כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

מודל העכבר של פגיעה חוזרת באיסכמיה כלייתית המתואר כאן מורכב מכריתת כליה ימנית המספקת רקמת בקרה והידוק של פדיקל הכליה השמאלי כדי לגרום לאיסכמיה הגורמת לפגיעה כלייתית חריפה. מודל זה משתמש בגישת לפרוטומיה בקו האמצע כאשר כל השלבים מבוצעים באמצעות חתך אחד.

במאמר זה אנו מתארים מודל עכברי של פגיעה כלייתית חריפה הנגרמת על ידי פגיעה חוזרת באיסכמיה, ונדגיש כיצד זה יכול להיות מודל שימושי מאוד הן של פגיעה מולדת בכליות, אך גם של התחדשות הכליה. קריקטורה סכמטית זו מציגה את כלי הדם הגדולים והכליות יחד עם כליות ושופכנים. לאחר לפרוטומיה בקו האמצע, השופכן הימני נקשר ומבוצעת כריתת הכליה הימנית.

עורק הכליה השמאלי והווריד מהודקים על ידי מהדק טראומטי, ולאחר תקופה מסירים את המהדק ומחזירים את זלוף הכליות. הנה ייצוג של ניסוי טיפוסי. רקמת כריתת הכליה הימנית משמשת כרקמה מבוקרת שימושית.

שלי בדרך כלל מוקרבים בנקודת הזמן של 24 שעות כדי לחקור פגיעה כלייתית חריפה. ניתן להעריך את תפקוד הכליות באמצעות קריאטינין בפלזמה או חנקן אוריאה בדם. ניתן להעריך את הרקמה הן לפציעה כמו בנמק צינורי חריף, אך גם להתחדשות, הבולטת יותר בנקודות זמן מאוחרות יותר.

מאפיין חשוב מאוד של מודל זה הוא שניתן להשתמש בו בעכברים בגילאים שונים, בזנים שונים, וגם בעכברים זכרים ונקבות כאחד. כאן אנו רואים עכבר B זכר בן שמונה שבועות שעבר הרדמה עם זריקה תוך-צפקית של קטמין, הידרוכלוריד ומיין. אזור הניתוח גולח ולאחר מכן עבר חיטוי באמצעות תמיסת כלורהקסידין מדוללת.

לאחר מכן, העכבר הונח על כרית כירורגית מחוממת עטופה סטרילית במצב שכיבה כאשר הגפיים העליונות והתחתונות מקובעות לרפידה באמצעות סרט דבק נמוך. בשלב זה מורחים משחת עיניים למניעת התייבשות הקרניות ומשככי כאבים ניתנים באמצעות הזרקה תת עורית של בופרנורפין הידרוכלוריד. ההליכים המבוצעים באמצעות מכשירים כירורגיים סטריליים לחיטוי ממוקמים בהישג יד.

בשדה כירורגי סטרילי, המפעיל ילבש חלוק סטרילי, מסכה וכפפות, ואם מבוצעת סדרת ניתוחים, יש לבצע כל הליך עם מכשירי חיטוי סטריליים באמצעות מספריים להפרדת רקמות. נעשית לפרוטומיה בקו האמצע. העור מופרד בצורה בוטה מהצפק כדי לאפשר קלות על העור וסגירת הצפק.

מאוחר יותר לאחר מכן, נעשה חתך לאורך האלבה הליניארית באמצעות מספריים או אזמל. מפסק קוליברה מוחדר לחתך והעכבר מכוסה בווילונות סטריליים. המעיים נעקרו ימינה וכוסו בלחות ונקבים כדי לחשוף את הכליה והשופכן הימניים.

כפי שמוצג כאן, השלב הראשון של כריתת הכליה הימנית הוא בידוד וחלוקה של השופכן הימני. השופכן הימני מבודד באמצעות מלקחיים זוויתיים ונקשר פעמיים באמצעות שישה תפרים קלועים משי לפני החלוקה. כפי שמוצג בסרטון זה, רקמת החיבור לאורך הצד הגבי של הכליה הימנית מנותחת בצורה בוטה עד לעורק הכליה והווריד.

ברגע שעורק הכליה והווריד נגישים, מלקחיים מחליקים בזהירות מתחתיהם, כדי ליצור תעלה שתאפשר ליישם קליפ המוסטטי. כאן ניתן לראות את הקליפ ההמוסטטי מוחל וזה ימנע כל דימום מכלי הכליה החתוכים. לאחר הליך כריתת הכליה, עורק הכליה והווריד החסומים מחולקים קרוב לכליה, אשר מוסרים לאחר מכן.

ניכר אובדן קל של דם שמקורו בכליה וזה מוסר באמצעות ניצני צמר גפן מעוקרים. הרקמות המחוברות קדמית ואחורית לעורק הכליה השמאלי והווריד מנותחות בצורה זהירה. תעלה מתחת לכלי הכליה השמאליים נוצרת באופן דומה לזה המתואר עבור כריתת הכליה הימנית.

איסכמיה כלייתית נגרמת לאחר מכן על ידי מריחת קליפ מיקרו צלופן כדי לחסום הן את עורק הכליה והן את הווריד. ניתן לאשר חזותית את האיסכמיה המוצלחת על ידי התכהות אחידה הדרגתית של הכליה. לאחר השראת איסכמיה, מסירים את המחזיר וסוגרים את הצפק בתפר יחיד.

