Name: ברונכוסקופיה מודרכת מבחינה ויזואלית, Intrabronchial הרכבת חיסון ו: ריאות שור במחקר ביו בVivo טכניקות דגימה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: חקור אינטראקציות מארח-פתוגן בריאות בקר באמצעות ברונכוסקופיה מודרכת. הטכניקה כוללת הזרקה תוך-ברונכיאלית, שטיפה ברונכואלוולרית ודגימת רקמת ריאה לניטור התקדמות מחלה לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים אסירי תודה למשרד החינוך והמחקר הפדרלי של גרמניה (BMBF) על מימון עבודתם. כמו כן, המחברים מודים לאינס למסר, סילקה סטלברג, אינגולף רוקנאגל ולכל העמיתים האחרים שעובדים בצוות של בית החיות (FLI, גרמניה) על הסיוע הטכני שלהם עם הסימפונות. הם אסירי תודה למריה כריסטינה האס (FLI, גרמניה) על עזרתה באספקת ספרות. יתר על כן, המחברים מבקשים להביע את תודתם לד"ר אנג'לה ברנדט (FLI, גרמניה) ולניקולט בסטול (אוניברסיטת ויסקונסין-ריבר פולס) על הקריאה הביקורתית של כתב היד.

הצהרת אתיקה מחקר זה בוצע בהתאם קפדן עם חוק אירופאי והלאומי לטיפול ושימוש בבעלי חיים. הפרוטוקול אושר על ידי ועדת האתיקה של ניסויים בבעלי חיים וההגנה על בעלי חיים במדינת תורינגיה, גרמניה (מספר אישור: 04-004/11). כל הניסויים בוצעו תחת פיקוח של הסוכן המוסדי המורשים להגנה על בעלי החיים. ברונכוסקופיה בוצעה אך ורק תחת הרדמה כללית. במהלך המחקר, נעשה כל מאמץ על מנת למזער אי נוחות או סבל. הערות כלליות הטכניקות המתוארות פותחו עבור השוקיים של כ 6-8 שבועות של גיל, במשקל של כ 60-80 קילוגרם. לשימוש במינים אחרים של בעלי חיים גדולים או השוקיים שונים בגיל ובמשקל גוף, הטכניקות צריכה להיות מותאמות כך שיתאימו לגודל ומשקל ולקחת בחשבון את האנטומיה הריאות של מיני בעלי חיים המסוים. כלציוד המשמש חייב להיות סטרילי. psittaci כלמידיה הוא חיידק zoonotic אשר עלול לגרום למחלות בדרכי הנשימה ובכלל בבני אדם. ג שאינו העופות זן psittaci DC15 שימוש בפרוטוקול הנוכחי יש לטפל בם במסגרת בטיחות ביולוגית ברמה 2. כל העבודה עם הפתוגן ועם בעלי חיים נגועים חייבת להתבצע לובשת ציוד מגן אישי, כגון מכונת נשמה, סרבל הוכחת מים סנסציה, מגפי גומי וכפפות. לובש הנשמה מתאימה הוא בעלת חשיבות רבה, שכן התוואי הטבעי של זיהום לג psittaci הוא aerogen. אריזה וסימון של דגימות חייבת להיות הוכחת חיטוי מאז יש להתייחס אל כל הדברים בחומר חיטוי יעיל נגד chlamydiae על פי הוראות היצרן לפני שעזב את יחידת הדיור של בעלי החיים. 1. הכנת בעלי החיים לרונכוסקופיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את משקליו של העגל למינון של חומרי הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח (IV) גישה לורידn וריד הצוואר השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, להזריק לאט xylazine (0.2 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף) על פני כ 30 שניות, ולאחר מכן, לאחר הרגעה מתרחשת, להזריק קטמין (2.0 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את בעלי החיים על השולחן ומניח אותו בכיבה לרוחב נכון. לאחר החיה ממוקמת כראוי על השולחן, לבדוק אם גישת IV היא עדיין במקום ולתקן אותו במידת צורך. במהלך הרדמה, לבדוק באופן קבוע את רפלקס העפעף כדי לקבוע את עומק ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שבעל החיים הוא נושמים בקצב קבוע, שיש מישהו למשוך את הלשון החוצה ולמתוח את הצוואר. מניחים ספקולום צינור מתכת בפיו של בעל החיים, תוך שימוש בתנועות סיבוב קלות. דחוף את ספקולום קדימה תחת שליטת ראייה, תוך שימוש בפנס, עד שהגרון הוא גלוי לעין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על הרדמה לאורך כל הליך אנדוסקופי על ידי הזרקת בולוס של 7 xylazine מ&quot;ג ו70 קטמין מ&quot;ג לפי צורך. </li></ol> . 2 חיסון (חיסון אתרים: איור 1) </p&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 3 מזרקים עם הבידוד, המכילים 1, 2, ו 5 מיליליטר של הבידוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס צינור טפלון לערוץ החוזר של אנדוסקופ. הצינור לא צריך לבלוט מהקצה של אנדוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את אנדוסקופ דרך ספקולום המתכת. readjustments הקל של ספקולום עשוי להיות נחוץ כדי לאפשר לפטירתו של הגרון. Trachealis הסמפונות, שמתפצל לצד ימין, עוזר ליישר את התמונה על המסך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את המזרק עם הבידוד 5 מיליליטר לקצה צינורית הטפלון. נווט בצינור לסניפים שבי הבידוד יופקד ולהחיל את הכמות הרצויה (ריאה ימנית: medius Lobus: 0.5 מיליליטר, accessorius Lobus: 0.5 מיליליטר, Lobus caudalis: 0.5 מיליליטר ו1.0 מיליליטר; שמאל ריאות: cranialis Lobus, Pars cranialis : 0.5 מיליליטר, Pars caudalis: 0.5 מיליליטר, Lobus caudalis: 1.5 מיליליטר). צרף את המזרק עם 1 &amp;# 160; מיליליטר הבידוד לצינור, ואז לנווט לtrachealis הסמפונות ולהפקיד את הבידוד (cranialis Lobus, Pars caudalis: 1.0 מיליליטר). זה מועיל תמיד להתקרב מגויר באותו סדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את אנדוסקופ וספקולום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספריי 1 מיליליטר של הבידוד לכל נחיר עם מפעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא את בעלי החיים בחזרה לאורווה ולמקם אותו בעמדה נוטה להתעוררות. אל תשאיר את בעלי החיים ללא השגחה או בחברתם של בעלי חיים אחרים עד שהוא חזר להכרה מספיק כדי לשמור על עינת חזה. יציב ההתאוששות צריך להיות ממוזג, שכן יכולתו של בעל החיים לויסות חום היא ירד בהרדמה כללית. הערה: סימנים קליניים ראשונים אמורים להתרחש על 24-36 שעות לאחר חיסון, בהתאם לפתוגן בשימוש. </li></ol> . 3 נהלי דגימה (Sampling אתרים: איור 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את בעלי החיים כפי שמתואר ב1.1-1.6 צעדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברונכואלוואולרית שטיפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום 5 מזרקים בכל המכילים 20 מיליליטר של תמיסת מלח איזוטונית סטרילית, במי אמבטיה ולאפשר להם לחמם עד כ 38 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס קטטר שטיפה לערוץ החוזר של אנדוסקופ, ולאחר מכן להכניס את אנדוסקופ לתוך ספקולום המתכת ולנווט קדימה לתוך הסמפונות העיקרית של הריאה השמאלית עד שתגיע &quot;עמדת הטריז&quot; שבו אנדוסקופ לא יכול להיות דחף כל עוד לפנינו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזה אחר זה, לצרף את המזרקים עם פתרון NaCl החם לשטיפת קטטר, להחדיר את הנוזל ולשאוב אותו ישירות. נוזל שטיפת רונכואלוואולרית חייב להיות מאוחסן בבקבוקי זכוכית siliconized ולשים על קרח מייד לאחר התאוששות כדי למנוע מקרופאגים מכתשיים מהצמדה למשטח הזכוכית. שים לב גם את הכמות של תמיסת מלח והחדיר את כמות הנוזלים התאוששו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את צנתר שטיפה מהערוץ עובד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צחצוח הסימפונות<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נווט באנדוסקופ למיקום הדגימה הרצוי, בפרוטוקול המתואר זה tracheae Bifurcatio. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כסה את המברשת עם הצינור לפני הכנסתו לערוץ החוזר של אנדוסקופ עד הקצה של המברשת מופיע על הצג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדחוף את המברשת עם צינור הפלסטיק קדימה כ -5 ס&quot;מ ולחשוף אותו מצינור הפלסטיק על ידי לחיצה על הידית, ואז לנווט אותו למיקום שהוא להיות מוברש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תדבק שיחות אפיתל בעדינות על ידי דוחף ומושך את המברשת קדימה ואחורה בזמן ניווט אנדוסקופ כדי להבטיח מגע בין המברשת והקיר של הסמפונות. תפסיק לשפשף כאשר מתרחש דימום. כסה את המברשת עם הצינור לפני תלישה של הערוץ עובד בו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן עד חמישה כתמים על שקופיות מיקרוסקופ על ידי בעדינות מגלגל את המברשת על השקופית. לקבע את המריחות במתנול הקר עבור 10 דקות, אוויר יבש ולאחסן ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המברשת ניתן לשטוף באמצעי תקשורת שונים, בהתאם לצורך של תאי שנדגמו. אם לוקח brushings מרובה עם אותה המברשת, הקפד לשטוף אותו רק בתקשורת שאינו מגרה את הרירית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביופסיה הריאה Transbronchial <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נווט באנדוסקופ למיקום הדגימה הרצוי, בפרוטוקול המתואר זה caudalis Pars של cranialis Lobus. לפני החדרת המלקחיים הביופסיה לתוך תעלת העבודה פתוחה ולסגור אותו כמה פעמים כדי לוודא שהוא עובד בצורה חלקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דחוף את המלקחיים ביופסיה לסניף הזנב של הסמפונות trachealis עד התנגדות קלה מתרחשת. משוך לאחור 2-3 סנטימטר, פתח את המלקחיים, לדחוף קדימה על 2 סנטימטר, לסגור את המלקחיים, למשוך בחזרה והסר את המלקחיים מהערוץ עובד. זה דורש קצת תרגול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את הרקמה מביופסית המלקחיים, תוך שימוש במחט או מלקחיים קטנים. בהתאם לשימוש נוסף של הרקמות, לאחסן אותו בnitr הנוזליעוגן או בינוני קיבוע מתאים. זה צריך לקרות מייד אחרי ההסרה כדי למנוע תהליכי autolytic. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיפול שלאחר פרוצדורליים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא את בעלי החיים בחזרה לאורווה ולמקם אותו בעמדה נוטה להתעוררות. אל תשאיר את בעלי החיים ללא השגחה או בחברתם של בעלי חיים אחרים עד שהוא חזר להכרה מספיק כדי לשמור על עינת חזה. יציב ההתאוששות צריך להיות ממוזג, שכן יכולתו של בעל החיים לויסות חום היא ירד בהרדמה כללית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על בעלי החיים מקרוב אחר סימנים של חזה אוויר לשעה 24 הבאה. לספק מזון ומים טריים, כאשר בעל החיים חזרו להכרה מלאה. </li></ol></li></ol>

