td>נוגדן ניטרוטירוזין&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab7048</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן NADPH אוקסידאז</td><td>אפסטייט</td><td>07-001</td><td></td></tr><tr><td>DAPI&nbsp;</td><td>וקטור</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>מגבון משימות עדין (Kimwipe)&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>06-666-A</td><td></td></tr><tr><td>סרט פרפין מפלסטיק (פרפילם)&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-374-10</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי&nbsp;</td>דגם <td>אולימפוס</td><td>: FV1000 FCS / RICS</td><td>קיימות אפשרויות רבות&nbsp;</td></tr></tbody></table>

הערכה של תפקוד כלי דם בחולים עם מחלת כליות כרונית

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

חולים עם מחלת כליות כרונית (CKD) הגדילו באופן משמעותי את סיכון למחל לב וכלי דם (CVD) בהשוואה לאוכלוסייה הכללית, וזה מוסבר באופן חלקי בלבד על ידי גורמי סיכון CVD מסורתיים. תפקוד לקוי של כלי דם הוא גורם חשוב לא מסורתי סיכון, המתאפיין בחוסר תפקוד אנדותל כלי דם (שהוערך ביותר בכינויו התרחבות לקוי האנדותל תלוי [EDD]) והתקשות של העורקים אלסטיים הגדולים. בעוד טכניקות שונות קיימות כדי להעריך EDD ונוקשות עורק אלסטי גדולים, נפוץ ביותר הם התרחבות זרוע עורק בתיווך זרימה (BA FMD) ומהירות של אב העורקים גל דופק (aPWV), בהתאמה. שני צעדים אלה לא פולשנית של תפקוד לקוי של כלי דם הם מנבאים עצמאיים של אירועי לב וכלי דם בעתיד בחולים עם ובלי מחלת כליות. חולים עם מחלת כליות כרונית להדגים שני FMD BA לקוי, והגדילו את aPWV. בעוד המנגנונים שבאמצעותם המדויקים deve תפקוד כלי דםכורת במחלת הכליות כרונית הם הבינו באופן חלקי, סטרס חמצוני מוגבר וירידה שלאחר מכן בתחמוצת חנקן זמינות ביולוגית (NO) הם תורמים חשובים. שינויים תאיים בסטרס חמצוני יכולים להיות מוערכים על ידי איסוף תאי האנדותל של כלי דם מוריד antecubital ומדידת ביטוי חלבון של סמנים של סטרס חמצוני באמצעות immunofluorescence. אנו מספקים כאן דיון בשיטות אלה כדי למדוד FMD תואר ראשון, aPWV, וביטוי חלבון תא האנדותל בכלי דם.

FMD התואר הראשון הוא לכמת כשינוי השיא בקוטר של עורק הזרוע הבא hyperemia תגובתי. לפיכך, בקוטר במנוחה הוא בהשוואה לקוטר שלאחר תום תקופת חסימת שרוול למדידת לחץ דם 5 דקות (איור 1). לוח מראה תמונת אולטרסאונד נציג של עורק הזרוע, והלוח ב &#39;מציג גרף של שינוי R-הגל מגודרת בקוטר משחרור שרוול ל2 דקות שלאחר מכן, כפי שהתקבל באמצעות תוכנה זמינה באופן מסחרי. כשינוי הוא לעתים קרובות די מינימאלי (באיור 1 השינוי הוא 4.8%), הבדלים קטנים במדידה יכולים ל...

מידת חוסר תפקוד כלי דם ותורמים מנגנונים פיסיולוגיים ניתן להעריך בחולים עם מחלת כליות כרונית על ידי מדידת התרחבות עורק זרוע בתיווך זרימה, מהירות גל הדופק של אב העורקים, וביטוי חלבון תא האנדותל בכלי דם.

