Name: במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 54 s
Description: למד שיטת הדמיה תלת-ממדית בזמן אמת של תאי גזע המטופויאטיים ואבותיהם במח העצם של עכברים. טכניקה זו משתמשת במיקרוסקופיית שני-פוטון וקונפוקלית לאיתור תאים ומעקב אחר תנועתם לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ההדמיה בוצעה על מיקרוסקופ confocal זקוף Leica SP5 ממוקם בתוך מתקן FILM של Imperial College בלונדון, המנוהל על ידי ד&quot;ר מרטין Spitaler. בעל הדגימה וכיסוי הראש נעשה בשיתוף פעולה עם המחלקה להנדסה הכימית של Imperial College בלונדון, עם עצות מסמואל ג&#39;ונס וד&quot;ר סיימון Schultz. ניקולה Ruivo, פרנסיסקו דיאז וצוות הלשכה המרכזית לסטטיסטיקה בImperial College סייעו לסיועם ועצות על גידול בעלי עכבר. מארק סקוט ממומן על ידי HFSP וקולנוע, Olufolake Akinduro ידי CRUK וכריסטינה Lo סלסו ידי CRUK, KKLF, BBSRC וHFSP.

<ol><li>Lo Celso, C., Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hematopoietic+Stem+Cell+Niche+at+a+Glance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The Hematopoietic Stem Cell Niche at a Glance.</a> J Cell Sci. 124 (Pt 21), 3529-3535 (2011).</li>
<li>Wang, L. D., Wagers, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+Niches+in+the+Origination+and+Differentiation+of+Hematopoietic+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Dynamic Niches in the Origination and Differentiation of Hematopoietic Stem Cells.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 12 (10), 643-655 (2011).</li>
<li>Schofield, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Relationship+Between+the+Spleen+Colony-forming+Cell+and+the+Hematopoietic+Stem+Cell%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cells%22%5BJournal%5D)">The Relationship Between the Spleen Colony-forming Cell and the Hematopoietic Stem Cell.</a> Blood Cells. (1-2), 7-25 (1978).</li>
<li>Bischoff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+Between+Satellite+Cells+and+Skeletal+Muscle+Fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Interaction Between Satellite Cells and Skeletal Muscle Fibers.</a> Development. 109 (4), 943-952 (1990).</li>
<li>Cotsarelis, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-retaining+Cells+Reside+in+the+Bulge+Area+of+Pilosebaceous+Unit%3A+Implications+for+Follicular+Stem+Cells%2C+Hair+Cycle%2C+and+Skin+Carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Label-retaining Cells Reside in the Bulge Area of Pilosebaceous Unit: Implications for Follicular Stem Cells, Hair Cycle, and Skin Carcinogenesis.</a> Cell. 61 (7), 1329-1337 (1990).</li>
<li>Doetsch, F., Caillé, I., Lim, D. A., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subventricular+Zone+Astrocytes+are+Neural+Stem+Cells+in+the+Adult+Mammalian+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Subventricular Zone Astrocytes are Neural Stem Cells in the Adult Mammalian Brain.</a> Cell. 97 (6), 703-716 (1999).</li>
<li>Palmer, A. E., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Calcium+Signalling+Using+Genetically+Targetable+Fluorescent+Indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Measuring Calcium Signalling Using Genetically Targetable Fluorescent Indicators.</a> Nature Protocols. 1 (3), 1057-1065 (2006).</li>
<li>Lewandowski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Cellular+Imaging+Pinpoints+the+Role+of+Reactive+Oxygen+Species+in+the+Early+Steps+of+Adult+Hematopoietic+Reconstitution%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">In vivo Cellular Imaging Pinpoints the Role of Reactive Oxygen Species in the Early Steps of Adult Hematopoietic Reconstitution.</a> Blood. 115 (3), 443-452 (2010).</li>
<li>Sipkins, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Imaging+of+Specialized+Bone+Marrow+Endothelial+Microdomains+for+Tumour+Engraftment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vivo Imaging of Specialized Bone Marrow Endothelial Microdomains for Tumour Engraftment.</a> Nature. 435 (7044), 969-973 (2005).</li>
<li>Lo Celso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+Tracking+of+Individual+Haematopoietic+Stem%2FProgenitor+Cells+in+their+Niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal Tracking of Individual Haematopoietic Stem/Progenitor Cells in their Niche.</a> Nature. 457 (7225), 92-96 (2009).</li>
<li>Xie, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Functional+Haematopoietic+Stem+Cell+Niche+Using+Real-time+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Detection of Functional Haematopoietic Stem Cell Niche Using Real-time Imaging.</a> Nature. 457 (7225), 97-101 (2009).</li>
<li>Köhler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+Cellular+Dynamics+and+Endosteal+Location+of+Aged+Early+Hematopoietic+Progenitor+Cells+Revealed+by+Time-lapse+Intravital+Imaging+in+Long+Bones%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Altered Cellular Dynamics and Endosteal Location of Aged Early Hematopoietic Progenitor Cells Revealed by Time-lapse Intravital Imaging in Long Bones.</a> Blood. 114 (2), 290-298 (2009).</li>
<li>Schultz, S. R., Kitamura, K., Post-Uiterweer, A., Krupic, J., Häusser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+Pattern+Coding+of+Sensory+Information+by+Climbing+Fibre-evoked+Calcium+Signals+in+Networks+of+Neighboring+Cerebellar+Purkinje+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Spatial Pattern Coding of Sensory Information by Climbing Fibre-evoked Calcium Signals in Networks of Neighboring Cerebellar Purkinje Cells.</a> J Neuroscience. 29 (25), 8005-8015 (2009).</li>
<li>Lo Celso, C., Lin, C. P., Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Imaging+of+Transplanted+Hematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cells+in+Mouse+Calvarium+Bone+Marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vivo Imaging of Transplanted Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Mouse Calvarium Bone Marrow.</a> Nat Protoc. 6 (1), 1-14 (2011).</li>
<li>Lo Celso, C., Scadden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Transplantation+of+Hematopoietic+Stem+Cells+%28HSCs%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs).</a> Journal of Visualized Experiments. (2), e157(2007).</li>
<li>Progatzky, F., Dallman, M. J., Lo Celso,, C, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+Seeing+to+Believing%3A+Labelling+Strategies+for+in+vivo+Cell-tracking+Experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Interface+Focus%22%5BJournal%5D)">From Seeing to Believing: Labelling Strategies for in vivo Cell-tracking Experiments.</a> Interface Focus. 3 (3), 20130001(2013).</li>
<li>Ellis, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Relationship+Between+Bone%2C+Hemopoietic+Stem+Cells+and+Vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The Relationship Between Bone, Hemopoietic Stem Cells and Vasculature.</a> Blood. 118 (6), 1516-1524 (2011).</li>
<li>Nombela-Arrieta, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Imaging+of+Haematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cell+Localization+and+Hypoxic+Status+in+the+Bone+Marrow+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantitative Imaging of Haematopoietic Stem and Progenitor Cell Localization and Hypoxic Status in the Bone Marrow Microenvironment.</a> Nature Cell Biology. 15, 533-543 (2013).</li>
</ol>