יש המחברים אין לחשוף.

שיטת bronchoscopic של חיסון שפותחה ושיטות דגימת bronchoscopic שונות הותאמו לשימוש בבעלי חיים גדולים בתנאי ניסוי. הטכניקות המתוארות הן קלים ללימוד, אפילו עבור בוחנים עם ניסיון מועט באנדוסקופיה. התהליך של ברונכוסקופיה הוא פולשנית וללא תופעות לוואי הקשורות בשיטות של החיסון, כמו גם את שיטות הדגימה תיארו (BAL, ביופסיה של הריאה transbronchial, צחצוח הסימפונות), שראו אי פעם בכל אחד מבעלי החיים. הסיבוכים הקשורים בביופסיות ריאה transbronchial בבני האדם מדממים וחזה האוויר 48, כל אלה לא נראו בשוק שעברו הליך זה. הביופסיה הריאה transbronchial היא זמן רב יותר ודורשת יותר ציוד מאשר בשיטת transcutaneous, אבל זה פחות פולשני ואינו נושא בסיכון לזיהום פצע. , השיטה אנדוסקופית חזותי המבוקר של inoculatיון מאפשר התצהיר של כמות מוגדרת של הפתוגן באתרים ספציפיים של הריאות. לפיכך, תוצאה הוא ממצאים קליניים ופתולוגי מאוד עקביים בכל בעלי החיים מחוסן 32-34. עם זאת, זה לא דומה לכל התכונות של זיהום טבעי בשוק. במודל של ג נשימה זיהום psittaci, הטכניקה המתוארת של חיסון הוביל לנגעי ריאות הקשורים לאתרים של מיקום הפתוגן 34, ואילו, בעגלי זיהומים שנרכשו באופן טבעי בדרך כלל לפתח דלקת ריאות של אונות הפסגה. עובדה זו צריכה להילקח בחשבון כאשר לפרש את הרלוונטיות של ממצאי ניסוי בהקשר של דלקות ריאות נרכשות טבעיות בראשי בקר. Videoendoscopic BAL מאפשר דגימת אזור מוגדר של הריאות. לצורך ניסויים, זה יתרון בהשוואה לשימוש בקטטר באף בתנאים עיוורים. בשל האנטומיה של ריאות שור, שהצנתר בצורה עיוורת יהיה דחיפהאד לאונה סרעפתית הנכונה ברוב המקרים 53,54 והבוחן אין לו השפעה על האזור של הריאות כי הוא lavaged. יתרון נוסף של BAL אנדוסקופית בשוק הרדים שכיבו לרוחב הוא שיעור ההחלמה הממוצע הגבוה של נוזל החדיר של יותר מ 80%. השוואה עם מחקרים אחרים מגלה כי, בעמידה, עגלים מסוממים, התאוששות של 133.3 ± 1.6 מיליליטר 46 ו127.13 ± 3.53 מיליליטר 45 לאחר החדרה של 240 מיליליטר נוזל לתוך האונה הזנב הוא מדווחת. בעגלים מסוממים בעינת חזה 51% מהנוזל החדיר יכולים להיות התאוששו מהאונה הגולגולת ו62% מהאונה הזנב 43. משמעות דבר היא כי כמחצית מהנוזל החדיר יכולה להיות התאוששה בתנוחה זקופה של העגל. בהתאם לכמות של בלף הדרוש להכנת מדגם נוספת, זה לא יכול להשאיר מספיק חומר כדי לבצע את כל הניסויים הרצויים. BAL בבקר כבר בשימוש על ידי קבוצות מחקר רבות ורביםפרמטרים שונים שנבדקו בתנאים שונים. רוב המחברים ביצעו שטיפה של אונות בסיס 43,45,46, אבל את כמות הנוזלים המשמשים לשטיפה שונה בין קבוצות המחקר. זה מוביל לחוסר עקביות בדילול של התאים התאוששו, חלבונים וחומרים אחרים, ולכן קשה להשוות את הממצאים מפרסומים שונים. לכן, לשימוש בבקר מומלץ שטיפה עם חמישה שברים של 20 מיליליטר (כלומר 100 מיליליטר בסך הכל) מי מלח חם, איזוטוני גוף, שהם התאוששו מייד לאחר החדרה. בעת שימוש בקטטר שטיפה עם קוטר גדול (כלומר&gt; 2 מ&quot;מ), הנפח של כל חלק צריך להיות גדל במעט, תלוי בכמות הנוזלים שתישאר בקטטר. האנטומיה מפולחות מאוד של ריאות השור מובילה להגבלה שיטתית; תוצאות שהתקבלו מחלק אחד של הריאה לא יכולות להיות נכונות גם לגבי שאר הריאות. מאחר ואיןשליטת מראה של אזור הריאה כולה נחקר על ידי ביופסיה ושטיפה transbronchial, הבוחן לא יכול לדעת אם האזורים שנדגמו היו בריאים או חולים. לכן, זה מאוד חשוב למקומות בהם הפתוגן היה מחוסן לפני על מנת שיהיה קצב התאוששות גבוה יותר של הפתוגן ויש אפשרות גבוהה יותר של דגימת אזורי ריאה פגועות לטעום. מגבלה נוספת היא הסיכון המוגבר הרדמה בבעלי חיים של מצב קליני ירוד. יש להשתמש בשיטות שתוארו רק בדגמים של קל עד בינוניים למחלה לשמור את הנטל לבעלי החיים נמוכים ככל האפשר. הרדמה כללית במעלי גירה תמיד צריכה להיות כל הזמן קצר ככל האפשר, כמו פיתוח הגז בכרס הפנימי מגדיל את הסיכון בהרדמת מינים אלה. בעלי חיים חייבים להיות ממוקמים בעמדה נוטה מייד לאחר ברונכוסקופיה, כדי לאפשר הזרימה של הגז שפותח וחייבים להיות במעקב צמוד עד שהתאוששו לגמרי מהרדמה. כמו כן, הטכניקות המתוארות אינן suitable לדגימה במרווחים של פחות מ 24 שעות. הפרוטוקול המתואר יכול להיות מותאם לחומרים מזהמים אחרים. חיסון אנדוסקופי של פתוגנים שונים תואר, כגון ג psittaci 32-34, haemolytica Pasteurella 38-40,42, somni Haemophilus 55, ווירוס שלשולים נגיפי שור 44. כמו כן, האתרים של הפקדת פתוגן בריאה יכולים להיות מותאמים למודל הרצוי. כשאתה בוחר את אתרי דגימה, כמה עובדות חשובות צריכים להילקח בחשבון: יש לבחור באתרים (i) דגימה המבוססים על מיקומם של חיסון ועל הממצאים פתולוגיים הצפויים. (Ii) כאשר נתיחה לאחר מוות הוא שיש לבצע יש להקפיד להשאיר את אזורי הריאה unsampled מספיק עבור vivo לשעבר דגימה. (Iii) יש לבחור מקומות באתר דגימה כך שניתן יהיה להגיע עם הציוד. במיוחד לביופסית ריאות transbronchial, יש מגבלות בשל אורכו של מלקחיים ביופסיה. (Iv) Tהוא בסדר גודל של דגימה הוא צחצוח חשוב, הסימפונות וביופסית ריאות transbronchial עלול להוביל לדימום קל, אשר היו לזהם את בלף. לכן, חייב להיות תמיד מתקבל בלף ראשון. בעת השימוש בפרוטוקול במינים אחרים, האנטומיה ריאות המינים ספציפיים חייבת להילקח בחשבון.