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא להעריך את התפקוד הווסקולרי בחולים עם מחלה כלית כרונית, וזאת על ידי איסוף ראשוני של תאים אנדותליאליים וסקולריים מהחולים. לאחר מכן, נמדדת מהירות גל הדופס באורטה כדי להעריך את נוקשתו של עורק אלסטי גדול. לבסוף, נמדד הרחבה תלוית זרימה של העורק הברכיאל (brachial artery flow mediated dilation) כדי להעריך את התפקוד האנדותליאלי הווסקולרי.בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המאפיינות את התפקוד של האנדותל העורקי. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום העורקים, כגון מה קורה ברמה התאית לביטוי של חלבונים שונים. באופן כללי, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקשו, שכן נדרש אימון ותרגול נרחב כדי להגיע למיומנות בדימות באולטרסאונד.את הפרוצדורה תדגים לוני פרינו, עוזרת מחקר מהמעבדה שלי. ראשית, יש להכין את האזור באמצעות חומר חיטוי מקומי. לאחר מכן, יש להניח סדינים סטריליים עם חלון מעל האזור.על אחות מוסמכת או רופא להניח קנולה (IV) ולחבר מחבר למניעת קרישה (hep lock adapter). הנח שני תלי J על הסדינים כדי לפרוס את צורת ה-J. משוך את קשת ה-J בשני התלים.לאחר הפיתול, הסירו את מכסה ה-hep lock והחדירו את ה-JWI לתוך הוריד לעומק של כחמישה סנטימטרים. דחפו את התיל קדימה ואחורה מספר פעמים לפני ההוצאה כדי למנוע הצטברות מרובה של דם על התיל. לאחר מכן, השתמשו קוצרי תיל כדי לגזור את התילים כך שיתאימו לשפופרת קונית של 50 milliliter המכילה כ-30 milliliter של תמיסת דיסוציאציה (dissociation buffer).חזור על שלבים אלו עבור התיל השני כאשר איסוף הדגימות הושלם. חזור למעבדה הרטובה. אחוז בתילים באמצעות פינצטה והחזק אותם בתוך המבחנה אך מעל התמיסה למשך 10 דקות.השתמשו בפיפט ממונע כדי לשטוף את התילים עם תמיסת דיסוציאציה מהמבחנה. שחררו את התמיסה כך שתזרים לאורך התילים ונערו את עודפי הנוזל חזרה אל המבחנה. הוציאו את התילים וסובבו את הדגימה בצנטריפוגה כדי לשקיע את המשקע.הוצא את הדגימות ושחזר את המשקע ב-PBS לפני הצנטריפוגה. במשך חמש דקות נוספות לאחר מכן, השתמש בקצה של טיפ פיפט על צינור שאיבה כדי להשאיר כ-2 ml בשפופרת. שאב את השאר בעזרת ואקום מבלי להפריע למשקע.שחזר את המשקע באמצעות ריסספנזיה והעבר בעזרת פיפט את הדגימה באופן שווה לאזורים האליפטיים של שמונה שקופיות שסומנו מראש. הנח את השקופיות באינקובטור בטמפרטורה של 37 °C למשך חמש שעות לפני האחסנה בטמפרטורה של 80- °C עד לתחילת האנליזה. על הנבדק להחליף למכנסיים קצרים חד-פעמיים ולהישכב על הגב בחדר שקט, מעומעם ובטמפרטורה מבוקרת.כאשר תהיו מוכנים להתחיל, מקמו את האלקטרודות עבור האולטרסאונד ומכשיר נוקשות העורקים. לאחר מכן, הצמידו את שרוול מד לחץ הדם לנבדק. התחילו את קריאות לחץ הדם לאחר 20 דקות, וחזרו על הקריאות עד שהמדידות יהיו בטווח של חמישה מילימטרים של כספית אחת מהשנייה.