Name: השתלה של הריאה Valve שימוש במודל עכבר של Heterotopic לב והשתלות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 56 s
Description: חקור מנגנונים תאיים ומולקולריים של היווצרות רקמה חדשה והתקשות במסתמי לב הנדסיים באמצעות השתלה הטרוטופית בעכבר. השיטה מאפשרת ניטור זרימת דם באולטרהסאונד תדר גבוה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה, בין שאר, על ידי מענק מ-NIH (RO1 HL098228) לCKB.

הערה: כל נהלי בעלי החיים אושרו על ידי הוועדה בבית חולים בבעלי חיים מוסדי הטיפול ושימוש של הילדים ארצי. 1. ריאתי שסתום לב קציר מתורם שסתום לב מאוס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי כל הכלים הניתוחיים לפני הניתוח: X 1 מספריים בסדר, מלקחיים מייקר 3x, מלחציים כלי דם מיקרו 2x, מלקחיים החלת מהדק 1x, בעל מחט מייקר 1x, מספריים אביב 1x, מפשק 1x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> C57BL / 6 עכבר נשי 6-8 בשבוע ישן משמש כתורם שסתום לב ריאה. הסר את העכבר מהכלוב שלה ולשקול אותה, ולאחר מכן להרדים עם קוקטייל קטמין / xylazine (קטמין, 200 מ&quot;ג / קילוגרם ו xylazine, 20 מ&quot;ג / קילוגרם, IP) ממנת יתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קליפ אזור החזה ומניח את העכבר בעמדת recumbence גב על כרית. לאחר מכן לבצע את פתיחת בית החזה. לחשוף את הלב, לעשות חתך קטן בעלייה הימנית, ותנקב החדר השמאלי עם מי מלח קר כקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בוטות לנתח את עורק הריאה (PA) מעולהאורטה. גזור את המסתם הריאתי (PV), יחד עם 2 שרוול מ&quot;מ של עורק ריאה. השלך את השארית של הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את PV בהפרין הקר ותמיסת מלח (100 יחידות / מיליליטר). הערה: אפשר לשמור PV בפתרון עבור שתי שעות לפני ההשתלה ללב התורם. </li></ol> 2. הכנת לב תורם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> C57BL / 6 עכבר נשי 6-8 בשבוע ישן משמש כתורם לב. הסר את העכבר מהכלוב שלה ולשקול אותה, ולאחר מכן להרדים עם קוקטייל קטמין / xylazine (קטמין, 200 מ&quot;ג / קילוגרם ו xylazine, 20 מ&quot;ג / קילוגרם, IP) ממנת יתר. זהו הליך מסוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קליפ אזור החזה ומניח את העכבר בעמדת recumbence גב על כרית. לאחר מכן לבצע את פתיחת בית החזה. בוטות להפריד את הלב, נחות וריד נבוב (IVC), קאווה מעולה נבוב (SVC), אב העורקים עולים, הרשות הפלסטינית, ועורק ריאה. Perfuse IVC עם תמיסת מלח סטרילית קרה כקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור IVC, SVC, ועורק ריאה עם 6-0 תפר משי ואז לחתוך מעולהחיבורי אותיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את אב העורקים ואת הרשות הפלסטינית עם 2 שרוול מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגזור PV ולהיפטר ממנו. </li></ol> 3. שסתום לב להשתלות על לב תורם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאחר שלב 2.5, למקם את שסתום לב מהצעד 1.5 ללב התורם ולכוון את שסתום הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Secure PV עם תפר בצד ימין של המסתם באמצעות 10-0 תפרים monofilament על מחטים מחודדות ולהתחיל לתפור ברציפות עם 5-6 stiches מהצד השני של PV האחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שסיימתי את הצד הקדמי, סובב את הלב בצורה אופקית ולהתחיל לתפור את הצד האחורי של PV על הלב התורם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את הלב בפתרון הפרין / תמיסת מלח סטרילית קרה. הערה: לב התורם יכול להיות כל הזמן בפתרון עבור שתי שעות לפני ההשתלה לעכבר הנמען. </li></ol> 4. Heterotopic לב השתלה לנמען מאוס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> C57BL / 6 עכבר נשי 6-8 בשבוע ישן שימש כrecipient. הסר את העכבר מהכלוב שלה ולשקול אותה, ולאחר מכן הרדים עם קוקטייל קטמין / xylazine (10 מ&quot;ג / קילוגרם קטמין, 100 מ&quot;ג / קילוגרם ו xylazine). Ketoprofen (5 מ&quot;ג / קילוגרם) משמש כמשכך כאבי preanesthesia. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שבדק את רמת הרגעה בזנב צביטות, קליפ בבטן ושיער חזה. לשמן את העיניים עם משחת עיניים סטריליות, ומניח את העכבר בעמדת recumbence גב על כרית. לחטא את הבטן עם רפידות בטאדין ואלכוהול. ואז לכסות את העכבר עם וילון סטרילי ולחשוף את אזור החתך בלבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך פיום בטן קו האמצע מלמטה xyphoid לאזור suprapubic, ולהכניס את מפשק התמך עצמי. עטוף את המעיים בגזה טבול מלוחה. בוטות להגדיר את אב העורקים infrarenal ווריד נבוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח שני 6-0 תפרי משי proximally וdistally סביב אב העורקים וIVC לרסן את זרימת דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הלב התורם בצד ימין של אב העורקים בבטן ולכסות אותו עם גאו סטריליze. לחות זה עם מי מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך aortotomy באב העורקים בבטן באמצעות מחט G 30 ולהאריך את הפתיחה עם מספריים לגודל של אב העורקים התורמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע מקצה לצד השקה באמצעות תפרי 10-0 monofilament סטרילי במחטים מחודדות. אבטח את אב העורקים תורם עם תפר אחד בקצה הפרוקסימלי של הפתח באב העורקים בבטן ולהתחיל לתפור ברציפות עם 4-5 stiches מהקצה הדיסטלי של אב העורקים בבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעיף את הלב לצד השמאל, לכסות אותו עם גזה מלוחה רווי, ולהתחיל לתפור ברציפות עם 4-5 stiches מהקצה הדיסטלי של אב העורקים בבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך venotomy בIVC באמצעות מחט G 30 ולהאריך את הפתיחה לגודל של עורק הריאה התורם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבצע סוף להשקת צד שימוש בתפרי 10-0 monofilament סטרילי במחטים מחודדות. Secure תורם הרשות הפלסטינית עם תפר אחד בקצה הפרוקסימלי של הפתח בIVC ולהתחיל לתפור ברציפות עם 4-5 מstichesהקצה הדיסטלי של נחות הווריד הנבוב. הפעם, בגלל שאב העורקים הוא בדרך, לוודא שתפירה של הקיר השמאלי של הרשות הפלסטינית של התורם היא על החלק הפנימי של IVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את לומן IVC עם הפרין ותמיסת מלח (100 יחידות / מיליליטר). סגור את הקיר הימני של תורם הרשות הפלסטינית ונמען IVC על ידי תפירתם ברציפות לקצה הדיסטלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מייתר דיסטלי ולשלוט בדימום על ידי הפעלת סוכן hemostat אקטואלי נספג סטרילי. כאשר הדימום מפסיק לחלוטין, להסיר את התפר הפרוקסימלי ולשלוט בדימום באותו אופן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את המעיים ולסגור את השרירים ועור הבטן בשתי שכבות באמצעות תפר monofilament 6-0 פוליאמיד השחור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 0.5 מיליליטר תת עורי מלוח ומניח את העכבר בכלוב התאוששות על כרית חימום עד שהעכבר הוא נייד באופן מלא. עם ההתאוששות, להחזיר את העכבר לכלוב חדש עם מצעי נייר. תן משככי כאבים (איבופרופן, 30 מ&quot;ג / קילוגרם, מי שתייה) ל48 שעות. לעשותלא יחזור בעלי חיים שעברו ניתוח לחברתם של בעלי חיים אחרים, עד שהתאושש באופן מלא. </li></ol>

