כימות יחיד כלי דם קטנים בחדירות מבודדת-perfused דם עכברוש ריאות הכנה

המטרה הכוללת של הליך זה היא לכמת חדירות בכלי מיקרו בודדים של ריאות חולדה מבודדות בשיטה מבוססת פלואורסצנטיות. זה מושג על ידי בידוד ריאות חולדות והחדרתן בדם אוטולוגי. השלב השני של ההליך הוא החדרת מיקרו-צנתר פרוזדורים שמאלי לאזור קטן של הריאה כדי להחדיר דקסטרין מתויג פלורה ארבע.

לאחר מכן, בזמן שהדקסטרין המתויג מוזרק, נאספות תמונות של כלי המיקרו של הריאות. השלב האחרון הוא לכמת את החדירות של מיקרו-כלים בודדים מהתמונות באמצעות תוכנה. בסופו של דבר, התוצאות יכולות להראות את מידת החדירות של כלי המיקרו של הריאות בתנאים שונים, כגון לאחר טיפול ב-LPS.

שידגים את ההליך הזה יהיה ד"ר קאווה קסאמי, פוסט-דוקטורנט מהמעבדה שלי בגין על ידי ביצוע טרכאוטומיה בחולדה זכר במישור כירורגי מאושר של הרדמה. השתמש בצינורית קנה הנשימה PE 90 ואבטח אותה עם תפרים. לאחר מכן, יש להחדיר ללב 100 עד 200 יחידות של הפרין באמצעות מחט פרפר בגודל 21.

המתן דקה אחת ואז הוציא את הדם. אוספים את הדם ומניחים אותו בצד עם מי מלח. מלאו שתי צינוריות עשויות צינורות טיגון של שלושה מילימטר באורך ארבעה סנטימטרים ומתרחבות בקצה אחד.

כעת בצע כריתת בית החזה. בצע חתך גדול מספיק כדי שהצינורית תיכנס לחדר הימני והחלק במאורה המתרחבת של צינורית אחת לכיוון עורק הריאה. אבטח את הצינורית בעזרת תפרים.

השתמש באותה טכניקה כדי להכניס את הצינורית השנייה לקודקוד החדר השמאלי לכיוון האטריום השמאלי. אבטח אותו עם סרט טבורי ברוחב שני מילימטרים. כעת הסר את רקמות החיבור המעכבות והסר את הארוך והלב יחד עם הצינוריות.

העבירו אותם לצלחת פטרי כשהמשטח הסרעפתי של הריאה כלפי מעלה ושלושת הצינוריות כולן מיושרות. העבר את התכשיר המנותח לבמה מתכווננת המצוידת בצינורות טיגון מספר 18 המחוברים למתמרי לחץ המשמשים כצינורות כניסה ויציאה. כעת מערבבים את אוסף הדם בנפח שווה של 5% תמיסת אלבומין.

הוסף תערובת זו למאגר הטעינה. הפעל את המשאבה במהירות של 14 מיליליטר לדקה. ודא שלצינור אין בועות אוויר.

בהכנה. חבר את עורק הריאה לצינור כניסת הריאה ואת צינורית הפרוזדורים השמאלית לצינור היציאה. בדוק שוב שאין אוויר בצינור, ובדוק גם שהשאנט פתוח.

חבר את צינורית קנה הנשימה למתמר לחץ שלישי. נפח את הריאות דרך צינורית קנה הנשימה עם 30% חמצן. שמור על הריאות בלחץ מים של חמישה סנטימטרים.

כעת מהדקים את השאנט והפעל את המשאבה במהירות של 14 מיליליטר לדקה. כדי להתחיל את הזלוף הריאתי במהלך הזלוף, כוונן את המשאבה כדי לשמור על לחץ הריאות בכ-10 סנטימטרים של מים ולשמור על לחץ הפרוזדורים השמאלי על שלושה סנטימטרים של מים. התחל בהכנת הריאה המוחדרת בדם.

ראשית, בנה קטטר עירוי מצינור PE 10 באורך 40 ס"מ המוחדר לצינור PE 90 באורך 30 סנטימטר. חבר את הקצה השני של צינור PE 10 למחט בגודל 30 המחוברת למזרק של סמ"ק אחד. הביאו את קצה הצינור המחובר לריאה מעל התכשיר והצמידו אליו את קטטר העירוי.

הנח את צנתר העירוי לאטריום השמאלי ולאחר מכן לתוך הריאה עד שהוא נתקל בהתנגדות. כוח מופרז יפגע בריאה. חתך נכון של המיקרו-צנתר הוא קריטי מכיוון שכל נזק לריאה על ידי המיקרו-צנתר יפחית את הצלחת הפרוטוקול.

לאחר מכן, מלאו את המזרק בצלצולים והצמידו אותו למשאבה. להחדיר לאט את התמיסה בקצב של 10 מיקרוליטר לדקה. בהדרגה אתר העירוי יהפוך חיוור בהשוואה לשאר הריאה כדי לשמור על לחות פני הריאה במהירות בפלסטיק למעט אתר העירוי.

כעת כדי לדמיין את הריאה, צור חלון צפייה על ידי הצמדת טבעת O לכיסוי 22 מילימטר. בעזרת שומן תא עצירה, אבטח את טבעת ה-O למחזיק מבחנה. לאחר מכן מקם את החלון מעל מקום העירוי.

השלם את ההתקנה על ידי הנפת מטרה של פי 20 מעל החלקת הכיסוי והתמקדות בריאה. לא צפוי עיוות חזותי. כעת החדירו לריאה פתרון לבחירה.

בדוגמה זו, בעקבות תמיסת המלח, מיליליטר אחד של דקסטרין מצומד ZI מוזרק לריאה דרך משאבת המזרק במהלך 60 דקות. באמצעות תוכנת ההדמיה, הקלט תמונה אחת לדקה במהלך העירוי של שעה והמשך להקליט במהלך שלב השטיפה שלאחר מכן למשך 10 דקות נוספות לאחר החדרת דקסטרין פיץ, שטוף אותו על ידי החדרת תמיסת צלצול הריאות למשך 10 דקות נוספות לפחות באותו קצב זרימה. מאוחר יותר. בעת ניתוח התמונות הנרכשות, ציון עוצמת הקרינה המקסימלית באזור העניין במהלך עירוי ההתאמה.

לאחר מכן ציין את עוצמת הקרינה המקסימלית של הקרינה השיורית לאחר שטיפה של 10 דקות. שינויים בחדירות כלי הדם נחקרו באמצעות עירוי דקסטרין פיצי לאחר טיפול בליפופוליסכריד חיידקי מכיוון שזהו מודל בשימוש נרחב של LI. פלואורסצנציה של התאמה שיורית e הייתה נמוכה במיקרו-כלי דם שטופלו בצלצולים, אך גבוהה באלו שטופלו ב-LPS. יתרה מכך, בהשוואה לעירוי של רינגר, עירוי LPS גרם להפחתה משמעותית במדד החדירות המצביע על עלייה גלובלית בחדירות בכל כלי הדם בשדה התמונה.

יתרה מכך, בהשוואה לעירוי של רינגר, עירוי LPS גרם להפחתה משמעותית במדד החדירות המצביע על עלייה גלובלית בחדירות בכל כלי הדם בשדה התמונה. לאחר צפייה בסרטון זה, הוא אמור להבין היטב כיצד להכין ריאות מונעות של ציפורים מבודדות, להכניס מיקרו-קטטר זנב שמאלי ולהגדיר חדירות במיקרו.