Name: כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: למד מודל עכברים לפגיעת כליה חריפה הנגרמת מפגיעת איסכמיה-ריפרפוזיה. השיטה כוללת נפרקטומיה ימנית לבקרה וצביטת עורק ווריד כלייתי שמאלי כדי לחקור מנגנוני פגיעה והתחדשות כלייתיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחקר הנוכחי נתמך על ידי מענקים מ-Kidney Research UK (ST4/2011), קרן קנינגהם (CT11/14) וקרן הצדקה של גברת EA Hogg.

הערה:. ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שהוטלו על ידי בעלי חיים (הליכים מדעיים) Act 1986 נהלים בוצעו באמצעות מכשירים סטריליים (autoclaved) כירורגית וחומרים מתכלים. בעוד המודל העכברי של IRI הכליות מוצג כאן בוצע על זכר 8 שבועות בן עכבר BALB / C זה יכול להתבצע reproducibly על מגוון רחב של זני Murine של שני מינים בגילים בדרך כלל בין 7-15 שבועות, עם בן גיל האופטימלי 8 שבועות. הנתונים שהוצגו בסעיף תוצאות הנציג הושגו משני BALB / ג ועכברי FVB. היישום של מי מלח מחומם משמש כדי לשמור על המעיים ואזור ניתוח לחים אבל זה צריך להיות במעקב צמוד ומינימאלי כבקשה המוגזמת של נוזלים יכול להוביל לartifactual הפחתה של הסרום או הפלזמה רמות קריאטינין, שהוא חשוב קריאת נתוני ניסוי. 1. הכנת בעלי החיים וLaparotomy &lt;ol&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם קטמין הידרוכלוריד (70 מ&quot;ג / קילוגרם) וhydrochloride medetomidine (1 מ&quot;ג / קילוגרם) intraperitoneally ולאשר את עומק ההרדמה על ידי אובדן הרפלקסים למשל קמצוץ הבוהן. משך מטוס הרדמה וכתוצאה מכך הוא 4 שעות. זה מספיק כדי לבצע את ההליך הכירורגי כולו ואין צורך בהרדמה נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר את השיער מסביב לאזור החתך, להבטיח כי האזור נקי משיער פזור, ולטהר את עור הבטן באמצעות פתרון chlorhexidine לדלל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר על משטח מחומם כירורגית במצב שכיבה ולתקן את הגפיים העליונים ותחתונים למשטח באמצעות דבק נמוך נקודת סימון. ודא שהגפיים העליונים נשמרים במצב נורמלי כדי למנוע דחיסת ריאות. לאורך כל ההליך לפקח על העכבר לכוויות תרמיים. במידת האפשר מומלץ שישמש מקור חום לא חשמלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל את hydrochloride עצירות כאבים (0.06 מ&quot;ג / קילוגרם)תת עורי ולהחיל סיכה העין לעיניים כדי למנוע התייבשות של קרנית. משככי כאבים מנוהלים מראש אופרטיבי על מנת לסייע בהתאוששות לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש ברקמה מפריד מספריים או סכין אזמל לעשות חתך פיום בטן קו האמצע ובוטות להפריד את העור מהצפק. זה מאפשר לעור והצפק שנתפרו בנפרד במהלך סגירת פצע. חתך של alba Linea avascular עשוי לתת גישה לחלל הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי ליצור תצוגה ברורה של אזור הניתוח להכניס מפשק ולעטוף את העכבר. </li></ol> 2. חטיבת השופכן הימני וNephrectomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דחף בעדינות את המעיים לכיוון הצד השמאלי של חלל הבטן באמצעות autoclaved ספוגיות כותנה מעוקרת טבולה במלח כדי לחשוף את הכליה ושופכן הימנית. מכסה את המעיים עם וילונות לחים כדי למנוע התייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את השופכן תקין עם מלקחיים זווית. ולקשור את השופכן תקין פעמיים באמצעות 6/0 silתפר k-קלוע. לניסויים ארוך טווח, השתמשו תפרים נספגים לכל ניתוחי הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלקים את השופכן בין התפרים. בעוד צומת vesico-ureteric צריכה למנוע משתן דולף לתוך הצפק משלפוחית ​​השתן השופכן גבעול כאמצעי הגנה מפני כל דליפה לאחר הניתוח במהלך ניסויים לטווח ארוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאפשר גישה קלה יותר בעת ביצוע כריתת הכליה הימנית, דחף בעדינות את הכבד וימינה באמצעות מקלון צמר גפן טבולה ולהחזיק במקום בעזרת גזה לחה כדי לחשוף את עורק הכליה הימני ווריד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בוטות לנתח את רקמת חיבור ושומן לאורך ההיבט המדיאלי של הכליה הימנית ככל עורק הכליה הימני ווריד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליצור ערוץ מתחת לעורק הכליה וריד על ידי הזזה בזהירות את המלקחיים הזווית מתחת לכלי הדם. מדריך המלקחיים מתחת עם הטיפים סגורים ולהסיר בעדינות עם הקצוות הפתוחים כדי להקל על היווצרות של הערוץ.