Name: טכניקה חדשה לניתוח כמותי של נשירת שיער בעכברים באמצעות ניתוח גווני אפור (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: למדו שיטה לכימות נשירת שיער בעכברים באמצעות מדידת בליעת אור בגלאי ג'ל. טכניקה זו מספקת תוצאות אובייקטיביות ושחזוריות למחקר אלופציה ופיתוח טיפולים חדשים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לבית החולים לילדים במונטיפיורי, המחלקה לרפואת ילדים, על התמיכה במחקרים אלה. ברצוננו להודות לקרן הלאומית להתקרחות אראטה על התמיכה הכספית בביצוע מחקרים עם עכברים מושתלים C3H/HeJ.

הצהרת אתיקה: כל המחקרים שכללו בעלי חיים חייבים להיות מאושרים על ידי IACUC של המוסד (לנתונים העוקב, פרוטוקולים אושרו על ידי מונטיפיורי IACUC, פרוטוקול # 11-6-240 ו# 13-7-100). בעלי חיים מסופקים הרדמה אור כפי שצוינו למטרה הבלעדית של שמירה עליהם עדיין בצילום, אין נהלים כואבים הנדרשים לפרוטוקול זה. 1. רכישת תמונות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את מוקד ושדה הראייה לתרמי ג&#39;ל משתמש בנייר עם טקסט מודפס. ודא אחידות של מקור אור על פני אזור מצולם. כדי להבטיח אחידות, להשתמש תרמי ג&#39;ל עם שנבנה במקור אור לצילום רעיוני. אל תשתמש במקור אור שקוף, כמו זה ליצור צללית של החיה שאינה מתאים לניתוח בגווני אפור נוסף. הערה: זה יהיה מקום העכבר קצת מחוץ לפוקוס, המספק מיצוע אופטי על פני האזור של העניין (ROI) ולעזור להפחית את שגיאות quantal לאזורים (כלומר, &lt;10 פיקסל) קטנים מאוד של עניין. אזורים גדולים יותר של ריבית לא יושפעו על ידי קטין זה מתמקד התאמה, לא יהיה להם להיות מושפע מהבדלים בגודל של החיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים בעלי חיים באמצעות קטמין (100 מ&quot;ג / מיליליטר) / xylazine (20 מ&quot;ג / מיליליטר) (2: 1), כפי שזה מספק השפעת הרדמה מהירה והתאוששות מהירה ואופטימלי לצילום בעלי חיים רבים. הערה: הרדמה הוא אישר כאשר החיה היא עדיין מספיק כדי לאפשר צילום. כבעלי חיים בדרך כלל להתאושש מההרדמה האור הזה בתוך 10-15 דקות, הווטרינר לא מומלץ שימוש במשחות עיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בעלי חיים הרדימו על תרמי ג&#39;ל ביישור אנכי (קרוב במקביל ככל האפשר). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצילומי גב, הנח את בעלי החיים במצב שכיבה עם גפיים מורחבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצילומי הגחון, למקם את בעלי חיים במצב שכיבה, דואג שבעלי החיים לא מסובבים רוחבי. </li&gt; </ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח סטנדרטי בגווני אפור באזור מצולם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דלת גישה קרובה. החשוב: Ambient אור יכול להציג את השינויים בחשיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר F-stop לחשיפה המעמידה את האזור של עניין בטווח ליניארי של רכישה (קריאת F-stop). הערה: רוב המערכות תציג בי התמונה רוויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שינוי F-להפסיק להגדרת חשיפה נוספת המעמידה את האזור של עניין בטווח ליניארי על ידי הגדלת או הקטנת F-stop על ידי 1, כך ששניהם הסטנדרטי באזור של עניין ולהישאר בטווח ליניארי של רכישה (התייחסות F- לעצור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע צילום הושלם, למקם את בעלי החיים על שולחן התחממות ולעקוב אחר עד שהם יכולים לשמור על כיבו sternal. חזור חיות בכלובים שלהם. להחזיר את הקבוצה של בעלי חיים לביבר לאחר שכל בעלי החיים התאוששו באופן מלא. </li></ol> 2. כימות קליטת אור &lt;/ P&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזורי מארק ריבית על התמונות של בעלי החיים באמצעות סיפקו תוכנה לתרמי ג&#39;ל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקפת גב חיה שלמה, להשתמש בתמונה מלבנית או סגלגלה המשתרעת מהגפיים העליונים לגפיים התחתונים, המשתרעת לרוחב ככל האפשר כך ששום חלק של התיבה חורגת האחורי של בעלי החיים, כפי שמוצג באיור 1 א. הערה: אפשר גם לסמן את השטח של עניין באמצעות כלי ציור ביד חופשית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתצוגת הגחון בעלי חיים שלמה, להשתמש 2 מלבנים: אחד המכסה את אזור אגן ואחד המכסה את אזור החזה, כפי שמוצג באיור 1 ב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזור קטן יותר של עניין, כלומר, מיקום של מתן תרופה, סימן כמתאים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מארק אזור (ים) של ריבית על תקן קליטה בגווני אפור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיא קליטה מכל אחד מהאזורים המסומנים של עניין. </li></ol> 3. ניתוח obtaine רמות הקליטהד לאזורים של עניין ייתכן שיהיה הצורך מנורמל לסטנדרטי רקע להשוואה בין צילומים. מערכת היחסים של חשיפה לקליטה הוא לוג-לוג (כלומר, מערכת היחסים הוא ליניארי בין יומן (חשיפה) ולהיכנס (קליטה)). שימוש במערכת יחסים זו, הקליטה של האזור של עניין יכולה להיות מנורמלת לערך רקע סטנדרטי, אשר יאפשר קליטה להשוואה ישירה בין תמונות שונות, כוללים אלה שצולמו בנקודות זמן שונות (כלומר, מדידות סידוריים בתוך פרוטוקול מחקר). ההליך לביצוע תיקונים אלה מפורט בשלבים אופציונליים 3.1 ו -3.2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקומה (אופציונלית) מגרש של יומן (חשיפה) לעומת יומן (קליטה) תוך שימוש בערכים המתקבלים מתקן קליטה בגווני אפור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (אופציונאלי) כוון לוריאציות ברמת כל תצלום כדלקמן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר F-stop לקריאה (כפי שנקבע בשלב 1.6) ו- F-stop להתייחסות (כפי שנקבע בסעיףTEP 1.8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב קליטה ממוצעת של סטנדרטי בכל התמונות בF-להפסיק לקרוא. ממוצע זה הוא התייחסות תקן הערך (RSV). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב הבדל בקליטה בין הקריאה והגדרות F-stop התייחסות בכל תצלום לסטנדרטי (דלתא-S) ולכל ROI המוגדר (דלתא-ROI-1, דלתא-ROI-2 ... ..delta-ROI-X) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את הספיגה המתוקנת לכל החזר על השקעה באופן הבא: קליטה מתוקנת (ROI-X) = קליטה (ROI-X) בקריאת F-stop + (RSV - קליטה סטנדרטית בקריאת F-stop) * (דלתא-ROI-X / דלתא-S) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקמפל נתוני ניסוי ולבצע ניתוח נתונים תוך שימוש בטכניקות סטטיסטיות סטנדרטית למשתנים רציפים (כלומר, ANOVA, T-test). </li></ol>

