פונקציונליות ניטור ומורפולוגיה של כלי דם גויס על ידי גורמים מופרשים על ידי תאים מניבי גידול בצמיחה מהיר

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא להשתמש באולטרסאונד ובמיקרוסקופיה אנדו כדי להמחיש את הפוטנציאל האנגיוגני של מאגר של גורמים המופרשים על ידי תאים סרטניים. זה מושג על ידי השתלת פקק ליצירת סביבה דמוית גידול בעכבר בהיעדר תאי גידול. לאחר מכן, מעריכים את צפיפות כלי הדם ואת אחוז כלי הדם התפקודיים בתוך הפקק.

בשלב האחרון מדומיינת המורפולוגיה של כלי הדם. בסופו של דבר, ניתן להעריך את האיזון בין הגורמים הפרו-אנגיוגניים והאנטי-אנגיוגניים המופרשים על ידי התאים והשפעותיהם על אנגיוגנזה באופן חיוני ובנקודות זמן שונות על ידי שתי שיטות ההדמיה המשלימות . היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו בדיקת פקק מטריג'ל קונבנציונלית, הוא שהיא מאפשרת ניתוח של מאגר של גורמים מופרשים על ידי התאים תוך שימוש בשיטות הדמיה תוך-חיוניות משלימות.

להדגים את ההליך הזה, היא הריצה, סטודנטים לדוקטורט F Andra מהמעבדה שלי כדי להשתמש באולטרסאונד להערכת מטריצה חוץ-תאית או ECM, חיקוי כלי דם של תקע ג'ל, התחל בהנחת צינור איינור אחד של 1.5 מיליליטר המכיל 80 מיקרוליטר של מדיה ממוזגת שהוכנה לאחרונה על קרח. החלק המסובך ביותר בהליך הוא הזרקת הג'ל ללא בועות באמצעות טיפים קרים כקרח. ערבוב עדין והזרקה איטית יבטיחו מתן ג'ל אופטימלי.

לאחר מכן בעזרת טיפים קרים של 1000 מיקרוליטר מערבבים 600 מיקרוליטר קר כקרח ארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה. ג'ל חיקוי ECM מופשר לתקשורת תוך הקפדה לא ליצור בועות. לאחר אישור הרגעה על ידי צביטת הבוהן, גלחו את הבטן של כל עכבר והשתמשו במזרק קר כקרח של מיליליטר אחד המצויד במחט בגודל 27 כדי לאט לאט תת עורית.

הזרקו את התוכן של צינור EEND DPH אחד לכל בעל חיים. לאחר מתן הנפח כולו, החזק את המחט במקומה למשך מספר דקות עד להתמצקות. שלושה שבועות לאחר מכן, גלחו שוב את אזור הבטן של העכברים, הסירו שיער מיותר עם קרם אפילציה, ואז קבעו את העכברים במצב שכיבה על במת המניפולטור המיקרו

לאחר מכן, מלאו מזרק מיליליטר אחד המצויד במחט בגודל 30 במי מלח. לאחר מכן הנח את המחט בתוך וריד הזנב. תקן את המחט בחוזקה ושחרר את המזרק.

כעת הנח את המתמר באמצע אזור הסריקה הרצוי ולחץ על תלת מימד כדי לאתחל את שלב המנוע התלת מימדי. לחץ על 3D. שוב, הזן את מרחק הסריקה וגודל הצעד ולחץ על סריקה.

ודא שהתקע כולו נסרק בנתוני התמונה התלת-ממדית המוצגים. אם לא, כוונן את המתמר כך שכל התקע יהיה גלוי וסרוק שוב את האזור כפי שהודגם זה עתה. לאחר מכן בחר ניגודיות והתאם את פיצוי רווח הזמן או בקרות tgc כדי להחשיך את התמונה, השתמש במיקסר בקבוקון כדי להפעיל את המיקרו-בועות למשך 45 שניות.

לאחר מכן מערבבים 50 מיקרוליטר של המיקרו-בועות עם 50 מיקרוליטר מי מלח במזרק של מיליליטר אחד. החלף את מי המלח המכיל מזרק משוחרר במזרק המכיל את המיקרו-בועות המופעלות והזריק את המיקרו-בועות המדוללות לווריד הזנב של כל עכבר. המתן מספר שניות עד שהבועות יגיעו למצב יציב ולאחר מכן לחץ על תלת-ממד ובחר סריקה כדי להשיג תלת-ממד.

ניגודיות משופרת של תמונות. לחץ על ראיית חנות כדי לשמור את נתוני התמונה, ולאחר מכן בחר תלת מימד והשמד תלת מימד. כדי להרוס את המיקרו-בועות, לחץ שוב על 3D ובחר סריקה כדי להשיג לולאת cena לאחר ההרס.

לאחר מכן לחץ שוב על ראיית חנות. לאחר מכן, בהגדרות ההפניה, לחץ על צור הפניה ולאחר מכן בחר ניהול מחקר. כדי לפתוח את לולאת הסנה שלפני ההרס.

כעת לחץ על תהליך cena כדי ליצור שכבת ניגודיות ירוקה. לאחר מכן בחר עומס לתלת מימד בתוכנת הדמיית האולטרסאונד. לאחר מכן, לחץ על הגדרות מצב, לחץ על עוצמת קול ובחר מקביל.

לאחר מכן פלח סדרה של קווי מתאר כדי ליצור נפח תלת מימדי של רקמת היעד ולחץ על סיום כדי להשלים את הפילוח. כדי להשתמש במיקרוסקופיה אנדו קונפוקלית סיבים כדי להעריך את מורפולוגיה כלי הדם של פקק הג'ל החיקוי ECM להזריק 200 מיקרוליטר של 10 מיליגרם למיליליטר, מתאים דקסטרן עם תווית C לווריד הזנב של כל חיית ניסוי. לאחר מכן החל חתך קטן כסנטימטר אחד מהתקע והנח את בדיקת המיקרוסקופיה האנדו בעדינות על גבי התקע תוך שמירה על התקע שלם.

לאחר שהגשושית נמצאת במקומה, השתמש בדוושת כף הרגל כדי ללחוץ על לייזר התחל. לאחר שהפלואורסצנטיות מופיעה על המסך, לחץ על בחירה עם דוושת הרגל כדי לרכוש סרטים קצרים באורך של עד 32 בין סרטים, שטוף את קצה הגשושית בצינור המכיל מים. בסיום הצילום, נקו את הקצה בעזרת צמר גפן כדי לנתח את קוטר הכלי הממוצע.

לאחר מכן, לחץ על זיהוי כלי מיקרו כדי לפתוח את חלון מודול זיהוי כלי השיט ולחץ על העדפות. ודא שממוצע קוטר הכלי בסטטיסטיקה המעניינת. פסי היסטוגרמה של חלונות ותצוגה במצב תצוגה מסומנים.

לחץ על זיהוי כדי להציג את המידות שנבחרו. על מנת לנתח את עוצמת האות הפלואורסצנטי באזורים הסמוכים לכלי הדם, יש לבחור ביצירת החזר ROI מעגלי וליצור מעגל באזור העניין. לבסוף, בחר חשב היסטוגרמה בתוך החזר ROI כדי לחשב את הערכים הקשורים לאזור המוקף בעיגול.

כאן מתגלה הגיוס הנרחב של כלי דם פונקציונליים בתוך תקעים טעונים בינוניים ממוזגים U 87 מ"ג על ידי הדמיית אולטרסאונד משופרת בניגודיות מיקרו-בועות. לעומת זאת, בתוך התקעים המכילים מדיום מותנה מתאים מייצרי גידול רדומים, זרימת הדם כמעט בלתי ניתנת לזיהוי. המורפולוגיה של כלי הדם החדשים שנוצרו מודגשת עוד יותר על ידי מיקרוסקופיה אנדו קונפוקלית סיבים של כלי הדם לאחר מתן דקסטרן מתאים כפי שמודגם בתמונות מייצגות אלה, שימו לב כיצד כלי הדם בתוך התקעים העמוסים במדיום המותנה U 87 מ"ג מציגים מורפולוגיה טיפוסית של כלי דם מוגדל

כלי הדם המוגדלים והסבוכים מאוד מדגימים גם זרימה לא רציפה ואיטית ודליפה של הדם נצפית באזור הסובב וכן מעידה על ידי האות הפלואורסצנטי הגבוה הניכר מחוץ לכלי הדם. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך שעות במספר נקודות זמן כדי לייעל את קינטיקה של אנגיוגנזה.