<html></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 2.6 עד קצות המלקחיים גלויים דרך רקמות חיבור בדיוק מעל העורק ווריד הכליה. ברגע שנראה לעין לשפשף בעדינות את קצות המלקחיים נגד העצות של קבוצה נוספת של מלקחיים זווית לשבור את רקמת חיבור בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם עורק הכליה וריד בבירור נגיש הם יכולים להיות סתם את החברה. מחליקים בזהירות מלקחיים זווית מתחת לעורק הכליה ווריד עם הטיפים סגורים. פעם במקום לפתוח את קצות המלקחיים ולהנחות את המוליך קליפ עוצר דמום בין הטיפים ותקיפות להחיל קליפ עוצר דמום אל עורק הכליה וורידים קרוב לכליה. לחלופין העורק ווריד הכליה ניתן ligated באמצעות תפר 6/0 קלוע משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלקים את העורק החסום כליות ווריד קרוב לכליות, אשר כעת ניתן להסיר עם כל רקמת חיבור חסיד שנותרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל גזה משמשת להחזיק את הכבד ולהחליף את המעיים עם צמר גפן. </li></ol>&gt; 3. איסכמיה כליה שמאלית וreperfusion <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דחף בעדינות את המעיים לכיוון צד ימין של חלל הבטן עם צמר גפן על מנת לחשוף את הכליה ושופכן עזבה ולכסות עם וילונות לחים. במידת צורך יכול להיות מוסח הלבלב עם גזה לחה כדי לאפשר גישה קלה יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש לנתיחה בוטה לשבור בעדינות רקמות חיבור קדמית ואחוריות לעורק הכליה השמאלי ווריד, ולאחר מכן ליצור ערוץ מתחת כלי באופן דומה לזה שתואר באגף הימני ושופכן Nephrectomy צעד 2.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום לאיסכמיה של הכליה השמאלית ידי החלת קליפ serrafine מיקרו על העורק ווריד הכליה. איסכמיה מוצלחת ניתן לאשר באופן חזותי על ידי מחשיך אחיד הדרגתי של הכליות. כלי דם בנוסף לעורק הכליה השמאלי והווריד עשויים לעתים לספק את הכליות. אם הוא קיים, כלי דם נוספים אלה יהיו גם צריכים להיות occluded באמצעות קליפים serrafine מיקרו על מנת בהצלחהלגרום לאיסכמיה של כל הכליה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את המעיים ובזהירות להבטיח כי אין פיתולים חדים שעלולות להוביל לתוצאות מתפשרות איסכמיה של המעיים. באופן זמני לסגור את הצפק עם תפר אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות האינדוקציה איסכמיה מקום באופן מיידי את העכבר על שמיכת homeothermic עם תרמיסטור רקטלית צורף ליחידת בקרה שתשמור על טמפרטורת הגוף על 37 מעלות צלזיוס למשך המבוקש לאיסכמיה. כדי להגדיר את האורך המתאים של איסכמיה דרושה כדי לגרום למידה הרצויה של פגיעה בכליות ואי ספיקת כליות מומלצת שטיטרציה להתבצע עבור כל זן ומפעיל כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זמן קצר לפני תום תקופת איסכמי מחדש לפתוח את הצפק ובזהירות למקם את המעיים כדי לאפשר גישה למהדק ולהציג את הכליות. ההחדרה של מפשק, כפי שניתן לראות בסרטון, אין צורך ובוצעה אך ורק למטרות פרזנטציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את CLמגבר לאחר תקופה של איסכמיה הגיע למסקנה. מייד לאחר הסרת הכליה במהירות תשנה את הצבע מחום כהה לורודה כהה בריא מצביע reperfusion המוצלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוב לוודא שהמעיים אינם מעוות לפני סגירת הצפק עם שמיכת תפר באמצעות 6/0 תפר משי קלוע. ואז לסגור את העור באמצעות קליפים עור מתכתיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למזער את הסיכון לזיהום שלאחר ניתוח, להחיל חיטוי כגון תמיסת יוד / אלכוהול לאזור הניתוח. </li></ol> 4. התאוששות שלאחר ניתוח וטיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תת עורי הרדמה חלקית הפוכה עם hydrochloride atipamezole (2 מ&quot;ג / קילוגרם) ולנהל נוזלים עם הזרקה תת עורית של 1 מיליליטר חימם מלח כדי למנוע התייבשות לאחר ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לפקח עכברים עד שהם חזרו להכרתו, מופיע התראה והם מסוגלים לתקן את עצמם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאפשרים עכברים להתאושש בקופסא מחוממת המשיכו ב29 C °, located בסביבה שקטה, ל24 שעות. יהיו לי עכברי יכולת לקויה thermoregulate בשל ההרדמה ולכן חיוני כי הם שוכנו בטמפרטורה גבוהה, כדי לאפשר התאוששות יעילה. יכול להיות גם סיפק מזון טבול לעודד נוזלים וצריכת תזונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור ניסויי התאוששות לטווח ארוך מספקים משככי כאבים מתמשכים ולהסיר סרטוני עור 7 ימים לאחר ניתוח. </li></ol> 5. הערכת פגיעה בכליות פונקציונלית מבנית והתחדשות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דם ניתן לגבות מוריד הזנב במהלך ניסויים או על ידי לנקב לב בעת המתת חסד בסוף הניסוי. למדוד את תפקוד כליות על ידי קריאטינין בסרום, תוך שימוש בשיטת creatinase מבוסס, וחנקן אוריאה בדם (BUN) על מנתח צנטריפוגלי יוכימיים כפי שתואר לעיל 7. תפקוד הכליות של עכברים בריאים נורמלים צריך להיקבע לפני הקמת מודל של אי ספיקת כליות כמו זה יכול להשתנות במידה ניכרת depending על שיטת הניתוח המשמשת לדוגמא את התגובה יפה ושיטות creatinase מבוססות למדידת קריאטינין לתת תוצאות שונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבחון את מבנה כליה על ידי histopathology בסעיפי רקמות פרפין מוטבע כליות מוכתמות בHaematoxylin ו eosin (H &amp; E) או תקופתי חומצה שיף (PAS). ללכוד בין 5-10 תמונות בהגדלה של 200x בתוך הפס החיצוני של מדולה החיצונית (OSOM) לכל עכבר. להעריך את רמת הפגיעה בOSOM כאזור זה נפגע במודל זה משום שהוא פגיע מאוד להיפוקסיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באחת משתי מערכות הניקוד מפורטות להלן כדי למדוד נמק חריף צינוריים (ATN) או התחדשות. מורפולוגיה נציג של הסיווגים בשימוש במערכות אלה מודגמת באיור 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במערכת בינארית פשוטה להבקיע ATN. על הבסיס של יושר סלולארי וסימן מורפולוגיה ולספור tubules כמו גם (מורפולוגיה שלמות תא) קיימא או נמקים (inte תא נפגעיםgrity, מורפולוגיה נורמלית תא או אובדן של תאים). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבטא את מספר צינוריות נמקים כאחוז מהמספר הכולל של צינוריות (tubules נימקי%). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסווג התחדשות באמצעות מערכת אחרת המבוססת על שלמות התא, מורפולוגיה ומספר גרעינים. tubules מארק ולספור בריאים, נמקים, פצוע או מתאושש בהתאם לקריטריונים המפורטים בשלבים הבאים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמו במערכת ATN הניקוד (המפורטת בצעד 5.4) tubules סימן עם תאים נורמלים ללא פגע בריאים כתוך tubules מראה שלמות תא נפגעה, מורפולוגיה של תאים חריג או אובדן תא גלוי צריכה להיות הבקיע כנימקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסווג את הצינוריות כנפצעו אם יש להם ציטופלסמה דליל המכילה כמה גרעינים. בניגוד לכך, לייעד צינוריות המכילות יותר גרעינים עם מורפולוגיה של תאים נורמלים יותר כמחלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביע כל סיווג אבובית כאחוז מהמספר הכולל אבובית. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Kinsey, G. R., Li, L., Okusa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+in+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Exp+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inflammation in acute kidney injury.</a> Nephron Exp Nephrol. 109, (2008).</li>
<li>Wei, Q., Dong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+ischemic+acute+kidney+injury%3A+technical+notes+and+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mouse model of ischemic acute kidney injury: technical notes and tricks.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 303, (2012).</li>
<li>Ferenbach, D. A., Kluth, D. C., Hughes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemeoxygenase-1+and+renal+ischaemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Exp+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Hemeoxygenase-1 and renal ischaemia-reperfusion injury.</a> Nephron Exp Nephrol. 115, (2010).</li>
<li>Ferenbach, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+induction+of+macrophage+hemeoxygenase-1+is+protective+during+acute+kidney+injury+in+aging+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">The induction of macrophage hemeoxygenase-1 is protective during acute kidney injury in aging mice.</a> Kidney Int. 79, 966-976 (2011).</li>
<li>Ferenbach, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage%2Fmonocyte+depletion+by+clodronate%2C+but+not+diphtheria+toxin%2C+improves+renal+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Macrophage/monocyte depletion by clodronate, but not diphtheria toxin, improves renal ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Kidney Int. 82, 928-933 (2012).</li>
<li>Ferenbach, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+expressing+heme+oxygenase-1+improve+renal+function+in+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Macrophages expressing heme oxygenase-1 improve renal function in ischemia/reperfusion injury.</a> Mol Ther. 18, 1706-1713 (2010).</li>
