Combined DNA-RNA Fluorescent <em>In situ</em> Hybridization (FISH) to Study X Chromosome Inactivation in Differentiated Female Mouse Embryonic Stem Cells

Tahsin Stefan Barakat; Joost Gribnau

doi:10.3791/51628

DNA-RNA בשילוב פלורסנט באתרו הכלאה (דגים) לחקר איון כרומוזום X בתאי גזע הבדיל נקבה עכבר ...

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Combined DNA-RNA Fluorescent In situ Hybridization (FISH) to Study X Chromosome Inactivation in Differentiated Female Mouse Embryonic Stem Cells

DNA-RNA בשילוב פלורסנט באתרו הכלאה (דגים) לחקר איון כרומוזום X בתאי גזע הבדיל נקבה עכבר עוברי

Full Text

28,534 Views

15:54 min

June 14, 2014

DOI: 10.3791/51628-v

Tahsin Stefan Barakat¹, Joost Gribnau¹

¹Department of Reproduction and Development,Erasmus MC - University Medical Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ניאון הכלאה באתרו (FISH) מאפשר זיהוי של חומצות גרעין בסביבה הטבעית שלהם בתוך תאים. אנחנו כאן מתארים פרוטוקול לזיהוי המשולב, בו זמני של RNA ו-DNA בדרך של דגים, אשר יכול לשמש כדי לחקור איון כרומוזום X בתאי גזע עובריים בעכבר.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לחקור את השבתת כרומוזום X בתאי גזע עובריים של עכברים נקבות מובחנים באמצעות שילוב בו-זמנית של DNA ו-RNA פלואורסצנטי ב-C שתי הכלאות או דגי D-N-A-R-N-A. זה מושג על ידי גרימת התמיינות ראשונה בתאי גזע עובריים של עכברים. כמו בתהליך זה, המדמה התפתחות עוברית תקינה לאחר ההשתלה, מופעלת השבתה של כרומוזום X, וכתוצאה מכך שעתוק והצטברות משופרים של RNA ציסטה, המקודד את כרומוזום ה-X הלא פעיל העתידי.

השלב השני הוא לתקן את תאי הגזע העובריים הממוינים באמצעות פרלדהיד. לאחר מכן, הכינו את הבדיקות לזיהוי DNA מכרומוזום X ו-RNA ציסטה על ידי תיוג שברי DNA עם ביוטין או דיגו ג'נין. שימוש בתרגום ניק.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos