טיפוח של תאי יונקים באמצעות מערכת פניאומטיים Bioreactor יחיד שימוש

המטרה הכוללת של הליך זה היא לגדל כמויות גדולות של תאי יונקים. זה מושג על ידי כיול תחילה של ה-pH והחמצן המומס או ביצוע בדיקות, ולאחר מכן חיטוי ה-pH, ביצוע בדיקות ושרוול בדיקת הטמפרטורה. השלב השני הוא הכנסת הבדיקות והשרוול לתוך הכלי ולמקם את הכלי על הביוריאקטור ולחבר את הפליטה, המסנן, קווי הגז ובדיקת הטמפרטורה.

השלב הבא הוא לחבר את כבלי ה-DO וה-pH ולחבר באופן אספטי את הנשאים הבינוניים והמיקרו הנשאבים לתוך הביוריאקטור. השלב האחרון הוא להפעיל את הבקרים כדי להבטיח שהביו-ריאקטור משיג את מהירות האימפלר, הטמפרטורה וריווי החמצן הרצויים. בסופו של דבר, לאחר חיסון וניטור ממוחשב, ניתן לעבד את התרבית למיצוי וטיהור המוצר הרצוי.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו ביו-ריאקטור מיכל ערבוב רב פעמי, הוא שהביו-ריאקטור של גלגל האוויר קל לשימוש וממזער את הסיכויים לזיהום מיקרוביאלי. בואו נתחיל. כדי להתחיל את הפרוטוקול, היכנס למסך שלום.

לאחר מכן, בדוק את חיישן ה-pH וודא שקצה החיישן מלא בתמיסת אלקטרוליטים. השג אחת עם תמיסת pH ארבע, נוספת עם תמיסת pH שבע ובקבוק כביסה עם מים מזוקקים. לאחר מכן חבר את כבל ה-pH לחיישן ה-pH.

נווט אל הכרטיסיה פעולות בממשק Hello, בחר כיול. לאחר מכן בחר בכרטיסייה PHA וכיול שתי נקודות. הזן את טמפרטורת המאגר לשדה טמפרטורת תמיסת הכיול.

הנח את החיישן בתמיסת pH ארבע לכיול הזן את הערך בשדה האפס. לאחר שהגרף מתייצב, דחף, כייל ושטוף את חיישן ה-pH במים מזוקקים. חזור על הכיול עבור pH 7 ושמור את ההגדרות.

הזן את ערך המאגר בשדה הטווח והמתן עד שהשתל יתייצב. כדי להתחיל חמצן מומס או לבצע כיול. ודא שחיישן ה-DO מחובר למערכת במשך מספר שעות והיה מקוטב בתוך לשונית הכיול, בחר DOA וכיול שתי נקודות.

נתק את חיישן ה-DO. הזן אפס בכרטיסיית האפס והמתן עד שהגרף יתייצב. לפני בחירת כיול אחד, חבר מחדש את חיישן ה-do והזן 100 בשדה הטווח.

כאשר התרשים מתייצב, לחץ על כייל שניים. לאחר מכן שמור את ההגדרות וסגור את התוכנית. לאחר הכיול, הנח את החיישנים ואת הבאר התרמית בשקיות חיטוי ובצע חיטוי למשך 30 דקות ב-121 מעלות צלזיוס ו-15 PSI.

לאחר סיום החיטוי, חטאו את שקיות החיטוי עם 70% אלכוהול איזופרופיל והעבירו את השקיות לארון בטיחות ביולוגי או BSC. לחטא ולהכניס את כלי המגיב לתוך ה-BSC. הסר את האריזה הפנימית ובדוק את הכלי והצינורות לאיתור נזק.

לאחר מכן, התקן את חיישן ה-DO ביציאה השמאלית הקדמית של כלי המגיב ואת הבאר התרמית ביציאה השמאלית האחורית. התקן את חיישן ה-pH ביציאה הקדמית הימנית להתקנה. פתח את מכסה החיישן והשחיל את החיישן קלות לתוך היציאה בחלק העליון של הכלי.

לאחר מכן העבירו את הכלי אל מחוץ ל-BSC. ודא שכבלי חיישן ה-pH וה-DO נמצאים מחוץ לשרוול הכלי ושום דבר לא ממוקם בתוך השרוול. החזק את הכלי כך שאתה פונה לחזית והחלק את רגלי הכלי תחילה לתוך השרוול.

ודא שתחתית הכלי מונחת על תנורי החימום. לאחר מכן הכנס בזהירות את חיישן הטמפרטורה לתוך הכלי התרמי. ובכן. לאחר מכן, הסר את ערכות הצינורות מהשקית.

