6 באוקטובר 2014
הסרת עיניים, המכונות גם אנוקלאציה, מספקת אסטרטגיה שימושית ללמוד היבטים של מודלי חוצי חזותיים,, ופלסטיות התפתחותית לאורך מערכת הראייה של יונקים שכן הוא גורם בלתי הפיך חלקית (משקפת) או אובדן ראייה (משקפת) מלא. כאן אנו מתארים גישה לשחזור וברורה מאוד לביצוע באנוקלאציה vivo.
המטרה הכוללת של הליך זה היא להסיר בהצלחה עין מעכבר מורדם בצורה מאוד פשוטה וניתנת לשחזור. זה מושג על ידי תזוזה תחילה של גלגל העין על ידי לחיצה עדינה על הקנתוס עם מלקחיים מעוקלים. השלב השני של ההליך הוא הנחיית המלקחיים מאחורי העין, כדי לתפוס בחוזקה את עצב הראייה.
השלב השלישי הוא ביצוע תנועות מעגליות. כשהיד מחזיקה את המלקחיים, גוף העכבר ינוע באותו כיוון. השלב האחרון הוא להגביר בהדרגה את מהירות התנועות כדי להבטיח התכווצות של עצב הראייה וכתוצאה מכך ניתוק גלגל העין.
בסופו של דבר, ניתן להשתמש בעין כדי לחקור את מסלול הראייה של AFR לאורך על ידי, למשל, חשיפת תהליכי פלסטיות שונים של חסך חושי במוח העכבר. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני השיטות הקיימות, המשתמשות לרוב בתפירה ודיסקציה קהה, הוא ששיטת ה-iation שלנו מבוססת פשוט על כיווץ עצב הראייה, מה שמביא לדימום מינימלי עד ללא דימום וקל מאוד ללמידה. התחל בהרדמת העכבר באמצעות הזרקה תוך צפקית של תערובת של קטמין ומיין במי מלח.
אשר את ההרגעה על ידי בדיקת הרפלקסים של העכבר. צבט את אצבעות הרגליים בעזרת מלקחיים ובדוק אם יש תגובת רפלקס. אם אין תגובה, השתמשו באפליקטור עם צמר גפן ואתנול 70% כדי לנקות את העפעפיים והאזור סביב העין.
אם אין תגובת מצמוץ עין, המשך עם העין בגרעין. הנח את העכבר על משטח יציב, שטוח, חלק ויבש. עקר את קצות המלקחיים המשוננים המעוקלים במעקר חרוזי זכוכית.
גודל הטיפ הטוב ביותר לשימוש הוא 0.5 על 0.4 מילימטרים. לאחר מכן, לחץ בעדינות על הקנתוס עם המלקחיים עד שגלגל העין נעקר מהשקע וניתן להגיע לעצב הראייה. לאחר מכן הנח את המלקחיים מאחורי העין ולחץ בחוזקה והחזק את עצב הראייה כשעצב הראייה אוחז לאט לאט התחל להזיז את המלקחיים במעגלים בכיוון ההתנגדות הנמוכה ביותר.
שמירה על העכבר על שולחן הניתוחים, יש לאבטח את העכבר. הגוף שלו צריך לזוז גם כן. האיצו בהדרגה עד לאחר שבע עד 15 תנועות מעגליות, עצב הראייה מתכווץ וגלגל העין מתנתק.
אם הסיבובים מהירים מדי או שהמלקחיים נמשכים חזק מדי, העצב יישבר בטרם עת והתחנונים יבואו בעקבותיו. התחל בהיפוך ההרדמה. תן לעכבר זריקה תוך-צפקית של aamaz all hydrochloride במי מלח.
לאחר מכן יש לתת תוך שרירי 0.05. יש לתת מיליליטר של משכך כאבים מוכן כמו מלוקסיקם ומשככי כאבים כל 24 שעות. כעת, מרחו משחת עיניים על העין הנותרת כדי למנוע התייבשות של הקרנית.
אם זה היה מיושם לפני הניתוח, זה היה נמרח על השולחן. העבירו את העכבר לכלוב אחיזה, שלטו בטמפרטורת הגוף של העכבר באמצעות פלטת חימום או שמיכה בזמן שהוא מתאושש כאשר בעל החיים חוזר לשליטה מוטורית, העבירו אותו בחזרה לכלוב הביתי שלו. הסרה מוצלחת של העין מאופיינת בהיעדר דימום או כל נזק פיזי נראה לעין לרקמת האורביטל או לארובת העין.
העין הגרעינית צריכה להיות בעלת תכונות של כדור שלם כמו קרנית חלקה וכורואיד. יש לכווץ את עצב הראייה בבסיס הרשתית. אורך העצב הנותר על החיה צריך להראות חתך נקי ואסור לפגוע באזור המוח שמסביב.
ניסוי נערך באמצעות טכניקות אלה ואחריו גילוי של Z 2 68 mRNA על ידי רדיואקטיבי ב-C 2 הכלאה כדי לחשוף פעילות עצבית המושרה חזותית בקליפת המוח. בניגוד לבקרות עם גירוי חזותי, עכברים עם שתי עיניים וגרעין הראו פעילות בסיסית בקליפת המוח הראייתית השמאלית והימנית עקב היעדר מוחלט של קלט חזותי. ככזה, נחשפו הגבולות בין קליפת המוח החזותית לקליפת המוח הלא חזותית.
הוצאה חד-עינית חשפה את שני האזורים המונעים על ידי החד-עינית כהיפואקטיביים בקליפת המוח הראייתית הנגדית לצבע המוסר. אזורים אלה ממוקמים מדיאלית ורוחבית לאזור המשקפת המרכזית. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך פחות מדקה אחת אם היא מבוצעת כראוי.
לכן, הוא מספק שיטה יעילה לבחינת פעילות, פלסטיות או תופעות אחרות במסלול הראייה של אף אוזן גרון.
מאמר זה מציג שיטה פשוטה לביצוע עקירה של העין (enucleation) במודל של עכברים in vivo, המאפשרת לחוקרים לבחון פלסטיות חזותית וחוצת-מודאלית. הטכניקה ממזערת דימומים והיא קלה ללמידה, מה שהופך אותה למתאימה ליישומים ניסויים מגוונים.
עקירה אמינה של העין (ocular enucleation) במודל in vivo בעכברים מאפשרת מחקר בקיבולת גבוהה של פלסטיות מערכת הראייה ומנגנוני חסך חושי, ובכך תומכת בתיקוף יעדים בשלבים מוקדמים בביולוגיה של מערכת העצבים. השחזוריות של השיטה ופשטותה התפעולית מפחיתות את השונות הפרוצדורלית, ובכך מגבירות את הביטחון החזוי בניתוחים המשכיים. יכולת זו רלוונטית באופן אסטרטגי עבור צוותי ביו-פארמה המחפשים מודלים פרה-קליניים חסונים לבחינת הסתגלות עצבית ופלסטיות חוצת-מודליות.
שיטה זו להוצאת עיניים (enucleation) משתלבת ברצף שבין השלב המוקדם של הגילוי למחקרים פרה-קליניים, ומספקת בסיס להפחתת סיכונים מכניסטיים ולאישור יעדים במחקר נוירוביולוגי.