Name: Ex Vivo הכנות של הנורה Vomeronasal האיברים ואבזר חוש הריח הפגועה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-04T23:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: למד הכנה אקס ויו של הנורה Vomeronasal והאיברים המחוברים ל-AOB בעכבר. שיטה זו מאפשרת מדידות אלקטרופיזיולוגיות מדויקות של תגובות עצביות לפירומונים וקיירומונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי r00 DC011780 (JPM: NINDS, NIH), F30 DC011673 (בית לוחמי הגטאות: NINDS, NIH) ובקרנות UT Southwestern הפעלה (JPM).

<ol><li>Bruce, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+exteroceptive+block+to+pregnancy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An exteroceptive block to pregnancy in the mouse.</a> Nature. 184, 105(1959).</li>
<li>Bellringer, J. F., Pratt, H. P., Keverne, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+the+vomeronasal+organ+and+prolactin+in+pheromonal+induction+of+delayed+implantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Involvement of the vomeronasal organ and prolactin in pheromonal induction of delayed implantation in mice.</a> J Reprod Fertil. 59, 223-228 (1980).</li>
<li>Bean, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+agonistic+behavior+by+the+dual+olfactory+system+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Modulation of agonistic behavior by the dual olfactory system in male mice.</a> Physiol Behav. 29, 433-437 (1982).</li>
<li>Meredith, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vomeronasal+organ+removal+before+sexual+experience+impairs+male+hamster+mating+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Vomeronasal organ removal before sexual experience impairs male hamster mating behavior.</a> Physiol Behav. 36, 737-743 (1986).</li>
<li>Hendrickson, R. C., Krauthamer, S., Essenberg, J. M., Holy, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+shapes+sex+selectivity+in+the+mouse+accessory+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Inhibition shapes sex selectivity in the mouse accessory olfactory bulb.</a> J Neurosci. 28, 12523-12534 (2008).</li>
<li>Ben-Shaul, Y., Katz, L. C., Mooney, R., Dulac, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+vomeronasal+stimulation+reveals+sensory+encoding+of+conspecific+and+allospecific+cues+by+the+mouse+accessory+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In vivo vomeronasal stimulation reveals sensory encoding of conspecific and allospecific cues by the mouse accessory olfactory bulb.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, (2010).</li>
<li>Tolokh, I. I., Fu, X., Holy, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliable+sex+and+strain+discrimination+in+the+mouse+vomeronasal+organ+and+accessory+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reliable sex and strain discrimination in the mouse vomeronasal organ and accessory olfactory bulb.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 33, 13903-13913 (2013).</li>
<li>Luo, M., Fee, M. S., Katz, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encoding+pheromonal+signals+in+the+accessory+olfactory+bulb+of+behaving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Encoding pheromonal signals in the accessory olfactory bulb of behaving mice.</a> Science. 299, 1196-1201 (2003).</li>
<li>Binns, K. E., Brennan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+electrophysiological+activity+in+the+accessory+olfactory+bulb+and+medial+amygdala+associated+with+mate+recognition+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Changes in electrophysiological activity in the accessory olfactory bulb and medial amygdala associated with mate recognition in mice.</a> Eur J Neurosci. 21, 2529-2537 (2005).</li>
<li>Leszkowicz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noradrenaline-induced+enhancement+of+oscillatory+local+field+potentials+in+the+mouse+accessory+olfactory+bulb+does+not+depend+on+disinhibition+of+mitral+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Noradrenaline-induced enhancement of oscillatory local field potentials in the mouse accessory olfactory bulb does not depend on disinhibition of mitral cells.</a> Eur J Neurosci. 35, 1433-1445 (2012).</li>
<li>Ames, A. 3r, Gurian, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+Recordings+from+Isolated+Mammalian+Retina+Mounted+as+a+Membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Electrical Recordings from Isolated Mammalian Retina Mounted as a Membrane.</a> Arch Ophthalmol. 70, 837-841 (1963).</li>
<li>Flock, A. F., Strelioff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+hair+cells+in+isolated+coils+from+the+guinea+pig+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Studies on hair cells in isolated coils from the guinea pig cochlea.</a> Hear Res. 15, 11-18 (1984).</li>
<li>Woodbury, C. J., Ritter, A. M., Koerber, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+anatomy+of+individual+rapidly+adapting+low-threshold+mechanoreceptors+innervating+the+%27hairy%27+skin+of+newborn+mice%3A+early+maturation+of+hair+follicle+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Central anatomy of individual rapidly adapting low-threshold mechanoreceptors innervating the 'hairy' skin of newborn mice: early maturation of hair follicle afferents.</a> J Comp Neurol. 436, 304-323 (2001).</li>
<li>Llinas, R., Muhlethaler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+electrophysiological+study+of+the+in+vitro%2C+perfused+brain+stem-cerebellum+of+adult+guinea-pig%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">An electrophysiological study of the in vitro, perfused brain stem-cerebellum of adult guinea-pig.</a> The Journal of physiology. 404, 215-240 (1988).</li>
<li>Riviere, S., Challet, L., Fluegge, D., Spehr, M., Rodriguez, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formyl+peptide+receptor-like+proteins+are+a+novel+family+of+vomeronasal+chemosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Formyl peptide receptor-like proteins are a novel family of vomeronasal chemosensors.</a> Nature. 459, 574-577 (2009).</li>
<li>Meeks, J. P., Holy, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+preparation+of+the+intact+mouse+vomeronasal+organ+and+accessory+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">An ex vivo preparation of the intact mouse vomeronasal organ and accessory olfactory bulb.</a> J Neurosci Methods. 177, 440-447 (2009).</li>
<li>Leinders-Zufall, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+pheromone+detection+by+mammalian+vomeronasal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive pheromone detection by mammalian vomeronasal neurons.</a> Nature. 405, 792-796 (2000).</li>
<li>Kato, H. K., Chu, M. W., Isaacson, J. S., Komiyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+sensory+representations+in+the+olfactory+bulb%3A+modulation+by+wakefulness+and+experience%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Dynamic sensory representations in the olfactory bulb: modulation by wakefulness and experience.</a> 76, 962-975 (2012).</li>
<li>Meeks, J. P., Arnson, H. A., Holy, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Representation+and+transformation+of+sensory+information+in+the+mouse+accessory+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Representation and transformation of sensory information in the mouse accessory olfactory system.</a> Nature. 13, 723-730 (2010).</li>
</ol>

יש הסופרים אין קונפליקטים משמעותיים של ריבית לחשוף.

Vivo לשעבר הכנת VNO-AOB המתואר בפרוטוקול זה היא אלטרנטיבה יעילה להרדמת in vivo 5-7 ופרוסה חיות חריפה 17 ניסויים של תפקוד AOB. בניגוד לניסויי פרוסת AOB חריפים, שגם חושפים את רכיבי מעגל עבור קלטות אלקטרו אופטיות, הכנה זו שומרת על כל afferents החושית וקשרי התוך AOB. למרות שיכול להיות גם אמר את זה בהרדמה בגישות vivo, נוכחותם של חומרי הרדמה בהכרח משנה את התפקוד עצבי, איזון מעכב / כלומר מעורר, שהוא חיוני לעיבוד מידע ובמעגלי ריח אחרים <sup...

עיבוד חושי במוח היונקים בדרך כלל משתרע על פני מעגלים עצביים הדדי המחובר מרובים, כל אחד מהם תמציות תכונות מסוימות מקלט חושי. במסלולים חושיים, עיבוד מידע מוקדם הוא חיוני לתפיסה והתנהגות נורמליות. במערכת ההרחה האבזר (AOS), הנורה חוש הריח האבזר (AOB) היא המעגל העצבי העיקרי המקשר את הפריפריה החושית למבנים במורד הזרם שמכתיבים את איזון ההורמונלי 1,2, תוקפנות 3, ועורר 4. ככזה, עיבוד מידע בתוך מעגל זה קשור מאוד לשינויים בהתנהגות בעלי חיים. הנורה חוש הריח האבזר ממוקמת בעכברים וחולדות בהיבט גב / הזנב / האחורי של הנורה העיקרית חוש הריח (MOB) מתחת הצפוף, vascularized סינוס rhinal. AOB מקבל עצבוב מביא מהאקסונים של תאי עצב ההיקפי vomeronasal החושי (VSNs) שמתגוררים באיבר vomeronasal (VNO), smal<html> צינור עיוור הסתיים ליטר בחוטם הקדמי בדיוק מעל החיך הרך. אקסונים אלה חוצים את הסדין העדין של רקמה במחיצה בגבול המדיאלי של מעברי האף. מספר מחקרים בחנו תגובות עצביות AOB למקורות של ריחות AOS (כגון שתן עכבר) in vivo באמצעות עכברים מורדמים 5-7 או בעלי חיים באופן חופשי, לחקור 8. הגבורה הרדימה במחקרי vivo המעורבים (א) tracheotomies כדי להבטיח הרדמה עמוקה ולמנוע את השאיפה של גירויים נוזליים 5-7, (ב) גירוי של גנגליון האוהד צוואר הרחם 6 או cannulation הישיר של איבר vomeronasal 5,7 להציג את ריחות בלתי נדיף ו (ג) craniotomies עם או בלי כריתת אונה קדמית כדי לאפשר קידום אלקטרודה לתוך AOB 6. ער / מתנהג מחקרים 8-10 השתלה כירורגית מעורבת של דיסק קשיח זעירה. לסיכום, פרדיגמות ניסוי אלה הן רבות עוצמה, אבל קשות מאוד ולעתים קרובות דורשות הרדמה. ss = &quot;jove_content&quot;&gt; מעניין לציין, כי מספר מחקרים ניסו לשמור על מבנים חושיים ומעגלים עצביים במורד הזרם בחיים מחוץ לגוף (ex vivo) בהצלחה מסוימת 11-15. בגלל הקשרים בין VNO וAOB יישארו ipsilateral, ובגלל הרקמה במחיצה קו האמצע יכולה להיות חשופה לsuperfusate מחומצן בחצי כדור בודד, בקשנו לפתח vivo לשעבר גישה כזו חד אונה לבודד מבנים אלה תוך שמירה על הקישוריות התפקודית שלהם. הצלחנו לאחרונה בהשגת מטרה זו 16. הכנה זו שומרת VNO וAOB החיים ותפקודיים מחובר לפחות 4 שניהם - 6 שעות, כי שניהם אקסונים (יחד הרקמות רכות במחיצה קו האמצע) וAOB הם רדודים יחסית &lt;600 מיקרומטר תכונות שאינן נגישים לsuperfused מלאכותי נוזל השדרתי מחומצן ( aCSF). vivo לשעבר הכנת VNO-AOB זה מאפשרת כניסתה של גירויים מבוקרים לתוך VNO באמצעות צינורית דקה, וגישה ויזואלית ישירה לAOB הקטן למיקום האלקטרודה ממוקד ו / או מיקרוסקופ פלואורסצנטי החי. בשיטה זו יש יתרון אם אחד רצונות ללמוד מעגלים אלה בהיעדר חומרי הרדמה. בגלל גישה זו מנתקת קשרי צנטריפוגלי, הוא לא מתאים גם לפניות לאפנון צנטריפוגלי של תפקוד AOB. Vivo לשעבר הכנת VNO-AOB קשה ללמוד, אבל השיג פעם אחת מייצר פלטפורמה אמינה שעליו לחקור את הארגון במעגל, עיבוד מידע, ופלסטיות עצבית במעגל החושי רב עוצמה הזה.

<table><tbody><tr><td>מספריים ישרים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14002-14</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td> - <td>כלי מדע עדינים</td><td>ישרים 14060-10</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>- כלי מדע עדינים</td><td>מעוקלים 14061-10</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים של אדסון</td> כלי <td>מדע עדינים</td><td>11006-12</td><td></td></tr> <tr><td># 3 ידית אזמל</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>#11 להבי אזמל</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>3120030</td><td></td></tr><tr><td>ישר פלדת פחמן סכיני גילוח</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>35 מ"מ צלחת פטרי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-772-21</td><td></td></tr><tr><td>תא דיסקציה</td><td>מותאם אישית&nbsp;</td><td>לא ישים</td><td>ראה קרש פלסטיק <חזק>איור 1</חזק></td></tr><tr><td>Delrin 0.6 ס"מ x 1.5 ס"מ x 0.1 ס"מ</td><td>מותאם אישית&nbsp;</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Dow Corning סיליקון שומן ואקום</td><td>פישר מדעי</td><td>146355D</td><td></td></tr><tr><td>#5 מלקחיים,</td><td>כלים מדעיים עדינים</td> לסטודנטים <td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>#5 מלקחיים, טיפ ביולוגי</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>#5 מלקחיים,</td><td>כלים מדעיים עדינים</td> לסטודנטים <td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Vannas מספריים אביב</td><td>כלים</td> <td>מדעיים עדינים15000-08</td><td></td></tr><tr><td>1/16 אינץ' זכר Luer</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45505-00</td><td></td></tr><tr><td>1/16 אינץ' צינורות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-171-129</td><td></td></tr><tr><td>שני טון אפוקסי</td><td>Grainger</td><td>5E157</td><td></td></tr><tr><td>ValveBank ערכת זלוף בלחץ</td><td>AutoMate Scientific</td><td>09-16</td><td></td></tr><tr><td>בקר דיגיטלי/ידני ValveLink</td><td>AutoMate Scientific</td><td>01-18</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>שונים</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>שונים</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 dihydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>שונים</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 hexahydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>different</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>שונים</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>various</td><td></td></tr><tr><td>myo-inositol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>different</td><td></td></tr><tr><td>Na-pyruvate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>different</td><td></td></tr><tr><td>Na-ascorbate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr> different <tr><td>HEPES buffer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>different</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>שונים</td><td></td></tr></tbody></table>

ex vivo הכנות של הנורה vomeronasal האיברים ואבזר חוש הריח הפגועה

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

מערכת עכבר חוש הריח אבזר (AOS) היא מסלול חושי מיוחד לאיתור ריחות בלתי נדיף חברתיים, פרומונים, וkairomones. המעגל העצבי הראשון במסלול AOS, הנקרא הנורה חוש הריח האבזר (AOB), ממלא תפקיד חשוב בקביעת התנהגויות מיניות אופיינית כמו תוקפנות והזדווגות טריטוריאליות. מעגל זה קטן (&lt;1 מ&quot;מ 3) הוא בעל היכולת להבחין מדינות התנהגותיים ייחודיות, כגון מין, מתח, ולחץ מרמזי chemosensory בהפרשות והפרשות של בני מין. בעוד הארגון הקומפקטי של מערכת זו מציג הזדמנויות ייחודיות להקלטה מחלקים גדולים של המעגל בו זמנית, החקירה של עיבוד חושי בAOB נותרת מאתגרת, בעיקר בשל המיקום בניסוי הנחות שלו במוח. הנה, אנחנו מדגימים נתיחה רב שלבים שמסירה את AOB ללא פגע בתוך אונה אחת של גולגולת העכבר הקדמית, והשאיר להתחבריונים לשני נוירונים vomeronasal ההיקפי חושיים (VSNs) ומעגלים עצביים המקומיים בשלמותה. ההליך חושף את פני השטח AOB לכוון בדיקה חזותית, בהנחיית אלקטרו והקלטות אופטיות מרכיבי מעגל AOB בהיעדר חומרי הרדמה. עם החדרת צינורית דקה לתוך איבר vomeronasal (VNO), אשר בתי VSNs, אפשר ישירות לחשוף את הפריפריה לריחות חברתיים ופרומונים בעת הקלטת פעילות במורד הזרם בAOB. הליך זה מאפשר לבירורים מבוקרים לעיבוד מידע AOS, אשר יכול לשפוך אור על מנגנונים המקשרים חשיפת פרומון לשינויים בהתנהגות.

השגת הצלחה עם הכנה זו דורש תרגול רב, ויש לו כמה שלבים שבו היא יכולה להיכשל. יש לצפות לדורשים ניסיונות רבים בעבר להשגת הצלחה. חדר הנתיחה המותאמת אישית נדרש להשלמה מוצלחת של פרוטוקול זה, ויש לקבל לפני תחילת השלבים מאוחר יותר של הניתוח. עיצוב החדר מוצג באיור 1 הוא מספיק לצורך זה, ויכול להיות עשוי מפלסטיק זול יחסית עם דרישות עיבוד מינימליות. אם אחד חסר את היכולת לייצר תאים כאלה, ניתן להתייעץ חברות עיבוד מקומיות או באינטרנט ותוכלנה לבנות את החדר תמורת תשלום. <p cla...

הנורה עכבר חוש הריח אבזר (AOB) כבר קשה ללמוד בהקשר של קידוד חושי. הנה, אנחנו מדגימים נתיחה שמייצרת vivo הכנה לשעבר שבו נוירונים AOB יישארו תפקודי מחוברים לתשומות ההיקפית שלהם, ומקלים על מחקרים בתחום עיבוד מידע של פרומונים העכבר וkairomones.

Ex Vivo הכנות של הנורה Vomeronasal האיברים ואבזר חוש הריח הפגועה

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לייצר תכשיר ex vivo של איבר האף של העכבר המחובר פונקציונלית, או VNO, נורת ריח אביזר או OB. זה מושג על ידי ביצוע תחילה דיסקציה גסה של גולגולת העכבר כדי לבודד חצי כדור יחיד של החוטם ופקעת הריח. בשלב השני, אקסוני ה-VNO העדינים ו-OB נחשפים דרך דיסקציה משנית בתא זלוף רקמות. לבסוף, מוחדרת צינורית דקה ל- VNO שדרכה ניתן להכניס את הריח והגירוי.בסופו של דבר, ניתן להשתמש בהקלטות אלקטרופיזיולוגיות כדי למדוד את הפעילות העצבית בתוך ה-A OB במהלך גירוי ה-VNO. היתרון של טכניקה זו על פני טכניקות קיימות כמו אלקטרופיזיולוגיה של פרוסות מבחנה, הוא שבטכניקה זו, איבר החישה והמעגלים העצביים במורד הזרם נשארים מחוברים מבחינה תפקודית. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שישנם שלבי דיסקציה עדינים רבים שקשה ללמוד, ומכיוון ששגיאות בכל אחד מהשלבים הללו עלולות לגרום לדיסקציה כושלת כדי להתחיל את הדיסקציה הראשונית, השתמש תחילה במלקחיים של Addin כדי להסיר את העצמות הקודקודיות והקדמיות של גולגולת העכבר, תוך הקפדה לא ליצור מגע עם נורות הריח.לאחר מכן, השתמשו באזמל כדי לבצע חתך עטרה דרך האונה הקדמית, שני מילימטרים צמודים לסינוסים, ואז הסירו את החתך במוח. השתמש במספריים ישרים כדי להסיר את היבטי הקיפוד החשופים של הגולגולת הגחונית, ולהשאיר את הסינוסים ואת רקמת העצבים הנותרת. הסר את הקשת הז

ex-vivo-preparations-intact-vomeronasal-organ-accessory-olfactory

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מערך Multielectrode (MEA) הקלטות לספק שיטה ללימוד את הפעילות החשמלית של אוכלוסיות גדולות של נוירונים. כאן, אנו מציגים את הפרטים של הכנה MEA להקליט האפיתל עכבר vomeronasal ובמקביל מגרה את הרקמות.

מערך Multielectrode הקלטות של האפיתל Vomeronasal

בעכברים, היכולת לזהות פרומונים מתווכת בעיקר על ידי האיבר vomeronasal (VNO). כאן, רקמה חריפה פרוסה הכנת VNO לביצוע הדמיה סידן מתואר. גישה זו מאפשרת פיזיולוגיים תצפיות subpopulations ו / או נוירונים בודדים ברקמה חיה נוח זיהוי קולטן ליגנד.

הדמיה פרומון חישה ב תכשיר Vomeronasal עכבר רקמות חריפה Slice

האיבר הוומרו-נזלי (VNO) מזהה אותות כימיים בתוך-מיניים המעבירים מידע חברתי ורבייתי. ביצענו ניסויי דימוי Ca2+ באמצעות עכברים טרנסגניים המבטאים G-CaMP2 ברקמת ה-VNO. גישה זו מאפשרת לנו לנתח את דפוסי התגובה המורכבים של נוירוני הוומרו-נזל למספר רב של גירויי פרומונים.

התגובות הדמיה העצבית ההכנות Slice של איברים Vomeronasal הבעת חיישן סידן מקודד גנטית

סרטון זה מתאר את הבידוד של איבר vomeronasal עכבר (VNO) והכנת רקמות עבור חתך ויברטום. חלקים משמשים לאפיון התכונות הביופיזיות והפיזיולוגיות של קבוצה מסוימת של נוירונים חושיים.

הכנת איבר Vomeronasal עכבר עבור חתך Vibratome

סרטון זה מדגים הקלטה אלקטרופיזיולוגית של נוירונים חושי ריח (OSNs) בעכברים באמצעות טכניקת מהדק טלאי מחורר. אפיתל הריח, המכיל OSN עם קולטני ריח מתויגים פלואורופור, מבודד מעכבר ומאובטח בתא הקלטה. פיפטת הקלטה מהודקת לידית הדנדריטית של OSN, וניסטטין בתוך הפיפטה מנקב את הממברנה כדי ליצור קישוריות חשמלית עם התא. לבסוף, פיפטה נוספת משמשת להעברת ממריץ ריח, והפעילות האלקטרופיזיולוגית של התא המתוקן נרשמת.

רישום טלאי מהדק מחורר של נוירונים חושי ריח בעכברים

סרטון הפרוטוקול מתאר הקמת מהדק טלאי של תא שלם להקלטה אלקטרופיזיולוגית מנוירוני החישה של איבר הוומרונסאל (VNO) בעכברים. פרוסת VNO קורונלית עם נוירונים חושיים המסומנים באופן פלואורסצנטי ממוקמת במערך הקלטה. תא עצב מסומן מתוקן עם פיפטת הקלטה בתצורה של תא שלם לרישום אלקטרופיזיולוגי בתגובה לגירויים כימיים.

הקמת מהדק טלאי לכל התא להקלטה אלקטרופיזיולוגית מנוירונים חושיים Vomeronasal

שיטה ידנית פירוק עצמות אפקטיבית להכין רקמות האף מאוס שלמות עם ארגון האנטומי משומר

ניתוח התכונות הפיזיולוגיות של נוירונים חושי ריח עדיין מתמודד עם מגבלות טכניות. כאן אנו מתעדים אותם באמצעות מהדק טלאי מחורר בהכנה שלמה של אפיתל הריח בעכברים ממוקדי גנים. טכניקה זו מאפשרת לאפיין את תכונות הממברנה ותגובות לליגנדים ספציפיים של נוירונים המבטאים קולטני ריח מוגדרים.

הקלטה מחוררת תיקון מהדק של עכבר עצב סנסורי חוש הריח בneuroepithelium שלמים: ניתוח פונקציונלי של נוירונים הבעת קולטן odorant מזוהה

כאן, אנו מתארים גישה פיזיולוגית המאפשרת זיהוי וניתוח מעמיק של אוכלוסייה מוגדרת של נוירונים חושיים בפרוסות רקמה קורונלית חריפות של האיבר הוומרונזאלי של העכבר באמצעות רישומי מהדק טלאי של תא שלם.

מעמיק פיסיולוגי ניתוח של אוכלוסיות תאים מוגדרות ב אקוטי רקמות פרוסות של איברי עכבר vomeronasal

חוש הריח נוירונים חושיים מבטאים מגוון רחב של מולקולות מיון האקסון להקים מעגלים עצביים נאותים. פרוטוקול זה מתאר שיטת מכתים immunohistochemical לדמיין ביטויים קומבינטוריים של מולקולות מיון האקסון ב טרמיני האקסון של נוירונים חושית חוש הריח.

Quadunple Immunostaining של הנורה חוש הריח עבור ויזואליזציה של חוש הריח חושפת אקסון מולקולרית קודי זהות

מאמר זה מספק פרוטוקול יעיל לדיסקציה ודיסוציאציה של אפיתל הריח של עכברים לצורך ריצוף RNA חד-גרעיני.

דיסקציה ודיסוציאציה מהירה של אפיתל הריח של העכבר למתלים חד-גרעיניים

למד הכנה אקס ויו של הנורה Vomeronasal והאיברים המחוברים ל-AOB בעכבר. שיטה זו מאפשרת מדידות אלקטרופיזיולוגיות מדויקות של תגובות עצביות לפירומונים וקיירומונים.

Ex Vivo הכנות של הנורה Vomeronasal האיברים ואבזר חוש הריח הפגועה

גלה סרטונים נוספים