6 בנובמבר 2014
שיטה לכמת את גודלו וצורת orofacial של עוברי laevis Xenopus פותחה. בפרוטוקול זה, מדידות גודל מסורתיות בשילוב עם morphometrics הגיאומטרי כדי לאפשר ניתוחים מתוחכמים יותר של התפתחות וליקויי orofacial.
המטרה הכוללת של ההליך הבא היא לתאר פנוטיפים של פנים אוראליות של עוברי xap Levis בצורה סטטיסטית כמותית. זה מושג על ידי הרכבה ראשונה של ראשי עוברי xip מנותקים בתבנית חימר לתיעוד תמונות באמצעות התמונות. מידות הפנים נמדדות כדי לספק מידע על גודל אזור הפנים בפה.
ציוני הדרך הבאים מיושמים באמצעות מורפומטריה גיאומטרית כדי להעריך את צורת אזור הפנים בפה. התוצאות מראות שינויים משמעותיים בגודל ובצורה באזור הפנים של הפה Opus בהתבסס על ניתוחים סטטיסטיים של ממדי הפנים ומיקום ציון דרך יחסי. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי התפתחות אופוס או פנים, ניתן ליישם אותה גם במחקרי מורפולוגיה אחרים של בעלי חוליות, כגון השוואות של מינים קרובים למטרות אבולוציוניות או אקולוגיות.
סעיף זה מתאר כיצד להכין כלי קו חימר כדי להחזיק ראשי עוברים לתיעוד הצילום שלהם. ראשית, משטחים מעט חימר דוגמנות לכלי בכל גודל שיעשה, ומחליקים אותו כך שיכסה את כל הצלחת. לאחר מכן לחץ קלות מחט מתגרה ישרה לתוך החימר בזווית של 45 מעלות.
החזק את המחט בחוזקה והזיז לאט את המנה ליצירת קו מדוכא. לאחר מכן, השתמש בפיפטה מזכוכית כדי ליצור שקעים מעגליים רדודים לאורך כל קו. בכל שקע ניתן להניח ראש עובר לפני ההעמסה.
הראשים מילאו את המנה ב-PBT. פרטים על תרבית zap piss מתוארים בפרוטוקול הטקסט וכן פרטים על תיקון עוברים. עבור פרוטוקול זה, תקן עוברים בין שלבים 42 ל-45.בהתאם.
ראשית, הניחו את העוברים הקבועים בצלחת פטרי בגודל 150 מילימטר המכילה כ-100 מיליליטר PBT. עכשיו, ערפו את ראשם. ראשית, החזיקו עובר עם זוג מלקחיים והשתמשו באזמל כדי לבצע חתך בצד האחורי של המעי.
שנית, בצע חתך בצד הקדמי של המעי ליד הלב כדי להסיר לחלוטין את הראש. בעזרת פיפטה מעבירים את הראשים לצלחת קו החימר. זה קריטי שראשי העוברים יונחו בחימר באותו כיוון בדיוק לצילום.
כדי להבטיח הצלחה, השתמש בשורות המצוירות בחימר כמדריכים. זה גם מועיל אם אותו אדם מצלם את כל התמונות באותו יום. למבט חזיתי, התצלומים ממקמים את הראשים עם הצד האחורי כלפי מטה בשקעים.
השתמש במלקחיים כדי לתפעל את הראשים ואת החימר שמסביב כך שהראשים יהיו מקובעים מול המצלמה ולא יוטו למבט לרוחב. תצלומים ממקמים את הראשים כך שכל הצדדים שלהם פונים לאותו כיוון. תפעל את הראשים ואת החימר שמסביב, כך שבלוטות המלט כולן פונות כלפי מטה באותה זווית.
כעת באמצעות כל מיקרוסקופ נתיחה עם יכולות לכידת תמונה, אסוף תמונות של ראשי הראשנים. השתמש במספר נורות כדי למנוע הצללה מוגזמת והשתמש בהגדלה הגבוהה ביותר האפשרית. צלם כל ראש באותו אופן.