<ol><li>Polito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+morbidity+and+mortality+in+very+preterm+VLBW+infants+with+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Intens+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Increased morbidity and mortality in very preterm VLBW infants with congenital heart disease.</a> Intens Care Med. 39, 1104-1112 (2013).</li>
<li>Wren, C., Reinhardt, Z., Khawaja, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twenty+year+trends+in+diagnosis+of+life+threatening+neonatal+cardiovascular+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Dis+Child+Fetal%22%5BJournal%5D)">Twenty year trends in diagnosis of life threatening neonatal cardiovascular malformations.</a> Arch Dis Child Fetal. 93, F33-F35 (2008).</li>
<li>Vacanti, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+transplantation+Third+annual+Samuel+Jason+Mixter+lecture%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+surgery%22%5BJournal%5D)">Beyond transplantation Third annual Samuel Jason Mixter lecture.</a> Archives of surgery. 123, Chicago Ill. 545-549 (1960).</li>
<li>Tudorache, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+replacement+of+aortic+heart+valves+with+tissue-engineered+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Orthotopic replacement of aortic heart valves with tissue-engineered grafts.</a> Tissue engineering Part A. 19, 1686-1694 (2013).</li>
<li>van Geldorp, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient+outcome+after+aortic+valve+replacement+with+a+mechanical+or+biological+prosthesis+weighing+lifetime+anticoagulant+related+event+risk+against+reoperation+risk%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+thoracic+and+cardiovascular+surgery%22%5BJournal%5D)">Patient outcome after aortic valve replacement with a mechanical or biological prosthesis weighing lifetime anticoagulant related event risk against reoperation risk.</a> The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 137, 881-886 (2009).</li>
<li>El Oakley, R., Kleine, P., Bach, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choice+of+prosthetic+heart+valve+in+today%27s+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Choice of prosthetic heart valve in today's practice.</a> Circulation. 117, 253-256 (2008).</li>
<li>Quinn, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+for+Bench+to+Bedside+Translation+of+Regenerative+Cardiac+Constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Pediatric+cardiology%22%5BJournal%5D)">Animal Models for Bench to Bedside Translation of Regenerative Cardiac Constructs.</a> Progress in Pediatric cardiology. 35, (2013).</li>
<li>Shinoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+heart+valves+valve+leaflet+replacement+study+in+a+lamb+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+thoracic+surgery%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering heart valves valve leaflet replacement study in a lamb model.</a> The Annals of thoracic surgery. 60, S513-S516 (1995).</li>
<li>Sodian, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+of+heart+valves+in+vitro+experiences%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+thoracic+surgery%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering of heart valves in vitro experiences.</a> The Annals of thoracic surgery. 70, 140-144 (2000).</li>
<li>Shinoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineered+heart+valves.+Autologous+valve+leaflet+replacement+study+in+a+lamb+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Tissue engineered heart valves. Autologous valve leaflet replacement study in a lamb model.</a> Circulation. 94, II164-II168 (1996).</li>
<li>Sodian, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+biodegradable+three+dimensional+matrices+for+tissue+engineering+of+heart+valves%5BTitle%5D)+AND+%22ASAIO+journal+%28American+Society+for+Artificial+Internal+Organs%22%5BJournal%5D)">Evaluation of biodegradable three dimensional matrices for tissue engineering of heart valves.</a> ASAIO journal (American Society for Artificial Internal Organs. 46, 107-110 (1992).</li>
<li>Sodian, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+in+vivo+experience+with+tissue-engineered+trileaflet+heart+valves%29%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Early in vivo experience with tissue-engineered trileaflet heart valves).</a> Circulation. 102, III22-III29 (2000).</li>
</ol>

יש לנו מה למסור.

שיעור התמותה של הליך זה הוא קרוב ל20%, שרובו נגרמו על ידי שטף דם באתר PV ההשתלה וההשקה באב העורקים התורם לאב העורקים בבטן של הנמען. ברוב המקרים, שיעור התמותה יורד באופן משמעותי 48 הודעה שעה ניתוח. עכברי ההישרדות הראו פעימות לב חזקות וזרימת דם דרך PV המושתל. התהליך כולו לוקח ארבע שעות למנתח מיקרו מנוסה. זה ייקח בערך 250 עכברים להשתלט על הטכניקה. השתלת לב heterotopic היא יחסית ישרה קדימה בהשוואה להשתלת PV ללב התורם. אחד השלבים הקריטיים ביותר להשתלת HV מוצלחת הוא קציר של מבנה PV מעכב...

מומי לב וכלי דם מולדים הם אחד הגורמים המובילים לתמותת תינוקות ב1,2 העולם המערבי. ביניהם, היצרות של המסתם pulmonic ופגמי שסתום אב העורקים bicuspid הם צורה שכיחה 3. ניתוח החלפה מסתם בלב הוא בחירה שגרתית של ניתוחים שיקומיים; עם זאת, סיבוכים כוללים היצרות והסתיידות של שסתום הלב, ותלות לכל החיים בתרופות נגד קרישת דם הם מקור משמעותי של בריאות לקויה כרונית ומוות 4-7. יתר על כן, חוסר פוטנציאל צמיחה דורש ניתוחי תיקון, דבר המגדיל את התמותה של חולים צעירים אלו 4,8,9 נוספים. בניסיון לפתח שסתום לב החלפה פונקציונלי עם פוטנציאל צמיחה, Shinoka et al. תאים עצמיים זורעים על לב שסתום סינטטי מתכלה 8. השסתום הסינתטי הפך לשסתום לב ילידים כמו מבנה עם potenti הצמיחהאל. מחקרים בבעלי חיים גדולים ראשוניים הוכיחו את הכדאיות של שימוש במתודולוגיה זו כדי ליצור שסתום לב פונקציונלי 10. עם זאת, מחקרי השתלה לטווח ארוך הוכיחו עמידות ירודה עקב עיבוי הדרגתי של neotissue הסתום וכתוצאה מכך הצמצום של שסתום הלב. לעבוד מSodian et al. משמש את המתודולוגיה Shinoka, אבל סופו של דבר החליף את מטריצת PGA עם אלסטומר מתכלה, אשר נתן את מאפייני יומכנית של שסתום הרקמות המהונדס לבנות פרופיל פיסיולוגי יותר 9,11,12. במחקר in vivo, למרות ההצלחה של ההשתלה, רירית תא האנדותל מחוברות לא נוצרה שעלול להגביל את ההצלחה לטווח הארוך של פיגום זה 12. כדי לעצב דור השני שסתום לב סינטטי משופר באופן רציונלי, מודל עכברי של השתלת שסתום לב נוצר כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים underlyinהיווצרות neotissue גרם, עיבוי שסתום, ופיתוח היצרות. מודלים עכבריים מציעים מגוון רחב של חומרים כימיים מולקולריים, כוללים transgenics, אשר אינם זמינים במינים אחרים 7. במודל השתלת שסתום הלב הזה, vivo לשעבר החלפת שסתום לב הריאה syngeneic בוצעה לראשונה; ולאחר מכן הלב עם שסתום לב המושתל הושתל heterotopically למארח syngeneic באמצעות טכניקת microsurgical. מודל זה מאפשר החלפה מסתם לב ללא הצורך במעקפי cardiopulmonary. במאמר זה, הסבר מפורט על קציר שסתום לב, הכנות לב תורם, השתלת שסתום לב, והשתלת לב heterotopic מתוארת. התוצאות הראו דופק רציף מהלב התורם, שלא היה תלוי בקצב לב הנמען. זרימת הדם דרך שסתום ריאתי הושתל נמדדה באמצעות מערכת אולטרסאונד בתדירות גבוהה עם גל פעם האםppler.

<table><tbody><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J (H-2b), מעבדות</td><td>ג'קסון</td> נקבה <td>664</td><td>8-12 שבועות</td></tr><tr><td>הזרקת קטמין הידרוכלוריד</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td></td></tr><tr><td>פתרון סטרילי קסילזין</td><td>Akorn Inc.</td><td>NADA# 139-236</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>NDC 0856-4396-01</td><td></td></tr><tr><td>איבופרופן</td><td>PrecisionDose</td><td>NDC 68094-494-59</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodium</td><td>Sagent Pharmaceticals</td><td>NDC 25021-400</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח (סטרילית 0.9% נתרן כלורי)</td> <td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-0138-22</td><td></td></tr><tr><td>0.9% הזרקת נתרן כלורי</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים וזלין</td><td>Dechra מוצרים וטרינריים</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה ליוד</td><td>משולש חד פעמי, בע"מ</td><td>NDC 50730-3201-1</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה לאלכוהול</td><td>McKesson Corp.</td><td>NDC 68599-5805-1</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים עם קצה כותנה</td><td>פישר סינטיפיק</td><td>23-400-118</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>FST</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו-אדסון</td><td>FST</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>מהדק מריחת מלקחיים</td><td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>S& T מהדק כלי דם</td><td>FST</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיציים</td><td>FST</td><td>15008-08</td><td></td></tr><tr><td>Colibri Retractors</td><td>FST</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 - מלקחיים עדינים</td><td>FST</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 מלקחיים</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט טיש/ מלקחיים</td><td>Micrins</td><td>MI1540</td><td></td></tr><tr><td>תפר מונופילמנט פוליאמיד שחור, 10-0</td><td>AROSurgical Instruments Corporation</td><td>TI638402</td><td>לתפירת השתל</td></tr><tr><td>תפר מונופילמנט פוליאמיד שחור, 6-0</td><td>AROSurgical Instruments</td><td>SN-1956</td><td>לסגירת שרירים וסגירת עור</td></tr><tr><td>ספוגים לא ארוגים</td><td>McKesson Corp.</td><td>94442000</td><td></td></tr><tr><td>המוסטט נספג</td><td>אתיקון</td><td>1961</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>3 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>18 גרם 1 1/2 אינץ', מחט</td><td>BD</td><td>305190</td><td></td></tr><tr><td>25 גרם 1 אינץ', מחט</td><td>BD</td><td>305125</td><td></td></tr><tr><td>30 גרם 1 אינץ', מחט</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>מעגל מים חמים</td><td>Gaymar</td><td>TP-700</td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>Gaymar</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>גוזם</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr><tr><td>VEVO2100 אולטרסאונד בתדר גבוה</td><td>VisualSonics</td><td><a href="http://www.visualsonics.com/vevo2100">http://www.visualsonics.com/vevo2100</a></td><td>את המספר הקטלוגי והתמחור ניתן לקבל מנציגי המכירות.</td></tr><tr><td>ג'ל העברת אולטרסאונד</td><td>מעבדות פרקר, INC.</td><td>01-02</td><td></td></tr><tr><td>שולחן עליון מערכת הרדמה לבעלי חיים מעבדה</td><td>VetEquip, INC.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>1001936060</td><td></td></tr></tbody></table>

