שיטה להערכת ההשפעות של טווח של אורכי גל ועוצמות של אדום / טיפול באור האינפרה-אדום קרוב בסטרס חמצוני במבחנה

המטרה הכוללת של ההליך הבא היא להעריך את ההשפעות של מגוון אורכי גל ועוצמות של טיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום על מתח חמצוני במבחנה. על מנת לעשות זאת, פיתחנו שיטה חדשה להעברת האור שבה אנו יכולים לתפעל את אורך הגל והעוצמה המועברים. אנו מרכיבים קסנון או מקור אור בפס רחב בבית על בסיס מתכת, ואז מניחים עדשת ציפוי, מסנן מים וצמצם כניסה מול האור.

השלב הבא בהליך הוא להנחות את האור שנוצר ממקור האור בפס רחב דרך הכניסה, הצמצם ומוביל האור הנוזלי ודרך עדשת ציפוי שנייה. לאחר מכן מותקנים מסנני רוחב פס וצפיפות ניטרלית כדי להשיג את אורך הגל ועוצמת האור הרצויים. שימו לב שהמסננים מאפשרים מעבר של טווח צר של אורכי גל המכונה פס גל.

היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני השיטות הקיימות למתן טיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום, כגון נוריות LED או לייזרים, הוא בכך שהיא מאפשרת מניפולציה מדויקת ומכוילת על פרמטרים של אורך גל ועוצמה. זה מאפשר לנו לייעל את אספקת האור לתוצאות הביולוגיות הטובות ביותר שהמחקר הנוכחי נותן כמו תאים מנותקים. בנוסף, ניתן ליישם אותו גם על מערכות אחרות כגון אורגנוטיפית, מודלים של נוירוטראומה.

בעת עבודה עם כל מקור אור בפס רחב בהיר, ודא שאינך מסתכל ישירות לתוך מקור האור מכיוון שהוא עלול לגרום לנזק חזותי קבוע. כדי להכין את מנגנון אספקת האור, חבר מקור אור בפס רחב כגון קסנון או טונגסטן lamp לאספקת חשמל מתאימה. מקם עדשת איסוף מול מקור האור כדי לייצר אלומת אור שנאספה.

העבירו את האור דרך מסנן חום נוזלי כדי להסיר את רוב החום מקרן האור. מקמו עדשת איסוף לפני מקור האור כדי לייצר אלומת אור שנאספה. העבירו את האור דרך מסנן חום נוזלי כדי להסיר את רוב החום מקרן האור.

בהתאם ליישום, מקד את האלומה המורכבת לעורק הכניסה של מוביל אור נוזלי כדי לספק אספקה גמישה יותר של האור. בקצה השני של מוביל האור הנוזלי מקם עדשת ציפוי שנייה ולאחר מכן מחזיק למסנני ההפרעות והצפיפות הנייטרלית. סידור זה אמור לייצר נקודת אור מוארת באופן שווה של פס הגל והעוצמה הרצויים.

ייתכן שהמרחק בין קצה מוביל האור למישור הדגימה יצטרך להשתנות בהתאם לאזור שיש להאיר. חשוב לזכור שבהתאם לחוק הריבוע ההפוך, ככל שהמרחק מקצה מוביל האור גדל, עוצמת האור תפחת במחקר הנוכחי. מרחק זה הוא 14 סנטימטרים, מה שמביא לייצור חתך קרן המאיר באופן שווה שטח באר של שלוש על שלוש על צלחת תרבית רקמות של 96 בארות.

ודא שאור תועה מהמנורה ורכיבים אופטיים נלווים אינו מסוגל להגיע לדגימות אחרות, למשלample, באמצעות קרטון שחור. לאחר בניית המכשיר, הפעל את מצנן המים עבור מסנן החום הנוזלי וודא שיש חילופי מים דרך מעטפת המסנן. הפעל את המנורה מקור החשמל והמתן לפחות חמש דקות למקור האור בפס רחב.