<ol><li>McAndrews, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Hair+Loss+Association%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">American Hair Loss Association.</a> , 
 <a target="_blank" href="http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp">http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp</a> (2011).</li>
<li>Safavi, K. H., Muller, S. A., Suman, V. J., Moshell, A. N., Melton, L. J. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+alopecia+areata+in+Olmsted+County%2C+Minnesota%2C+1975+through+1989%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Incidence of alopecia areata in Olmsted County, Minnesota, 1975 through 1989.</a> Mayo Clin Proc. 70 (7), 628-633 (1995).</li>
<li>Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+alopecia%3A+new+developments%5BTitle%5D)+AND+%22South+Med+J%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced alopecia: new developments.</a> South Med J. 86 (5), 489-496 (1993).</li>
<li>Trueb, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+hair+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Therapy+Lett%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced hair loss.</a> Skin Therapy Lett. 15 (7), 5-7 (2010).</li>
<li>Sato, N., Leopold, P. L., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+adenovirus-mediated+expression+of+Sonic+hedgehog+gene+on+hair+regrowth+in+mice+with+chemotherapy-induced+alopecia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Effect of adenovirus-mediated expression of Sonic hedgehog gene on hair regrowth in mice with chemotherapy-induced alopecia.</a> J Natl Cancer Inst. 93 (24), 1858-1864 (2001).</li>
<li>McGarvey, E. L., Baum, L. D., Pinkerton, R. C., Rogers, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+sequelae+and+alopecia+among+women+with+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Pract%22%5BJournal%5D)">Psychological sequelae and alopecia among women with cancer.</a> Cancer Pract. 9 (6), 283-289 (2001).</li>
<li>Baxley, K. O., Erdman, L. K., Henry, E. B., Roof, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+effect+on+cancer+patients%27+body+image%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Nurs%22%5BJournal%5D)">Alopecia: effect on cancer patients' body image.</a> Cancer Nurs. 7 (6), 499-503 (1984).</li>
<li>Stough, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+effect%2C+pathophysiology%2C+and+management+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Psychological effect, pathophysiology, and management of androgenetic alopecia in men.</a> Mayo Clin Proc. 80 (10), 1316-1322 (2005).</li>
<li>Ogunmakin, K. O., Rashid, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+the+case+for+medical+necessity%5BTitle%5D)+AND+%22Skinmed%22%5BJournal%5D)">Alopecia: the case for medical necessity.</a> Skinmed. 9 (2), 79-84 (2011).</li>
<li>Olsen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+clinical+trial+of+5%25+topical+minoxidil+versus+2%25+topical+minoxidil+and+placebo+in+the+treatment+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A randomized clinical trial of 5% topical minoxidil versus 2% topical minoxidil and placebo in the treatment of androgenetic alopecia in men.</a> J Am Acad Dermatol. 47 (3), 377-385 (2002).</li>
<li>Rossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1+mg+daily+administration+on+male+androgenetic+alopecia+in+different+age+groups%3A+10-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Ther%22%5BJournal%5D)">1 mg daily administration on male androgenetic alopecia in different age groups: 10-year follow-up.</a> Dermatol Ther. 24 (4), 455-461 (2011).</li>
<li>Gibbons, R. D., Fiedler-Weiss, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer-aided+quantification+of+scalp+hair%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Clin%22%5BJournal%5D)">Computer-aided quantification of scalp hair.</a> Dermatol Clin. 4 (4), 627-640 (1986).</li>
<li>Fleming, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+a+structural+analysis+of+dermatoscopic+imagery%5BTitle%5D)+AND+%22Comput+Med+Imaging+Graph%22%5BJournal%5D)">Techniques for a structural analysis of dermatoscopic imagery.</a> Comput Med Imaging Graph. 22 (5), 375-389 (1998).</li>
<li>Chamberlain, A. J., Dawber, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+evaluating+hair+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Australas+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods of evaluating hair growth.</a> Australas J Dermatol. 44 (1), 10-18 (2003).</li>
<li>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale*. , Imatest. 
 