הערכים של מודלים בבעלי חיים גדולים במחקר ביו במחקר ביו תחומי מודרני, מודלים של בעלי החיים הם עדיין הכרחיים כדי להבהיר אינטראקציות מורכבות - הקשורים לבריאות או מצב מחלה - בתוך אורגניזמים יונקים. למרות 17 פרסי הנובל שהוענק למדענים שחקרו בקר, סוסים, כבשים, או עופות כמודלים למחקר ביו 1, כיום רובם המכריע של ניסויים בבעלי החיים מתבצעים עם מכרסמים, בעוד שפחות מ 1% מהמחקרים עובדים עם חיות בית או בעלי חיים. בעלי חיים קטנים מציעים הרבה יתרונות מעשיים (כלומר בעלות נמוכה, גמישות גנטית, תפוקה גבוהה, זמינות של מספר רב של גנטי, וכלים וערכות חיסוניים), ומודלים עכבריים מהונדסים גנטי הם מקובלים לבצע מחקרים מכניסטית לגלות מסלולים מולקולריים מסוימים. במחקר ביו של מערכות, לא מורכביםהוא רלוונטי ביולוגי ותועלת קלינית של מודלים בעכברים הופכים יותר ויותר בספק. הם יכולים להיות מטעים ולשאת בסיכון של פשטנות של מורכבות ביולוגיות 2-9. בשל ייחוד בין מינים, לא בעלי חיים יחיד יהיו במראה לחלוטין את המצב האנושי, ונראה את השימוש במודל אחד או יותר כדי להיות מועיל בגישת מחקר ביו בינתחומי. בהקשר של רפואת translational, בעלי חיים גדולים מציעים את ההזדמנות לשרת את המודלים השוואתיים כלספק תוצאות עם שייכות ביולוגית גבוהה של שימוש כפול עבור שני בני אדם וחיות בריאות 1. למרבה הפלא, את הגנום האנושי הוא דומה באופן הדוק יותר על ידי הגנום השור מאשר על ידי הגנום של מכרסמים מעבדה. כמו כן, אושר לאחרונה כי, בהשוואה למינים אחרים, הגנום של עכברים הוא הרבה יותר מחדש 10-12. במערך מחקר מורכב, שימוש בבעלי החיים מציעים uniqהזדמנות UE של מחקרים על ידי איסוף חוזר ונשנה של מגוון רחב של דגימות in vivo מהאחד ו- אותו individuum מבלי להקריב בעלי החיים התוך בודדים, לטווח ארוך. לכן, ניתן לנטר שינויים פונקציונליים, דלקתיים ומורפולוגיים באותו הנושא על פני תקופה מסוימת של זמן 13. ריאות שור כמודל נשימה מתאים בשל המספר הגבוה של הבדלים משמעותיים באנטומיה ריאות, פיזיולוגיה נשימה, ואימונולוגיה ריאות, עכברים לא מתרבים היבטים רבים pathophysiological חשובות של מחלת ריאות אנושית. זה חייב להילקח בחשבון בעת שימוש בהם כמודלים של בעלי חיים למחלות בדרכי הנשימה 2,9,14-16. למרות מוזרויות של האנטומיה ומבנה קיימות עבור כל ריאות של יונקים, מאפיינים פונקציונליים (כרכי ריאות כלומר, זרמי אוויר ומכניקת נשימה) הם טובים יותר להשוואה בין בני אדם בוגרים ועגלים בשל משקלי גוף דומים(50-100 קילוגרם). מאפייני המינים ספציפיים של הריאה השור הם כדלהלן: הריאה השמאלית מורכבת משתי אונות (cranialis lobus, אשר מחולקת לשני חלקים, וcaudalis lobus), בעוד שהריאה הימנית מורכבת מארבע אונות (lobus cranialis, lobus medius, caudalis lobus, וaccessorius lobus). בניגוד לאנטומיה הריאות של רוב יונקים אחרים, הסמפונות של הסניפים תקין גולגולת אונה ישירות מהצד לרוחב ימין של קנה הנשימה. עם כל כבוד לsubgross אנטומיה, ריאות השור מציגה רמה גבוהה של lobulation ואחוז גבוה של רקמת ביניים 17,18 המוביל לעמידת ריאות ספציפית נמוכה יחסית והתנגדות רקמות pulmonic גבוהה 19. לכן, פעילות הנשימה הנדרשת היא גבוהה למדי בהשוואה למינים אחרים 20,21. הרמה הגבוהה של lobulation מובילה לעצמאות חזקה מהמגזרים. לפיכך, infתהליכי lammatory הם מוגבלים על ידי septa רקמת חיבור, ומגזרים חולים ובריאים לעתים קרובות נמצאים בתוך אותה האונה. בשל המחסור בדרכי נשימה בטחונות, ריאות שור הוא מתאים במיוחד למראה תפקוד ריאות חסימתית 13. באשר לכלי הדם של ריאת השור, עורקי ריאה הקטנים מראים שכבות שריר חלק בולטות מאוד. לכן, השוקיים עשויים גם לשמש כמודל בבעלי חיים מבוסס של יתר לחץ דם או בכלי דם הריאתיים שיפוץ 22-24. עם כל כבוד לזיהומים בדרכי הנשימה, מחלות באופן טבעי קיימות בבעלי חיים שחולקות קווי דמיון רבים עם המחלה הדומה באדם. דוגמאות אופייניות הן שחפת שור 25, וירוס סינסיציאלי נשימה זיהומים (RSV) בשוק 26-28, או זיהומי כלמידיה שנרכשו באופן טבעי 29. לפיכך, מודלים של בעלי חיים גדולים שמקרוב דומים למצב במארח הטבעי. לכן, הם רוב useful לחקר אינטראקציות בין המאכסן לפתוגן והפתופיזיולוגיה המורכבת של המחלה המקבילה בבני אדם 30,31. כמודל רלוונטי מבחינה ביולוגית של זיהום psittaci כלמידיה בדרכי הנשימה, שוקיים נבחרו מאז ראשי בקר מייצגים פונדקאים טבעיים לפתוגן זה 32-35. מידע המתקבל ממודל זה, ביחס לפתוגנזה של המחלה או נתיבי הולכה אפשריים בין בעלי חיים ובני האדם, יסייע להרחיב את הידע שלנו עם השפעה לשתי בהמות ואדם. המודל גם יכול לעזור כדי לוודא אפשרויות טיפוליות חלופיות מקובלות ולחיסולה של ג ריאתי זיהומי psittaci, שהוא, שוב, עניין בשתי רפואת הווטרינרית ואנושית. טכניקות יישומים ולדוגמאות אפשר להשיג ממערכת הנשימה שור מאמר זה מתאר וממחיש את הטכניקות ושיטות אבחון applicablדואר לריאות שור והשתמש במודל שלנו להערכה גם את ההשפעות של הפתוגן על הריאות של יונקים ואת היעילות של התערבות טיפולית. ברונכוסקופיה שבוצעה ברפואה אנושית מאז 1960s, והוא נחשב הליך בטוח 36. בשוק, ברונכוסקופיה הניסיונית תוארה ב -1968 בפעם הראשונה 37. יישום intrabronchial של פתוגנים הוצע על ידי Potgieter et al. כשיטת אמינה כדי לייצר מחלה בדרכי נשימה תחתונה בשוק 38 וכיום היא שיטה נפוצה במחקר שור 34,39,40. חיסון Intrabronchial של כמות מוגדרת של הפתוגן תחת שליטת videoendoscopic מאפשר להשמה סלקטיבית של הגורם המזהם בריאות. זה מוביל לממצאים קליניים ופתולוגיים עקביים בכל בעלי החיים 34 ומאפשר דגימה ממוקדת של אזורי ריאה אשר צפויים להשתנות כתוצאה מחשיפת הפתוגן. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; נוזל שטיפה ברונכואלוואולרית (בלף) הוא אינדיקטור שתואר היטב לנוכחות והחומרה של דלקת ריאות. שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) היא הליך סטנדרטי ברפואה אנושית לאבחון של מגוון רחב של מחלות בדרכי הנשימה 41. בבקר חי, BAL הוצג על ידי ווילקי ומרקם בסוף שנות השבעים של המאה שעברה 42. זה נחשב טכניקה בטוחה ודיר כדי ללמוד את דרכי נשימה התחתונות של הבקר. בשל היעדר נתונים מספקים על הפרמטרים בלף בבעלי חיים בריאים, בשינה 1988 BAL ביצע פרינגל et al. על עגלים בריאים עם bronchoscope סיב אופטי גמיש. המחברים גם הצביעו על הצורך לתקנן פרוטוקולי BAL תחת תנאי ניסויים לרכוש תוצאות דומות 43. BAL עדיין משמש כשיטת דגימת in vivo בשוק 44-46. צחצוח הסימפונות משמש ברפואה אנושית בכינויוכלי אבחון כדי לדגום נגעי neoplastic או לניתוח מיקרוביולוגית 36. למטרות מחקר, ניתן להשיג בתרביות תאים ראשוניות של תאי האפיתל שנקטפו על ידי צחצוח ציטולוגית 47. בבקר, השימוש בbrushings הסימפונות לניתוח מיקרוביולוגית תואר לאפיין את סביבת החיידקים של הריאות 43. ביופסיה הריאה Transbronchial מספקת דגימות רקמת ריאה והוא כלי אבחון בעל ערך עבור מפוזר מחלות ריאה בבני אדם. pneumothorax אבחנה רפואי ודימום הקשורים בהליך הם סיבוכים הקשורים לטכניקה זו. השכיחות שלהם היא דיווחה להיות פחות מאחוז אחד בחולים אנושיים 48. הביופסיה הריאה Transbronchial היא לא שיטה נפוצה לשימוש בבקר, בשל העלות הגבוהה של הציוד הנדרש והזמן הדרוש כדי להשיג ביופסיות. במקום זאת, ביופסיות הריאה transcutaneous יותר נוחים בתנאי שדה 49-51.

