Name: הקל Sonication Immunofluorescence הכתמה של שלב מאוחר עוברי וזחל דרוזופילה רקמות באתר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: למד שיטת סוניקציה לחיטוי אימונופלואורסצנטי של רקמות עובריות וזחליות ב-Drosophila melanogaster. הפרוטוקול מאפשר הדמיית חלבונים ותאים ספציפיים ללא צורך בניתוח רקמות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו אסירי תודה לרות ליהמן וDorthea Godt שעושים חסד סיפק נוגדנים ושה ופקק התנועה. ברצוננו להודות למרכז מניות Bloomington באוניברסיטת אינדיאנה לשמירה על מניות ובלבד ובנק Hybridoma מחקרים התפתחותיים שפותח בחסות NICHD ומתוחזק על ידי אוניברסיטת איווה. אנו מודים לכל החברים במעבדה Wawersik לייעוץ והתמיכה שלהם. עבודה זו מומנה על ידי מונרו חוקרי גרנט התכנית (לAF וLB) וNSF להעניק IOS0823151 (לMW).

<ol><li>Moore, L. A., Broihier, H. T., Van Doren, M., Lunsford, L. B., Lehmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+genes+controlling+germ+cell+migration+and+embryonic+gonad+formation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Identification of genes controlling germ cell migration and embryonic gonad formation in Drosophila.</a> Development. 125, 667-678 (1998).</li>
<li>Rothwell, W. F., Sullivan, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRothwell%2C+WF+%22Drosophila+Protocols%22">Drosophila Protocols</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. 141-157 (2000).</li>
<li>Jenkins, A. B., McCaffery, J. M., Van Doren, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+E-cadherin+is+essential+for+proper+germ+cell-soma+interaction+during+gonad+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila E-cadherin is essential for proper germ cell-soma interaction during gonad morphogenesis.</a> Development. 130, 4417-4426 (2003).</li>
<li>Ashburner, M., Golic, K., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+A+Laboratory+Handbook%22">Drosophila: A Laboratory Handbook</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Ch. 6 122-205 (2005).</li>
<li>Blair, S. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBlair%2C+SS+%22Drosophila+Protocols%22">Drosophila Protocols</a>. Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Ch. 10 159-173 (2000).</li>
<li>Patel, N. Drosophila melanogaster: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPatel%2C+N+%22Methods+in+Cell+Biology%22">Methods in Cell Biology</a>. Goldstei, L. S. B., Fryberg, E. A. , Academic Press. Vol. 44 445-487 (1994).</li>
<li>Maimon, I., Gilboa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+staining+of+Drosophila+larval+ovaries%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection and staining of Drosophila larval ovaries.</a> J Vis Exp. , (2011).</li>
<li>Le Bras, S., Van Doren, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+male+germline+stem+cell+niche+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of the male germline stem cell niche in Drosophila.</a> Dev Biol. 294, 92-103 (2006).</li>
<li>Sheng, X. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jak-STAT+regulation+of+male+germline+stem+cell+establishment+during+Drosophila+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Jak-STAT regulation of male germline stem cell establishment during Drosophila embryogenesis.</a> Dev Biol. 334, 335-344 (2009).</li>
<li>Sinden, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jak-STAT+regulation+of+cyst+stem+cell+development+in+the+Drosophila+testis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Jak-STAT regulation of cyst stem cell development in the Drosophila testis.</a> Dev Biol. 372, 5-16 (2012).</li>
<li>DeFalco, T., Camara, N., Le Bras, S., Van Doren, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonautonomous+sex+determination+controls+sexually+dimorphic+development+of+the+Drosophila+gonad%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Nonautonomous sex determination controls sexually dimorphic development of the Drosophila gonad.</a> Dev Cell. 14, 275-286 (2008).</li>
<li>Jemc, J. C., Milutinovich, A. B., Weyers, J. J., Takeda, Y., Van Doren, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((raw+Functions+through+JNK+signaling+and+cadherin-based+adhesion+to+regulate+Drosophila+gonad+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">raw Functions through JNK signaling and cadherin-based adhesion to regulate Drosophila gonad morphogenesis.</a> Dev Biol. 367, 114-125 (2012).</li>
<li>Fuller, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFuller%2C+M+%22The+Development+of+Drosophila+melanogaster%22">The Development of Drosophila melanogaster</a>. Bat, M., Martinez Arias, A. , Cold Spring Harbor Press. Vol. I 71-147 (1993).</li>
<li>Cuevas, M., Matunis, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stem+cell+niche%3A+Lessons+from+Drosophila+testis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The stem cell niche: Lessons from Drosophila testis.</a> Development. 138, 2861-2869 (2011).</li>
<li>Williamson, A., Lehmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ+cell+development+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Germ cell development in Drosophila.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 12, 365-391 (1996).</li>
<li>Jemc, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+gonadal+cells%3A+the+supporting+cast+for+the+germline%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Somatic gonadal cells: the supporting cast for the germline.</a> Genesis. 49, 753-775 (2011).</li>
<li>Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSpradling%2C+AC+%22The+Development+of+Drosophila+melanogaster%22">The Development of Drosophila melanogaster</a>. Bat, M., Martinez Arias, A. , Cold Spring Harbor Press. Vol. I 1-70 (1993).</li>
<li>Eliazer, S., Buszczak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Finding+a+niche%3A+studies+from+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Finding a niche: studies from the Drosophila ovary.</a> Stem Cell Res Ther. 2, 45(2011).</li>
<li>Sahut-Barnola, I., Godt, D., Laski, F. A., Couderc, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+ovary+morphogenesis%3A+Analysis+of+terminal+filament+formation+and+identification+of+a+gene+required+for+this+process%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Drosophila ovary morphogenesis: Analysis of terminal filament formation and identification of a gene required for this process.</a> Developmental Biology. 170, 127-135 (1995).</li>
<li>Godt, D., Laski, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+cell+rearrangement+and+cell+recruitment+in+Drosophila+ovary+morphogenesis+and+the+requirement+of+bric+a+brac%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of cell rearrangement and cell recruitment in Drosophila ovary morphogenesis and the requirement of bric a brac.</a> Development. 121, 173-187 (1995).</li>
<li>Gancz, D., Lengil, T., Gilboa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+regulation+of+niche+and+stem+cell+precursors+by+hormonal+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Coordinated regulation of niche and stem cell precursors by hormonal signaling.</a> PLoS Biol. 9, e1001202(2011).</li>
<li>Matsuoka, S., Hiromi, Y., Asaoka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egfr+signaling+controls+the+size+of+the+stem+cell+precursor+pool+in+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Egfr signaling controls the size of the stem cell precursor pool in the Drosophila ovary.</a> Mech Dev. 130, 241-253 (2013).</li>
<li>Song, X., Zhu, C. H., Doan, C., Xie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+stem+cells+anchored+by+adherens+junctions+in+the+Drosophila+ovary+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Germline stem cells anchored by adherens junctions in the Drosophila ovary niches.</a> Science. 296, 1855-1857 (2002).</li>
<li>Homem, C. C., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila.+neuroblasts%3A+a+model+for+stem+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila. neuroblasts: a model for stem cell biology.</a> Development. 139, 4297-4310 (2012).</li>
<li>Urbach, R., Technau, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblast+formation+and+patterning+during+early+brain+development+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">Neuroblast formation and patterning during early brain development in Drosophila.</a> BioEssays. 26, 739-751 (2004).</li>
<li>Bello, B., Reichert, H., Hirth, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+tumor+gene+negatively+regulates+neural+progenitor+cell+proliferation+in+the+larval+central+brain+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The brain tumor gene negatively regulates neural progenitor cell proliferation in the larval central brain of Drosophila.</a> Development. 133, 2639-2648 (2006).</li>
<li>Lee, C. Y., Wilkinson, B. D., Siegrist, S. E., Wharton, R. P., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brat+is+a+Miranda+cargo+protein+that+promotes+neuronal+differentiation+and+inhibits+neuroblast+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Brat is a Miranda cargo protein that promotes neuronal differentiation and inhibits neuroblast self-renewal.</a> Dev Cell. 10, 441-449 (2006).</li>
<li>Betschinger, J., Mechtler, K., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+segregation+of+the+tumor+suppressor+brat+regulates+self-renewal+in+Drosophila+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Asymmetric segregation of the tumor suppressor brat regulates self-renewal in Drosophila neural stem cells.</a> Cell. 124, 1241-1253 (2006).</li>
<li>Pereanu, W., Shy, D., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenesis+and+proliferation+of+the+larval+brain+glia+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Morphogenesis and proliferation of the larval brain glia in Drosophila.</a> Dev Biol. 283, 191-203 (2005).</li>
<li>Moraru, M. M., Egger, B., Bao, D. B., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cell+identity%2C+morphology%2C+apoptosis+and+mitotic+activity+in+a+primary+neural+cell+culture+system+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">Analysis of cell identity, morphology, apoptosis and mitotic activity in a primary neural cell culture system in Drosophila.</a> Neural Dev. 7, 14(2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