אין מה לחשוף.

מה שהושג? הפרוטוקול עושה שימוש בהדמיה רב ממדית זמן לשגות כדי לפקח על ההגירה של FACS המטוהרים, vivo לשעבר HSPCs שכותרתו, הושתל במח עצם calvarial עכבר. זיהוי של תאים מושתלים יחידים הושג ואלה היו במעקב לאורך תקופות ממושכות של זמן (שעות) ברמת דיוק גבוהה. חפצי תנועה מושרה נשימה כבר ממוזערים ותאים כבר reimaged שוב ושוב על פני זמן ממושך, כמובן. מה הם כיוונים עתידיים? פיתוח של הטכניקה יכול להתקדם לעבר ניסויי התאוששות כדי לאפשר הדמיה בימים מרובים, במהלך שבוע או יותר ושימוש בהרדמת גז כגון isoflurane לקצר ולפשט את תהליך ההתאוששות לעכבר (הערה: ניסויי התאוששות דורשים אך ורק תנאים סטריליים ניתוח וניהול של משככי כאבים מתאימים). Development של צבע צבעים גדולים יותר של צבעי in vivo, כמו גם תיוג גנטי יעיל של תאי hematopoietic גם יקל על ניסויים רב תיוג, מספק תובנה רבה יותר על תאי תאי אינטראקציות בתוך מח העצם ומאפשר לניסויים מורכבים יותר בעתיד. בנוסף, תיוג בו זמנית של מבני מח עצם מרובים ורכיבי סטרומה יספק תמונה של האירועים המתרחשים בנישות HSPC מלאה יותר. יציבות תמונה של הזמן לשגות סרטים יכולה להיות שיפור preacquisition ידי ייצוב מיקרוסקופ נוסף, כמו גם צמצום הדרגתיים בטמפרטורה במדגם וpostacquisition על ידי שימוש באלגוריתמי רישום תמונה. מגבלות: הטכניקה המתוארת מציגה כמה מגבלות. הישרדות של עכברים לאחר מתן הרדמה בזריקות היא בלתי צפויה והיא קלה מאוד לסיבוכים ניסיון תלוי בתגובת אדם להרדמה. בדרך כלל, זמן רב יותר פגישת הדמיה, קשה יותר הוא לעכבר כדי להתאושש מהרדמה ולכן חשוב לתכנן בקפידה אם העכבר הוא להיות התאושש, באופן אידיאלי הגבלת משך הזמן של הדמיה הזמן לשגות. השימוש בהרדמה בזריקות מגבילה את הזמן בכל פגישת הדמיה יכולה להימשך. למרות זאת, ניתן להאריך את ההרדמה על ידי readministering מינון קטן יותר של חומר הרדמה, שקשה לבצע את זה בצורה מדויקת ומינון יתר העכבר הוא אחד הגורמים השכיחים ביותר לסיום המוקדם של ההדמיה in vivo. ההרדמה גז היא פחות רעילה ומאפשרת לפגישת הדמיה ראשונית ארוך יותר, אולם התאוששות מהירה של העכבר לאחר&gt; 2 שעות ממשל של isoflurane ארוך הוא מוצלח רק לעתים נדירות. מגבלה נוספת של הטכניקה היא ברזולוציה המוגבלת של התמונות שניתן להשיג במהלך הדמיה הזמן לשגות ריבוי נקודות, כתוצאה מהצורך לרכוש תמונות במהירות. זה, בשילוב עם סחף או שדה מוקדי קופץ (דיסקussed לעיל), יכול לעשות מעקב של תאים קשים. השוואה עם שיטות חלופיות: HSPCs בדרך כלל מסומנים עם צבע lipophilic עשה, אבל צבעי דיר וDiI חלופות שווי ערך וניתן להשתמש בם כל עוד מספיק בהירים צבעי תא אחרים, כפי שנסקר ב[ 16]. למרות תיוג vivo לשעבר של תאים עם עשה הוכח שלא משפיע על התפקוד לטווח הארוך של HSCs, יש לו את המגבלה שעשתה (או כל צבע כימי אחר) בדילול מלא על חלוקת תא. מאז HSCs להתרבות בימים הראשונים שלאחר השתלה, יחס האות לרעש לתאים אלה במהירות מתדרדרת. תיוג אנדוגני של תאים באמצעות מניפולציה וביטוי של חלבוני ניאון גנטיים הוא שיטה חלופית בת קיימא, כל עוד חלבוני הניאון באים לידי ביטוי ברמות גבוהות מספיק כדי ליצור אות לזיהוי דרך עצם הגולגולת. ישנם מספר של techn החלופיiques זמין לביצוע הדמיה של HSPCs בתוך חלל מח עצם, כל אחד עם מגבלות יתרונות שלהם ו. החדרה של מכשירי הדמיה מבוססת סיבים אופטיים אפשרה להדמיה של הכינון מחדש של מח עצם בעצמות [8] ארוכות, תוך ההדמיה confocal לאחר חשיפה כירורגית של עצם השוק והדילול של אמייל עצם עם מקדחה כירורגית [12] פיק תמונות מפורטות של HSPCs המתגורר ב אזורי פריפריה של עצמות ארוכות. שיטות אלה עם זאת הן הרבה יותר חודרניים מזו שתוארה כאן ולכן אינו מאפשרת לחזור על פגישות הדמיה מתמקדות באותו האזור במח עצם באותו העכבר. יתר על כן, זה אפשרי, כי טכניקות אלה עשויות להשפיע על התאים שנצפו ניתנה תגובה בלתי נמנעת לפגיעה נרחבת ברקמה הסובבת. HSPCs כבר צילם לתקופות קצרות של זמן באמצעות coverslips ממוקם מעל, עצמות ירך נכרת שבורות [11], אולם ההשפעה של הכנה קשה זו של הרקמה על HSPCs אינה קליאהr והטכניקה היה בשימוש באופן ייחודי כדי להשיג תצפיות נקודת זמן אחת. עצמות קבועים כבר מחולק למקטעים סדרתי, מוכתמת, והתמונות שהתקבלו שחזרו למודל 3D, מתן פתרון 3D מצוין, במיוחד כאשר יציקות כלי דם נמצאות בשימוש [17], ולאחרונה סריקת הלייזר Cytometry (LaSC) נעשה שימוש כדי להשיג כמותיים צעדים על HSPCs באתר, מודגש על ידי immunostaining [18] אך אינם מסוגלים לספק כל מידע זמני על התנהגות התאים. הטכניקות מתוארות בטכניקה חדשה זו מספקות שילוב של רזולוציה טובה ב3D, דגימה זמנית מספיק לניטור תאי 4D והם יחסית לא פולשנית, ולכן מציעים גישה אידיאלית להשגת ניטור ארוך טווח של HSPCs אינטראקציה עם מח העצם microenvironment.