לאחר מכן מניחים את העכבר מיד על שמיכה הומאו עם TER רקטלי המחובר ליחידת בקרה כדי להבטיח שטמפרטורת הגוף נשמרת על 37 מעלות למשך הזמן הנדרש של איסכמיה. לאחר תקופת האיסכמיה, המיקרו קליפס נחשף ומוסר מיד לאחר הסרת הקליפ, הכליה תעבור במהירות מסגול כהה לצבע ורוד בריא המעיד על רפרפוזיה מוצלחת לאחר החלפה זהירה של המעיים. הצפק נתפר באמצעות שישה תפרי משי קלועים.

לאחר מכן סוגרים את העור באמצעות קליפסים מתכתיים ויוד על אזור הניתוח כדי למזער את הסיכון לזיהום לאחר הניתוח. ההרדמה מתהפכת חלקית על ידי מתן תת עורי של aamaz. כל ההידרוכלוריד והנוזלים ניתנו על ידי הזרקה תת עורית של מיל אחד של מי מלח חמים וסטריליים רגילים.

לאחר מכן העכברים מנוטרים בקפידה עד שהם חוזרים להכרה, נראים ערניים ומסוגלים לכתוב את עצמם לחים וניתן לתת להם מזון כדי לעודד צריכת נוזלים. העכברים מורשים להתאושש בקופסה מחוממת שנשמרת בטמפרטורה של 29 מעלות צלזיוס הממוקמת בסביבה שקטה למשך 24 שעות לניסויים ארוכי טווח. משככי כאבים מתמשכים ניתנים וקליפס העור מוסר שבעה ימים לאחר הצגת הניתוח.

הבא הוא נתונים המצביעים על הפגיעה התפקודית והמבנית המתרחשת בביופסיה. עכברים הקריבו 24 שעות לאחר איסכמיה כלייתית. תפקוד הכליות מוערך בדרך כלל על ידי מדידת קריאטינין בפלזמה או בסרום או חנקן אוריאה בדם.

הגרפים מצביעים על עלייה באי ספיקת כליות עם עלייה במשך משך האיסכמיה. מבנה הכליה נבדק על ידי היסטופתולוגיה על קטעי רקמה משובצים של פיילין המוכתמים ב-H ו-E או PAS. מערכת בינארית פשוטה אומצה כדי להבקיע נמק צינורי חריף או TN בפס החיצוני של המדולה החיצונית של הכליה על בסיס התא.

מורפולוגיה ושלמות תאים מוגדרים כברי קיימא עם תא בריא, חד-שכבתי או נמק אם התאים משובשים או הולכים לאיבוד. מספר החצוצרות הנמקיות מתבטא לאחר מכן כאחוז מהמספר הכולל של החצוצרות בשדה. כפי שהנתונים הגרפיים ממחישים, איסכמיה כלייתית גורמת לנמק חצוצרות חריף משמעותי בכליות איסכמיות בהשוואה לביקורת שלא נפגעה.

הנתונים הבאים ממחישים את ההתחדשות המתרחשת במשך שבעה ימים לאחר איסכמיה כלייתית בעכברי FVB זכרים בני שמונה עד 10 שבועות. תפקוד הכליות מתאושש בהדרגה במהלך שבעה ימים לאחר איסכמיה, הן קריאטינין בפלזמה והן אוריאה בדם חנקן יורד בהתמדה עם קריאטינין בפלזמה חוזר לרמות הבסיס, מה שממחיש את השיפור בתפקוד הכליות כדי להעריך התחדשות רקמות מבניות לאחר פגיעה איסכמית. מערכת ניקוד נוספת מאומצת בקצרה על בסיס שלמות התא ומספר תאים מוגדרים כבריאים, מחלימים, פצועים או נמקיים.

אלה מבוטאים לאחר מכן כאחוז ממספר הצינורות הכולל. שיטת הניקוד מתוארת בפירוט בפרוטוקול הנלווה. כפי שנתונים אלה ממחישים.

פגיעה ברקמות מתחילה להראות סימני התאוששות שבעה ימים לאחר איסכמיה כלייתית עם מספר מוגבר של חצוצרות המוגדרות כהתפשטות תאים צינורית בריאה היא אינדיקטור חשוב להתחדשות. ניתן להזריק לעכברים BRDU לפני הקרבה ושילוב וביטוי BRDU על ידי חלוקת תאים שכומתו והוערכו על ידי אימונוהיסטוכימיה על קטעי כליה משובצים פטין. התמונות והנתונים הגרפיים מראים התפשטות דרמטית של תאים צינוריים ושילוב BRDU נלווה ביום הרביעי לאחר איסכמיה, אשר פוחתת באופן ניכר ביום השביעי.

מודל העכבר של פגיעה באיחוי איסכמיה כלייתית המוצג כאן משתמש בגישת לפרוטומיה בקו האמצע המאפשרת הן את כריתת הכליה הימנית והן את הידוק הפדיקל הכלייתי השמאלי באמצעות חתך אחד. כמודל לפגיעה כלייתית חריפה, רמה גבוהה של שליטה על חומרת הפגיעה ניתנת על ידי טיטרציה של אורך האיסכמיה. זהו מודל רב תכליתי וישים למגוון רחב של מחקר של המתווכים המולקולריים והתאים של פגיעה כלייתית חריפה והתחדשות רקמות לאחר מכן.

יתר על כן, המעבדה שלנו השתמשה בהצלחה במודל זה במגוון רחב של זני עכברים משני המינים ומגוון גילאים.