Name: שיטה להערכת ההשפעות של טווח של אורכי גל ועוצמות של אדום / טיפול באור האינפרה-אדום קרוב בסטרס חמצוני במבחנה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: למד שיטה חדשנית להערכת השפעות טיפול באור אדום ואינפרה-אדום קרוב על סטרס חמצוני בתאים מגודלים במבחנה. השיטה מאפשרת שליטה מדויקת באורכי גל ובעוצמות לייעול תוצאות ביולוגיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי התוכנית לחקר נוירוטראומה (אוסטרליה המערבית). פרויקט זה ממומן באמצעות חשבון הנאמנות לטראומה בדרכים, אך אינו משקף דעות או המלצות של המועצה לבטיחות בדרכים.

1. כיול אופטי: מדידת תפוקת אור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין את מנגנון מסירת האור, להתחבר למקור אור בפס רחב (למשל, קסנון או מנורת טונגסטן) לאספקת חשמל מתאימה. מקם עדשת collimating מול מקור האור כדי לייצר קרן collimated של אור. להעביר את האור דרך מסנן חום נוזלי כדי להסיר ביותר של החום מקרן האור. בהתאם ליישום, למקד את אלומת collimated על צמצם הכניסה של מדריך אור נוזלי, אשר מספק למסירה גמישה יותר של האור (לדוגמא., לחממה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצה השני של ספר אור הנוזלי, למקם את העדשה שנייה collimating ולאחר מכן בעל להפרעות ומסנני צפיפות ניטראליים. בדוק שהסדר זה מייצר מקום מואר באופן שווה של אור של תחום הגלים ועוצמה הרצויים. הערה: המרחק בין סוף ספר האור ומטוס הדגימה ייתכן שיהיה צורך להשתנות בהתאם להאזור זה חייב להיות מואר, אך יש לזכור כי ככל שהמרחק מהקצה של עליות מדריך אור, עוצמת אור תקטן. במחקר הנוכחי, מרחק זה הוא 14cm ומייצר חתך קורה שבאופן שווה מאיר אזור היטב 3x3 על צלחת 96-היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שאור תועה מהמנורה והרכיבים אופטיים הקשורים הוא לא הצליח להגיע לדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את מתקן המים הקרים למסנן החום הנוזלי ולהבטיח שיש חילופי מים דרך מסנן המעיל. הפעל את מקור כוח המנורה ולחכות לפחות 5 דקות למקור אור בפס רחב לייצוב. הערה: השימוש במים הקריר נדרש כדי למנוע חימום יתר של המכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר מסנן התערבות צר (בדרך כלל שתואר על ידי אורך הגל שלהם המרכז, העברת שיא ורוחב חצי מקסימום רוחב פס (FWHM)) על מנת ליצור את תחום הגלים הרצויים של תאורה. הערה: מסנני ההתערבות צר ששמשו במחקר הנוכחי היו 442 ננומטר, 550 ננומטר, 671 ננומטר ו810 ננומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את האור המיוצר על ידי המנורה במטוס שבו הדגימה היא להיות ממוקמת במהלך טיפול. למדוד אור באמצעות בדיקה מכוילת irradiance (אספן קוסינוס) מחוברת לspectroradiometer מתאים, באמצעות תוכנת תקינות לפי הוראות יצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במסנני צפיפות ניטראליים כדי להתאים את עוצמת האור עד התפוקה הרצויה מתקבלת. הערה: במחקר הנוכחי, את עוצמת האור שנתקבל בכל מסנן התערבות מותאמת לתת תפוקת quantal שווה בכל אחד מארבעת תחומי תדרי הטיפול. חשוב לבדוק את הכיול באופן קבוע, כפלט המנורה עשוי להשתנות. הערה: בעקבות ההגדרה של המנגנון, התאים מוכנים להיות מואר איור 1 הוא ייצוג של מנגנון אספקת האור השתמש במחקר הנוכחי.. </li></ol><img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52221/52221fig1.jpg" ftp_upload> תמונת איור 1. של מנגנון משלוח האור. אילוסטרייטד היא מקור כוח האור, מנורת קסנון עם דיור, עדשת collimating, מסנן מים, צמצם כניסה, מדריך אור נוזלי, עדשת collimating שנייה, בעל מסנן, מסגרת טיפול ושחור כרטיס מט. שים לב כי מסנני אורך הגל ועוצמת צרי אינם מוצגים. 