פרוטוקול זה מספק שיטה להצלחת immunostain למקד דרוזופילה עוברית ורקמות זחל באתר, ובכך מבטל את הצורך בנתיחה. לפי פרוטוקולים לפני מכתים עוברים המוקדמים 1,2,3, קרום כוריוני מוסר באמצעות אקונומיקה 50% (NaOCl). דגימות קבועות בפורמלין ומתנול. בגלל ציפורן הזחל גורמת מדגם ישן יותר לצוף, המדגם כולו מועבר דרך תא מסננת, כדי להבטיח שמירת זחל. מדגם מאוחסן, אם תרצה בכך, במתנול כיתה כימית. לאחר התייבשות, תהליך sonication מיושם כהלכה משבש את שלמות ציפורן הזחל. זה קריטי...

עוברי דרוזופילה וזחלים מספקים מודל מצוין ללמוד תהליכים התפתחותיים באיברים ורקמות רבים. הדמיה של תאים בודדים היא לעתים קרובות יש צורך במחקרים אלה על מנת לוודא הסביבות המורכבות שבו תאים לפתח. ויזואליזציה של תאים ברקמות יכולה להיות מושג באמצעות immunostaining. ובכן תיאר immunostaining פרוטוקולים קיימים לרקמות עוברי דרוזופילה &lt;17 שעות לאחר הטלת ביצים (AEL) 1-3. עם זאת, צורות מגן ציפורן לקראת הסוף של עובר, מניעת חלחול נוגדן יעיל. לפיכך, פרוטוקולי immunostaining אלה אינם יעילים בניתוח של רקמות בעוברים בשלב מאוחר ובשלבים מאוחרים יותר של התפתחות זחל (instar 1 st (L1), instar 2 nd (L2), ו3 instar rd (L3)). חוסר יעילות זה מטיל מחסום להבנה של תהליכים דינמיים המתרחשים בתקופה התפתחותית מורחבת זה 4. Tissנתיחת ue היא טכניקה מועסק נרחב לעקוף מכשול זה 5-7. עם זאת, לנתיחה יכולה להוכיח לא יעילה. חילוץ ניתן לשעבוד על ידי קושי באיתור או בידוד עוברי ורקמות זחל. יתר על כן, ההסרה הפיסית של רקמות היעד עלולה לגרום נזק על ידי פקיעתם או בכך שלא לחלץ אותם בשלמותם. Sonication הוא שיטה שמעסיקה גלי קול להפריע אינטראקציות מולקולאריים. זה כבר נעשה שימוש כדי לשבש את שלמות ציפורן זחל תסיסנית כדי immunostain פיתוח סוגי תאים עצביים 6. פרוטוקול זה הותאם לimmunostain עוברי בשלב מאוחר ובלוטות מין זחל, אשר יכול להיות קטנה כמו 50μm בקוטר 8-10. באמצעות מחקרים כאלה, התהליך של תאי גזע בתאי מין היווצרות נישה גברית (GSC) התאפיין בשלב מאוחר עוברי דרוזופילה 8-10 ומנגנוני ויסות התפתחות תאי גזע וDIFferentiation בבלוטות מין עוברי בשלב מאוחר וזחלים כבר הובהר 9-12. לפיכך, sonication מספק אלטרנטיבה יעילה לנתיחת רקמות שעלולות להיות קשה בגלל גודל של רקמה. יתר על כן, היא מאפשרת immunostaining של רקמות דרוזופילה באתר, עוזב תאים בהקשר של הגוף כולו ושמירה במורפולוגיה באתר. כאן, אנו מתארים פרוטוקול צעד אחר צעד לimmunostaining הקרינה של עוברי בשלב מאוחר עד תחילת / רקמות אמצע-L3 באתר. ניתוח של רקמת אשכים ועצביים דרוזופילה מוצג בנציג התוצאות כדי להדגים את היעילות של פרוטוקול זה. יתר על כן, פרוטוקול immunostaining זה עשוי להיות מותאם לנתח רקמות אחרות דרוזופילה, כמו גם רקמות באורגניזמים אחרים עם עור מת חיצוני.