 <a target="_blank" href="http://www.imatest.com/docs/q13/">http://www.imatest.com/docs/q13/</a> Forthcoming.</li>
<li>Freyschmidt-Paul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+alopecia+areata+in+C3H%2FHeJ+mice+with+the+topical+immunosuppressant+FK506+%28Tacrolimus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Treatment of alopecia areata in C3H/HeJ mice with the topical immunosuppressant FK506 (Tacrolimus).</a> Eur J Dermatol. 11 (5), 405-409 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Matsushita, O., Sakon, J., Gensure, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+prevention+of+chemotherapy-induced+alopecia+with+PTH-CBD%2C+a+collagen-targeted+parathyroid+hormone+analog%2C+in+a+non-depilated+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Drugs%22%5BJournal%5D)">Treatment and prevention of chemotherapy-induced alopecia with PTH-CBD, a collagen-targeted parathyroid hormone analog, in a non-depilated mouse model.</a> Anticancer Drugs. 25 (1), 30-38 (2014).</li>
<li>Peters, E. M., Foitzik, K., Paus, R., Ray, S., Holick, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+strategy+for+modulating+chemotherapy-induced+alopecia%2C+using+PTH%2FPTHrP+receptor+agonist+and+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist.</a> J Invest Dermatol. 117 (2), 173-178 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Seymour, A., Sakon, J., Gensure, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+hormone+linked+to+a+collagen+binding+domain+promotes+hair+growth+in+a+mouse+model+of+chemotherapy+induced+alopecia+in+a+dose-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Anti-cancer+drugs%22%5BJournal%5D)">Parathyroid hormone linked to a collagen binding domain promotes hair growth in a mouse model of chemotherapy induced alopecia in a dose-dependent manner.</a> Anti-cancer drugs. 25 (7), 819-825 (2014).</li>
</ol>

לסופרים אין מה לחשוף.