למרות נישות של תאי גזע שהוכרו במשך עשרות שנות 3 וגם מאופיינות ברקמות רבות כגון הנורה חוש הריח, סיבי שריר, בליטת זקיק שיער או אזור subventricular CNS 4-7, יחסי הגומלין בין תאי גזע hematopoietic (HSCs) וmicroenvironment מח עצם ( BM) עדיין לא נחקר מספיק בשל הקושי של ישירות התבוננות תאים בודדים דרך העצם, כמו גם את הטבע מאוד נוזל של הרקמה עצמה. הוכח, באמצעות מספר המחקרים התפקודיים המבוסס על ablating או overexpressing גנים מסוימים באו HSCs או תאי סטרומה של microenvironment עצמו, שרשת סבוכה סוגי תאים שונים ואותות רגולציה של אחראית להסדרת האיזון העדין בין quiescence , התפשטות, התרחבות והתמיינות של HSCs 1-2. Crosstalk בין HSCs והנישות שלהם ניתן להבין לעומק רק באמצעות תצפית ישירה. זה ACHתודה ievable לפיתוח פרוטוקולי הדמיה מתקדמות, המשלבת את הטכנולוגיה זמינה לא רק במונחים של מיקרוסקופיה, אלא גם של פתרונות בעל דגימה ושל תוכנת רכישה. הדמיה חיה רזולוציה תא בודדת של תאים מושתלים hematopoietic גזע ואב (HSPCs) בתא BM של עצמות calvaria העכבר הראתה כי HSPCs engrafting למקם בקרבתו של כלי SDF-1 וVCAM-1-חיוביים 8-9 ושתאים לא בוגרים יותר נמצאים בתוך 15 - 20 מיקרון מתאי osteoblastic GFP החיובי (קו Col2.3-GFP מהונדס עכבר, שבו יזם 1α קולגן מוגבל תא העצם מניע ביטוי של GFP) ואילו הצאצאים שלהם הם יותר דיסטלי 10. תצפיות דומות התקבלו מעצמות ירך גזורים ושבורות 11 ומעצמות tibeal דלילים 12. הדמיה של מח עצם calvarial נשארת הגישה פולשנית לפחות כדי להשיג הדמיה ישירה של HSPCs בתוך הmicroenvironment ילידי Eir. עם כל הדמיה דוגמא חיה יש צורך מהותי כדי לשמור על המדגם בשקט ככל האפשר, כדי למנוע כל חפצים מיותרים בשל תנועת מדגם. נשימה גורמת לתנודות מטוטלת של ראש העכבר, אשר צריכה להימנע כאשר ההדמיה מח עצם calvarial. מחזיקי stereotactic קונבנציונליים, משמשים למשל להדמיה מוחית ואלקטרופיזיולוגיה, אינם מתאימים להדמית calvarium כי הם חוסמים את העצמות הקדמיות. החל מ בעל עכבר להשתמש כדי למזער את המצוקה במהלך בדיקות הדמיה ואלקטרופיזיולוגיה חיות 13, בעל 2 רכיב פותח, עם חתיכה קטנה קבועה לראש של העכבר כדי ליצור חלון הדמיה מחובר לזרוע גדולה יותר להבטיח אחיזה יציבה עם צלחת בסיס כבדה המבטיחה בחוזקה לבמת מיקרוסקופ. אבטחת החתיכה לגולגולת של עכבר הראש מאפשרת נשימה חופשית ועדיין לשתק את הראש במקום וכראוי ביטול מ &#39;ovements עקב נשימה. מנגנון &quot;נעילה ומפתח&quot; המקשר את ראש החלקים לגוף המחזיק מאפשר הגודל של החלון כדי למזער כמו גם דיוק מוגבר של מיצוב, ולכן לפשט את הניתוח, ואת ההתאמה של צלחת הבסיס לבמה מאפשר יישור מדויק על המיקרוסקופ. כדי לפקח באופן מדויק תאי ניעתי, פרוטוקול הזמן לשגות ריבוי נקודות נועד לאפשר מעקב של תאים לאורך זמן עם 5 דקות במרווחים בין נקודות זמן. HSCs כאן, עשה שכותרתו הזריק לעכברי כתב osteoblasitc col2.3GFP 10,14 וצלם כ 20 שעה מאוחר יותר. בעל העכבר שתוכנן והגדרות ההדמיה הנדרש לביצוע הדמיה הזמן לשגות מהירה ריבוי נקודות של אותם האזורים על פני תקופה של שעות מרובות מתוארות בפירוט.