<table><tbody><tr><td>אנדוסקופ וידאו וטרינרי</td><td>Karl Storz GmbH & Co. KG, Tuttlingen, גרמניה</td><td>PV-SG 22&ndash; קוטר 140</td>: <td>9 מ"מ, תעלת עבודה: 2.2 מ"מ, אורך עבודה 140 ס"מ</td></tr><tr><td>קטטר שטיפה</td><td>Karl Storz GmbH & Co. KG, טוטלינגן, גרמניה</td><td></td><td>קוטר: 2 מ"מ; אורך: 180 ס"מ, מפעיל מתאם Luer-lock</td></tr><tr><td></td><td>WEPA Apothekenbedarf GmbH & Co KG, Hillscheid, גרמניה</td><td>32660</td><td>אורך: 60 מ"מ</td></tr><tr><td>מלקחיים ביופסיה</td><td>Karl Storz GmbH & Co. KG, Tuttlingen, גרמניה</td><td>REF 60180LT</td><td>1.8 מ"מ, משונן, סגלגל</td></tr><tr><td>Omnifix 20 מ"ל, Luer-Lock</td><td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, גרמניה</td><td>4617207V</td><td></td></tr><tr><td>מברשת Cytology</td><td>mtp GmbH, Neuhausen ob Eck, גרמניה</td><td>110240-10</td><td>אורך עבודה 180 ס"מ, אורך מברשת: 15 מ"מ, קוטר 1.8 מ"מ</td></tr><tr><td>iv acess</td><td>Henry Schein Vet GmbH, המבורג, גרמניה</td><td>קוטר 370-211</td>: <td>1.2 מ"מ; אורך: 43 מ"מ</td></tr><tr><td>Rompun 2% (קסילזין)</td><td>Bayer Vital GmbH, לברקוזן, גרמניה</td><td></td><td>0.2 מ"ג/ק"ג משקל גוף</td></tr><tr><td>קטמין 10% (קטמין)</td><td>bela-pharm GmbH & Co. KG, Vechta, גרמניה</td><td></td><td>2.0 מ"ג/ק"ג משקל גוף</td></tr><tr><td>תמיסת מלח איזוטונית</td><td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, גרמניה</td><td></td><td></td>3200950</tr><tr><td>SUB 6 אמבט מים</td><td>CLF analytische Laborger&auml; te GmbH, Emersacker, גרמניה</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>ספקולום צינור מתכת</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>קוטר: 3.5 ס"מ; אורך: 35 ס"מ</td></tr><tr><td>פנס</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקי זכוכית סיליקון</td><td>n/</td><td>a n/a</td><td>סיליקון עם Sigmacote (Sigma-Aldrich Co. LLC)</td></tr><tr><td>Omnifix Luer 3 מ"ל</td><td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, גרמניה</td><td>4616025V</td><td></td></tr><tr><td>Omnifix Luer 5 מ"ל</td><td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, גרמניה</td><td>4616057V</td><td></td></tr><tr><td>אטמי איטום</td><td>Henry Schein Vet GmbH, המבורג, גרמניה</td><td>900-3057</td><td></td></tr><tr><td>Inoculum</td><td></td><td>n/a</td><td>פתוגן מדולל במאגר 8 מ"ל</td></tr></tbody></table>

ברונכוסקופיה מודרכת מבחינה ויזואלית, intrabronchial הרכבת חיסון ו: ריאות שור במחקר ביו<em&gt; בvivo</em&gt; טכניקות דגימה

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

יש חיפוש מתמשך למודלים של בעלי חיים אלטרנטיביים במחקר של רפואה בדרכי הנשימה. בהתאם למטרה של המחקר, בעלי חיים גדולים כמודלים של מחלת ריאות לעתים קרובות דומים למצב של אדם הריאות הרבה יותר טוב מאשר עכברים לעשות. עבודה עם בעלי חיים גדולים גם מציעה את ההזדמנות לטעום אותו בבעלי החיים שוב ושוב על קורס מסוים של זמן, המאפשר מחקרים ארוך טווח, מבלי להקריב את בעלי החיים. המטרה הייתה להקים בvivo שיטות דגימה לשימוש במודל שור של זיהום psittaci כלמידיה בדרכי הנשימה. דגימה צריכה להתבצע בנקודות זמן שונות בכל בעל חיים במהלך תקופת המחקר, והדגימות צריכה להיות מתאימות כדי ללמוד את התגובה המארחת, כמו גם את הפתוגן בתנאי ניסוי. ברונכוסקופיה היא כלי אבחון חשוב ברפואת אדם ולשימוש וטרינרים. זהו הליך בטוח ופולשנית. ארטיק זהle מתאר את חיסון intrabronchial של עגלים, כמו גם שיטות דגימה לדרך הנשימה התחתונה. Videoendoscopic, חיסון intrabronchial מוביל לממצאים קליניים ופתולוגי מאוד עקביים בכל בעלי החיים מחוסן, והוא, אם כן, מתאים היטב לשימוש במודלים של מחלת ריאות זיהומית. שיטות הדגימה המתוארות הן שטיפה ברונכואלוואולרית, צחצוח הסימפונות וביופסית ריאות transbronchial. כל אלה הם כלי אבחון חשובים ברפואה אנושית ויכול להיות מותאם למטרות ניסיוניות לעגלים בגילי 6-8 שבועות. הדגימות שהתקבלו היו מתאימות גם לזיהוי הפתוגן ואפיון של החומרה של דלקת ריאות במארח.