כדי לייצב, בחר מסנן הפרעות פס צר כדי ליצור את פס הגל הרצוי של התאורה. מדוד את האור המופק על ידי המנורה במישור שבו יש למקם את הדגימה. במהלך הטיפול.

האור נמדד באמצעות בדיקת קרינה מכוילת המחוברת לספקטרום מתאים. רדיומטר. השתמש במסנני צפיפות ניטרלית כדי להתאים את עוצמת האור עד לקבלת התפוקה הרצויה. במחקר הנוכחי, עוצמת האור המועברת על ידי כל מסנן הפרעות מותאמת כדי לתת פלט איכותי שווה בכל אחת מארבעת רצועות גל הטיפול.

ניתן ליישם את שיטת הטיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום המתוארת על כל סוג תא או מערכת מודל במבחנה. כאן אנו מראים את הטכניקה שלנו להעברת אור לתאים באמצעות פאוכרומוציטומה או תאי PC 12. כדוגמה, תאי תרבית באמצעי גידול.

ב 96, מגשים היטב מצופים בפוליאול ליזין עד שהם מתכנסים 70 עד 80%. הכן את הריכוז הרצוי של גלוטמט או גורם לחץ חלופי במצע תרבית גדילה מלאה. כאן אנו משתמשים ב-10 מילי-מולרי גלוטמט.

הסר את המדיה מהתאים ושטוף אותם בעדינות שלוש פעמים עם מי מלח פוספט. לאחר הכביסה יש להוסיף מדיה המכילה גלוטמט לנפח כולל של מאה מיקרוליטר לבאר. מיד עם הוספת גלוטמט או גורם הלחץ הנבחר, חשוף תאים לטיפול באור באורכי הגל ובעוצמות הרצויים על ידי הנחת לוחית התרבית מתחת למנגנון אספקת האור המוכן.

הקפד לשנות את תפוקת האיכות של אלומת האור באמצעות השילובים הקבועים של מסנני צפיפות ניטרלית. תלוי באורך הגל המנוהל. לאחר סיום הטיפול באור, יש להניח את התאים על משטח ישר ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתנאים מווסתים של פחמן דו חמצני למשך 24 שעות.

ניתן לתת גם מינונים נוספים של טיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום. לפני ביצוע הסבב האחרון של טיפול באור, הכינו את הריאגנטים שישמשו לזיהוי מיני חמצן תגובתיים כאינדיקטור למתח חמצוני. כאן אנו משתמשים בדיאטות מסומנות שזוהרות כאשר הן מגיבות עם מגוון מינים תגובתיים, כולל דילו, פלואורסצאין D אצטט, נותנות טיפול באור לתאים כמתואר בשלב הרביעי, מוודאות שהתאים מטופלים בשפעת הרצויה ובאורכי גל של אור.

מיד לאחר טיפול קל, יש להסיר את החומר המכיל גלוטמט ולשטוף פעמיים עם PBS. המשך בבדיקות תוך שימוש בצבעי אינדיקטור שזוהרים כאשר הם מגיבים עם מינים תגובתיים בהתאם להוראות היצרן. מדוד את הקרינה שנוצרת על ידי צבעי המחוון באמצעות קורא צלחות המוגדר להגדרות העירור והפליטה המתאימות.

השתמש בצבע הערכה המטרית כדי לכמת את ריכוז החלבון בבארות בהתאם להוראות היצרן. ביטוי תפוקות פלואורסצנטיות ביחס לריכוז החלבון עבור כל באר בודדת, ולאחר מכן ניתוח תוצאות באמצעות תוכנה סטטיסטית. פיתוח טכניקה זו סולל את הדרך לחוקרים החוקרים את ההשפעות של אורכי גל ועוצמות מרובות של טיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום על מתח חמצוני.

טכניקה זו עשויה לשמש במערך של מערכות מודל, כולל תאים מנותקים או תרביות אורגנוטיפיות.