<table><tbody><tr><td colspan="4">טבלה 1: ריאגנטים ומאגרים</td></tr><tr><td>מאגר פוספט Triton X-100 (PBTx)</td><td></td><td></td> <td>עבור 5 ליטר: 500 מ"ל PBS 10X, 4.45 ליטר ddH2O, 50 מ"ל טריטון 10%. אחסן ב-RT.</td></tr><tr><td>מי מלח חוצץ פוספט 10X (PBS 10X)</td><td></td><td></td> <td>עבור 1 ליטר ב-dH2O: 80 גרם NaCl, 2 גרם KCl, 14.4 גרם Na2HPO4, 2.4 גרם KH2PO4. הוסף רכיבים ומלא לנפח המתאים. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td>טריטון 10%</td><td></td><td></td><td>ל-50 מ"ל: 5 מ"ל טריטון, 5 מ"ל PBS 10X, 45 מ"ל ddH2O. רוק לערבוב. אחסן ב-RT.</td></tr><tr><td>צינורות PEMS</td><td></td><td></td><td>0.1 מ' (pH 6.9), 2.0 מ"מ MgSO<תת>4, 1.0 מ"מ EGTA. אחסן ב-RT.</td></tr><tr><td>צינורות</td><td></td><td></td><td>ל -400 מ"ל של תמיסה של 0.25 מ '(pH 6.9): 30.24 גרם צינורות dH20 NaOH. ממיסים צינורות ב-300 מ"ל dH2O ולאחר מכן התאימו ל-pH 6.9 עם NaOH. הביאו את הנפח הכולל ל-400 מ"ל עם dH2O וחיטוי. אחסן ב-RT.</td></tr><tr><td>פורמלדהיד</td><td></td><td></td><td>37% פורמלדהיד לפי משקל במתנול. אחסן ב-RT. אחסן תערובת פסולת פורמלדהיד, הפטן ומתנול בכלי אטום היטב במכסה אדים לפני השלכתו בהתאם להנחיות המוסד.</td></tr><tr><td>הפטן</td><td></td><td>CAS 142-82-5</td><td>n-הפטן. אחסן ב-RT. אחסן תערובת פסולת פורמלדהיד, הפטן ומתנול בכלי אטום היטב במכסה אדים לפני השלכתו בהתאם להנחיות המוסד.</td></tr><tr><td>מתנול</td><td></td><td>CAS 67-56-1</td><td>חנות ב-RT. אחסן תערובת פסולת פורמלדהיד, הפטן ומתנול במיכל אטום היטב במכסה אדים לפני השלכתו בהתאם להנחיות המוסד.</td></tr><tr><td>מאגר פוספט Tween (PBTw)</td><td></td><td></td><td>להכנת 1 ליטר: 100 מ"ל PBS 10X, 890 מ"ל ddH2O, 10 מ"ל Tween 10%. מסנן לעקר לאחר הוספת כל הרכיבים. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td>טווין 10%</td><td></td><td></td><td>עבור 50 מ"ל: 5 מ"ל טווין, 5 מ"ל PBS 10X, 40 מ"ל ddH2O. סלע לערבוב. אחסן ב-RT.</td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין/פוספט בופר Tween (BBTw)</td><td></td><td></td><td>להכנת 1 ליטר: 100 מ"ל PBS 10X, 890 מ"ל ddH2O, 10 מ"ל טווין 10%, 1 גרם אלבומין סרום בקר (BSA). הוסף BSA ואז עקר באמצעות 0.2 &mu; M יחידת מסנן ואקום. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td>סרום עיזים רגיל (NGS)</td><td>ackson ImmunoResearch Laboratories</td><td>005-000-121</td><td>להכנת 10 מ"ל: סרום עיזים רגיל 10 מ"ל ddH2O. הוסף ddH2O לבקבוקון של NGS ועיקר באמצעות 0.2 &mu; מסנן סירנינג. אחסן את הכמות בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td>1,4-דיאזאביציקלו[2.2.2]אוקטן (DABCO)</td><td></td><td>CAS: 281-57-9</td><td>להכנת 100 מ"ל: 25 מ"ל ddH2O, 1 מ"ל Tris HCl (1M, pH 7.5), 2.5 גרם מוצק DABCO, 3.5 מ"ל 6N HCl, 250 &mu; l 10N NaOH, 70 מ"ל גליצרול. בכוס של 250 מ"ל עם מוט ערבוב, הוסיפו ddH2O, Tris HCl ו-DABCO. יש לערבב ולאחר מכן להוסיף 6N HCl, 10 N NaOH וגליצרול. לאחר מכן הוסף 10N NaOH טיפה עד שהתמיסה מגיעה ל-pH 7.5. אליקוט. אחסן את הכמות בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr>תמיסת <td></td><td></td><td>DABCO + p-phenylenediamine (PPD)</td><td>1.765 מ"ל NaHCO3, 0.353 Na2CO3, 0.02 גרם PPD (CAS: 106-50-3). ממיסים PPD בתמיסת NaHCO3 ו-NaCO3. הוסף 60 &mu; l של תמיסת PPD ל-500 &mu; l של DABCO. אחסן את הכמות בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td>צלחות מיץ תפוחים</td><td></td><td></td><td>להכנת ~ 200 צלחות: 45 גרם אגר (CAS#9002-18-0), 45 גרם סוכר מגורען (נקנה בחנות), 500 מ"ל מיץ תפוחים (נקנה בחנות), 15 מ"ל Tegosept 10%, 1.5 מ"ל ddH2O. הוסף אגר ל-ddH2O בבקבוק של 4 ליטר ואז חיטוי למשך 30 דקות. מערבבים מיץ תפוחים וסוכר על צלחת ערבוב מחוממת. מוסיפים בהדרגה את תערובת מיץ התפוחים לאגר חיטוי. ערבבו על צלחת ערבוב מחוממת ולאחר מכן הוסיפו נפחים של 10 מ"ל לצלחות פטרי בקוטר 35 מ"מ והניחו לעמוד ב-RT להתמצקות. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td>Tegosept 10%</td><td></td><td></td><td>להכנת 100 מ"ל: 10 גרם Tegosept, 100 מ"ל אתנול. אחסן את הכמות בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td>משחת</td><td></td><td></td> שמרים <td>~ 50 גרם שמרים פעילים יבשים. מוסיפים בהדרגה ddH2O לכוס המכילה שמרים תוך כדי ערבוב עד לקבלת מרקם דמוי משחה. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.</td></tr><tr><td colspan="4">טבלה 2: חומרי מכתים</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D3571</td><td>1:1000, מלאי ב-5 מ"ג/מ"ל.</td></tr><tr><td>ארנב אנטי-ואסה</td><td></td><td></td><td>1:250, מתנה מרות להמן.</td></tr><tr><td>עכבר אנטי-פאסיקלין III</td><td>מחקרים התפתחותיים בנק היברידומה (DSHB)</td><td>7G10</td><td>1:10</td></tr><tr><td>עכבר אנטי-1B1</td><td>מחקרים התפתחותיים בנק היברידומה (DSHB)</td><td>1B1</td><td>1:4</td></tr><tr><td>חזיר גוניה נגד פקק</td><td></td><td></td> תנועה <td>1:2500, מתנה מדורתיאה גודט (Li et al, 2003).</td></tr><tr><td>עכבר אנטי-פרוספרו</td><td>מחקרים התפתחותיים בנק היברידומה (DSHB)</td><td>פרוספרו MR1A</td><td>1:10</td></tr><tr><td>עכברים נגד אילב</td><td>מחקרים התפתחותיים בנק היברידומה (DSHB)</td><td>7EBA10</td><td>1:30</td></tr><tr><td>עכבר אנטי-רפו</td><td>מחקרים התפתחותיים בנק היברידומה (DSHB)</td><td>8D12</td><td>1:10</td></tr><tr><td>עיזים נגד ארנב Alexa546</td><td>Invitrogen</td><td>A11010</td><td>1:500</td></tr><tr><td>עז נגד עכבר Alexa488</td><td>Invitrogen</td><td>A11029</td><td>1:500</td></tr><tr><td>עז נגד חזיר גוניה Alexa633</td><td>Invitrogen</td><td>A21105</td><td>1:500</td></tr><tr><td>עז נגד חולדות Alexa488</td><td>Invitrogen</td><td>A11006</td><td>1:500</td></tr><tr><td colspan="4">טבלה 3: חומרים וציוד</td></tr><tr><td>כלובי זבוב</td><td>בעבודת יד; Genesee Scientific Corporation</td><td>לא ישים; בקבוקים: 32-130; כלוב מוכן מראש: 59-101</td><td>מיוצר על ידי חיתוך צינורות אקריליק יצוקים שקופים (בקוטר 1 3/4 אינץ') למקטעים בגובה 4 אינץ' עם מסור מצנפת מורכב ב-400 סל"ד. הקרנת נירוסטה עדינה במיוחד (הוצמדה לקצה אחד של האמבטיה עם דבק קומפונד אקרילי. שיטה חלופית המשתמשת בבקבוק מזון זבובים ריק ניתן למצוא ב-Drosophila פרוטוקולים ISBN 0-87969-584-4. ניתן לרכוש כלובים גם מהתאגיד המדעי Genesee.</td></tr><tr><td>סוניקטור: ברנסון 250 סוניפיקטור דיגיטלי</td><td>ברנסון</td><td>דגם: ברנסון סוניפיקטור דיגיטלי 250</td><td></td></tr><tr><td>סוניפיקטור</td><td>ברנסון</td><td>דגם #: 102C (CE)</td> <td>EDP: 101-135-066; S/N: מסנן</td></tr><tr><td>מזרק</td> OBU06064658 <td>Nalgene</td><td>190-25-20</td><td>0.2 &mu; m תאית, מסנן ממברנה אצטט</td></tr><tr><td>מערכת הדמיה: מיקרוסקופ קונפוקלי דיסק מסתובב עם מקור אור מולטיכרומטי, מצלמת CCD דיגיטלית ותוכנת הדמיה</td><td>מיקרוסקופ: אולימפוס, מקור אור: Lumen Dynamics, מצלמה: Q-Imaging, תוכנת הדמיה: Intelligent Imaging Inc.</td><td></td><td>מיקרוסקופ: BX51 מצויד בדיסק מסתובב DSU, מקור אור: X-Cite 120Q, מצלמה: RETIGA-SRV, תוכנת הדמיה: Slidebook 5.0</td></tr><tr><td>יחידת מסנן ואקום</td><td>Nalgene</td><td>450-0020</td><td>0.2 &mu; מסנן ממברנה חנקתית תאית</td></tr></tbody></table> M

הקל sonication immunofluorescence הכתמה של שלב מאוחר עוברי וזחל<em&gt; דרוזופילה</em&gt; רקמות<em&gt; באתר</em

Sonication-facilitated Immunofluorescence Staining of Late-stage Embryonic and Larval Drosophila Tissues In Situ

מחקרים שבוצעו בתסיסנית עוברים וזחלים מספקים תובנה חיונית לתהליכים התפתחותיים כגון מפרט גורל התא וorganogenesis. Immunostaining מאפשר ההדמיה של פיתוח רקמות ואיברים. עם זאת, לציפורן הגנה שיוצרת בסופו של עובר מונעת חלחול של נוגדנים לעוברי בשלב מאוחר וזחלים. בעוד לנתיחה לפני immunostaining משמשת באופן קבוע לנתח רקמות זחל דרוזופילה, זה מוכיח לא יעיל עבור חלק ניתוחים בגלל רקמות קטנות עשויות להיות קשות לאתר ולבודד. Sonication מספק חלופה לנתיחה בפרוטוקולי immunostaining דרוזופילה זחל. זה מאפשר עיבוד מהיר, בו זמני של מספר הגדול של עוברים בשלב מאוחר וזחלים ושומר במורפולוגיה באתר. לאחר הקיבוע בפורמלין, מדגם sonicated. לדוגמא נתונה אז immunostaining עם נמלה העיקרית אנטיגן ספציפיibodies ונוגדנים משני שכותרתו fluorescently לדמיין סוגי תאי היעד וחלבונים ספציפיים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. במהלך התהליך של sonication, מיקום נכון של בדיקה sonicating מעל המדגם, כמו גם את המשך ועוצמת sonication, הוא קריטי. שינויים קלים additonal לפרוטוקולי immunostaining סטנדרטיים עשויים להידרש לכתמים באיכות גבוהות. לנוגדנים עם אות נמוכה יחס רעש, פעמים דגירה ארוכות יותר הן בדרך כלל צורך בכך. כהוכחה של קונספט לפרוטוקול הקל sonication זה, אנו מראים immunostains של שלושה סוגי רקמות (אשכים, השחלות, ורקמות עצביות) בטווח של שלבי התפתחות.

כדי להדגים את היעילות של immunostaining מבוסס sonication בניתוח עוברי בשלב מאוחר וברקמות זחל באתר, עוברי wild-type וזחלים עובדו לimmunostaining של אשכים, השחלות, ורקמה עצבית. דגימות הם צילמו באמצעות מיקרוסקופיה confocal ותוצאות נציג מוצגות (איור 1 ואיור 2). תוצאות עולות כי הפרוטוקול המתואר הוא יעיל המאפשר הדמיה תכונות מורפולוגיות, כמו גם תאים בודדים באתר במהלך שלבי התפתחות דרוזופילה מאוחר עובריים דרך מוקדם / אמצע L3. <p class="jove_c...

צביעה חיסונית היא טכניקה יעילה להמחשת סוגי תאים וחלבונים ספציפיים בתוך רקמות. על ידי שימוש בסוניקציה, הפרוטוקול המתואר כאן מקל על הצורך לנתח רקמות Drosophila melanogaster מעוברים וזחלים בשלב מאוחר לפני צביעה חיסונית. אנו מספקים מתודולוגיה יעילה לצביעה חיסונית של זחלי הר שלמים קבועים בפורמלדהיד.

הקל Sonication Immunofluorescence הכתמה של שלב מאוחר עוברי וזחל<em&gt; דרוזופילה</em&gt; רקמות<em&gt; באתר</em

Studies performed in Drosophila melanogaster embryos and larvae provide crucial insight into developmental processes such as cell fate specification and ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לדמות או לצבוע רקמות ב-C. elegans באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית לאחר סוניקציה. דבר זה מושג תחילה על ידי איסוף דגימות של עוברים וזחלים, ולאחר מכן קיבועם באמצעות פורמאלדהיד, הפטאן ומתנול. השלב השני הוא ביצוע סוניקציה לדגימה המקובעת במטרה להסיר את הקוטיקולה כדי לאפשר חדירה של נוגדנים.בשלב הבא, הדגימה עוברת צביעה אימונוהיסטוכימית באמצעות נוגדנים ראשוניים ונוגדנים משניים פלואורסצנטיים. השלב הסופי הוא קיבוע הדגימה בתמיסת Antifade מבוססת גליצרין. לבסוף, נעשה שימוש במיקרוסקופיה קונפוקלית או במיקרוסקופיה פלואורסצנטית אפיפלוורסצנטית (epi-fluorescent) כדי להדמיא את הרקמה המתפתחת, כמו גם את ביטוי החלבונים והמיקום שלהם.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות אחרות, כגון דיסקציה של רקמות, הוא שהיא מאפשרת הדמיה של מגוון רקמות בהתפתחות. בדרך כלל, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקשרו, כיוון ששלב הסוניקציה תלוי במספר גורמים להשגת יעילות מרבית, כולל המיקום הנכון של ראש הסוניקטור. את הפרוצדורה ידגימו Ashley Fiddler ו-Lauren Bole, שתיים מחוקרות התואר הראשון המוכשרות מהמעבדה שלי.כדי להתחיל בניסוי, הסר בזהירות עוברים שנאספו על פלטת אגר באמצעות מברשת צבע קטנה טבולה בתמיסת phosphate buffer Triton X 100 או PBTX. לאחר מכן, נגב את המברשת הנושאת את הדגימה כנגד הדופן הפנימית של מסננת תאים. הנח מכסה של צלחת פטרי מתחת למסננת התאים.לאחר מכן, שטפו את מברשת הצבע ואת דפנות מסננת התאים באמצעות בקבוק נטיל המכיל PBTX. לאחר העברת הדגימה למסננת, שפכו מספיק PBTX לתוך המסננת כדי להרים את הדגימה מהרשת. חזרו על שלב זה שלוש פעמים כדי להסיר שמרים ופסולת זבובים, ולאחר מכן הסירו את ה-PBTX.לאחר מכן, שפכו תמיסת אקונומיקה בריכוז 50% לתוך המסננת והניחו לזחלים להישאר בתמיסה למשך חמש דקות. לאחר מכן, הסירו את התמיסה. לאחר מכן, שטפו את הדגימה ב-PBTX והניחו לדגימה להישאר בתמיסה למשך שלוש דקות.חזור על הפעולה חמש פעמים, וייבש את תחתית מסננת התאים. לאחר מכן, השתמש במברשת צבע רטובה ב-PBTX כדי להעביר את הדגימה לבקבוק סינצילציה המכיל 1.75 milliliters של pems. במנדף, הוסף 250 microliters של 37%formaldehyde ושמונה milliliters של reagent grade.הוסיפו Heptane לבקבוק הסינטילציה, ונערה את הבקבוק במהירות של 200 RPM למשך 20 דקות. לאחר מכן, הוסיפו 10 milliliters של methanol לבקבוק הסינטילציה מבלי להסיר את הפאזה המימית, ונערה בעוצמה במהירות של 500 RPM. מיד לאחר הנעירה, שפכו את התוכן למסנן תאים מעל מכל פסולת נוזלית.הוסיפו מתנול נוסף לבקבוקון העבירו את התוכן דרך מסננת תאים. כדי לוודא שכל הדגימה הוסרה, נגבו את תחתית מסננת התאים בעזרת נייר סופג למעבדה.לאחר מכן, השתמש במברשת כדי להעביר את הדגימה מהמסננת לשפופרת מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 milliliter המכילה 0.5 milliliters של methanol. המתן עד שהדגימה תשקיע. לאחר מכן, הסר את ה-methanol באמצעות פיפטה והחלף אותו במנה רעננה של 0.5 milliliter של methanol.חזור על שלב זה שלוש פעמים והוסף 0.5 milliliter סופי של methanol לשפופרת לפני אחסונה בטמפרטורה של negative 20 degrees Celsius. לשלב מאוחר יותר, הוצא את הדגימה המאוחסנת מהמקפיא והסר את ה-methanol באמצעות פיפטה. לאחר מכן, הוסף לשפופרת one milliliter של תמיסת methanol phosphate buffer tween בריכוז 50% או תמיסת PBTW, ונער את השפופרת בתנועה סיבובית למשך שלוש דקות.