מהלך המחלה ההשפעה של הפתוגן על בריאותם של בעלי החיים ניתן להעריך על ידי בדיקה קלינית. במודלים של הזיהום בדרכי הנשימה שלנו, בעלי חיים נבדקו פעמיים ביום ותצפיות קליניות נרשמו באמצעות שיטת ניקוד. מידע נוסף נכבש על ידי ביצוע in vivo שיטות אחרות דגימה, למשל, אוסף של דם ומטליות או מדידת תפקוד ריאות. בדיקות פתולוגיות בוצעו בנקודות זמן שונות לאחר חיסון כדי לתאר את ההתקדמות של הזיהום 32-34. בלף שיעור ההחלמה קצב ההתאוששות של הנוזל החדיר היה 83.05 ± 4.58% (ממוצע ± סטיית תקן). איתור פתוגן Recultivation של הפתוגן יכול להתבצע מbrushings הסימפונות. כמו כן, הקרנת PCR של דגימות שונות אפשר לזהות את הפתוגן, למשל tiביופסיה ssue, מדגם מברשת ציטולוגיה, בלף-תאים 52 או ספוגית בלוע. ויזואליזציה של פתוגן אפשרית על ידי ביצוע אימונוהיסטוכימיה סעיפים קפוא של ביופסיות הריאה והכנות שקיעה של בלף-התאים (איור 3). בניסויים קודמים, ה-PCR של דגימות דם ודגימות (הלחמית, צואה, אף) בוצעה כדי לאפיין את ההתפשטות ושפיכה של הפתוגן 32. סמנים של דלקת המקומית של רקמת הריאה בבלף, פרמטרים שונים של דלקת ריאות ניתן ללמוד. ספירת התאים בסך הכל, ואת חלקם של הנויטרופילים בדרך כלל להגדיל כאשר דלקת ריאות היא הווה. להתמיינות תאים, יכולות להיות מוכתמות הכנות שקיעה של בלף-תאים פי Giemsa ומובחן באמצעות טבילת שמן (איור 4). פרופורציות נייד ונוזליות של בלף מופרדות על ידי צנטריפוגה (XG 300; 20 דקות). בלף-Supernatant מכיל סמנים שונים המשתנים במהלך תהליכים דלקתיים בריאה וניתן ללמוד תחת תנאי ניסוי. דוגמאות לכך הן חלבון וeicosanoids 29,34 סך הכל. סקירה סכמטית של שימוש נוסף האפשרי של הדגימות תיארו מוצגת באיור 5. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1. תכנית של הריאה השור עם אתרי חיסון (צהוב). המספרים מציינים את הסדר שבו הבידוד מנוהל לתוך הסמפונות שונה. R: ימין; L: עזב. ריאה ימנית: medius Lobus 1: 0.5 מיליליטר, 2 accessorius Lobus: 0.5 מיליליטר, 3 caudalis Lobus: 0.5 מיליליטר ו -4 1.0 מיליליטר; ריאה שמאלית: cranialis Lobus, <strong&gt; 5 Pars cranialis: 0.5 מיליליטר, caudalis 6 Pars: 0.5 מיליליטר, 7 caudalis Lobus: 1.5 מיליליטר, 8 cranialis Lobus, Pars caudalis: 1.0 מיליליטר. <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig2highres.jpg" width="500" /> . איור 2 תכנית של הריאה השור עם אתרי חיסון (צהוב) ואתרי דגימה:. שטיפה ברונכואלוואולרית (כחולה), צחצוח הסימפונות (ירוקה), וביופסית ריאה (כתום) שים לב כי כל הדגימות שהתקבלו מאזורים שבם הפתוגן הופקד לפני. R: ימין, L: עזב. <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig3highres.jpg" width="500" /> איור 3.) ביופסיה ריאות מעגל מחוסן עם Chl<html> psittaci amydia 4 ימים לאחר החיסון (dpi), ב) משקעים סלולריים של בלף מעגל מחוסן עם ג dpi psittaci 9. תיוג immunohistochemical לchlamydiae. תכלילים כלמידיה (חיצים) נמצאים הריאה (א) ובמקרופאגים מכתשיים (ב). counterstain hematoxylin. <img alt="איור 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig4highres.jpg" width="500" /> איור 4. משקעים נייד של בלף מעגל מחוסן עם ג מקרופאגים psittaci 9 dpi. מכתשיים (#) הם סוג התא הדומיננטי בבלף. הסכום של גרנולוציטים נויטרופילים (*) עולה כאשר תהליכים דלקתיים הם הווה. מכתים פפנהיים השתנה. &quot;Width =&quot; es.jpg 600 &quot;/&gt; איור 5. שיטות אפשריות להכנת מדגם. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51557/51557fig5highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

מאמר זה מתאר טכניקות bronchoscopic בריאת השור תחת תנאי ניסוי, כלומר חיסון מודרך bronchoscopically, שטיפה ברונכואלוואולרית, צחצוח הסימפונות, וביופסית ריאות transbronchial.

ברונכוסקופיה מודרכת מבחינה ויזואלית, Intrabronchial הרכבת חיסון ו: ריאות שור במחקר ביו<em&gt; בVivo</em&gt; טכניקות דגימה