בדוח זה תיאור מפורט מסופק בטכניקה חדשה לכימות נשירת שיער במכרסמים. טכניקה זו מנצלת תרמי ג&#39;ל לרכישת תמונה וניתוח, ציוד שהוא זמין ברוב המעבדות. המדידות הוכחו להיות חזק כדי שינויים קלים בטכניקה (איורים 4-5), ומתואמים היטב לדרגת אובדן ראייה שיער במודלים של טיפול (איור 6). טכניקות אלו הועסקו בהצלחה בהערכה של טיפולים ניסיוניים להתקרחות 17. כלי כמותי להערכת צמיחת שיער במכ...

Alopecia (נשירת שיער) יכול להיות אירוע נפשי ורגשי מצער עם גורמים רבים. התקרחות גברית-תבנית היא הגורם השכיח ביותר של התקרחות, המשפיע על כשני שלישים מהגברים בגיל 35 1. דפוס דומה של אובדן שיער יכול להיות שנצפה בנשים עם תסמונת שחלות פוליציסטיות. בשתי הפרעות אלו, נשירת השיער היא אנדרוגן בתיווך. Alopecia יכול להתרחש גם כמחלה אוטואימונית, alopecia areata, אשר משפיעה על 1.7% מכלל האוכלוסייה 2. Alopecia יכול להתרחש כתופעת לוואי של כמה טיפולים רפואיים, כגון כימותרפיה 3. אחוז גבוה (65-85%) של חולי כימותרפיה חוויה מסוים של התקרחות 4,5. ההשלכות הפסיכולוגיות של אובדן שיער נחקרו היטב בהגדרת כימותרפיה. התקרחות בעקבות כימותרפיה יכולה לגרום לחרדה, דיכאון, דימוי גוף שלילי, הערכה עצמית נמוכה ותחושה של רווחה 6,7 מופחתת. Pe גבוהrcentage (47-58%) של חולי סרטן נשיים לשקול נשירת שיער להיות ההיבט הטראומתי ביותר של כימותרפיה, ועד טיפול ירידה של 8% מחשש ל4,6 נשירת שיער. יש גם עדויות בהתקרחות אנדרוגנית לתמוך טיפול להפחתת השלכות פסיכולוגיות ואפילו רפואיות של 8,9 נשירת שיער. כמו כן, אלופציה אריאטה דווחה להיות השלכות פסיכולוגיות קשות 2, ואת האופי אחיד של נשירת השיער יכול להוביל לתוצאה קוסמטית לא נעימות, יותר מרוב הגורמים אחרים לנשירת שיער. בעוד תרופות עם השפעות מתונות אנטי-אנדרוגנית (כלומר, ספירונולקטון) היו בשימוש עם הצלחה מוגבלת כטיפול להתקרחות, התרופה היעילה הראשונה להתקרחות מינוקסידיל הייתה 10. יש להורדת לחץ דם זה תופעות לוואי שנצפה בגרימת צמיחת שיער, ועכשיו משמשת כטיפול מקומי לצורות רבות של התקרחות. עם זאת, תגובות הן לעתים קרובות לא שלמות, עם כמה נושאים המראים רק איטיing של נשירת שיער ולא לצמיחה מחודשת בפועל 10. פינסטריד הוא אנטגוניסט תחרותי להקליד השני 5α-רדוקטאז שהמרה בלוקים של טסטוסטרון לדיהידרוטסטוסטרון, וכתוצאה מכך השיפור בהתקרחות אנדרוגנית על חשבון מצור אנדרוגן המערכתי חלקי. שיעורי תגובה עם טווח ארוך טיפול (10 שנים) הם סביב 50% -11. בסך הכל, למרות מחקר רב בתחום זה, עדיין אין טיפול הולם לנשירת שיער. במשך עשרות שנים, מדענים ורופאים בחנו את שיטות של מדידת צמיחת שיער קרקפת בניסויים קליניים. עם התפתחותה של תרופות המטפלות בהתקרחות, חל צורך גדול יותר באמצעי אמין, חסכוני ופולשנית למדידת צמיחת שיער ו, במיוחד, תגובה לטיפול. טכנולוגית ניתוח תמונה לכימות מדויק של צפיפות שיער בחולים עם הפרעות נשירת שיער הניבה תוצאות עקביות ותקפה בעבר תוך שימוש במגוון של techniques, כולל ניתוח של תמונות דיגיטציה 12, ניתוח תמונה של שערות בודדות ועור נגעים 13, וסריקה מיקרוסקופית לכמת המוני שיער באזור קרקפת מוגדר 14. למרבה הצער, בעת מתודולוגיות מעל סיפקו הערכה משופרת של יעילות לשיער צמיחה-קידום התערבויות בניסויים קליניים, שיטות אלה לא הוחלו על מחקרים במכרסמים בחקירות פרה-קליניים. המטרה שלנו היא לפתח שיטה עקבית ואמינה לכמת נשירת שיער בעכברים, שיאפשר לחוקרים להעריך בצורה מדויקת יותר ולהשוות גישות טיפוליות חדשות לצורות שונות של התקרחות. פיתחנו מתודולוגיה שימוש בציוד זמין ברוב המעבדות אשר תאפשר כימות מהיר ואמין של צפיפות שיער בעכברים עם שיער שחור או חום. מתודולוגיה זו נבדקה במודלים של עכברים של התקרחות בעקבות כימותרפיה, alopecia areata, והתקרחות מwaxing. פרוטוקול מפורט מוצג לביצוע מדידות אלה, ובכלל זה נתונים אימות מC57BL / 6 וC3H / זני HeJ של עכברים. כטכניקה זו מסתמכת על גילוי קליטת אור מפיגמנטים בשערה, זה לא יכול לשמש כדי לזהות את צמיחת שיער בעכברים לבנים או עכברים לבקן.