התאם את קידוד הצבע על הצינור למחברים ולמשאבות המתאימים ביחידת הבקרה של הביוריאקטור. נתב את הוספת המדיה וקווי הדגימה מאחורי חיישן ה-DO והתרמי. ובכן הכנס את הצינור למשאבה המקודדת בצבע בצד שמאל של הביוריאקטור.

חבר את קווי הגז הראשיים והמיקרו. לחץ על מחבר קו הגז הראשי לשקע הגז שלו כדי להתקין את קו הגז הראשי. לאחר מכן סובב את מחבר קו הגז המיקרו בכיוון השעון לתוך יציאת הגז שלו כדי להתקין את קו הגז המיקרו

כדי להתקין את צינורות תנור המסנן, פתח את תנור המסנן ואבטח את צינור מסנן הפליטה ל-uan. ודא שהצינור עובר דרך שני הווים למסנן ויוצא מהתנור. נתב את הקו התחתון דרך הוו בתחתית תנור המסנן וסגור את הדלת.

לאחר מכן חבר את הכבלים לחיישני DO ו-pH. לאחר השלמת ההתקנה, צור חיבור סטרילי באמצעות אביזרי פיתוי בין קו מהדורה בינונית שאינו בשימוש למקור שקית הבקבוק הבינונית. נווט ללשונית הפעולות בממשק Hello.

לחץ על משאבות בקרה, בחר משאבת מדיה ולחץ על המחוון כדי להפעיל את משאבת המדיה. לאחר מכן הוסף 1.5 עד 3.0 ליטר מדיה ולחץ על המחוון כדי לכבות את המשאבה. המערכת מוכנה כעת לשאוב לכור מיקרו-נשאים שהוכנו בעבר

ניתן להוסיף אותם באמצעות שורת חיבור. חבר את בקבוק ה-MICROCAR לקו התוספת המתאים באמצעות מנעול פיתוי סטרילי. הפעל את משאבת התוספת בתוך מסך משאבת הבקרה.

לאחר הוספת מנשאי המיקרו כבה את המשאבה באמצעות המחוון, נווט בחזרה למסך הראשי בממשק Hello, בחר פעולות ולאחר מכן התקדם. בחר את הבקר המתאים כדי לערוך את ההגדרות. הגדר את הבקרים לאוטומטי והזן את נקודות ההגדרה.

לאחר הגדרת הבקרים, הפעל את משאבת האוויר. הסתכל בתוך כלי המגיב כדי לוודא שגלגל האוויר מסתובב. ודא שחיישן ה-DO מקוטב לחלוטין ושערך ה-DO התייצב.

לאחר מכן כייל את טופס חיישן הביצוע, חיבור סטרילי בין קו תוספת בינוני שאינו בשימוש המזוהה על ידי פס כתום אחד לבין מקור שקית בקבוק התא באמצעות אביזרי פיתוי. לאחר מכן, התקן את חלק הסיליקון של הצינור במשאבת המדיה. ודא שהצינור clamp פתוח ושהצינור המסועף clamp סגור.

נווט אל לשונית משאבת הבקרה ולאחר מכן הפעל את משאבת המדיה. הוסף את התאים וכבה את משאבת המדיה. לאחר החיסון, נווט אל לשונית הפעולות ובחר קח דגימה.

ודא שצינור הדגימה נמצא במשאבת הדגימה ותפעל את זין עצירת הדגימה בהתאם להוראות שעל המסך. הסר את המזרק עם הדגימה לספירת תאים ויישומים אחרים במורד הזרם מבצעים ספירת תאים. לבסוף, כאשר התאים הגיעו לצפיפות הרצויה של 1.2 כפול 10 לששת התאים למיליליטר, יש להוסיף את חיסון הנגיף למזרק של 20 מיליליטר.

חבר את המזרק ליציאת תוספת רזרבית בכור. השתמש במסך משאבת הבקרה כדי להפעיל את משאבת התוספת ולהוסיף את חיסון הנגיף. רוב תאי A 5 49 נדבקו לנשאי המיקרו תוך שעתיים.

לאחר 12 שעות, התאים הראו סימני השטחה והתפשטות על פני המיקרו-מכונית. עד 24 שעות, נשאי מיקרו הציגו פיזור אחיד של תאים. קולוניזציה של מיקרו-מכוניות מתרחשת במהירות כפי שמודגם כאן.

אחוז ההתיישבות של מיקרו-מכוניות על ידי 54 9 תאים הוא 75% על ידי 24 שעות. גרף זה מציג את מספר התאים הקיימים 54 9 בתרבית לפני ואחרי הדבקה באדנו-וירוס. התאים ממשיכים לגדול באופן אקספוננציאלי למיליון תאים למיליליטר לאחר 48 שעות.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להרכיב ולהפעיל ביו-ריאקטור גלגל אוויר לגידול תאי יונקים בצפיפות גבוהה לייצור תאים או חלבונים. תודה על הצפייה ובהצלחה בניסויים שלך.