לאחר מכן שמור את התמונות לא דחוסות וברזולוציה הגבוהה ביותר האפשרית. מהתמונות יש למדוד את מידות הפנים בפה. ראשית, קבע את רוחב הפנים.
לזהות את הנקודות שבהן החלק הגחוני של כל עין פוגש את היקפי הפנים, ולמדוד את המרחק בין הנקודות הללו. פרטים על מדידת גובה הפנים ואזור הפנים בפה ניתן למצוא בפרוטוקול הטקסט. שימו לב במיוחד לקביעת אורך החוטם בתמונות לרוחב, צרו קו אנכי המסמן את החלק הקדמי של העין.
לאחר מכן מדוד את המרחק האופקי מהנקודה הקדמית ביותר שבה הפנים פוגשות את הקצה הגבי של בלוטת המלט לקו האנכי המסמן את החלק הקדמי של העין. ממדים אחרים כמו רוחב הפה והעגלגלות מוסברים בפרוטוקול הטקסט לניתוח זה, יש לתקן קואורדינטות ציון דרך בפנים ולשמור בקובץ. ציוני הדרך צריכים ללכוד את צורת התמונה ולהיות שמישים בכל התמונות.
אז אל תשתמש במבנים שאולי לא קיימים בכל הדגימות. כעת פתח את קובץ התמונה הראשון. כדי להעריך, בחר את הכרטיסייה תוספים בסרגל הכלים הראשי ובחר בורר נקודות.
מהתפריט הנפתח, בחר בכרטיסייה הוסף נקודות ומקם את נקודות ציון הדרך בתמונה. הם מופיעים כצבעוניים. הצלבות עוברות בין נקודות ציון באמצעות הכלי הזזת צלבים.
לאחר הצבת כולם, בחר בכרטיסיית תוצאות התצוגה בסרגל הכלים הראשי ובחר באפשרות הצגה. פעולה זו מציגה את הקואורדינטות של ציון הדרך. לאחר מכן, העתק את הקואורדינטות לתוכנית גיליון אלקטרוני בשורה ריקה מעל סוג הנתונים המודבק LM שווה ואחריו מספר ציוני הדרך במדגם בשורה למטה.
מזהה סוג הנתונים המודבק שווה ואחריו השם המזהה את המדגם. לכל דגימה חייב להיות מזהה ייחודי. חזור על תהליך זה עד שכל התמונות לדוגמה ימופו ויוזנו לגיליון האלקטרוני.
לאחר מכן, העתק את העמודות עם זיהוי לדוגמה וקואורדינטות של כל ציון דרך ושמור אותו במסמך טקסט. לאחר מכן פתח את התוכנה המורפומטרית. בתוכנה זו, בחר צור מערך נתונים חדש מהתפריט הראשי.
תן שם לקובץ ולערכת הנתונים במסך המוקפץ וייבא את הקובץ כ-TPS. כעת בחר קובץ טקסט של קואורדינטות כדי ליצור את מערך הנתונים. לאחר מכן, בצע התאמה ויישור.
ראשית, סמן את ערכת הנתונים בכרטיסיית עץ הפרויקט. לאחר מכן בחר מוקדמות בסרגל הכלים הראשי ופרוקרסטים חדשים יתאימו מהתפריט הנפתח. מבין הבחירות הזמינות, בחר מיושר לפי ציר עקרונות.
לאחר מכן בחר באפשרות לבצע התאמה של קראסטי בחזרה בתפריט הנפתח של המוקדמות, בחר צור מטריצת קובנס ובחר ביצוע. כעת מלשונית התוצאות, הצג את המתאמים של מטריצת קובנס. כדי להבחין בין דגימות ניסיוניות וקבוצות בקרה, צור קובץ מסווג על ידי הקצאת כל דגימה במערך הנתונים למשתנה המסווג המתאים.
בגיליון אלקטרוני, צור עמודה עם התווית ID וצור עמודה עם התווית טיפול. לאחר מכן רשום כל דוגמה בעמודה מזהה והקצה אותה לקבוצה. תחת עמודת הטיפול, שמור את זה כקובץ טקסט ובתוכנה המורפומטרית, ייבא אותו באמצעות האפשרות בחר התאמה לפי מזהה.
כעת תחת לשונית ההשוואה, צור טרנספורמציה של ניתוח פונקציות מבחין בתפריט המוקפץ. תחת פונקציה זו, ודא שמערך הנתונים המתאים נבחר וסוג הנתונים הוא קואורדינטות ההתאמה של הפרוקרסטות. הדגש את זוגות הקבוצות שיש להשוות ולאחר מכן הפעל מבחן 1000 תמורות.
כדי להציג את המפה הווקטורית של הקואורדינטות, עבור לתפריט הגרפיקה ובחר בכרטיסייה הפרש צורות. אם התמונה הפוכה, העלה את התפריט המוקפץ במרחב ההתוויה כדי להפוך את הדיאגרמה לכיוון הנכון. כמו כן, בתפריט הנפתח, שנה את הגרף לרשת טרנספורמציה כדי להניח את הווקטורים על פרטי רשת ביצירת ניתוח רכיבים עיקרי.
ניתוח רכיבי עקרון פיזור. רשתות טרנספורמציה CVA, scatterplot ורשתות טרנספורמציה CVA מסופקות כולן בפרוטוקול הטקסט. העוברים טופלו בקולטן חומצה רטינואית מיקרו-מולרית או מעכב RAR משלב התפתחותי 24 עד שלב 30, ולאחר מכן קובעו בשלב 42 וצולמו עוברי ביקורת שטופלו ב-DMSO.
בדרך כלל, הטיפול במעכב RAR הביא להיצרות של הפרעות בעיניים בפנים ופה בצורת משולש מעוות. לאחר ביצוע ניתוח מורפומטרי גיאומטרי, השונות הוערכה באמצעות ניתוח רכיבים עיקריים. עוברים שטופלו הובחנו בבירור מקבוצת הביקורת.
לאורך ציר ה-PC one, החצים מזהים חריגים סטטיסטיים מתוך קבוצה. ההבדלים המורפולוגיים הוערכו לאחר מכן על ידי ניתוח פונקציות מבחינות. שינויים דרמטיים במיקום ציוני הדרך הרוחביים מצביעים על היצרות של צורת הפנים.
תזוזה קלה כלפי חוץ במיקום הנחיריים מסומנת על ידי החצים. יש גם עיוות בולט באזור האמצע. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשתמש בשילוב של מדידות גודל מסורתיות ומורפומטריה גיאומטרית כדי להעריך את הגודל והצורה של הפנים העובריות של Theus.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מאמר זה מציג שיטה לכימות הגודל והצורה של אזור הפה והפנים בעוברים של Xenopus laevis. באמצעות שילוב של מדידות גודל מסורתיות עם מורפומטריה גיאומטרית, המחקר מאפשר ניתוחים מורכבים של התפתחות אזור הפה והפנים ושל פגמים בה.
ניתוח כמותי של פנוטיפים אורופציאליים ב-Xenopus מאפשר בחינה קפדנית של מנגנוני התפתחות קרניו-פציאליים, ובכך תומך בתיקוף יעדים בשלבים מוקדמים ובצמצום סיכונים מנגנוניים במערכות רלוונטיות למחלה. השילוב של מורפומטריה גיאומטרית וניתוח סטטיסטי מספק ביטחון חיזוי להבחנה בין השפעות טיפוליות ותומך ברציפות תרגומית משלב הגילוי למחקר פרה-קליני. תהליך עבודה זהו ישים באופן ישיר לתעדוף תיקי פיתוח ולהחלטות קידום מותאמות סיכון בקווי פיתוח של הפרעות קרניו-פציאליות והתפתחותיות.
שיטה זו משתלבת ברצף שבין הגילוי לשלב הפרה-קליני על ידי מתן אפשרות להערכה כמותית של הפנוטיפ, הבחנה סטטיסטית בין קבוצות ותוצרי נתונים הניתנים לשחזור עבור צוותי מו"פ רב-תחומיים.