<table><tbody><tr><td>KODAK Gel Logic 100 Imaging System</td><td>Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA</td><td></td><td>מערכת הדמיה של ג'לים לקבלת תצלומיות וניתוחן, חייבת לכלול מקור אור מובנה לצילום רפלקטיבי.</td></tr><tr><td>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale</td><td><a href="http://www.imatest.com/docs/q13/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Imatest</a></td><td></td><td>סטנדרט לסולם אפור</td></tr><tr><td>C57BL/6J Mice</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>עכברים למחקר מייצג</td></tr><tr><td>C3H/HeJ engrafted mouse</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>עכברים מושתלים למחקר מייצג</td></tr></tbody></table>

טכניקה חדשה לניתוח כמותי של נשירת שיער בעכברים באמצעות ניתוח גווני אפור

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

Alopecia הוא צורה נפוצה של נשירת שיער אשר יכול להתרחש בתנאים רבים ושונים, לרבות אובדן זכר-דפוס שיער, תסמונת שחלות פוליציסטיות, וalopecia areata. Alopecia יכול להתרחש גם כתופעת לוואי של כימותרפיה בחולי סרטן. במחקר זה, המטרה שלנו הייתה לפתח שיטה עקבית ואמינה לכמת נשירת שיער בעכברים, שיאפשר לחוקרים להעריך באופן מדויק ולהשוות גישות טיפוליות חדשות לאלה צורות שונות של התקרחות. השיטה משתמשת תרמי ג&#39;ל סטנדרטי להשיג ותהליך תמונות של עכברים, מדידת קליטת האור, אשר מתרחשת בחלק מחוספס לכמות שיער שחור (או אפור) על העכבר. נתונים שכבר לכמת באופן זה אז יכול להיות מנותח באמצעות טכניקות סטטיסטיות סטנדרטיים (כלומר, ANOVA, T-test). מתודולוגיה זו נבדקה במודלים של עכברים של התקרחות בעקבות כימותרפיה, areata התקרחות ונשירת שיער מהשעווה. בדוח זה, הפרוטוקול מפורט הוא פרהented לביצוע מדידות אלה, ובכלל זה נתונים אימות מC57BL / 6 וC3H / זני HeJ של עכברים. טכניקה חדשה זו מציעה מספר היתרונות, ביניהם פשטות היחסית של יישום, הסתמכות על ציוד שהוא זמין ברוב מעבדות מחקר, ומיישום מטרה, הערכה כמותית שהוא יותר חזק מאשר הערכות סובייקטיביות. השיפורים בכימות של צמיחת שיער בעכברים ישפרו מחקר של מודלים התקרחות ולהקל על הערכה של טיפולים חדשים ומבטיחים בניסויים פרה-קליניים.