<li>Keppler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+creatinine+determination+in+mice+and+rats%3A+an+enzymatic+method+compares+favorably+with+a+high-performance+liquid+chromatography+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Plasma creatinine determination in mice and rats: an enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay.</a> Kidney Int. 71, 74-78 (2007).</li>
<li>Vinuesa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+involvement+in+the+kidney+repair+phase+after+ischaemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Macrophage involvement in the kidney repair phase after ischaemia/reperfusion injury.</a> J Pathol. 214, 104-113 (2008).</li>
<li>Friedewald, J. J., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+cells+in+ischemic+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Inflammatory cells in ischemic acute renal failure.</a> Kidney Int. 66, 486-491 (2004).</li>
<li>Gandolfo, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxp3%2B+regulatory+T+cells+participate+in+repair+of+ischemic+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Foxp3+ regulatory T cells participate in repair of ischemic acute kidney injury.</a> Kidney Int. 76, 717-729 (2009).</li>
<li>Burne, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+CD4%2B+T+cell+as+a+major+pathogenic+factor+in+ischemic+acute+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Identification of the CD4+ T cell as a major pathogenic factor in ischemic acute renal failure.</a> J Clin Invest. , 1283-1290 (2001).</li>
<li>Burne-Taney, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cell+deficiency+confers+protection+from+renal+ischemia+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">B cell deficiency confers protection from renal ischemia reperfusion injury.</a> J Immunol. 171, 3210-3215 (2003).</li>
<li>Kinsey, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+suppress+innate+immunity+in+kidney+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells suppress innate immunity in kidney ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 20, 1744-1753 (2009).</li>
<li>Li, L., Okusa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%2C+dendritic+cells%2C+and+kidney+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages, dendritic cells, and kidney ischemia-reperfusion injury.</a> Semin Nephrol. 30, 268-277 (2010).</li>
<li>Lin, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+Wnt7b+is+critical+for+kidney+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Macrophage Wnt7b is critical for kidney repair and regeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 4194-4199 (2010).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+macrophage+phenotypes+contribute+to+kidney+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair.</a> J Am Soc Nephrol. 22, 317-326 (2011).</li>
<li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dexamethasone+ameliorates+renal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Dexamethasone ameliorates renal ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 20, 2412-2425 (2009).</li>
<li>Sharples, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+protects+the+kidney+against+the+injury+and+dysfunction+caused+by+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin protects the kidney against the injury and dysfunction caused by ischemia-reperfusion.</a> J Am Soc Nephrol. 15, 2115-2124 (2004).</li>
<li>Gueler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statins+attenuate+ischemia-reperfusion+injury+by+inducing+heme+oxygenase-1+in+infiltrating+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Statins attenuate ischemia-reperfusion injury by inducing heme oxygenase-1 in infiltrating macrophages.</a> Am J Pathol. 170, 1192-1199 (2007).</li>
<li>Delbridge, M. S., Shrestha, B. M., Raftery, A. T., ElNahas, A. M., Haylor, J. L. The effect of body temperature in a rat model of renal ischemia-reperfusion injury. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDelbridge%2C+MS+%22Transplant+Proc%22">Transplant Proc</a>. 39, 2983-2985 (2007).</li>
</ol>

