Dissection and Immunostaining of Imaginal Discs from <em>Drosophila melanogaster</em>

Carrie M. Spratford; Justin P. Kumar

doi:10.3791/51792

נתיחה וImmunostaining של דמותי דיסקים מ Melanogaster דרוזופילה

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Dissection and Immunostaining of Imaginal Discs from Drosophila melanogaster

נתיחה וImmunostaining של דמותי דיסקים מ Melanogaster דרוזופילה

Full Text

27,815 Views

10:10 min

September 20, 2014

DOI: 10.3791/51792-v

Carrie M. Spratford¹, Justin P. Kumar¹

¹Department of Biology,Indiana University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

המבנים הבוגרים של דרוזופילה נגזרים ממבנים דמויי שק הנקראים דיסקים דמיוניים. ניתוח דיסקים אלה מספק תובנה לגבי תהליכים התפתחותיים רבים כולל קביעת רקמות, קביעת גבול תאים, התפשטות תאים, מפרט גורל התא וקוטביות תאים מישוריים. פרוטוקול זה משמש להכנת דיסקים דמיוניים למיקרוסקופ אור/פלורסנט.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לנתח דיסקים דמיוניים מזחלי דרוזופילה עבור אימונוהיסטוכימיה, זה מושג על ידי הסרת קומפלקס הראש המורכב מהפה, הווים, העין והדיסקים הטנאליים והמוח מהזחלים. השלב השני הוא לתקן את קומפלקס הראש ולדגור עליו עם נוגדנים ראשוניים ומשניים. לאחר מכן, העין והדיסקים הטנאליים מופרדים ממתחם הראש.

השלב האחרון הוא הרכבת הדיסקים הדמיוניים בחומר נגד הלבנה על מגלשת זכוכית. בסופו של דבר, מדווחים פלואורסצנטיים או LAC Z וצביעת נוגדנים יכולים לחשוף את הביטוי המרחבי והזמן של גנים וחלבונים בתוך הרקמות הדמיוניות באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. אם כי ניתן להשתמש בטכניקה זו כדי לספק תובנה לגבי לוקליזציה של גנים וחלבונים בדיסק הדמיוני האנטן.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos