טכניקה חדשה לניתוח כמותי של נשירת שיער בעכברים באמצעות ניתוח גווני אפור

התקרחות היא צורה נפוצה של נשירת שיער שיכולה להתרחש במצבים רבים ושונים, כולל כתופעת לוואי של כימותרפיה. פיתחנו שיטה לכימות נשירת שיער בעכברים, תוך שימוש בהדמיית ג'ל סטנדרטית לביצוע ניתוח גווני אפור, כדי להקל על מחקר של טיפולים חדשים ומבטיחים להתקרחות.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לספק כימות של צפיפות השיער באמצעות ספיגת אור. זה מושג על ידי צילום ראשוני של בעלי חיים על הדמיית ג'ל. השלבים הבאים הם הגדרת אזור עניין בתצלום וקביעת ספיגת האור באזור העניין.

ואז משווים את ספיגת האור לתקן צילום. בסופו של דבר, ניתן לחשב ממוצע של ספיגת אור בין בעלי חיים שטופלו באופן דומה כדי להראות את ההשפעות של התערבות על צמיחת שיער. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא בלתי מוטה, ניתנת לכימות וניתנת לשחזור.

זה חשוב ביותר מכיוון שהוא מאפשר לך להשתמש בסטנדרטים, טכניקות סטטיסטיות כמו Inova כדי לקבוע את המובהקות הסטטיסטית של התוצאות. עבור פרוטוקול זה, השתמש בהדמיית ג'ל עם מקור אור מובנה לצילום רפלקטיבי. זה מבטיח אחידות אור טובה, בעוד שתאורת טרנס יוצרת צללית שאינה מתאימה לניתוח.

התחל בהכנת הדמיית הג'ל, הגדר את המיקוד ואת שדה הראייה. באמצעות טקסט מודפס כלשהו, העכבר יכול להיות מעט לא ממוקד מכיוון שזה באמת עובד. כדי להפחית שגיאות קוונטיות באזורי עניין קטנים, ודא את אחידות מקור האור על פני האזור המצולם במטרה לממוצע אופטי מצוין באזור העניין.

לאחר מכן, הכינו את החיה. בחר חומר הרדמה עם התחלה מהירה ומשך פעולה קצר וספק בדיוק מספיק כדי לשמור על בעלי החיים דוממים לצילום. כעת הניחו את החיות על ההדמיה בצורה אנכית וקרוב ככל האפשר למקביל.

לצילומי גב, הניחו את בעלי החיים במצב שכיבה עם גפיים מושטות. עבור צילומי גחון, הנח את החיות במצב שכיבה. ודא שהם לא מסובבים לרוחב.

ניתן למשוך ערכי ספיגה בין תמונות, אך לא לשם כך תוכננה המכונה. אז הוספת תקן בקנה מידה אפור מאפשרת לנו לנרמל את ערכי הספיגה בעת איסוף הנתונים. כעת מקם את תקן הגווני האפור באזור המצולם.

לאחר מכן סגור את החדר והפחת את תאורת הסביבה שעלולה להיכנס לתא במצלמה. הגדר את נקודת העצירה F לחשיפה שגורמת לאזור העניין לא להיות רווי יתר על המידה או לא חשוף יתר על המידה. לאחר מכן צלם.

אם נקודת העצירה F נבחרת כך שהתמונה רוויה, ערך הסולם האפור יתקבע בערך ו-B ללא שימוש כלל. לאחר מכן שנה את ה-F.Stop באחד, תוך שמירה על אזור העניין והסטנדרט בטווח חשיפה ליניארי, וצלם תמונה שנייה עם השלמת הצילום. הניחו את בעלי החיים על שולחן חימום ועקבו אחריהם עד שהם מתאוששים.

שכיבת עצם החזה. לאחר מכן החזירו את בעלי החיים לכלובים שלהם ובסופו של דבר לוויווריום להחלמה מלאה. כדי לכמת את ספיגת האור באמצעות תוכנת הדמיית הג'ל, סמן את אזורי העניין בתמונות של בעלי החיים למבט גבי של בעל חיים שלם.

השתמש בתמונה מלבנית, בתמונה אליפסה או בכלי יד חופשית כדי לשרטט רווח מהגפיים העליונות לגפיים התחתונות, הנמשך לרוחב ככל האפשר. שמור בשולי החלק האחורי של החיה למבט גחוני של בעל חיים שלם. השתמש בשני מלבנים.

אחד לכיסוי אזור האגן, המטופח, ואחד לכיסוי אזור החזה, שאינו מטופח. ניתן לסמן גם אזורי עניין קטנים יותר כמו היכן ניתנה תרופה כנדרש. שנית, סמן את אזור העניין בתקן הקליטה בקנה מידה אפור.

לאחר מכן רשום את הספיגה מכל אזור עניין מסומן להשוואה בין תצלומים. לנרמל את רמות הספיגה לתקן הרקע באמצעות קשר לוג של חשיפה לספיגה. לשם כך, שרטט עקומה של יומן החשיפה כנגד יומן הקליטה.

השתמש בערכים המתקבלים מתקן הקליטה בקנה מידה אפור, ולאחר מכן התאם לשינויים בתקן של כל תצלום כדלקמן. ראשית, בחר את ה-F-stop לקריאת ה-ROI ואת ה-F-stop עבור הייחוס וחשב את הספיגה הממוצעת של התקן בכל התמונות בקריאת F-stop. ממוצע זה הוא ערך תקן הייחוס או ה-RSV.

לאחר מכן, חשב את ההבדל בספיגה בין הגדרות הקריאה והייחוס F-Stop בכל תצלום ובצע את אותם חישובים עבור התקן ועבור כל החזר ROI מוגדר. כעת באמצעות נתונים מסטופ F אחד, חשב את הספיגה המתוקנת עבור כל החזר ROI באמצעות הנוסחה המוצגת. לאחר מכן, יש ליישם שיטות סטטיסטיות סטנדרטיות לניתוח הנתונים של עכברים מושתלים C3 HHEJ, אשר מודלים התקרחות ADA נותחו בשיטה המתוארת בחשיפות שונות.

השינויים בהחזר ההשקעה הלא חופף היו בקורלציה הדוקה כצפוי. השוואות דומות הניבו את אותו מתאם הדוק על פני תקופה של שלושה שבועות. העכברים צולמו כדי לכמת את נשירת השיער הצפויה שלהם.

80% מהעכברים שצולמו הראו נשירת שיער בפרק זמן זה. לשם השוואה, שישה עכברים שחורים רגילים C 57 לא הראו נשירת שיער באותה מסגרת זמן. במחקר שני, התקרחות הנגרמת על ידי כימותרפיה כומתה באמצעות הטכניקה המתוארת.

עכברים טופלו בציקלופוספאמיד במשך שלושה שבועות ולאחר חודשיים הם הראו נשירת שיער משמעותית בהשוואה לביקורת. לאחר השליטה, ניתן לנתח כל תמונה בפחות מחמש דקות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לכמת את כמות צמיחת השיער במכרסמים באמצעות מערכת הדמיית ג'ל סטנדרטית.