למחברים אין אינטרסים מתחרים או סותרים לחשוף.

IRI כליות הוא גורם חשוב של AKI ללא טיפול ספציפי זמין. מחקר ניסיוני של IRI הכליות היה אינפורמטיבי מאוד עם העבודה קודמת הוכיחה את התפקיד של מקרופאגים, תאים הדנדריטים, לימפוציטים, תאים אחרים תאי T רגולטורים, כמו גם ומגשרים באינדוקציה של שניהם פגיעה חריפה וריפוי שלב 5,8 - 16. בנוסף, IRI כליות הניסוי נעשה שימוש כדי להעריך את ההשפעה של סוכנים טיפוליים שונים 4,17-19. המודל של IRI כליות המפורטים כאן...

פגיעת reperfusion איסכמיה (IRI) היא מצב שכיח לפציעות לאיברים רבים, כולל כליות, לב והמוח. כליות IRI עלול להוביל לפגיעה בכליות חריפה (AKI) בחולים ואין טיפול ספציפי זמין. יש AKI כתוצאה מIRI פתוגנזה מסובכת מעורבת הן תגובת החיסון המולדת ובעלי כושר הסתגלות 1. מודל ניסיוני של IRI הכליות מציע את הפוטנציאל לנתח את התאים ומתווכים מעורבים בפתוגנזה של AKI כמו גם התחדשות הכליות לאחר שמתפתחת במשך ימים שלאחר מכן מפתח. יתר על כן את ההשפעות של סוכנים טיפוליים חדשניים על תהליכי מחלה ניתן להעריך. המטרה הכללית של המודל הניסיוני של IRI כליות מתוארת כאן הוא כדי לגרום לפגיעה בכליות גם תפקודית ומבנית חריפה. חוקרים אחדים מנוצלים מודל שכרוך בגיוס של IRI דו צדדי 2. למרות שמודל IRI כליות דו צדדי הוא שימוש, רן חד צדדייש מודל אל IRI היתרון של כריתת כליה תקין המתבצעת בזמן הניתוח. רקמת כריתת הכליה הימנית משמשת רקמת שליטה יקר כמו במחקרים שכללו שלב מקדים שגם גורם או מדכא את הביטוי של גן או חלבון. לדוגמא, יש לנו להשתמש במודל זה כדי להעריך את ההשפעות נפשית מראש של arginate heme (HA) הזרקת 24 שעות לפני IRI כליות 3. האינדוקציה המוצלחת של אנזים heme-oxygenase-1 cytoprotective (HO-1) על ידי HA לפני IRI אושרה ברקמת שליטת כריתת הכליה הימנית 4. HA מופחת IRI כליה בעכברים בגיל בחלק באמצעות מנגנון תלוי HO-1. בדומה לכך, יש לנו להשתמש במודל במחקרי דלדול מקרופאג כדי לבחון את התפקיד של מקרופאגים בIRI כליות 5. ניתוח immunohistochemical של רקמת כריתת הכליה תקין יכול לשמש כדי לאשר את היעילות של המתודולוגיה אבלציה. רקמת כריתת הכליה תקין ולכן יכולה לשמש לשניהם לאשר ולכמת את הרמה של induction או עיכוב של המולקולה של ריבית בכל בעלי חיים ניסיוניים בודדים. מודל זה יהיה עניין לחוקרים המשתמשים בתרופות או חומרים אחרים כדי לווסת את הביטוי של גנים או חלבונים וכו &#39;לפני הגיוס של IRI כליות. מחקרים אחרים השתמשו חתכים אגף לגשת לכליות. המודל שתואר כאן משתמש בניתוח בטן קו האמצע אחת כדי לבצע את שני כריתת הכליה תקין ולגרום reperfusion איסכמיה של הכליה השמאלית. גישה ניתוחית זו מספקת הדמיה מצוינת של שדה הניתוח כוללים pedicles הכליות ושינויים בצבע שבאים אחרי הידוק pedicle כליות. הניסיון פורסם עם המודל 4-6 מצביע על כך שהעכברים להתאושש במהירות מהניתוח עם שיעור הישרדות ליד 100%. לבסוף, ניתוח הקינטית של המודל על פני תקופה של 7 ימים עולה כי מודל זה מציג שחזור של שניהם בתפקוד הכלייתי ויושרה צינורי, עםהתפשטות תאים צינוריים משמעותית.