2. תא הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיטת ההצגה המתוארת R / NIR-LT יכולה להיות מיושמת על כל סוג תא או במערכת מודל חוץ גופית; כתיאורים של תרבית תאים כגון הבאים הם כלליים, תוך שימוש בטכניקות מבוססות היטב לpheochromocytoma התרבות (PC12), Müller (rMC1) ותאי רשתית מעורבים עיקריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני זריעת תאים לטיפול באור וassay סטרס חמצונים, התרבות הנציחה תאים בתקשורת הצמיחה שלהם המכילות תוספים מתאימים (לדוגמא., FBS, אנטיביוטיקה) בflas T75ks עד מחוברות 70-80%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוק תאים הונצחו מצלוחיות T75, תוך שימוש בשיטה מתאימה לסוג התא להיבדק למשל., טריפסין. אם יש צורך, לפני שתמשיך עם הזריעה של תאים ב96-גם צלחות assay, בארות צלחת assay המעיל עם 10μg / poly-L ליזין מיליליטר עבור 1h (למשל., לתאי PC12) או 10μg poly-L ליזין / מ"ל ל 1H ואחריו O / דגירה N עם 10μg / ml laminin (למשל., לתאי רשתית מעורבים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי צנטריפוגה כדי לאסוף מתאימים כ( למשל., 3 דק 'ב 405 XG לתאי PC12 או 10 דקות ב 218 XG לתאי rMC1), להסיר את supernatant וגלול ב8 מיליליטר של תקשורת בתרבות התא המתאימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם תאים ברשתית מעורב הם לשמש, להכין מגורי חולדה ילוד P0-5 על ידי עיכול אנזימטי (פפאין) על פי נהלים שנקבעו 19 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר תאי קיימא בניכוי 0.4% (w / v) צבע כחול trypan, באמצעות haemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם suc צפיפות תאיםh כי תאים יהיו כ 70-80% ומחוברות לאחר 24 או 48 שעות בתרבות. (לתאי PC12 צפיפות הזריעה היא 4.0 x 10 5 תאים / מיליליטר קיימא, לתאי rMC1, זה 2.5 x 10 5 תאי קיימא / מיליליטר ולתאי רשתית מעורבים זה 8 x 10 5 תאים / מיליליטר קיימא). לאחר הוספת תאים לאו 96-גם צלחות ברורות או שחורות (המשמשות לH 2 O 2 או assay DCFH-DA בהתאמה), בתקשורת של צמיחה המתאימה 100 μl, לאפשר צלחת לשבת על משטח שטוח על 37 מעלות צלזיוס, 5 % CO 2 (או מה תנאים מתאימים לסוג תא המסוים) לפחות 24 שעות כדי לאפשר לדבקות תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות תאים בתקשורת צמיחה במגשי 96 גם המתאימים עד שהם ומחוברות 70-80% (24 שעות לPC12 ותאי rMC1, 48h לתאי רשתית מעורבים). </li></ol> 3. הוספת גלוטמט לחץ לתאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן ריכוזי לחץ מימה מלח L-גלוטמית מונוסודיום החומצה של 0-10mM בgrow המלא המתאיםתקשורת ותרבות ה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המדיה מהתאים ולשטוף בעדינות תאים 3 פעמים עם PBS (PC12) או HBSS (rMC1 ותאי רשתית מעורבים). לאחר שטיפה, להוסיף מדיה המכיל גלוטמט להיקף כולל של 100 μl / טוב. </li></ol> 4. ראשית מינונים של טיפול אור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד עם תוספת של גלוטמט או הלחץ של בחירה, חושף את התאים לטיפול באור באורכי הגל והעוצמות הרצויים על ידי הצבת תחת מנגנון אספקת האור מוכן. הקפד לשנות את פלט quantal של קרן האור באמצעות שילובים הוקמו במסנני צפיפות ניטראליים בהתאם לאורך הגל להיות מנוהלת. הערה: בניסויים הנוכחיים, חושף את התאים לטיפול באור 3 דקות לשמור על הטמפרטורה על ידי נח 96 הצלחות גם על משטח חום C 37 o. זמן טיפול עשוי להיות מגוון, כנדרש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח שחור מט כרטיס מתחת לתאים כדי למנוע אור המשקף לבארות סמוכות ב96-welמגש l מיועד לפרמטרים טיפול אחרים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הטיפול הוא רצוי לאורכי זמן ארוכים יותר, להוסיף למאגר 25mm Hepes לשמור pH של התקשורת בתרבות תא או באופן אידיאלי, במקום צלחות המנגנון וטיפול בתוך חממה עם ריכוז CO 2 המוסדרים עד 5% CO 2, או תנאים שהם אופטימליים לסוג תא המסוים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השלמת הטיפול באור, למקם את התאים על משטח ישר ולדגור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 (או מה תנאים אופטימליים לסוג התא) ל24h. הערה: מינונים נוספים של R / NIR-LT יכולים להינתן כמתואר לעיל, כרצונכם. </li></ol> 5. סופי מינון של אור טיפול ואיתור של ROS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ביצוע הסיבוב של טיפול באור האחרון, להכין את חומרים כימיים שישמשו לזיהוי ROS. הכן חיץ 50mm ציטרט (pH6.0), טריטון X100, וH 2 O 2 מגיב זיהוי עובדפתרון (1: 2: 97 יחס של 2 O 2 פתרון מניות מגיב זיהוי 10mm H; 10 U / peroxidase חזרת מיליליטר; נתרן ציטרט 50mm (pH 6.0)). הכן DCFH-DA בריכוז סופי של 100μM בתקשורת מתאימה. הערה: מגיב DCFH-DA לתאי PC12 הוא בתקשורת RPMI, מגיב DCFH-DA לתאי rMC1 הוא בתקשורת DMEM. שים לב שיש לי ריאגנטים זיהוי זמינים מסחרי רגישויות ההפרש לROS הספציפי ויש לבחור ריאגנטים בקפידה כדי לספק את המידע מבוקש עבור יישום בודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל טיפול באור לתאים, כמתואר בשלב 4.1-4.1.2. מטופלים להבטיח את התאים עם fluences / אורכי הגל הרצויים של אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאחר טיפול באור, להסיר את המדיה המכיל גלוטמט ולשטוף פעמיים עם פתרון חיץ מתאים (לתאי PC12, PBS משמש ולתאי rMC1, HBSS משמש). לבצע את מבחני ROS בתאים באופן הבא: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> H 2 O 2 2 במשך 15 דקות. הוסף 50 μl של H 2 O 2 פתרון עובד איתור ודגירה של 30 דקות ב RT. למדוד הקרינה באמצעות קורא צלחת עם גל עירור של 530nm ואורך גל פליטה של ​​480nm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> assay DCF: להוסיף משל DCFH-DA הפתרון 100 מיקרומטר לכל אחד מהבארות 100 μl ו דגירה של 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. הסר את המדיה המכילה 100 מיקרומטר DCFH-DA ולשטוף עם פתרון חיץ מתאים (כמתואר לעיל) פעמיים. להוסיף 90 μl של פתרון חיץ ו -10 μl טריטון X100 לכל אחד מהבארות ובעדינות לנער על שייקר מסלולית למשך 30 שניות לפני 15 דקות דגירה על 37 מעלות צלזיוס. למדוד הקרינה נגזרה DCF באמצעות קורא צלחת עם גל עירור של 480nm וwavel פליטהength של 530nm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Express ROS ערכים ביחס לריכוז החלבון של תאים שנותרו בבארות, באמצעות ערכת colorimetric לכמת ריכוז חלבון על פי הוראות יצרן, תוך התייחסות לעקומה סטנדרטית לחישוב חלבון מ"ג. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Gutterman, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+and+reactive+oxygen+species+an+evolution+in+function%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Mitochondria and reactive oxygen species an evolution in function.</a> Circulation research. 97, 302-304 (2005).</li>
<li>Camello-Almaraz, C., Gomez-Pinilla, P. J., Pozo, M. J., Camello, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+reactive+oxygen+species+and+Ca2%2B+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial reactive oxygen species and Ca2+ signaling.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 291, C1082-C1088 (2006).</li>
<li>Kowaltowski, A. J., de Souza-Pinto, N. C., Castilho, R. F., Vercesi, A. E. Mitochondria and reactive oxygen species. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKowaltowski%2C+AJ+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22">Free Radical Biology and Medicine</a>. 47, 333-343 (2009).</li>
<li>Coyle, J. T., Puttfarcken, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress%2C+glutamate%2C+and+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress, glutamate, and neurodegenerative disorders.</a> Science. 262, 689-695 (1993).</li>
<li>Doble, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+excitotoxicity+in+neurodegenerative+disease%3A+implications+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+%26+therapeutics%22%5BJournal%5D)">The role of excitotoxicity in neurodegenerative disease: implications for therapy.</a> Pharmacology & therapeutics. 81, 163-221 (1999).</li>
<li>Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+therapies+for+acute+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Antioxidant therapies for acute spinal cord injury.</a> Neurotherapeutics. 8, 152-167 (2011).</li>
<li>Jia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+in+spinal+cord+injury+and+antioxidant-based+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress in spinal cord injury and antioxidant-based intervention.</a> Spinal Cord. 50, 264-274 (2012).</li>
<li>Fitzgerald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Red%2Fnear-infrared+irradiation+therapy+for+treatment+of+central+nervous+system+injuries+and+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+the+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Red/near-infrared irradiation therapy for treatment of central nervous system injuries and disorders.</a> Reviews in the Neurosciences. 24, 205-226 (2013).</li>
<li>Rutar, M., Natoli, R., Albarracin, R., Valter, K., Provis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((670-nm+light+treatment+reduces+complement+propagation+following+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">670-nm light treatment reduces complement propagation following retinal degeneration.</a> J Neuroinflammation. 9, 257(2012).</li>
<li>Eells, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+photobiomodulation+for+methanol-induced+retinal+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Therapeutic photobiomodulation for methanol-induced retinal toxicity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 100, 3439-3444 (2003).</li>
<li>Begum, R., Powner, M. B., Hudson, N., Hogg, C., Jeffery, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+with+670+nm+light+up+regulates+cytochrome+C+oxidase+expression+and+reduces+inflammation+in+an+age-related+macular+degeneration+model%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Treatment with 670 nm light up regulates cytochrome C oxidase expression and reduces inflammation in an age-related macular degeneration model.</a> PloS one. 8, e57828(2013).</li>
<li>Byrnes, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+promotes+regeneration+and+functional+recovery+and+alters+the+immune+response+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+surgery+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Light promotes regeneration and functional recovery and alters the immune response after spinal cord injury.</a> Lasers in surgery and medicine. 36, 171-185 (2005).</li>
<li>Liang, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photobiomodulation+partially+rescues+visual+cortical+neurons+from+cyanide-induced+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Photobiomodulation partially rescues visual cortical neurons from cyanide-induced apoptosis.</a> Neuroscience. 139, 639-649 (2006).</li>
<li>Zivin, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+and+safety+of+transcranial+laser+therapy+for+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Effectiveness and safety of transcranial laser therapy for acute ischemic stroke.</a> Stroke. 40, 1359-1364 (2009).</li>
<li>Lapchak, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+near-infrared+laser+therapy+applied+to+promote+clinical+recovery+in+acute+and+chronic+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+review+of+medical+devices%22%5BJournal%5D)">Transcranial near-infrared laser therapy applied to promote clinical recovery in acute and chronic neurodegenerative diseases.</a> Expert review of medical devices. 9, 71-83 (2012).</li>
<li>Chung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nuts+and+bolts+of+low-level+laser+%28light%29+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+biomedical+engineering%22%5BJournal%5D)">The nuts and bolts of low-level laser (light) therapy.</a> Annals of biomedical engineering. 40, 516-533 (2012).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-Level+Laser+Therapy+for+Closed-Head+Traumatic+Brain+Injury+in+Mice%3A+Effect+of+Different+Wavelengths%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+surgery+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Low-Level Laser Therapy for Closed-Head Traumatic Brain Injury in Mice: Effect of Different Wavelengths.</a> Lasers in surgery and medicine. 44, 218-226 (2012).</li>
<li>Hashmi, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+low-level+laser+therapy+in+neurorehabilitation%5BTitle%5D)+AND+%22PM%26R%22%5BJournal%5D)">Role of low-level laser therapy in neurorehabilitation.</a> PM&R. 2, S292-S305 (2010).</li>
<li>Fitzgerald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metallothionein-IIA+promotes+neurite+growth+via+the+megalin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Metallothionein-IIA promotes neurite growth via the megalin receptor.</a> Experimental Brain Research. 183, 171-180 (2007).</li>
<li>Fitzgerald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+light+reduces+oxidative+stress+and+preserves+function+in+CNS+tissue+vulnerable+to+secondary+degeneration+following+partial+transection+of+the+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Near infrared light reduces oxidative stress and preserves function in CNS tissue vulnerable to secondary degeneration following partial transection of the optic nerve.</a> Journal of neurotrauma. 27, 2107-2119 (2010).</li>
<li>Ando, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+laser+therapy+for+spinal+cord+injury+in+rats%3A+effects+of+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+biomedical%22%5BJournal%5D)">Low-level laser therapy for spinal cord injury in rats: effects of polarization.</a> Journal of biomedical. 18, 098002(2013).</li>
<li>Lanzafame, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocity+of+exposure+time+and+irradiance+on+energy+density+during+photoradiation+on+wound+healing+in+a+murine+pressure+ulcer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+surgery+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Reciprocity of exposure time and irradiance on energy density during photoradiation on wound healing in a murine pressure ulcer model.</a> Lasers in surgery and medicine. 39, 534-542 (2007).</li>
<li>Castano, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+laser+therapy+for+zymosan+induced+arthritis+in+rats%3A+Importance+of+illumination+time%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+surgery+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Low-level laser therapy for zymosan induced arthritis in rats: Importance of illumination time.</a> Lasers in surgery and medicine. 39, 543-550 (2007).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

יש לנו להתאים בהצלחה מערכת אספקת האור מדויקת ומכוילת לספק מנגנון למחקר של אופטימיזציה של R / NIR-LT במבחנה. פרמטרים אורך גל ועוצמת R / NIR-LT מסוגלים לטפל בצורה מדויקת ויעיל באמצעות מערכת זו. אנחנו קבענו כי טיפול באור של התאים לא הובילו למוות של תאים, אם כי ROS לא הוקטן באורכי הגל והמינון נמסרו, בסוגי התאים שנבדקו. העוצמות המרביות מושגת על ידי המערכת הנוכחית ב670nm (20.11W / m 2) נמצאות בעודף של צעדים שפורסמו בעבר של חדירות של קרינה למוח החולדה, שבי 1.17 W / m ...