טכניקה זו קיבלה תוקף באמצעות C3H / עכברים HeJ engrafted, מודל העכבר של אלופסיה 16. בעלי חיים אלה לפתח נשירת שיער בעולם, אשר מתקדמת בהדרגה לאורך זמן. עם זאת, נשירת השיער מתרחשת בטלאים, ועשויה להשתנות מעכבר אחד למשנהו, מציגה השתנות ניכרת ופוגעת הערכות איכותיות. מודל זה סיפק הזדמנות לבחון מתאמים בין המדידות של צפיפות אופטית במקומות שונים בעכבר כהערכה של תוקף. הייתה השאלה הראשונה צעדים אם באמצעות חשיפות שו...

התקרחות היא צורה נפוצה של נשירת שיער שיכולה להתרחש במצבים רבים ושונים, כולל כתופעת לוואי של כימותרפיה. פיתחנו שיטה לכימות נשירת שיער בעכברים, תוך שימוש בהדמיית ג'ל סטנדרטית לביצוע ניתוח גווני אפור, כדי להקל על מחקר של טיפולים חדשים ומבטיחים להתקרחות.

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לספק כימות של צפיפות השיער באמצעות ספיגת אור. זה מושג על ידי צילום ראשוני של בעלי חיים על הדמיית ג'ל. השלבים הבאים הם הגדרת אזור עניין בתצלום וקביעת ספיגת האור באזור העניין.ואז משווים את ספיגת האור לתקן צילום. בסופו של דבר, ניתן לחשב ממוצע של ספיגת אור בין בעלי חיים שטופלו באופן דומה כדי להראות את ההשפעות של התערבות על צמיחת שיער. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא בלתי מוטה, ניתנת לכימות וניתנת לשחזור.זה חשוב ביותר מכיוון שהוא מאפשר לך להשתמש בסטנדרטים, טכניקות סטטיסטיות כמו Inova כדי לקבוע את המובהקות הסטטיסטית של התוצאות. עבור פרוטוקול זה, השתמש בהדמיית ג'ל עם מקור אור מובנה לצילום רפלקטיבי. זה מבטיח אחידות אור טובה, בעוד שתאורת טרנס יוצרת צללית שאינה מתאימה לניתוח.התחל בהכנת הדמיית הג'ל, הגדר את המיקוד ואת שדה הראייה. באמצעות טקסט מודפס כלשהו, העכבר יכול להיות מעט לא ממוקד מכיוון שזה באמת עובד. כדי להפחית שגיאות קוונטיות באזורי עניין קטנים, ודא את אחידות מקור האור על פני האזור המצולם במטרה לממוצע אופטי מצוין באזור העניין.לאחר מכן, הכינו את החיה. בחר חומר הרדמה עם התחלה מהירה ומשך פעולה קצר וספק בדיוק מספיק כדי לשמור על בעלי החיים דוממים לצילום. כעת הניחו את החיות על ההדמיה בצורה אנכית וקרוב ככל האפשר למקביל.לצילומי גב, הניחו את בעלי החיים במצב שכיבה עם גפיים מושטות. עבור צילומי גחון, הנח את החיות במצב שכיבה. ודא שהם לא מסובבים לרוחב.ניתן למשוך ערכי ספיגה בין תמונות, אך לא לשם כך תוכננה המכונה. אז הוספת תקן בקנה מידה אפור מאפשרת לנו לנרמל את ערכי הספיגה בעת איסוף הנתונים. כעת מקם את תקן הגווני האפור באזור המצולם.לאחר מכן סגור את החדר והפחת את תאורת הסביבה שעלולה להיכנס לתא במצלמה. הגדר את נקודת העצירה F לחשיפה שגורמת לאזור העניין לא להיות רווי יתר על המידה או לא חשוף יתר על המידה. לאחר מכן צלם.אם נקודת העצירה F נבחרת כך שהתמונה רוויה, ערך הסולם האפור יתקבע בערך ו-B ללא שימוש כלל. לאחר מכן שנה את ה-F.Stop באחד, תוך שמירה על אזור העניין והסטנדרט בטווח חשיפה ליניארי, וצלם תמונה שנייה עם השלמת הצילום. הניחו את בעלי החיים על שולחן חימום ועקבו אחריהם עד שהם מתאוששים.