There is an ongoing search for alternative animal models in research of respiratory medicine. Depending on the goal of the research, large animals as ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לחקור אינטראקציות בין מאוחר לפתוגן במודל בקר של זיהום נשימתי. מטרה זו מושגת על ידי השראה של זיהום נשימתי בעגלים באמצעות הזרקה תוך-סימפונית (intra bronchial) של הפתוגן הנבדק במהלך מהלך המחלה. דגימות נלקחות מהחיה באופן חוזר באמצעות שטיפה ברונכואלוולולרית (bronchoalveolar lavage).בשלב הבא מבצעים שטיפות מברשת ברונכיאליות וביופסיות ריאה טרנס-ברונכיאליות כדי להוציא תאי אפיתל ודגימות של רקמת בועיות או רקמת ריאה, בהתאמה. בסופו של דבר, ניתן לאשר מחלה נשימתית ספציפית לנתיב פתוגני, למשל, על ידי שינויים דלקתיים בשטיפה, ציטולוגיה ובזיהוי אימונוהיסטוכימי של הפתוגן. בביופסיות ריאה טרנס-ברונכיאליות, היתרון המרכזי של מודל בעלי החיים הגדולים זה בהשוואה למודלים קיימים אחרים של בעלי חיים ומכרסמים, הוא שבמודל שלנו אנו מסוגלים לחקור את מהלך המחלה לאורך פרק זמן ממושך באותו פרט באמצעות דגימה חוזרת.בעוד ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי האינטראקציות בין המארח לפתוגן in vivo, ניתן ליישמה גם על מערכות אחרים, כגון פתוגנים חלופיים או מיני מאחס אחרים. את השמירה על ההרדמה והסיוע בדגימה תבצע פישר, שהיא וטרינרית מהמעבדה שלנו. לפני תחילת הפרוצדורה, מלאו שלוש מזרקים ב-1, 2 ו-5 milliliters של האינוקולום.לאחר אישור ההרדמה, יש לשלוף את לשונו של בעל החיים ולמתוח את הצוואר. לאחר מכן, באמצעות תנועות סיבוב קלות, יש להניח ספקולום מתכת בפיו של בעל החיים. דחפו את הספקולום קדימה תחת בקרה חזותית, והשתמשו בפנס כדי לקבוע מתי הלרינקס נראה.בשלב הבא, הכניסו צינור טפלון לתעלת העבודה של האנדוסקופ. הצינור לא אמור לבלוט מקצה האנדוסקופ. הכניסו את האנדוסקופ דרך המפשעת (speculum).ייתכן שיהיה צורך בביצוע התאמות קלות למרחיב (speculum) כדי לאפשר את הכנסת האנדוסקופ. כדי לעבור דרך הלרינקס, השתמש ב-bronchus trache, שמתפצל לצדו הימני של הריאה, כדי לסייע ביישור התמונה על המסך. לאחר מכן, חבר את המזרק המכיל 5 mL של אינוקולום לקצה צינור הטפלון.הנח את הצינור אל תוך הענפים שבהם יופקד האינוקולום והחדר את כמות האינוקולום המתאימה. לאחר מכן, חבר את המזרק המכיל 1 mL של אינוקולום אל הצינור. התקדם אל הסימפונות והקנה והפקד את האינוקולום בענף הרלוונטי.הוצא את האנדוסקופ ואת המרחיב (speculum). לאחר מכן, חבר את המזרק האחרון למפעיל (actuator) ורסס 1 mL של התרבית לכל נחיר. החזר את בעל החיים למאגר שלו במצב שכיבה על הבטן להשכמה.דיור ההתאוששות צריך להיות ממוזג. מכיוון שהיכולת של בעל החיים לוויסות תרמי פוחתת תחת הרדמה כללית, כדי לאסוף דגימות שסתום בנקודת הזמן הרצויה לדגימה, חממו חמישה מזרקים, שכל אחד מהם מכיל 20 milliliters של תמיסת סליין סטרילית איזוטונית, במקלח מים בטמפרטורה של 38 degree Celsius. לאחר מכן, הכניסו קטטר שטיפה לתעלת העבודה של האנדוסקופ והכניסו את האנדוסקופ לתוך הספקולום המתכתי.בשלב הבא, התקדמו אל תוך הסיבון הראשי של הריאה השמאלית עד להגעה למצב טריז (wedge position), כאשר לא ניתן לדחוף את האנדוסקופ קדימה יותר. לאחר מכן, one after another, חברו למבוב השטיפה מזרקים המכילים תמיסת sodium chloride חמה לצורך הזרקת הנוזל ושאיבתו באופן ישיר.יש לאחסן את נוזל שטיפת ברונכ׳אוולבולרית בבקבוקי זכוכית סיליקוניים על קרח מיד לאחר האיסוף, כדי למנוע מהמקרופאגים האלבולהריים להיצמד למשטח הזכוכית. רשמו הן את כמות התמיסה המלוחית שהוחדרה והן את כמות הנוזל שנאסף. לאחר מכן, הוציאו את קטטר השטיפה מהתעלה הפעילה כדי לאסוף תאים אפיתליאליים.בשלב הבא, נavigo את האנדוסקופ למיקום הדגימה הרצוי. לדוגמה, בניסוי זה אל הפיצול של הקנה (bifurcation trache); כאשר האנדוסקופ במקומו, כסו מברשת ברונכיאלית עם הצינור והחדירו אותה לערוץ העבודה של האנדוסקופ עד שקצה המברשת יופיע על המסך. דחפו את המברשת ואת צינור הפלסטיק קדימה כחמישה סנטימטרים.לאחר מכן, דחפו את ידית המברשת כדי להוציא אותה מתוך הפלסטיק. כאשר המברשת נמצאת במקומה, נתיבו אותה למיקום שיש להבריש. לאחר מכן, דחפו ומשכו בעדינות את המברשת קדימה ואחורה תוך כדי ניווט האנדוסקופ.יש להבטיח מגע בין המברשת לדופן הסיבון כדי להסיר תאי אפיתל. יש להפסיק את השפשוף כאשר מופיע דימום. לאחר מכן, כסו את המברשת בעזרת השפופרת ומשכו אותה החוצה מתוך תעלת העבודה.גלגלו בעדינות את סיבי המברשת המצופים בתאי אפיתל על עד חמש זכוכיות מיקרוסקופ, וקבעו את המריחות במתנול קר למשך 10 דקות. לאחר מכן, לאחר ייבוש של הזכוכיות באוויר, אחסנו אותן בטמפרטורה של minus 20 degrees Celsius כדי לבצע ביופסיית ריאה טרנשברונכיאלית. לאחר מכן, נווטו את האנדוסקופ למיקום הדגימה הרצוי.לדוגמה, עבור הפרס Alis של ה-LOAs crans כבניסוי זה, לפני הכנסת מלקחי הביופסיה לתעלת העבודה, פתחו וסגרו אותם מספר פעמים כדי לוודא תפקוד תקין, ולאחר מכן דחפו את המלקחים אל ענף ה-coddle של הסימפונות והקנה עד להתרחשות התנגדות קלה. כעת, משכו אותם חזרה שניים עד שלושה סנטימטרים ופתחו את המלקחים. דחפו את המלקחים קדימה שוב, כשני סנטימטרים, ולאחר מכן סגרו אותם.משכו חזרה והוציאו את המלקחיים מתעל הפעולה. השתמשו במחט כדי להסיר בזהירות את הרקמה ממלקחי הביופסיה ואחסנו אותה בתווך קיבוע מתאים כדי למנוע תהליכים אוטוליטיים. לבסוף, לאחר שהעגל התאושש בתאוה, נטרו שוב את בעל החיים לאיתור פנאומותורקס במהלך 24 השעות הבאות, תוך אספקת מזון ומים טריים.כאשר בעל החיים החזיר לעצמו את ההכרה המלאה, ניתן לצבוע נתחים קפואים של ביופסיות ריאה טרנס-ברונכיאליות בשיטה אימונוהיסטוכימית. כדי להדגים את הפתוגן שהוחדר, שימו לב להכלילות החלאמידיות החומות בריאת בעל חיים זה, שהוחדר בחלאמידיה ארבעה ימים לפני הדגימה. צביעה אימונוהיסטוכימית של תאי השטיפה מאפשרת את הדמיית הפתוגנים התוך-תאיים.לדוגמה, בתמונה זו, נראים גופי הכלואה (inclusions) של חלאמידיה במקרופגים אלבולאריים שנדגמו מעגל. תשעה ימים לאחר חיסון תוך-סימפוני בחלאמידיה, ניתן להבחין ב-CTAC. ניתן להבדיל בין תאי שטיפת סימפונות-שלפוחית (bronchoalveolar lavage) באמצעות צביעה ציטולוגית.מקרופאגים אלבולריים הם סוג התאים השולט בנוזל השטיפה. עם זאת, מספר הגרנולוציטים נויטרופיליים עולה כאשר קיימים תהליכים דלקתיים. לאחר רכישת המיומנות, ניתן לבצע את ההזרקה ב-10 עד 15 דקות ואת הדגימה בתוך 20 עד 30 דקות, אם הפעולה מבוצעת כראוי.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן ביצוע הזרקה תוך-סימפונית בעגלים, וכיצד לדגום נוזל שטיפת ברונכ׳יאולית (BAL), שפשוף סימפוני וביופסיית ריאה טרנס-ברונכ׳יאלית בבעל חיים תחת הרדמה.