<table><tbody><tr><td>מספריים לרקמות</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14072 - 10</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו-אדסון (שיני חולדה)</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11019 - 12</td><td></td></tr><tr><td>S& T JFA-5bTC מלקחיים - SuperGrip Angled</td><td>Fine Science Tools</td><td>00649-11</td><td></td></tr><tr><td>מפסק Colibri</td><td>Fine Science</td><td>Tools 17000 - 04</td><td></td></tr><tr><td>מוליך מיקרו קליפ</td><td>Fine Science</td><td>Tools 18057-14</td><td></td></tr><tr><td>Micro serrafines&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט Olsen-Hegar</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002 - 12</td><td></td></tr><tr><td>Hemoclip Plus קליפס קשירה קטן</td><td>Weck</td><td>533837</td><td></td></tr><tr><td>מערכת קליפ פצע אוטומטי, 9 מ"מ</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>PY2 52-3748</td><td></td></tr><tr><td>תפר קלוע שחור משי, גודל 6-0</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>723288</td><td></td></tr><tr><td>חום סטנדרטי </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מאט שמיכה Homeothermic & יחידת בקרה</td><td>הרווארד מכשיר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lacri-Lube</td><td>Allergan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetasept Chlorhexidine&nbsp; &nbsp;</td><td>AnimalCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetalar : תמיסת קטמין הידרוכלוריד</td><td></td><td></td><td>100 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>דומיטור: מדטומידין הידרוכלוריד&nbsp;</td><td></td><td></td><td>1 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>וטרינרי: בופרנורפין הידרוכלוריד&nbsp;</td><td></td><td></td><td>0.3 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>אנטיסדאן: אטיפמזול הידרוכוריד</td><td></td><td></td><td>5 מ"ג/מ"ל</td></tr></tbody></table>

כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

פגיעת reperfusion איסכמיה כליות (IRI) היא סיבה שכיחה של ניזק כלייתי חריף (AKI) בחולים וחסימה של זרימת דם כליות הוא בלתי נמנע במהלך השתלת כליה. מודלים ניסיוניים באופן מדויק וreproducibly לסכם IRI כליות הם קריטיים בלנתח את הפתופיזיולוגיה של AKI והפיתוח של סוכנים טיפוליים חדשניים. מוצג כאן הוא מודל של עכברים של IRI כליות שגורם לאקי לשחזור. זו מושגת על ידי גישת laparotomy קו האמצע לניתוח עם חתך אחד ומאפשר גם כריתת כליה תקין המספקת רקמת שליטה והידוק של גבעול הכליה השמאלי כדי לגרום לאיסכמיה של הכליה השמאלית. על ידי ניטור קפדני של עמדת המהדק ואת טמפרטורת גוף בתקופת איסכמיה מודל זה משיג פגיעה תפקודית ומבנית לשחזור. עכברים הקריבו 24 שעות לאחר ניתוח להפגין אובדן תפקוד כליות עם גובה של הסרום או ברמת קריאטינין בפלזמה, כמו גם strucנזק לכליות טוראל עם נמק צינורי חריף מאליו. משפר את תפקוד כליות והפגיעה ברקמות האקוטית פותרת במהלך 7 ימים הבאים IRI כליות כך שמודל זה יכול לשמש כדי ללמוד התחדשות כליות. מודל זה של IRI הכליות נוצל כדי ללמוד את הפתופיזיולוגיה המולקולרית ותאית של AKI, כמו גם ניתוח של התחדשות הכליה שלאחר מכן.

פציעה והתאוששות צינורי עשויות להיות מוערכת על ידי H &amp; E או צביעת PAS של חלקי רקמות הבאים IRI כליות. קשיות ממוקמות בתוך OSOM מסווגים כבריאים, נפגע, נמקים או מחלים על פי מורפולוגיה של תאים, יושרה ומספר גרעינים (איור 1). הפגיעה התפקודית ומבנית במודל זה היא תלויה משך איסכמיה. עלייה הדרגתית בחומרת פגיעה בתפקוד הכלייתי, שהוערכה על ידי קריאטינין פלזמה ו BUN, ניכרה כמשך הזמן של איסכמיה הוא גדל במרווחי 2min (איור 2). פציעה כליות מבנית, המשתמעת מציון AT...

מודל העכבר של פגיעה חוזרת באיסכמיה כלייתית המתואר כאן מורכב מכריתת כליה ימנית המספקת רקמת בקרה והידוק של פדיקל הכליה השמאלי כדי לגרום לאיסכמיה הגורמת לפגיעה כלייתית חריפה. מודל זה משתמש בגישת לפרוטומיה בקו האמצע כאשר כל השלבים מבוצעים באמצעות חתך אחד.

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

במאמר זה אנו מתארים מודל עכברי של פגיעה כלייתית חריפה הנגרמת על ידי פגיעה חוזרת באיסכמיה, ונדגיש כיצד זה יכול להיות מודל שימושי מאוד הן של פגיעה מולדת בכליות, אך גם של התחדשות הכליה. קריקטורה סכמטית זו מציגה את כלי הדם הגדולים והכליות יחד עם כליות ושופכנים. לאחר לפרוטומיה בקו האמצע, השופכן הימני נקשר ומבוצעת כריתת הכליה הימנית.עורק הכליה השמאלי והווריד מהודקים על ידי מהדק טראומטי, ולאחר תקופה מסירים את המהדק ומחזירים את זלוף הכליות. הנה ייצוג של ניסוי טיפוסי. רקמת כריתת הכליה הימנית משמשת כרקמה מבוקרת שימושית.שלי בדרך כלל מוקרבים בנקודת הזמן של 24 שעות כדי לחקור פגיעה כלייתית חריפה. ניתן להעריך את תפקוד הכליות באמצעות קריאטינין בפלזמה או חנקן אוריאה בדם. ניתן להעריך את הרקמה הן לפציעה כמו בנמק צינורי חריף, אך גם להתחדשות, הבולטת יותר בנקודות זמן מאוחרות יותר.מאפיין חשוב מאוד של מודל זה הוא שניתן להשתמש בו בעכברים בגילאים שונים, בזנים שונים, וגם בעכברים זכרים ונקבות כאחד. כאן אנו רואים עכבר B זכר בן שמונה שבועות שעבר הרדמה עם זריקה תוך-צפקית של קטמין, הידרוכלוריד ומיין. אזור הניתוח גולח ולאחר מכן עבר חיטוי באמצעות תמיסת כלורהקסידין מדוללת.לאחר מכן, העכבר הונח על כרית כירורגית מחוממת עטופה סטרילית במצב שכיבה כאשר הגפיים העליונות והתחתונות מקובעות לרפידה באמצעות סרט דבק נמוך. בשלב זה

renal-ischaemia-reperfusion-injury-mouse-model-injury

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מודל רב עוצמה עבור perioperative וביקורתית טיפול הקשור לפגיעה כליות חריפה מוצגת. שימוש hypoperfusion כל הגוף הנגרמת על ידי דום לב אפשר כמעט לשחזר את השינויים היסטולוגית ופונקציונלי של AKI קליניים.