שכיבת עצם החזה. לאחר מכן החזירו את בעלי החיים לכלובים שלהם ובסופו של דבר לוויווריום להחלמה מלאה. כדי לכמת את ספיגת האור באמצעות תוכנת הדמיית הג'ל, סמן את אזורי העניין בתמונות של בעלי החיים למבט גבי של בעל חיים שלם.השתמש בתמונה מלבנית, בתמונה אליפסה או בכלי יד חופשית כדי לשרטט רווח מהגפיים העליונות לגפיים התחתונות, הנמשך לרוחב ככל האפשר. שמור בשולי החלק האחורי של החיה למבט גחוני של בעל חיים שלם. השתמש בשני מלבנים.אחד לכיסוי אזור האגן, המטופח, ואחד לכיסוי אזור החזה, שאינו מטופח. ניתן לסמן גם אזורי עניין קטנים יותר כמו היכן ניתנה תרופה כנדרש. שנית, סמן את אזור העניין בתקן הקליטה בקנה מידה אפור.לאחר מכן רשום את הספיגה מכל אזור עניין מסומן להשוואה בין תצלומים. לנרמל את רמות הספיגה לתקן הרקע באמצעות קשר לוג של חשיפה לספיגה. לשם כך, שרטט עקומה של יומן החשיפה כנגד יומן הקליטה.השתמש בערכים המתקבלים מתקן הקליטה בקנה מידה אפור, ולאחר מכן התאם לשינויים בתקן של כל תצלום כדלקמן. ראשית, בחר את ה-F-stop לקריאת ה-ROI ואת ה-F-stop עבור הייחוס וחשב את הספיגה הממוצעת של התקן בכל התמונות בקריאת F-stop. ממוצע זה הוא ערך תקן הייחוס או ה-RSV.לאחר מכן, חשב את ההבדל בספיגה בין הגדרות הקריאה והייחוס F-Stop בכל תצלום ובצע את אותם חישובים עבור התקן ועבור כל החזר ROI מוגדר. כעת באמצעות נתונים מסטופ F אחד, חשב את הספיגה המתוקנת עבור כל החזר ROI באמצעות הנוסחה המוצגת. לאחר מכן, יש ליישם שיטות סטטיסטיות סטנדרטיות לניתוח הנתונים של עכברים מושתלים C3 HHEJ, אשר מודלים התקרחות ADA נותחו בשיטה המתוארת בחשיפות שונות.השינויים בהחזר ההשקעה הלא חופף היו בקורלציה הדוקה כצפוי. השוואות דומות הניבו את אותו מתאם הדוק על פני תקופה של שלושה שבועות. העכברים צולמו כדי לכמת את נשירת השיער הצפויה שלהם.80% מהעכברים שצולמו הראו נשירת שיער בפרק זמן זה. לשם השוואה, שישה עכברים שחורים רגילים C 57 לא הראו נשירת שיער באותה מסגרת זמן. במחקר שני, התקרחות הנגרמת על ידי כימותרפיה כומתה באמצעות הטכניקה המתוארת.עכברים טופלו בציקלופוספאמיד במשך שלושה שבועות ולאחר חודשיים הם הראו נשירת שיער משמעותית בהשוואה לביקורת. לאחר השליטה, ניתן לנתח כל תמונה בפחות מחמש דקות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לכמת את כמות צמיחת השיער במכרסמים באמצעות מערכת הדמיית ג'ל סטנדרטית.

a-new-technique-for-quantitative-analysis-hair-loss-mice-using

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ניתוח רקמות ספציפית של מודל התחדשות זקיקי שיער באמצעות lentivirus לתווך רווח או פסד--of-פונקציה.

ניתוח גנטי מהיר של איתות אפיתל-mesenchymal במהלך התחדשות שיער

סרטון זה מדגים שיטה להשתלת עור אנושי על עכבר מדוכא חיסון עם תגובת נויטרופילים מדוכאת. השיטה כוללת מריחת עור אנושי בעובי מפוצל על מיטת השתל של העכבר, אטימתו וכיסויו להתאוששות. בסופו של דבר, העור האנושי נצמד לעור העכבר, מבסס את כלי הדם ואת זרימת הדם, וכתוצאה מכך קסנוגרפט עור מוצלח.