השתלה של הריאה valve שימוש במודל עכבר של heterotopic לב והשתלות

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

שסתומי רקמות מהונדסות לב, שסתומים decellularized במיוחד, מתחילים לצבור תאוצה בשימוש הקליני של ניתוח שחזור עם תוצאות מעורבות. עם זאת, המנגנונים התאיים ומולקולריים של התפתחות neotissue, עיבוי שסתום, ופיתוח היצרות לא נחקרו בהרחבה. כדי לענות על השאלות לעיל, פיתחנו מודל עכברי heterotopic לב שסתום השתלה. שסתום לב היה שנקטפו מן עכבר תורם סתום ולהשתיל לעכבר תורם לב. הלב עם שסתום חדש הושתל heterotopically לעכבר נמען. הלב המושתל הראה דופק משלו, ללא תלות בקצב הלב של הנמען. זרימת הדם הייתה לכמת באמצעות מערכת אולטרסאונד בתדירות גבוהה עם דופלר גל פעם. הזרימה דרך המסתם הריאתי המושתל הראתה קדימה זרימה עם regurgitation המינימלי וזרימת השיא הייתה קרובה ל100 מ&quot;מ / שנייה. מודל עכברי זה של השתלת שסתום לב הוא highly צדדי, כך שזה יכול להיות שונה ומותאם לספק סביבות המודינמית שונות ו / או יכול להיות בשימוש עם עכברים הטרנסגניים שונים ללמוד פיתוח neotissue בשסתום לב רקמות מהונדסות.

איור 1 מדגים את השרטוטים של מודל ההשתלה שסתום לב באמצעות השתלת לב heterotopic. שסתום הלב היה שנקטפו מן לב תורם ומושתל אל לב מעכבר תורם שני. אז הלב עם שסתום הלב החדש הושתל בבטן של עכבר נמען. איור 2 מראה איור של הלב המושתל בחלל הבטן (א &#39;), מייד לאחר השתלת לב (ב&#39;), ו -5 דקות לאחר השתלה. לאחר הסרת תפרים בשני הצדדים של אב העורקים וIVC, הלב מתחיל להכות 1-2 דקות מאוחר יותר והופך להיות ורוד יותר עם יותר זרימת דם. ...

על מנת להבין את המנגנונים התאיים ומולקולריים שבבסיס neotissue היווצרות והתפתחות היצרות במסתמי לב רקמה מהונדסת, מודל עכברי של השתלת שסתום לב heterotopic פותח. שסתום לב ריאה הושתל לנמען באמצעות טכניקת השתלת לב heterotopic.