the-bovine-lung-biomedical-research-visually-guided-bronchoscopy

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מתארים טכניקת מחקר לרונכוסקופיה סיב אופטי ושטיפה ברונכואלוואולרית באמצעות שאיבה בלחץ נמוכה. הטכניקה משמשת כדי לקצור תאים חיסוניים ממשטחי רונכואלוואולרית ריאות. משמש הרדמה מקומית וטשטוש קל בהכרה (midazolam). נושאים לסבול את תופעות לוואי מינימליות גם הליך וניסיון.

שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) למחקר; קבלת תשואה הולמת לדוגמא

סרטון זה מתאר גישה תוך-סימפונית למתן חומר ניסיוני באופן סלקטיבי לתוך ריאה ימנית ושמאלית דיסטלית. בפרוטוקול המוצג, אנו ננהל בלומיצין תוך סימפוני לתוך עכבר כדי לקבל מודל טוב יותר עבור פיברוזיס ריאתי.

משלוח תוך סימפונות: טכניקה לניהול סוכן ניסיוני באופן סלקטיבי לתוך ריאה עכבר

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי לחילוץ רקמות ברונכיולריות מריאת חזיר שנקטף. הרקמה הסימפונית ex vivo יכולה לשמש לפיתוח מודלים של זיהומים לחקר דלקות ריאה כרוניות.

מיצוי רקמת ברונכיולרי חזיר: הליך לניתוח חלקי רקמת ברונכיולר מריאות חזיריות

סרטון זה מדגים את ביסוס זיהום הריאות במודל מכרסם חיסוני באמצעות אינטובציה והתקנת תרחיפים חיידקיים באונות הריאה. מודל זה מאפשר מחקרי יעילות אנטיבקטריאליים בבעלי חיים בעלי יכולת חיסון.

החדרה תוך סימפונית של דלקת ריאות סטרפטוקוקוס במודלים של מכרסמים חיסוניים

השימוש במודל המחקה את המצב של מחלות ריאה בבני האדם הוא קריטי ללימוד הפתופיזיולוגיה ו / או אטיולוגיה של מחלה מסוימת ולפתח התערבות טיפולית. הנה שיטת אינטובציה intratracheal לא פולשנית שיכול ישירות לספק חומרים אקסוגניים לריאות עכבר מוצגת.

פולשנית Intratracheal אינטובציה ללמוד פתולוגיה והפיזיולוגיה של עכבר ריאות

מצב בריאותי של הריאה משתקף על ידי סוג ומספר של תאים חיסוניים הנמצאים bronchioles של הריאה. אנו מתארים טכניקת שטיפה ברונכואלוואלית המאפשרת בידוד ומחקר של תאים לא דליקים וגורמים מסיסים ממערכת הנשימה התחתונה של עכברים.

ברונכאלווולאר של ריאות Murine כדי לנתח דלקת תאים דלקתית

Intratracheal (IT) המינהל של סוכנים ניסיוניים בעכברים לעתים קרובות מביא משלוח אסימטרי הריאות המרוחק.  בדוח זה, אנו מתארים גישה ישירה בלתי-מרורונצ'יאל (ליברות) כדי לאגור כל ריאה בעכברים חיים שאינם מבצעית.  גישה זו יכולה לשמש באופן סלקטיבי לניהול סוכנים לריאה אחת או להתאים כדי לשפר את מסירת הסוכן הסימטרי לשתי הריאות.

מינהל הארגון הישיר כדי לשפר את הסוכן הסלקטיבי התצהיר בתוך הריאה של העכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להדמיה תוך-חיונית של Mycobacterium tuberculosis המאושר על ידי BSL-2 מוחלש. מאמץ בריאה העכברית באמצעות חלון ריאה קבוע. גישה זו מאפשרת ניתוח אורך ברזולוציה תאית אחת של אינטראקציות מוקדמות בין מארח לפתוגן, כולל מיקום חיידקים, דינמיקת כלי דם וספיגת מקרופאגים באותה מיקרוסביבה ריאתית.

הדמיה תוך-חיונית של מיקובקטריום טוברקולוזיס אוקסוטרופי מוחלש בריאות עכברי במהלך זיהום תוך-כלי מוקדם

סוללה בדיקה (IMAP) לביצוע הערכה מעמיקה של השמיעה ויכולות קוגניטיביות לתרום מיומנויות הקשבה מתואר. הוא מהיר לנהל, ילד ידידותי ללא בלבול לשוני. דור Stimulus וניהול פרוטוקול נשלטים באמצעות פלטפורמת תוכנה (IHR-STAR) כדי להבטיח הליכי לשכפול.

יצירת תחושה של הקשבה: סוללה מבחן IMAP

Ex-Vivo ריאות זלוף (EVLP) אפשר השתלת ריאות בבני אדם להפוך לזמינה יותר בכך שיאפשר את היכולת להעריך איברים ולהרחיב את המאגר התורם. כאן אנו מתארים את הפיתוח של תכנית EVLP חולדה וחידודים המאפשרים למודל לשחזור להתרחבות עתידית.

שיטה של ​​מבודד<em&gt; Ex Vivo</em&gt; ריאות זלוף במודל עכברוש: ​​לקחים מפיתוח תכנית EVLP עכברוש

חקור אינטראקציות מארח-פתוגן בריאות בקר באמצעות ברונכוסקופיה מודרכת. הטכניקה כוללת הזרקה תוך-ברונכיאלית, שטיפה ברונכואלוולרית ודגימת רקמת ריאה לניטור התקדמות מחלה לאורך זמן.

ברונכוסקופיה מודרכת מבחינה ויזואלית, Intrabronchial הרכבת חיסון ו: ריאות שור במחקר ביו

גלה סרטונים נוספים