מיני חמצן מגיבים (ROS) נדרשים למגוון רחב של מסלולי העברת אותות ותגובות נורמליות של חילוף חומרים תאיים, כוללים אלה של neuroprotection 1. עם זאת, כאשר המנגנון נוגד חמצון אנדוגני אינו מסוגלים לשלוט בייצור של ROS, תאים עשויים להיכנע ללחץ חמצוני 2,3. בעקבות פגיעה במערכת העצבים המרכזי, העליות הקשורות בנוכחות של ROS וסטרס חמצונים הם חשבו לשחק תפקיד משמעותי בהתקדמות נזק 4,5. למרות המספר הרב של אסטרטגיות להחלשת לחץ חמצוני שכבר העריך, אין כיום, אסטרטגיות נוגדת חמצון רלוונטיים קליני יעילות לחלוטין להחלשת ייצור ROS וסטרס החמצונים הקשורים בשימוש קליני הבא neurotrauma 6. לכן הנחתה של סטרס חמצונים נשארה מטרה חשובה להתערבות טיפולית 7. שיפורי מעקבR ing / NIR-LT כבר דיווח במגוון רחב של פציעות ומחלות, כולל הפחתה בגודל Cardial אוטם, סיבוכי כליות וכבדים בסוכרת, ניוון רשתית, פגיעה במערכת העצבים המרכזית ושבץ 8, אולי על ידי הפחתת לחץ חמצוני. בהתייחס בפרט לפגיעה במערכת העצבים המרכזית, מחקרים פרה-קליניים של יעילות של 670nm אור הראו השפעות טובות במודלים של ניוון רשתית 9-11, פגיעה בחוט השדרה 12, מוות עצבי 13. ניסויים קליניים שנערכו לגיל יבש הקשורים ניוון מקולרים והם מתנהלים כיום לשבץ 14, אולם התוצאות של ניסויים אלה אינם מופיעים מבטיחות, אולי בשל כשל להעסיק טיפול יעיל פרמטרים 15. ככזה, R / NIR-LT לא אומץ באופן נרחב כחלק מפרקטיקה קלינית רגילה בneurotrauma, למרות היותו קל לניהול, לא פולשנית וטיפול זול יחסית. חסמים לתרגום קליני כוללים חוסר CLמוקדם הבין מנגנון פעולה והיעדר 16,17 פרוטוקול טיפול יעיל סטנדרטי. ספרות הקיימת לגבי טיפול באור מגלה שפע של וריאציה בפרמטרי טיפול ביחס למקורות קרינה (LED או לייזר), גל (לדוגמא, 630, 670, 780, 810, 830, 880, 904nm), מינון כולל (ג &#39;אול של קרינה / יחידת שטח), משך (זמן חשיפה), תזמון (עלבון מראש או שלאחר), תדירות טיפול ובמצב האספקה ​​(דופק או מתמשך) 8. ההשתנות בפרמטרי טיפול בין המחקרים עושה השוואה קשה ותרמה לספקנות לגבי יעילות 16. לכן, אופטימיזציה של R / NIR-LT בבירור נדרשת, עם מערכות תרבית תאים מסוגלים לספק את מנגנון הקרנת התפוקה הגבוהה הדרוש כדי להשוות את המשתנים המרובים. עם זאת יש מערכות תאורה זמינות מסחרי כמה שיכול לספק גמישות מספקת ושליטה על wavelength ועוצמה לבצע ניסויי אופטימיזציה כזה. מסחרי התקני LED זמינים הם בדרך כלל לא מסוגלים לספק אורכי גל מרובים או עוצמות, וכתוצאה מכך חוקרי העסקת התקני LED מרובים של יצרנים שונים, אשר עשוי להשתנות לא רק בעצמה, אלא גם את הספקטרום של אורך גל של האור הנפלט. יש לנו לטפל בבעיה זו על ידי שימוש במקור אור בפס רחב קסנון המסונן דרך מסנני התערבות צר, ובכך לייצר מגוון רחב של אורכי גל וfluences של אור, המאפשר שליטה הדוקה, מדויקת של הפרמטרים של R / NIR-LT. חשוב לציין כי המינון הטיפולי של טיפול מוגדר במספר הפוטונים אינטראקציה עם photoacceptor (chromophore), אשר, במקרה של R / NIR-LT הנחה היא להיות מונואמין ג ציטוכרום (COX) 18. אנרגיית פוטון נמסרה משתנה עם אורך גל; כלומר מינונים שווים של אנרגיה באורכי גל שונה יהיה comיקר של מספרים שונים של פוטונים. לכן, האור הנפלט מהמכשיר כויל לפלוט מספר שווה של פוטונים לכל אחד מאורכי הגל שנבחרו להיבדק. פיתחנו מערכת שיכול לשמש כדי לספק R / NIR-LT במגוון של אורכי גל ועוצמות לתאים במבחנה והפגנתי היכולת למדוד את ההשפעות של R מועבר / NIR-LT על ייצור ROS בתאים נתון ל לחץ גלוטמט.

<table><tbody><tr><td>ערכת בדיקת ROS תוך-תאית OxiSelect (פלואורסצנטי ירוק)</td><td>Cell Biolabs</td><td>STA-342</td><td></td></tr><tr><td>Amplex UltraRed Reagent</td><td>בדיקות מולקולריות</td><td>A36006</td><td></td></tr><tr><td>300 וואט מנורת קשת קסנון</td><td>Newport Corporation</td><td>6258</td><td>מקור אור אינטנסיבי מאוד, אל תסתכל ישירות לתוך המנורה. ודא שיש מספיק קירור למנורה בזמן שהיא מופעלת</td></tr><tr><td>USB4000-FL ספקטרומטר פלואורסצנטי</td><td>אופטיקה</td><td></td><td></td>אוקיינוס</tr><tr><td>CC-3-UV מתקן קוסינוס לאיסוף</td><td>פליטות אופטיקה</td><td></td><td></td>אוקיינוס</tr><tr><td>200&mu; קוטר m קוורץ סיבים</td><td>אופטיים אופטיקה</td><td></td><td></td>אוקיינוס</tr><tr><td>SpectraSuite פלטפורמת ספקטרוסקופיה</td><td>אופטיקה</td><td></td><td></td>אוקיינוס</tr><tr><td>2300 EnSpire Multimode קורא צלחות</td><td>פרקין אלמר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פירס BCA ערכת בדיקת חלבון</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td>רעילות חריפה, ללבוש כפפות בעת הטיפול.