השתלה של הריאה Valve שימוש במודל עכבר של Heterotopic לב והשתלות

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לחקור את המנגנונים התאיים והמולקולריים העומדים בבסיס היווצרות רקמה חדשה (neo tissue), התעבויות של המסתמים ופיתוח סטנוזיס בתוך מסתם לב בהנדסת רקמות. דבר זה מושג תחילה על ידי קצירת מסתם המפשורה מרקמת לב של עכבר תורם. בשלב השני, קוצף את הלב כולו מתורם שני.מסבים לאחר מכן את מסתם הלב הריאתי של התורם אל לב התורם, ואת הלב עם המסתם החדש משבחים באופן הטרוטופי לתוך עכבר מקבל. לבסוף, ניתן לנטר את תפקודו של הלב המשתבץ ואת זרימת הדם דרך המסתם הריאתי באמצעות מערכת אולטרסאונד בתדר גבוה במצב Doppler של גל דופק. היתרון העיקרי של שימוש במודל עכבר לעומת מודלים של בעלי חיים גדולים אחרים הוא ששימוש במודל עכברי מאפשר לנו לנצל מגוון רחב של ריאגנטים מולקולריים המאפשרים לחקור את המכניזמים המולקולריים התאיים העומדים בבסיס היווצרות רקמה וסקולרית חדשה בהתפתחות של סטנוזיס ומסתמי לב בהנדסת רקמות. באופן כללי, אנשים שאינם מכירים את השיטה יתקשו בהבנייה בשל מורכבות המיקרו-כירורגיה השורדת.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שהשגת אוסמוז נאותה באתרים השתלת היא קשה ללמידה, ומכיוון שביצוע אוסמוז בכלי דם בעלי קליבר קטן הוא מאתגר ללא גרימת דימום. כדי להוציא את שסתום המעטפת הריאתי מהתורם, ראשית יש לגזז את אזור החזה של נקבה תורמת בת שש עד שמונה שבועות, מסוג C 57 black six mouse, ולהניח את העכבר בתנוחה גבית (dorsal recumbent). לאחר ביצוע תורקוטומיה, חשוף את הלב, בצע חתך קטן בעליה הימנית ובצע פרפוזיה לחדר השמאלי עם סליין קר מאוד. לאחר מכן, בצע דיסקציה קהה של העורק הריאתי מהאאורטה הע上ית ואז גזור את השסתום הריאתי יחד עם שוליים (cuff) של 2 mm מהעורק הריאתי. שמור את השסתום הריאתי בתמיסת סליין והפרין קרה למשך עד שעתיים לפני השתלתו בלב התורם, לצורך הוצאת לב התורם.לאחר ביצוע תורקוטומיה (פתח בית חזה) בנקבת עכבר תורמת מסוג C 57 black six בת שבועיים עד שמונה, כפי שהודגם כעת בשיטה לא פולשנית, הפרד את הלב, הווריד הנבוב התחתון, הווריד הנבוב העליון, האביס (האורטה) העולה, העורק הריאתי והווריד הריאתי. שטוף את הווריד הנבוב התחתון בתמיסת סליין סטרילית קרה מאוד, ולאחר מכן קשור את הווריד הנבוב התחתון, הווריד הנבוב העליון והווריד הריאתי באמצעות תפר משי 6.0; גזור מעל הקשירות, גזור את האביס ואת העורק הריאתי עם שוליים (cuff) של 2 מילימטר, וגזור את המסתם הריאתי כדי להשתיל את מסתם הלב הריאתי אל לב התורם. ראשית, מקם את המסתם בלב התורם וכוון את הרקמה.בשלב הבא, השתמשו בתפרים חד-סיביים (monofilament) במידה 10 על מחטים קהות כדי לבצע תפר בצד ימין של השסתום כדי לקבע אותו. לאחר מכן, בצעו חמישה עד שישה תפרי רצף לאורך הצד השני של השסתום הפומואלי. לאחר סיום התפירה של חלקו הקדמי של השסתום, סובבו את הלב באופן אופקי ותפרו את חלקו האחורי של השסתום הפומואלי אל לב התורם.לאחר מכן, קשרו את הווריד הריאתי של לב התורם והוציאו את הלב. לאחר מכן, הניחו את הלב בתמיסות סלין קרה עם הפרין למשך עד שעתיים לפני ההשתלה בעכבר המקבל. כעת, ודאו את הרדמתה של נקבת עכבר C 57 black six בת שש עד שמונה שבועות, המקבלת את ההשתלה, באמצעות צביטה בבהו).לאחר גזירת שיער הבטן והגשםת העיניים במשחה אופתלמית סטרילית, הנח את העכבר במצב שכיבה על הגב (dorsal recumbent), חטא את הבטן באמצעות Betadine ופדים עם אלכוהול, וכסה את העכבר בסדין סטרילי כך שרק אזור החיתוך יישאר חשוף. לאחר מכן, בצע חתך לפרוטומיה בקו האמצע, מהאזור שמתחת לתוך-חרב (xiphoid) ועד לאזור שמעל הפובו (supra pubic). לאחר מכן, הכנס מפריד (retractor) בעל מנגנון נעילה ועטוף את המעיים בגזה לחה בתמיסת סליין.