דום לב Normothermic ו החייאה: במודל עכבר של פגיעה איסכמיה reperfusion

אנו מתארים מודלים של פגיעה בכליות הנגרמות איסכמיה reperfusion בינוניות וקשות שבו העכברים עוברים הידוק חד צדדי ואחרי כריתת כליה הנגדית בו זמנית או עיכוב, בהתאמה pedicle כליות. מודלים אלה נותנים באופן עקבי עלייה לפגיעה בתפקוד הכלייתי וסיסטיק לאחר פציעה, אך חומרת פציעה והישרדות תלויות ברקע, גיל וכירורגי ציוד עכבר.

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה כלייתית קשורה לתחלואה ותמותה גבוהה בחולים מאושפזים. כאן אנו מציגים מודל עכבר פשוט ויעיל של פגיעה חד-צדדית באיסכמיה-רפרפוזיה של הכליה ומספקים סקירה רציפה של שינויים פתולוגיים מייצגים שנצפו בכליה.

מודל עכבר יעיל של פגיעה חד-צדדית באיסכמיה-רפרפוזיה של הכליה

מחקר זה ביסס פרוטוקול המתמקד בשכלול טכני של מודל עכברי של איסכמיה כלייתית דו-צדדית - רפרפוזיה לחקר פגיעה חריפה בכליות.

שכלול טכני של מודל עכבר איסכמיה כלייתית דו-צדדית למחקר פגיעה חריפה בכליות

מאמר זה מציג מודל CKD איסכמי המשתמש ב-IRI כלייתי חד-צדדי עם נפרקטומיה נגדית שבוצעה יום לפני איסוף הדגימה; פרוטוקול זה מאפשר הערכה פונקציונלית מבוססת סרום, הישרדות גבוהה ופתולוגיה של CKD ניתנת לשחזור ב-28 ו-42 ימים, ומספק פלטפורמה גמישה למחקרים מכניים והתערבותיים.

מודל העכבר של מעבר ממחלת כליות חריפה לכרונית שנגרם מאיסכמיה כליתית/פגיעה ברפרפוזיה

מאמר זה מתאר שיטה ליצירת פגיעת דחיסת חוט שדרה (SCI) הניתנת לשחזור בעכבר היילוד. המודל מספק פלטפורמה מועילה לחקר מנגנונים של פלסטיות אדפטיבית העומדים בבסיס התאוששות תפקודית ספונטנית.

חוט השדרה עכבר בילוד דגם פגיעה דחיסה

כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של reperfusion איסכמיה מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה. מודל זה של פגיעת איסכמיה-רה-פרפוזיה במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

מאמר זה מתאר הליך גרימת פציעה איסכמיה-רה-פרפוזיה הרשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר בעכברים. פציעת איסכמיה-רה-פרפוזיה רשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר משמשת מודל פתולוגיות אנושי מתאפיין חמצן שנפרץ משלוח מזין ברשתית, המאפשר לחוקרים לבחון מנגנונים הסלולר פוטנציאל וטיפולים למחל אדם של היחידה העצבה וכלי דם ברשתית.

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע&quot;י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

הספורטאים סופגים כמה מאות פציעות מוחיות טראומטיות קלות (mTBI) / זעזוע מוח מדי שנה; עם זאת, את התוצאות של אלה על המוח הוא הבין היטב. לכן, מודל החיות של mTBI יחיד וחוזר על עצמו באופן עקבי משכפל סימפטומים קליניים רלוונטיים מספק את האמצעים לקדם את המחקר של mTBI ו זעזוע מוח.

דגם עכבר של פגיעה בודדת וחזרה קלה של פגיעה מוחית טראומטית

שמורת זרם כלילית (CFR), מוגדרת כיחס של זרימת דם כלילית מירבית לזרימת הדם הכלילית במנוחה. אנו מציגים פרוטוקול להערכת CFR בחולדות באמצעות אולטרסאונד, אשר מציעה את ההזדמנות לחזות גורמי סיכון לב וכלי דם בהעדר מחלה חסימתית כלילית.

הערכה של שמורת זרם כלילית לאחר איסכמיה אוטם שריר הלב Reperfusion בחולדות

למד מודל עכברים לפגיעת כליה חריפה הנגרמת מפגיעת איסכמיה-ריפרפוזיה. השיטה כוללת נפרקטומיה ימנית לבקרה וצביטת עורק ווריד כלייתי שמאלי כדי לחקור מנגנוני פגיעה והתחדשות כלייתיים.

כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

גלה סרטונים נוספים