מנוחה של שתי דקות בין כל מדידה, וביצוע של שלוש מדידות לפחות. לאחר מכן, גששו את הדופק בעורק brahcial והניחו את הסונומטר להקלטת גלי הדם בעורק זה. חזרו על הפעולה עבור העורקים radial, femoral ו-carotid.מדוד את המרחק לכל אחד מהאתרים הללו מהשקע הסופרסטרנלי (super sternal notch) באמצעות סרט מדידה עבור העורקים הברכיאלי, הרדיאלי והקרטיד, ובאמצעות סרגל ייעודי עבור העורק הפמורלי. לאחר מכן, חשב את מהירות גל הדופק (pulse wave velocity) עבור הזיווגים קרטיד-ברכיאלי, קרטיד-רדיאלי וקרטיד-פמורלי באמצעות תוכנה ייעודית. מקם את שרוול מד הדם של הזרוע בדיסטלי למבנה ה-reon.הגדירו את התוכנה הווסקולרית למצב הדק (trigger mode) והקליטו לפחות 10 מחזורי לב של תמונות אולטרסאונד ומדידות מהירות זרימת דם של עורק הזרוע (brachial artery) במצב בסיס. ניתן להשתמש בזרוע מכנית כדי לייצב את מתמר האולטרסאונד במידת הצורך. לאחר מכן, נפחו את שרוול מד לחץ הדם של האמה ל-250 millimeters of mercury.והפעילו טיימר. הנחו את המשתתף להישאר ללא תנועה. התחילו להקליט מהירויות כאשר הטיימר מורה על ארבע דקות ו-45 שניות.שחררו את השרוול לאחר חמש דקות ושנו את מכשיר האולטרסאונד להקלטת תמונות במצב B. כאשר השעון מורה על חמש דקות ו-10 שניות, המשיכו בהקלטה עד שהשעון מורה על שבע דקות.בשלב הבא, מדדו את לחץ הדם של הנבדק. אם לחץ הדם הסיסטולי גבוה או שווה ל-100 millimeters of mercury, הניחו 0.4 milligrams של nitroglycerin סובלינגואלי תחת לשונו של הנבדק והפעילו את הטיימר. התחילו בהקלטת B mode כאשר השעון מראה שלוש דקות והפסיקו את ההקלטה.כאשר השעון מורה על שמונה דקות. כדי לנתח את התאים האנדותליאליים הצבועים, חוקר בודד בסמיות צריך לסרוק את השקופיות באופן שיטתי; תאים אנדותליאליים מזוהים על ידי צביעה חיובית ל-VE cadherin, ושלמות הגרעין מאושרת על ידי צביעה חיובית ל-dapi. בנוסף, יש לצבוע את התאים עבור החלבון המבוקש.יש לדגום תמונות של 30 תאים בסך הכל לכל שקופית לצורך ניתוח מאוחר יותר. חזור על תהליך זה עבור כל שקופית בסדרה שנצבעה, כולל שקופית הבקרת VE. תוכנה איכותית משמשת לניתוח עוצמת הצביעה עבור הנוגדן הראשוני הנבדק.תמונה זו מראה את קוטר עורק הזרוע (brachial artery) בבסיס, שהתקבל במהלך הערכה של מטופל עם מחלה כרונית של הכליות לאחר שחרור חסום (cuff) למשך שתי דקות. הקלטה זו מראה שינוי בקוטר המוּנחה (gated) לפי גל R. צורות גלים אלו התקבלו בכל אחד מעורקי הה carotid וה-femoral.ההבדל בזמן ובמרחק שימש לחישוב דוח של מהירות גל הדופק באביון (aortic pulse wave velocity). כאן, תאי ביקורת ותאי חולה נותחו לבדיקת שלמות הגרעין, ביטוי של תאי אנדותל באמצעות VE cadherin ועבור האנזים המחמצן N-A-D-P-H oxidase. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להשיג את תמונות האולטרסאונד, צורות הגל ותמונות תאי האנדותל באיכות הגבוהה ביותר האפשרית לצורך הערכה כמותית ומדויקת.יש לזכור כי עבודה עם דגימות אנושיות עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות, כגון לבישת ציוד מגן אישי מתאים, בעת ביצוע הליך זה.