הגדירו באופן מובהק את האאורטה התת-כלייתית (infrarenal aorta) ואת הווריד החלול התחתון. לאחר מכן, מקמו שתי תפרים ממשי (silk) במידה 6/0 וקשרו באופן פרוקסימלי ודיסטלי סביב האאורטה והווריד החלול התחתון. כדי לעצור את זרימת הדם, השתמשו במחט במידה 30 כדי לבצע aortotomy באאורטה הבטנית ו-venotomy בווריד החלול התחתון.הרחב את הפתיחה בעזרת מספריים לגודל של אבי העורקים והעורק הריאתי של התורם. הנח את לב התורם בצד ימין של אבי העורקים הבטני וכסה אותו בגזה סטרילית לחה והמשך להרטיב אותו. קבע את אבי העורקים של התורם באמצעות תפר אחד בקצה הפרוקסימלי של הפתיחה באבי העורקים הבטני, ולאחר מכן בצע ארבעה עד חמישה תפרי רצף מהקצה הדיסטלי של אבי העורקים הבטני.הפכו את הלב לצד שמאל. כסו אותו בגזה ספוגה בסליין ותפרו את הקצה הדיסטלי של האבי העורקים הבטני (abdominal aorta) בארבעה עד חמישה תפרירים רציפים נוספים. אבטחו את עורקת הריאה של התורמת בתפר אחד בקצה הפרוקסימלי של הפתח בווריד הנבוב התחתון (inferior vena cava), ולאחר מכן הניחו ארבעה עד חמישה תפרירים רציפים מהקצה הדיסטלי של הווריד הנבוב התחתון.לאחר מכן, שטפו את לומינו של ה-inferior vena CVA עם הפרין ותמיסת מלח. סגרו את הדופן הימנית של עורק הריאה של התורם ואת ה-inferior vena CVA של המקבל באמצעות תפרים רציפים עד לקצה הדיסטלי. כעת הסירו את הליגטורה הדיסטלית והשריגו חומר המstטי סטרילי נספג למניעת דימום.כאשר הדימום פוסק לחלוטין, הסירו את התפר הפרוקסימלי ובקרו את הדימום השני באותו אופן; הלב המושתל יתחיל להפעיל פעימות תוך חמש דקות לאחר אנסטומוזיס מוצלח. לאחר מכן, החזירו את המעיים והשתמשו בתפרי 6-0 כדי לסגור את שרירי הבטן ואת העור בשתי שכבות. לבסוף, הזריקו תת-עורית 0.5 milliliters של סליין והניחו את העכבר בכלוב התאוששות על משטח חימום עד שהחיה תהיה ניידת לחלוטין.לאחר ההתאוששות, מקמו את העכבר לבד עד להחלמה מלאה בכלוב חדש עם מצע נייר ותנו תרופות לשיכוך כאבים. מים לשתייה למשך 48 שעות. בתמונות אלו מוצגים הלב המושתל בחלל הבטן מיד לאחר השתלת הלב וחמש דקות לאחר ההשתלה.עם הסרת התפרים משני צידי האורטה והוריד הנבוב התחתון, הלב מתחיל לפעום בתוך דקה עד שתי דקות והופך לוורוד יותר עם תחילת זרימת הדם. שימו לב להרחבה הגדולה יותר בעלייה הימנית. ככל שפעימות הלב מתחזקות בהדרגה והופכות ליציבות לאחר 24 שעות, ניתן למדוד את זרימת הדם דרך המסתם הריאתי השותל באופן פרוקוטנאי 10 ימים לאחר ההשתלה.באמצעות מערכת אולטרסאונד בתדר גבוה עם מצב דופלר של גל פולס, ניתן לצפות במצב B במיקומים של האורטה, החדר הימני, המסתם הריאתי השתול והעורק הריאתי. שכבת נפח הדגימה הצהובה ממוקמת על מסתם הריאתי (PV) השתול, כפי שמוצג בסכימה. כפי שניתן לראות בגרף, גל ה-QRS של לב התורם מזוהה באופן קצבי ובאופן בלתי תלוי בגלו של לב המקבל, עם מהירות שיא של כ-100 millimeters per second.במהלך ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להפסיק לחלוטין כל דימום באתר השביית מסתם ריאה או באנסטומוזיס בין אבי העורקים של התורמן לאבי העורקים הבטני של המקבל לאחר הליך זה. ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון השבייה של מסתמי לב בהנדסת רקמות בעכברים טרנסגניים, כדי לענות על שאלות נוספות לגבי מקור התאים המאכלסים את מסתם הלב העלול להיות חולה. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה של האופן שבו קוצרי מסתם ריאה, וכיצד לבצע החלפת מסתם לב והשתלת לב הטרוטופית במודל של עכבר.