בשלב הבא, שטפו את הדגימה עם 1 ml של PBTW פעמיים, והמתינו שהדגימה תשקע לפני שאיבת ה-PBTW באמצעות פיפטה; הוסיפו 1.0 ml של bovine serum albumin phosphate buffered tween, או BBTW, לבחולה, ונער אותה בתנועות עדינות (rocking) במשך שלוש דקות. המתינו שהדגימה תשקע והסירו את ה-BBTW באמצעות פיפטה. חזרו על שלב זה פעמיים.יש להקפיד להסיר כמה שיותר BBTW מבלי לאבד חלק מהדגימה. לאחר מכן, יש להוסיף 0.5 milliliters של BBTW למבחנה ולהניח אותה על קרח. בשלב הבא, הגדירו את הסוניקטור ל-10% מאמפליטוד המקסימום ולזמן ריצה של שתי שניות עם הפעלה קבועה; נקו את ראש הסוניקטור על ידי הנחת קצה הפרובה בתוך מבחנה קונית של 50 milliliter מלאה במים דה-יוניים והפעילו את הסוניקטור.לאחר מכן, ייבשו את ראש הסוניקציה באמצעות נייר סופג למעבדה. טבלו את הראש לתוך המבחנה, שלושה עד ארבעה מילימטרים מעל הדגימה, והפעילו את הסוניקציה. לאחר מכן, הוציאו את המבחנה והניחו אותה על קרח למשך 30 שניות כדי למנוע התחממות יתר כתוצאה מהסוניקציה, וכדי לאפשר לדגימה לשקוע לתחתית המבחנה.חזור על שלב זה בהתאם לגיל הדגימה לאחר סיום הסוניקציה. שטוף את הדגימה פעמיים ב-1 mL של BBTW. לאחר כל שטיפה, המתן שהדגימה תשקע לפני ייבוש ה-BBTW. בעזרת פפטה, הוסף 1 mL של BBTW למבחנה והנח אותה על רוקר (Rocker).לאחר שלוש דקות, יש להמתין לשקיעת הדגימה ולהסיר את ה-BBTW באמצעות פיפטה. לאחר מכן, יש לחזור על שלב זה פעמיים, לחסום את הדגימה על ידי הוספת 0.5 milliliters של סרום נורמלי 5% המדולל ב-BBTW למבחנה, ולהניח את הדגימה על רוקר למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.בשלב הבא, הוסיפו 0.5 milliliters של תמיסת נוגדן ראשוני והנחו את הדגימה בערבול איטי (rocking) למשך הלילה בטמפרטורה של 4 °C, ואפשרו לדגימה לשקוע לתחתית המבחנה. לאחר מכן, שאבו את הנוגדנים הראשוניים באמצעות פיפטה ושטפו פעמיים עם 1 milliliter של BBTW. הוסיפו 1 milliliter של BBTW לבקבוקית והניחו אותה על רוקר למשך שלוש דקות.לאחר מכן, הסירו את ה-BBTW באמצעות פיפטה וחזרו על הפעולה. לאחר חמישה מחזורים, חסמו את הדגימה עם תמיסת BBTW המכילה 5% normal serum ונערו אותה במשך 30 דקות. לאחר מכן, הסירו את התמיסה.הוסיפו נוגדן משני המדולל ב-5% נסיוב נורמלי בתמיסת BBTW ועטפו את המבחנה בנייר אלומיניום. לאחר מכן, הניחו לדגימה להתנדנד למשך הלילה בטמפרטורה של 4°C. שאבו את הנוגדנים המשניים בעזרת פיפטה ושטפו את הדגימה עם 1 mL של PBTW פעמיים.בשלב הבא, יש להוסיף מיליליטר אחד של PBTW למבחנה ולהניח אותה על מכשיר ערבוב (rocker) למשך חמש דקות. לאחר מכן, יש להמתין עד שהדגימה תשקע ולהסיר את ה-PBTW באמצעות פיפטה. יש לחזור על פעולה זו.חזור על הפעולה שלוש פעמים. הוסף 80 עד 100 µL של תמיסת DAB לשפור ואחסן אותה בטמפרטורה של 20°C- . לבסוף, לצורך הרכבת הדגימה, השתמש ב-5 עד 10 µL של dab BCO p lene diamine, או PPD anti fade.לאחר מכן, התבוננו בדגימה באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. היטלי Z אלה של ארבעה חתכים קונפוקאליים מדגימים את יעילות הפרוטוקול להדמיית מאפיינים מורפולוגיים וכן תאים בודדים ב-C two במהלך שלבי פיתוח של drosophila, החל משלב עוברי מאוחר ועד לשלבים מוקדמים ואמצעיים של L three. התפתחות האשכים מהווה מערכת טובה במיוחד להדגמת יעילות הפרוטוקול, מכיוון שהבשלת האשכים היא דינמית לאורך כל התפתחות הזחלים.תמונות אלו מדגישות תאי נבט באדום ותאי hub ואת אזורי ה-FU בירוק בחתכים קונפוקאליים בודדים של מוחות בשלב L3 אמצעי. צביעה אימונוהיסטוכימית של תאי אם של הגנגליון, נוירונים לא מובחנים בירוק, ונוירונים ראשוניים ולא בשלים באדום, מראה צביעה חזקה עם דפוסי ביטוי מובחנים באונות המוח ובחוט העצבים הגבי (ventral nerve cord); בהתאם לכיוון הקיבוע, הדימות מאפשר ויזואליזציה של רקמת המוח מהמשטח הגבי, מהמשטח הבטני או בחתך סגיטלי.שתי טכניקות אלה באתר (in situ) מאפשרות לביולוגים לחקור התפתחות של איברים ומורפוגנזה של רקמות באורגניזמים שבהם קוטיקולה מגנה מונעת חדירה של נוגדנים. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן הסוניקציה והצביעה האימונוהיסטוכימית של דגימות של ושט משלבים עובריים מאוחרים ושל זחלים, במטרה להדמיות של רקמות מתפתחות ב-C two. זכרו כי עבודה עם פורמאלדהיד, הפטן ומתנול עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט באמצעי זהירות כגון עבודה במכסורת פליטה (fume hood).יש להקפיד תמיד על לבישת כפפות מתאימות וחלוק מעבדה בעת ביצוע פרוצדורה זו.

sonication-facilitated-immunofluorescence-staining-late-stage

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Mesoscopic הקרינה טומוגרפיה פועלת מעבר לגבולות חדירה של מיקרוסקופיה רקמות חתך פלואורסצנטי. הטכניקה מבוססת על תאורה השלכה רב ותיאור תחבורה פוטון. אנו להדגים ב-vivo כל הגוף 3D להדמיה של המורפוגנזה ה-GFP-לבטא דיסקים דמותי האגף...

Mesoscopic Fluorescence טומוגרפיה עבור In-vivo הדמיה של פיתוח תסיסנית</em

Hemocytes תסיסנית לפזר מעל מכלול של העובר המתפתח. פרוטוקול זה מדגים כיצד הר התמונה באמצעות העברות אלה עוברים עם hemocytes שכותרתו fluorescently.

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים

תסיסנית גלמי אימונוהיסטוכימיה בטן

כאן אנו מתארים שלם הר...

הר כולו RNA פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עוברים

מוצג פרוטוקול של צביעה חיסונית שלמה על עוברי כנימות, בו מטופלים תנאים קריטיים להפחתת צביעת רקע והגברת חדירות הרקמות. תנאים אלה פותחו במיוחד לזיהוי יעיל של ביטוי חלבונים ברקמות העובריות של כנימות.

זיהוי של תנאים קריטיים לImmunostaining באפונה בכנימות עוברים: הגדלת רקמות חדירות והפחתת מכתים רקע

הדמית morphogenesis של עוברי חרק עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי מבוסס אור גיליון הפכה מדינה של האמנות. פרוטוקול זה מתאר ומשווה שלוש טכניקות הרכבה מתאימות עובר Tribolium castaneum, מציג שני קווים מהונדסים רומן מחוייט גם מתאים הדמיה חיה, דן בקרות איכות חיוניות ומציין מגבלות ניסוי נוכחיות.

גיליון מבוסס אור מיקרוסקופ פלואורסצנטי של חיים או קבוע מוכתמת<em&gt; Tribolium castaneum</em&gt; עובר

המתואר RNA בחיי עיר הכלאה פרוטוקול מאפשרת הגילוי של RNA כל עוברי דרוזופילה או רקמות גזור. באמצעות לוחות 96-ובכן microtiter tyramide אות הגברה, תעתיקים שניתן לאתר ברזולוציה גבוהה, רגישות, ואת התפוקה, בעלות נמוכה יחסית.

ברזולוציה גבוהה פלורסנט בחיי עיר הכלאה של עוברי דרוזופילה ורקמות באמצעות הגברה Tyramide אות

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לגילוי ולוקליזציה של חלבון עובר Drosophila ו- RNA מאוסף להטבעה והטבעה מראש, אימונוסטיור ו- mRNA בהכלאה במקום .

פרוטוקול לאימונוהיסטוכימיה והפצת RNA In-situ בתוך עובר דרוזופילה מוקדם

כאן, אנו מספקים פרוטוקול דיסקציה הנדרש כדי לצלם בשידור חי את הגונד הזכר העוברי המנוח של דרוזופילה . פרוטוקול זה יאפשר תצפית על תהליכים תאיים דינמיים בתנאים רגילים או לאחר מניפולציה מהונדסת או פרמקולוגית.

דיסקציה והדמיה חיה של דרוזופילה גונד העוברית המאוחרת

פרוטוקול זה מתאר תיוג פלואורסצנטי מותאם אישית מבוסס נוגדנים והזרקה לעוברים מוקדמים של דרוזופילה כדי לאפשר הדמיה חיה של חלבונים בשפע נמוך או שינויים לאחר תרגום שמאתגרים לזיהוי באמצעות גישות GFP/mCherry-tag מסורתיות.

הדמיה של חלבונים בשפע נמוך ושינויים לאחר תרגום בעוברי דרוזופילה חיים באמצעות הזרקת נוגדנים פלואורסצנטיים

פרוטוקולים אלו מתארים כיצד לאפיין את הארגון ותפקוד החסימה של צמתקי מחיצה מקופלים באפיתל העוברי של דרוזופילה.

ניסויי צביעת חיסון וחדירת צבע להגדרת חלבוני צומת ספטט מקופלים בליבה באפיתל עוברי של דרוזופילה

למד שיטת סוניקציה לחיטוי אימונופלואורסצנטי של רקמות עובריות וזחליות ב-Drosophila melanogaster. הפרוטוקול מאפשר הדמיית חלבונים ותאים ספציפיים ללא צורך בניתוח רקמות.

הקל Sonication Immunofluorescence הכתמה של שלב מאוחר עוברי וזחל

גלה סרטונים נוספים