טכניקה להשתלת עור אנושי במודל עכבר

סרטון זה מדגים את ההקלטה המשולבת של פלט afferent מגורה מכנית ותיוג מסוף עצבי בזקיקי השיער של פינת עכבר. הוא מתאר את השלבים הכרוכים בגירוי מכני של קצות העצבים של זקיקי השערה לפני ואחרי חשיפה לצבע פלואורסצנטי של קרום השיער, רישום אלקטרופיזיולוגי של פוטנציאלי הפעולה שנוצרו, והדמיה של תיוג מסוף העצבים בזקיקי השיער.

הקלטה משולבת של תפוקת Afferent מגורה מכנית ותיוג מסוף עצבי בזקיקי שיער עכבר

עור של יונקים מכיל מערך מגוון של מבנים - כמו זקיקי שיער וקצות עצבים - שמפגינים דפוסים ייחודיים של ארגון המרחבי. ניתוח עור כמו הר שטוח מנצל את הגיאומטריה 2 ממדית של רקמה זו להפקת תמונות ברזולוציה גבוהה בעובי מלא של מבני עור.

הר הדמיה שטוחה של עור העכבר ויישומו לניתוח של שיער זקיק דפוסים וחושי אקסון מורפולוגיה

פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור פצעים דו-צדדיים בעובי מלא בעכברים וכיצד לעקוב אחר, לקצור ולהכין את הפצעים לניתוח מורפומטרי. כלול תיאור מעמיק של אופן השימוש בסעיפים היסטולוגיים טוריים כדי להגדיר, לכמת ולזהות פגמים מורפומטריים במדויק.

מודל ריפוי פצעים מרין וניתוח פצעים מורפומטריים היסטולוגיים

כאן, אנו מתארים לעומק שיטה, המבוססת על טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת, לפלח ולמדוד מודלים תלת-ממדיים של עצמות קרניומקסילופציאליות בעכברים, להערכה טובה יותר של התפתחות עצם קרניומקסילופציאלית בעכברים ממה שמתאפשר בשיטות הנוכחיות.

ניתוח מומים קרניומקסילופציאליים בעכברים באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת תלת מימדית

קפילרוסקופיה היא כלי נגיש להדמיה ישירה, זולה ולא פולשנית של מיקרו-כלי דם. מטרת פרוטוקול זה היא לאפשר לחוקרים להשתמש בקפילרוסקופיה להדמיה של מורפולוגיה מיקרו-וסקולרית היקפית בציפורניים של עכברים.

הדמיה לא פולשנית של מורפולוגיה מיקרו-וסקולרית ממוסמרת בעכברים באמצעות קפילרוסקופיה

מטרת הפרוטוקול הנוכחי היא לספק הוראות והנחיות להערכת חולשה פיזית בעכברי מעבדה C57Bl/6x129J. מוסברים פרטים ספציפיים לגבי כל מדד המשמש במדד השבריריות הפיזית. כמו כן מוצגות מספר שיטות לדיווח על תוצאות שבריריות.

הערכת שבריריות במודל עכבר מזדקן

מחקר זה מציג גישת הדמיה דו-פוטונית ב-in vivo להמחשת המבנים של טרמינלי אקסון בעלי סף נמוך (LTMR) בעור כף הרגל הקדמית של עכברים. באמצעות דימות חוזר ברזולוציה גבוהה של אקסונים בודדים, שיטה זו מספקת פלטפורמה חדשה לחקר מבנה ותפקוד המעגל החישי העור במהלך ההתפתחות ובמבוגרים.

הדמיה תוך-חיונית של שני פוטונים של מורפולוגיית אקסון חושי במגע בעור עכבר

מאמר זה מתאר פרוטוקול מגיב רומן ולהגדיר מיועד מדידה רגישה של ההשפעות הנוירו של תרכובות וטיפולים על שיתוף תרבויות של נוירונים האסטרוציטים באמצעות ניתוח תוכן גבוהה. תוצאות מראים כי ניתוח תוכן גבוהה מהווה טכנולוגיה חדשנית מרגש להערכה neurotoxicity.

עצב Astrocyte שותף תרבות Assay לניתוח תכולה גבוהה של neurotoxicity

למדו שיטה לכימות נשירת שיער בעכברים באמצעות מדידת בליעת אור בגלאי ג'ל. טכניקה זו מספקת תוצאות אובייקטיביות ושחזוריות למחקר אלופציה ופיתוח טיפולים חדשים.

טכניקה חדשה לניתוח כמותי של נשירת שיער בעכברים באמצעות ניתוח גווני אפור

גלה סרטונים נוספים