assessment-vascular-function-patients-with-chronic-kidney

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הליך פולשני להערכת תפקוד האנדותל הוא הוכיח באמצעות Endo-PAT 2000.

הערכת תפקוד האנדותל vasodilator עם 2000 Endo-PAT

Capillaroscopy היא לא פולשנית מתודולוגיה, זולה יחסית להמחשת זרימת הדם באופן ישיר. טכניקת זרימת דם הזרוע מספקת מדדים מקובלים לא פולשנית של תפקוד האנדותל.

הערכה בלתי פולשנית של תפקוד כלי דם והאנדותל

המאמר הנוכחי מתאר את השיקולים המתודולוגיים למספר הערכות לא פולשניות של תפקוד כלי הדם והמורפולוגיה המשמשות בדרך כלל במחקר רפואי להערכת שלבים שונים של טרשת עורקים.

גישה המתודולוגית להערכות לא פולשני של תפקוד כלי דם ומורפולוגיה

פרוטוקול זה מתאר של הכליה מלא עבודה מעלה כי צריך להתבצע במודלים של העכבר של מחלת glomerular. השיטות מאפשרים ניתוח פונקציונלי, מבניים מכניסטית מפורט של הפונקציה glomerular, אשר ניתן להחיל על כל הדגמים העכבר של המחלה glomerular.

הערכה של תפקוד כליות במודלים של העכבר של מחלת Glomerular

אנו מתארים את ההערכה של מקדם של קביעה בין כלי וצפיפות זלוף של מקלעת נימי שטחית parafoveal כדי לזהות את תרומתם של כלי גדול יותר נימים לצפיפות זלוף.

הערכה של נימי ותרומת כלי שיט אחרים לצפיפות זלוף מקולרית נמדדת עם טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית אנגיוגרפיה

פרוטוקול זה מפרט את השלבים הכירורגיים של יצירת פיסטולה עורקית איליאק משותפת. פיתחנו מודל זה כדי לחקור פתופיזיולוגיה של הגפיים הקשורות להמודיאליזה.

מודל מורין של המודיאליזה גישה לתפקוד לקוי של היד

אולטרסאונד נקודתי (POCUS) משמש לעתים קרובות להערכת המעגל ההמודינמי וזיהוי נוכחות של גודש ורידי. מערכת הניקוד של אולטרסאונד עודף ורידי (VExUS) פותחה כדי לסייע לרופאים לחזות את ההשפעה של גודש ורידי על תפקוד לקוי של איברים. מאמר זה נועד לתאר רכישה ופרשנות של תמונות VExUS.

הסרת המסתורין של אולטרסאונד עודף ורידי (VExUS): רכישת תמונות ופרשנות

מאמר זה מציג פרוטוקול שלב אחר שלב לבידוד והערכה תפקודית של ענפי עורקי כליה אנושיים, המאפשר מחקרים פרה-קליניים לפיתוח תרופות.

מיקרודיסקציה רב-שכבתית ופרופיל פונקציונלי-מבני של ענפי עורקי הכליה האנושיים

המתודולוגיה לאיסוף בצפיפות גבוהה אירוע הקשור נתונים פוטנציאל בעוד חולים עם מחלת אלצהיימר לבצע משימה זיכרון הכרה נבדק. פרוטוקול זה יכלול הכנה בנושא, אבטחת איכות, רכישת נתונים, ניתוח נתונים.

בחינת מאפייני זיכרון אפיזודי באמצעות פוטנציאל הקשור לאירוע &#39;בחולים עם מחלת אלצהיימר

Karyotyping ספקטרלי (שמים) היא טכניקה מתקדמת cytogenetics לזהות סטיות כרומוזומליות גנומית. שיטה זו מנצלת את בדיקות ציור כרומוזום, המאפשרים סיווג של כרומוזומים כל. SKY יכול גם לזהות סטיות כרומוזום מורכבים ופגמים הפרדה בעכברים ובבני אדם עם מחלות שונות, לרבות מחלת כליות פוליציסטיות.

Karyotyping רפאים ללמוד חריגות כרומוזום בבני אדם ועכברים עם מחלת כליות פוליציסטיות

למד הערכת תפקוד כלי דם בחולי מחלת כליות כרונית באמצעות מדידת התרחבות עורק הזרוע ומהירות גל הדופק האורטי. שיטה זו מאפשרת לחקור תפקוד אנדותל וקשיחות עורקית במחקר קרדיולוגי.

הערכה של תפקוד כלי דם בחולים עם מחלת כליות כרונית

גלה סרטונים נוספים