transplantation-pulmonary-valve-using-mouse-model-heterotopic-heart

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

טכניקה מודגמת עבור ההליך המיקרו-כירורגי להשתלה הטרוטופית של לבבות בעכברים, כולל שיטות פשוטות לקצירת תורם ואנסטומוזיס של כלי הדם המקבל.

שיטה שונה לHeterotopic מאוס לב Transplantion

כתב היד מתארת ​​את הצעדים הנדרשים כדי לבצע את השתלת לב heterotopic בעכבר.

טכניקת השתלות Murine Heterotopic לב

כדי לחקור השתלה משולבת של איברים מוצקים וכלי דם, אנו מתארים מודל חדש של השתלת דופן חזה הטרוטופית, בלוטת התימוס ולב בעכברים באמצעות טכניקת שרוול צוואר הרחם ללא תפרים.

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

כאן, אנו מתארים טרום קלינית בעלי חיים גדולים (porcine) מודל של השתלת לב אורתוגרפית כי כבר הוקמה בחוזקה ומנוצל לחקור אסטרטגיות קרדיוקטיבי הרומן.

מודל הפרה-קליני של השתלת לב אורתוטופית

טכניקה חדשנית לשחזור מעגל הדם במודל הטרוטופי של השתלת לב עכבר בטן מודגמת.

שחזור מעגל הדם במודל השתלת לב של עכבר בטן

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה ויעילה להשתלת עלוני מסתם אבי העורקים מתחת לכמוסה הכליתית כדי לאפשר מחקר של אלוראקטיביות של מסתמי הלב.

מודל פשוט להשתלת מסתם לב הטרוטופי במכרסמים

בפרוטוקול הנוכחי, מודל השתלת לב עכבר משמש לחקירת מנגנון דחיית אלוגרפט לבבי. במודל השתלת לב הטרוטופי זה, יעילות הניתוח משופרת, והישרדותם של שתלי לב מובטחת על ידי אנסטומוזה מקצה לקצה של צוואר הרחם של השתלת לב באמצעות טכניקת שרוול שונה.

טכניקת שרוול שונה למודל השתלת לב הטרוטופי של עכבר צוואר הרחם

מודלים להשתלת לב עכברים מייצגים כלי מחקר חשובים לחקר אימונולוגיה של השתלות. הפרוטוקול הנוכחי מפרט השתלת לב צווארית הטרוטופית של עכברים הכוללת מיקום של אזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל גזע עורק הריאה של התורם כדי לאפשר זרימת דם למינרית.

השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכבר תוך שימוש באזיקי כלי דם

פרוטוקול זה מציג טכניקת אנסטומוזה פשוטה מקצה לצד להשתלת לב צוואר הרחם בעכברים, ומספק מודל חזק וניתן לשחזור ללימוד אימונולוגיה של השתלות.

השתלת לב עכבר הטרוטופית צווארית באמצעות טכניקת אנסטומוזה מקצה לצד לחקר אימונולוגיה של השתלות

חקור מנגנונים תאיים ומולקולריים של היווצרות רקמה חדשה והתקשות במסתמי לב הנדסיים באמצעות השתלה הטרוטופית בעכבר. השיטה מאפשרת ניטור זרימת דם באולטרהסאונד תדר גבוה.

השתלה של הריאה Valve שימוש במודל עכבר של Heterotopic לב והשתלות

גלה סרטונים נוספים