<table><tbody><tr><td>קטמין (נרקטן 100 מ"ג/מ"ל)</td><td>וטוקינול</td><td>407575 0107 C</td><td>ניתן להשתמש בחומרי הרדמה אחרים במקום זה.</td></tr><tr><td>מדטומידין (דומיטור 1 מ"ג/מ"ל)</td><td>אלנקו</td><td>134800-2</td><td>ניתן להשתמש במשככי כאבים אחרים במקום זה.</td></tr><tr><td>פתרון תיוג תאי DiD תוסס</td><td>רוש מוצרים בע"מ</td><td>V22887</td><td>צבעים אחרים זמינים וניתן להשתמש בהם במידת הצורך.</td></tr><tr><td>משחה אופטלמית Lacrilube</td><td>Allergan</td><td>n/a</td><td>זמין במרשם על ידי הווטרינר המקומי</td></tr><tr><td>Kemdent "Diamond Carve" זכוכית ionomer cement</td><td>Associated Dental Products Ltd. via Kemdent</td><td>SUN527</td><td>אנו משתמשים בגוון A3, אך ניתן להשתמש בכל גוון של מלט.</td></tr><tr><td></td><td>מזרקי אינסולין מקבילים</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td></td><td>מרובים PBS</td><td></td></tr> Terumo Medical Corporation SS10M3109 1 מ"ל, 31 גרם <tr><td>מרסן עכבר</td><td>מכשיר הרווארד 340031</td><td></td><td>סוג חרוט (קטן)</td></tr> <tr><td>מלקחיים ומספריים אוטוקלאב</td><td>Agar Scientific</td><td>AGT577 AGT5034</td><td>מספריים איריס - 90 מ"מ; פינצטה של Dumont HP (קצה 0.06 מ"מ)</td></tr><tr><td>בוחש סירה ומלט במשקל</td><td>VWR</td><td>611-1996/231-0370</td><td>5 מ"ל סירת שקילה (שחור)/ מדכא לשון עץ</td></tr><tr><td>Leica SP5 מיקרוסקופ קונפוקלי זקוף עם במה ממונעת ולייזר דו-פוטוני</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>התקשרו להצעת מחיר</td></tr><tr><td>עדשה אובייקטיבית לטבילה במים 25x (NA = 0.95)</td><td>Leica Microsystems</td><td>11506323</td><td>עדשת</td></tr> <tr><td>HCX IRAPO Lמחזיק עכבר מעוצב בהתאמה אישית</td><td>סדנת הנדסה של אימפריאל קולג'</td><td>ראה איור 1 לפרטים</td>כרית חימום עם בדיקת מדחום רקטלי מכשור BASi FHC-40902 / FHC-40908 / FHC-4090502 מחצלת חום / תיבת בקרה / בדיקת מדחום <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

במעקב 4 ממדי vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

באמצעות איזון עדין בין קפאון ושגשוג, התחדשות עצמית וייצור של צאצאי הבדיל, תאי גזע hematopoietic (HSCs) לשמור על מחזור של כל שושלות תאי דם הבוגרים. התיאום של האותות המורכבים המובילים לגורל HSC ספציפי נשען על האינטראקציה בין HSCs וmicroenvironment המורכב מח עצם, שעדיין הוא הבין היטב [1-2]. אנו מתארים כיצד על ידי שילוב של בעל דגימה חדש שפותח עבור מיצוב בעלי חיים יציב עם confocal רב שלבים ושני פוטונים בטכניקות ההדמיה vivo, ניתן להשיג ערימות ברזולוציה גבוהה 3D המכילות HSPCs ונישות המקיפות ולפקח עליהם לאורך זמן באמצעות הדמיה הזמן לשגות ריבוי נקודות. הדמיה בחדות גבוהה מאפשרת לתאי איתור vivo לשעבר שכותרת hematopoietic גזע ואב (HSPCs) המתגוררים בתוך מח העצם. יתר על כן, הדמיה 3D הזמן לשגות ריבוי נקודות, obtained עם הגדרות רכישה מהירות יותר, מספק מידע מדויק על תנועת HSPC והאינטראקציות ההדדיות בין HSPCs ותאי סטרומה. מעקב של HSPCs ביחס לתאי osteoblastic GFP החיובי מוצג כיישום למופת של שיטה זו. טכניקה זו יכולה להיות מנוצלת כדי לעקוב אחר כל תא hematopoietic או סטרומה שכותרתו כראוי של עניין בתוך חלל מוח עצם calvarium העכבר.

המנהג עשה, בעל עכבר דיוק גבוה כוללים חלון הדמיה calvarium מאפשר הדמיה ממושכת של HSPCs FACS המטוהר, שכותרתו הזריק לעכברים קטלני המוקרנים נמען (איור 1 א). בדרך כלל, לאחר ההזרקה של בין 15-20,000 תאים שכותרתו, 8 עד 15 תאים הם בדרך כלל מוכרים בתחום ההדמיה מח עצם של גולגולת היום הבא. כאן הוא הראה כיצד לרכוש ערימות 3D רזולוציה תא בודדות של HSPC המכיל אזורי מח עצם של כ 90 - 120 עובי מיקרומטר, (איור 1), ואחריו זמן לשגות סרטי 4D של HSPCs זוהה (איור 1 ג וסרט). תוצאות שאינן אופטימליות מתקבלות אם מלט השיניים אינו ערוך בצורה אופטימלית, למשל המים יכולים לדלוף מאזורים אטומים שאינם, ועל אף שניתן עקף מהחלק העליון של בעלה, כל תקופת הזמן שבה העדשה לא טבלה לתוך מים מוביל לf השחורה<html> Rames. להיסחף קצת בתמונות הוא בלתי נמנע בשל התפשטות תרמית של החומרים של בעל העכבר, אולם ניתן מודגש על ידי הידבקות בטון הכי מוצלחת, שהובילו לניתוק הדרגתי של העכבר, ועל ידי הפרעות של ההדמיה להגדיר, שמוביל לקפיצות פתאומיות של המוקד במהלך הדמיה הזמן לשגות. הסחף במהלך הדמיה הזמן לשגות ריבוי נקודות יכול להיגרם גם על ידי אי דיוקים בתנועות השלב שבו בוחנים מחדש את העמדות צילמו בעבר. חפצי דריפט וגמגום בזמן לשגות סרטים ניתן לתקן על ידי שימוש באלגוריתמי רישום תמונה. שולחן עירור 1 והגדרות פליטה. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td style="width:204px;"> צבע ערוץ </td><td style="width:213px;"> עירור </td><td style="width:208px;"> פליטה </td></tr><tr><td style="width:204px;"> GFP </td>13px; &quot;&gt; 488 ננומטר </td><td style="width:208px;"> 500-530 ננומטר </td></tr><tr><td style="width:204px;"> Autofluorescence </td><td style="width:213px;"> 543 ננומטר </td><td style="width:208px;"> 560-610 ננומטר </td></tr><tr><td style="width:204px;"> עשיתי </td><td style="width:213px;"> 633 ננומטר </td><td style="width:208px;"> 640-700 ננומטר </td></tr><tr><td style="width:204px;"> SHG </td><td style="width:213px;"> 840 ננומטר (MP) </td><td style="width:208px;"> 400-450 ננומטר </td></tr></tbody></table><img alt="איור 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51683/51683fig1highres.jpg" width="600" /> איור 1 בהדמית 4D vivo של HSPCs בcalvarium עכבר. תאי דוגמאות לתוצאות שהתקבלו (ב &#39;) פרוסות 2D מערימת 3D (עומק כולל הוא 114 מיקרומטר), המכילה אות מעצם קולגן (לבן), עשה שכותרתו (אדומה) - מתאר () של הניסוי (C B).. , Cel autofluorescentls (צהוב) ותאי osteoblastic (ירוק). ברים סולם: 100 מיקרומטר פרוסות (C) 2D מסרט 4D הזמן לשגות מראה HSC (אדום) עשה שכותרתו הנודד בקרבת תאי osteoblastic (ירוק).. הקו המקווקו מדגיש את התזוזה של התא. ברים סולם: 50 מיקרומטר (B) ו100 מיקרומטר (C). הערה:. הסרט המתקבל מרכישת הזמן לשגות ב( C) מוצג במאמר וידאו <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51683/51683fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

הטבע של האינטראקציות בין תאי גזע hematopoietic ואב (HSPCs) ונישות מח עצם הוא הבין היטב. שינויי חומרה מותאם אישית ופרוטוקול רכישה רב שלבים לאפשר את השימוש בשני הפוטונים ומיקרוסקופיה confocal לתמונת vivo לשעבר HSPCs שכותרתו התביית בתוך אזורי מוח עצם, אינטראקציות מעקב ותנועה.

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להשיג סדרות תמונות תלת-ממדיות (3D stacks) ברזולוציה גבוהה המכילות תאי גזע ופרוגניטורים המטופואטיים, ולנטר אותם לאורך זמן באמצעות דימוי רב-נקודתי בשיטת time lapse. דבר זה מושג תחילה על ידי סימון תאי הגזע והפרוגניטורים ההמטופואטיים, או HSCs, באמצעות צבע ליפופילי. לאחר מכן, ה-HSCs מוזרקים לעכבר מקבל.העכבר מוכן למיקרוסקופיה באמצעות אביזר ראש מותאם אישית ומחזיק דגימה למיקום יציב של החיה. לאחר מכן, מתקבלים סדרות תמונות (stacks) ברזולוציה גבוהה של נישות של תאי גזע ופרוגניטורים המטופויטיים, ומבוצע דימוי Time-lapse של מספר מיקומי מח עצם המכילים HS PCs; לבסוף, נעשה שימוש במיקרוסקופיה קונפוקלית ודו-פוטונית intravital כדי להראות את המיקום והתנועה של HSCs במרחב מח העצם. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון אימונופלואורסצנציה של חתכי מח עצם, הוא היכולת ללכוד מידע בקנה מידה ארבע-ממדי: שלושה ממדים בתוספת זמן.להשלכות של טכניקה זו השפעה על טיפול במחלות המטולוגיות, כיוון שהיא מסייעת להבין לאן עלינו לכוון תאי גזע המטופואטיים בתוך מחולל הדם כדי להבטיח את תפקודם התקין. הרעיון לשיטה זו עלה תחילה כאשר הבנו עד כמה קריטי זה שנוכל לעקוב אחר HS PC's לאורך זמן. שיטה זו עוזרת לנו לענות על שאלות בתחום הנישה של תאי הגזע, כאשר אנו מעוניינים לדעת היכן שוכנים תאי הגזע וכיצד הם מתנהגים לאורך זמן.כדי להתחיל, יש לאסוף את התאי הגזע והתאים הפרוגניטורים ההמטופויטיים כפי שהודגם על ידי מעבדה זו בסרטון geo קודם וכפי שצוין בפרוטוקול הכתוב. לאחר מכן, יש להוסיף את הצבע הליפופילי DID לתגלי התאים בריכוז סופי של 5 µM. יש לערבב את התגלי ב-Vortex באופן מיידי כדי להבטיח שהצבע לא ישקע מהתמיסה ובכך ייכשל בסימון התאים.דגרו את התאים למשך 10 דקות ב-37 °C כדי לשטוף אותם. בצעו סבב צנטריפוגה ראשון ב-500 ×g למשך חמש דקות ורוקנו את הנוזל. לאחר מכן, השביו את התאים ב-200 µL של PBS ואספו אותם למזרק אינסולין.מומלץ להשתמש במזרק אינסולין על פני מזרק רגיל מכיוון שאין לו נפח מת בסיכה. הדבר מאפשר להחדיר את כל תרחיף התאים לעכבר לצורך הזרקת תאים לעכבר שהקרינו במינון קטלני באמצעות הזרקה לווריד הזנב. ראשית, הנח את העכבר בתא חימום.ברגע שוריד הזנב נראה ומורחב (vasodilated), העבירו את העכבר למכשיר הריסון. החליקו בזהירות את המחט לתוך וריד הזנב. מזריקו את התאים לתוך הווריד.אין להיתקל בהתנגדות בעת ההזרקה. השאיר את העכבר למשך לילה. כדי לאפשר לתאים לנדוד למרווחי מחולל העצם, הרדם את העכבר ועקב אחר תחילתה של הרדמה עמוקה באמצעות רפלקס הכף (petal reflex).נגב את חלקו העליון של הקרקפת בעזרת 70% ethanol על טישיו. יש להיזהר שלא להחדיר ethanol לעיני העכבר. כדי לחשוף את אזור הגולגולת (calvarium) המיועד לדימות, בצע חתך קטן בחלק האחורי של הראש בין האוזניים על ידי הרמת העור בעזרת הפינצטה תוך כדי החזקת העור למעלה.החליקו את המספריים תחת העור וגזרו בעדינות לאורך החלק החיצוני של אזור הדימוי הרצוי. נגבו את העצם החשופה באמצעות מקל צמר גפן סטרילי שהורטב ב-PBS סטרילי כדי לשמור על העצם לחה. פעולה זו מונעת ייבוש יתר והצטלקות, העלולים להשפיע על איכות הדימוי.בשלב הבא, ערבבו כמות מספקת של צמנט דנטלי בתוך סירה (whey boat) עד לקבלת מרקם של משחה. מרחו אותו במהירות על פני השטח התחתונים של ראש האוטוקלאב שיוצמד לגולגולת. לפני שהצמנט מתקשה, הניחו את ראש האוטוקלאב על גולגולת העכבר, תוך הקפדה שלא להגיע עם הצמנט הדנטלי לאזור ההדמיה, והמתינו להתקשחותו.מרחו כמות קטנה של hydrogel פנימי, השומר על לחות הגולגולת, תוך הקפדה לא להפריע למלט בזמן התייבסותו. לאחר מכן, חברו את ראש המכשיר למחזיק ואבטחו אותו במקומו. השתמשו בבורג כדי להבטיח שהחריצים מתאימים למגרעות של המחזיק.הסר את ההידרוג'ל באמצעות מקלוני צמר גפן סטריליים לפני ההעברה למיקרוסקופ. לאחר מכן, הכנס את המחזיק לבמה של המיקרוסקופ ומקם את פלטת החימום מתחת לעכבר. הכנס את חיישן מדחום הרקטום ואבטח את כל הרכיבים על הבמה באמצעות סרט דבק.יש להניח טיפה קטנה של פומדה עינית על עיני העכבר כדי להבטיח שהן לא יתייבשו בזמן השפעת ההרדמה. אין להשאיר את העכבר ללא השגחה בשום שלב במהלך תהליך הדימוי בעודו תחת הרדמה. יש לבצע פוקוס על הגולגולת באמצעות העיניות.ראשית, מלאו את חלון הדימוג של כיפת הגולגולת במים סטריליים מזוקקים באמצעות עדשת טבילה במים. הורידו אותה כך שתיגע בטיפת המים. התמקדו בחלק העליון של הגולגולת באמצעות העיניות של המיקרוסקופ.מקם את אזור הדימוי על התפר המרכזי והזז אותו לכיוון החלק האחורי של הראש כדי למצוא את התפר העלילי (coronal suture). כנקודת התחלה, הגדר את התוכנה למצב של לכידת תמונות XY וכן מחסנית (stack) של שלושה DZ. הגדר את מהירות הדימוי ל-400 hertz ואת הרזולוציה ל-512 על 512 pixels.הגדירו את התוכנה כך שיתבצעו לכידות של מספר ערוצים, והגדירו את שיטת האיסוף כך שתשנה הגדרות בין ערימות (stacks) או בין פריימים. הגדירו שלוש הגדרות לכידה עצמאיות. כבו את הארת הלייזר בסיום הלכידה של כל ערימה.לאחר מכן, הגדירו את הסריקה הרצפית הראשונה עבור אות עצם של יצירת הרמוניה שנייה בדו-פוטונים. פתחו את התריס של הלייזר הרב-פוטוני וודאו שההגבר (gain) וההיסט (offset) של הלייזר הרב-פוטוני מוגדרים כראוי. כמו כן, וודאו שההספק של הלייזר הוא 12.5 עד 25% ושהלייזר מופעל.בחר PMT מתאים כגלאי יחיד ושנה את הצבע ללבן. חזור על הליך הגדרת הערוץ עבור אוטופלואורסצנציה משולבת ו-DID תחת ההגדרה השנייה. בצע סריקה באמצעות שני p mts מתאימים.שנו את צבע הערוץ לירוק עבור האוטופלואורסצנציה ואדום עבור ה-DID. לבסוף, הגדירו את הסריקה השלישית והאחרונה לגילוי GFP. הגדירו את הספק של קו הלייזר של 488 nanometer לסביב 15%. בחרו שפופרת מכפיל פוטונים מתאימה, או PMT, כגלאי הפעיל היחיד ושנו את הפסאודו-צבע שלה לירוק.הפעלו מצב דימות חי כדי להתחיל סריקת תצוגה מקדימה של הערוץ הנבחר, וכוונו את הגבייה (gain) וההיסט (offset) של הגלאי לחשיפה אופטימלית. חזרו על פעולה זו עבור כל סריקה בחלון הרצפי ושמרו את ההגדרות של סריקות רב-הערוציות הללו לשימוש חוזר ונוח. לאחר מכן, הפעילו לכידה רב-מיקומיות, המכונה בתוכנה זו mark and find, ואפסו את נקודות הקואורדינטות.בשלב הבא, סרקו את אזור דימות העצם החל מההצטלבות שבין התפר המרכזי לתפר העלילי. סרקו את עומק אזור מחית העצם באמצעות אוטופלואורסצנציה ו-DID בתצוגה משולבת. כאשר מזוהה תא, סמנו זאת כמיקום קואורדינטות חדש על ידי לחיצה על סמל הוספת מיקום חדש בצד שמאל של חלון הסימון.לאחר שבחנת את שדה הראייה הנוכחי, הזז את הבמה במרחק של שדה ראייה אחד. חזור על תהליך זה עבור כל שדה ראייה. התקדם בהדרגה סביב כל חלון הדימוג משמאל לתפר המרכזי, תוך תנועה לכיוון אפו של העכבר.ברגע שפיצול התפר המרכזי נראה לעין, עברו לצדו הימני של התפר וחזרו על הפרוצדורה. סרקו את הצד השמאלי בכיוון ההפוך. סמנו את הקואורדינטות של תאים חדשים שמעניינים אתכם באמצעות כלי הסימון והחיפוש (mark and find tool).כדי לסקור את הנקודות, הגדירו את הגבול העליון והתחתון של ערימת Zs סביב כל תא בכל מיקום. עבור כל נקודה, בצעו פוקוס למעלה ולמטה והגדירו את מיקומי ה-Z העליונים והתחתונים עבור לכידת ערימת DZ משולשת. עדכנו את הנקודה הבודדת ב-"mark and find", הגדירו את מרווח ה-Zack ל-5 µm ואת הממוצע עבור כל ערוץ סריקה רציף לרמה איכותית מתאימה.השיגו ערימת ייחוס באיכות גבוהה עבור כל נקודת עניין על ידי הפעלת הליך הסריקה המלא. עם סיום הסריקה באיכות גבוהה, הפעילו הגדרת time-lapse לצילום ואת הגדרות ה-time-lapse. הגדירו את מרווח הזמן לחמש דקות ואת זמן ההרצה הכולל לאורך הרצוי.החיל את ההגדרות הללו על הסריקה הכוללת. דוגמה זו מראה כיצד ניתן לבצע רכישה של יותר משלוש נקודות. על ידי שינוי הגדרות אלו, ניתן לקצר את זמן הסריקה כדי לאפשר מרווח של חמש דקות בצילום השהיה (time-lapse), וזאת על ידי הפחתת מספר הסריקות המשמשות לממוצע והגבלת הרזולוציה ל-512 על 512 פיקסלים. ניתן להפוך את הסריקה לדו-כיוונית ו/או להעלות את מהירות הסריקה ל-600 hertz ומעלה. התחל בדימות כפי שבוצע קודם לכן על ידי לחיצה על כפתור ההפעלה בתוכנה המוצגת.עם השלמת הדימות, בצע הריגה של העכבר כפי שפורט בפרוטוקול הכתוב. מחזיק העכברים בעל הדיוק הגבוה שהוכן בהתאמה אישית, הכולל חלון דימות של כיפת הגולגולת, מאפשר דימות ממושך של HS PCs מסומנים שהוזרקו לעכברים מקבלים שהקרנו באופן קטלני; מוצגים כאן פרוסות דו-ממדיות של מחסניות תלת-ממדיות ברזולוציית תא בודד של אזורי מח עצם המכילים HSPC בעובי של כ-90 עד 120 micrometer, עם אות מקולגן. העצם מוצגת בלבן ותאים המסומנים ב-DID מוצגים באדום.תאים עם פלואורסצנציה עצמית מוצגים בצהוב ותאי אוסטאובלסטים מוצגים בירוק. מוצג כאן סרטון time-lapse של 40 פריימים של ה-HS PCs שזוהו, המראה HSC המסומן ב-DID באדום, הנודד בקרבת תאי אוסטאובלסטים בירוק. לאחר רכישת המיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בתוך כשעה עבור הניתוח והדימוי הראשוני, ולאחר מכן במשך הזמן הדרוש לדימוי ה-time-lapse.לאחר צפייה בסרטון זה, אתם אמורים להרגיש בטוחים ביכולתכם להקים מערך דימוי של תאי קאלבר (calver) של עכבר ולבחון מספר HS PCs לאורך זמן.

in-vivo-4-dimensional-tracking-hematopoietic-stem-progenitor-cells

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

שיטה לנתח את התפלגות אבות היווצרות הדם במח העצם ב cytometry זרימה, כמו גם ביעילות לבודד מטוהרים מאוד בתאי גזע hematopoietic (HSCs) מתואר. הליך הבידוד מבוסס בעיקרו על העשרת המגנטי של כ-Kit תאים + תא מיון לטהר HSCs ללימודי תאית ומולקולרית.

ניתוח בידוד פנוטיפי של Murine בתאי גזע hematopoietic ו-Lineage מחויבים אבות

5 חלבוני ניאון קומבינטורית סימון של תאי גזע ואבות היווצרות הדם מאפשר במעקב משובט vivo באמצעות confocal ושני פוטונים במיקרוסקופ, מתן תובנות ארכיטקטורת hematopoietic מח העצם במהלך רגנרציה. שיטה זו מאפשרת מיפוי גורל לא פולשנית של תאים נגזרים HSPCs ספקטרלי מקודדים ברקמות שלמות לתקופות נרחבות של זמן לאחר השתלה.

במשובט מעקב vivo של גזע hematopoietic ובתאים המסומנים על ידי חמישה חלבונים ניאון באמצעות Confocal וmultiphoton מיקרוסקופית

מונוציטים הם מווסתים מרכזיים של חסינות מולדת וממלאים תפקיד קריטי בחידוש המערכת הפגוציטית החד-גרעינית ההיקפית ובמקרה של דלקת. כתב יד זה מתאר את הליך ההדמיה בזמן אמת של מח העצם של קלווריה של העכבר כדי לחקור את מנגנון הגיוס של המונוציטים.

מעקב עכבר מח עצם המונוציטים<em&gt; In vivo</em

מוצגת אסטרטגיה לניתוח כמותי של נתונים היסטולוגיים במח העצם. מיקרוסקופיה קונפוקלית של תאים המסומנים באופן פלואורסצנטי בקטעי רקמה מביאה לתמונות דו-ממדיות, המנותחות אוטומטית. ניתוחי לוקליזציה משותפת של סוגי תאים שונים מושווים לנתונים מתמונות מדומות, ונותנים מידע כמותי על אינטראקציות תאיות.

אוטומטי כימות של תא המטופואטיות - אינטראקציות תא סטרומה בתמונות היסטולוגית של עצם Undecalcified

הפרוטוקול מתאר מודל חדש של תא חלון עצם הירך של עכברים שניתן להשתמש בו כדי לעקוב אחר תנועת תאים במח עצם הירך in vivo. מיקרוסקופיה פלואורסצנטית רב-פוטונית תוך-חיונית משמשת להדמיית שלושה מרכיבים של מח עצם הירך (כלי דם, מטריצת קולגן ונויטרופילים) לאורך זמן.

חלון ירך דגם קאמרי<em&gt; In vivo</em&gt; מעקב תא Murine מח עצם

מיקרוסקופ זריחה intravital (IVFM) של החילונית מוחל בשילוב עם דגמים גנטיים בעלי חיים כדי ללמוד את יונת ואת engraftment של תאים hematopoietic גומחות מח עצם (מוניטור).

שילוב של מיקרוסקופ פלואורסצנטי Intravital (IVFM) עם דגמים גנטיים בחקר דינמיקה Engraftment Hematopoietic תאים במח העצם נישות

שיטה ליצור ולחיות תמונות שונים מוח העצמות נישות בעכברים מוצג. בהתבסס על נישה תומכת שנוצרו על ידי תאים mesenchymal האדם, תוספת של תאים אנדותל האדם גורם להיווצרות של כלי אדם, ואילו תוספת של rhBMP-2 גורם להיווצרות של רקמת העצם של המוח האנושי.

הנדסת ביו-הנדסה של Microenvironments מוח העצם של עכבר ויזואליזציה שלהם על ידי הדמיה חיה

אנו מתארים כאן את השיטה להדמיית מגהקריוציטים ופרופלטלטים במח העצם הגולגולתית של עכברים חיים באמצעות מיקרוסקופיה דו-פוטונית.

ב-Vivo הדמיה דו-פוטונית של מגהקריוציטים ופרופלטלטים במח העצם של גולגולת העכבר

פרוטוקול זה מתאר הזרקה תוך-פמורלית של כמה תאי גזע המטופויטיים או לוקמיים, כולל תאים ערוכים גנטית, במודלים של קסנוגרפט מורין, אשר לא רק יאפשרו השתלה מהירה ובטוחה של תאים אלא גם ניתוחים סדרתיים של מח העצם.

הזרקות תוך עצם הירך הפשוטות באמצעות עכברים חיים מאפשרות ניתוח רציף של מח עצם

מיקרוסקופיה תוך-ויטלית מאפשרת לחקור תהליכים ביולוגיים דינמיים כגון התחדשות רקמות והתפתחות גידולים. מח העצם הגולריאלי, רקמה דינמית ביותר, מציע תובנות לגבי המטופואיזיס ותפקוד כלי הדם. שימוש בשתל קיבוע ראש מודפס בתלת מימד תואם ביולוגית מאפשר הדמיה אורכית חוזרת, ומשפר את ההבנה שלנו לגבי דינמיקת הרקמות ומיקרו-סביבת הגידול.

הדמיה אורכית תוך-חיונית של דינמיקת כלי הדם במח העצם הגולגולתי

למד שיטת הדמיה תלת-ממדית בזמן אמת של תאי גזע המטופויאטיים ואבותיהם במח העצם של עכברים. טכניקה זו משתמשת במיקרוסקופיית שני-פוטון וקונפוקלית לאיתור תאים ומעקב אחר תנועתם לאורך זמן.

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

גלה סרטונים נוספים