</td></tr><tr><td>L-גלוטמית חומצה מונוסודיום מלח הידרט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>142-47-2 (נטול מים)</td><td></td></tr><tr><td>Pheochromocytoma חולדה מדולה יותרת הכליה (PC12)</td><td>אוסף תרביות מסוג אמריקאי</td><td>CRL-2522</td><td></td></tr><tr><td>מכון רוזוול פארק ממוריאל (RPMI1640) Media</td><td>Gibco</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי, מוסמך, מושבת בחום, מוצא ארה"ב</td><td>Gibco</td><td>10082-147</td><td>חם ל-37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש</td></tr><tr><td>סרום סוסים, ממקור ניו זילנדי</td><td>Gibco</td><td>16050-122</td><td>חם עד 37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש</td></tr><tr><td>תוסף GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>חם ל-37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש</td></tr><tr><td>100 מ"מ נתרן פירובט</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td>חם עד 37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין (10,000 יח'/מ"ל)</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>חם עד 37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש</td></tr><tr><td>100X MEM תמיסת חומצות אמינו לא חיוניות</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>חם ל-37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש</td></tr><tr><td>תאי רטינל מולר (rMC1)</td><td>אוניברסיטת קליפורניה, סן דייגו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>דולבקו'ס מדיום נשר מותאם (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965-118</td><td>חם עד 37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש</td></tr><tr><td>75 ס"מ2 צלוחיות</td><td>BD Biosciences</td><td>B4-BE-353136</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-lysine hydrobromide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>25988-63-0</td><td>Aliquot ויש לאחסן ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>תמיסת המלח המאוזנת של האנק (HBSS)</td><td>Gibco</td><td>14025-134</td><td>חם ל-37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש</td></tr><tr><td>תמיסת מלח עם חוצץ פוספט (PBS)</td><td>Gibco</td><td>10010-049</td><td>לחמם ל-37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש חלבון</td></tr><tr><td>עכבר למינין,</td><td>טבעי Gibco</td><td>23017-015</td><td>Aliquot ואחסן בטמפרטורה של -20 מעלות; C</td></tr><tr><td>1X נוירובזאלי בינוני</td><td>Gibco</td><td>21103-049</td><td>חם עד 37 מעלות; C באמבט מים לפני השימוש</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td> <td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>165U Papain</td><td>Worthington</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Cysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W326305</td><td></td></tr><tr><td>Corning 96 לוחות באר, תחתית שקופה,</td><td>קורנינג</td> שחור <td>CLS3603-48EA</td><td></td></tr><tr><td>Costar צלחות פוליסטירן שקוף 96 בארות לא מטופלות; צורת באר: עגול; עקר.</td><td>Costar</td><td>07-200-103</td><td></td></tr><tr><td>נדנדה</td><td>נדנדה מעבדה סטנדרטית צנטריפוגה</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>מעבדה סטנדרטית נייר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סינון צפיפות ניטרלית (0.3)</td><td>THORLABS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>442 ננומטר מסנן פס פס</td><td>THORLABS</td><td>FL441.6-10</td><td></td></tr><tr><td>550 ננומטר מסנן פס פס</td><td>THORLABS</td><td>FB550-10</td><td></td></tr><tr><td>מסנן פס פס 670 ננומטר</td><td>THORLABS</td><td>FB670-10</td><td></td></tr><tr><td>מסנן פס פס 810 ננומטר</td><td>THORLABS</td><td>FB810-10e</td><td></td></tr><tr><td>לא מותקן ואוסלאש; מסנני צפיפות ניטרלית סופגים 25 מ"מ (0.1)</td><td>THORLABS</td><td>NE01B</td><td></td></tr><tr><td>לא רכוב ואוסלאש; מסנני צפיפות ניטרלית סופגים 25 מ"מ (0.2)</td><td>THORLABS</td><td>NE02B</td><td></td></tr><tr><td>לא רכוב &Oslash; מסנני צפיפות ניטרלית סופגים 25 מ"מ (0.3)</td><td>THORLABS</td><td>NE03B</td><td></td></tr><tr><td>לא רכוב ואוסלאש; מסנני צפיפות ניטרלית סופגים 25 מ"מ (0.5)</td><td>THORLABS</td><td>NE05B</td><td></td></tr><tr><td>לא רכוב ואוסלאש; מסנני צפיפות ניטרלית סופגים 25 מ"מ (0.6)</td><td>THORLABS</td><td>NE06B</td><td></td></tr><tr><td>לא רכוב ואוסלאש; מסנני צפיפות ניטרלית סופגים 25 מ"מ (1.0)</td><td>THORLABS</td><td>NE10B</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטה להערכת ההשפעות של טווח של אורכי גל ועוצמות של אדום / טיפול באור האינפרה-אדום קרוב בסטרס חמצוני במבחנה

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Red טיפול / אור האינפרה-אדום קרוב (R / NIR-LT), מועבר על ידי לייזר או אור דיודה (LED), משפר את התוצאות תפקודיות ומורפולוגיים במגוון של פציעות של מערכת עצבים מרכזיות בגוף חי, ככל הנראה על ידי הפחתת לחץ חמצוני. עם זאת, השפעות של R / NIR-LT על סטרס חמצונים הוכחו להשתנות בהתאם לאורך גל או עוצמת הקרינה. מחקרים שהשוו בין פרמטרים טיפול חסרים, בשל העדר מכשירים זמינים מסחרי המספקים אורכי גל מרובים או עוצמות, מתאימים לגבוהה דרך-לשים במחקרי אופטימיזציה מבחנה. פרוטוקול זה מתאר טכניקה למסירה של אור בטווח של אורכי גל ועוצמות כדי לייעל את המינונים טיפוליים הנדרשים למודל פציעה נתון. חוקרים שערנו כי שיטה להעברת אור, שבו בקלות אפשר לשנות פרמטרים אורך גל ועוצמת, יכולה להקל על קביעת מינון אופטימלי של R / NIR-LT להפחתת מיני חמצן מגיבים(ROS) במבחנה. אור קסנון ללא קוהרנטית היה מסונן דרך מסנני התערבות פס צר כדי לספק אורכי גל שונים (אורכי גל מרכז 440, 550, 670 ו810nm) וfluences (8.5 x 10 -3 ל -3.8 x 10 -1 J / 2 סנטימטר) של אור לתאים בתרבית. תפוקת אור מהמנגנון כוילה לפלוט מינונים רלוונטיים טיפולי, שווים quantal של אור בכל אורך גל. מינים תגובתי אותרו בגלוטמט הדגיש תאים שטופלו באור, באמצעות DCFH-DA וH 2 O 2 צבעי ניאון רגישים. אנחנו בהצלחה נמסרו אור בטווח של אורכי גל רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית וטיפולי ועוצמות, לתאים בתרבית נחשפו לגלוטמט כמודל של פגיעה במערכת העצבים המרכזית. בעוד fluences של R / NIR-LT השתמש במחקר הנוכחי לא להפעיל השפעה על ROS שנוצר על ידי התאים בתרבית, השיטה של ​​מסירת אור ישימה למערכות חלקות אחרותEMS לרבות מבודד מיטוכונדריה או יותר מבחינה פיזיולוגית מודלים תרבות הפרוסה organotypic רלוונטיות, ויכול לשמש כדי להעריך את ההשפעות על מגוון של מדדי תוצאה של מטבוליזם חמצוני.

הפלט של אור נמסר באורך גל של 670nm כויל באמצעות מסנני צפיפות ניטראליים כדי להקרין תאים עם מגוון רחב של fluences מקיף מינון של 670nm אור הראה בעבר להיות מועיל in vivo (0.3 J / cm 2) 20. ככל שמספר מסנני צפיפות ניטראליים מול מקור האור גדל, עוצמת (W / m 2) ירד, מה שמאפשר פחות אור לעבור לאזור היעד. לוח 1 מציג את נתוני הכיול של 670nm אור שנוצרו ממצויד במסנן אורך גל מקור האור וכולל מספר של מסנני ND משמשים ואת עוצמת האור שנוצרה כתוצאה מכך, במרחקים שתוארו מתפ...

אור קסנון לא קוהרנטי הועבר דרך הפרעות צרות פס ומסנני צפיפות ניטרלית כדי להעביר אור באורך גל ועוצמה משתנים לתאים מתורבתים. פרוטוקול זה שימש להערכת ההשפעות של טיפול באור אדום/קרוב לאינפרא אדום על ייצור מינים תגובתיים במבחנה: לא נצפו השפעות באמצעות הפרמטרים שנבדקו.

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

המטרה הכוללת של ההליך הבא היא להעריך את ההשפעות של מגוון אורכי גל ועוצמות של טיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום על מתח חמצוני במבחנה. על מנת לעשות זאת, פיתחנו שיטה חדשה להעברת האור שבה אנו יכולים לתפעל את אורך הגל והעוצמה המועברים. אנו מרכיבים קסנון או מקור אור בפס רחב בבית על בסיס מתכת, ואז מניחים עדשת ציפוי, מסנן מים וצמצם כניסה מול האור.השלב הבא בהליך הוא להנחות את האור שנוצר ממקור האור בפס רחב דרך הכניסה, הצמצם ומוביל האור הנוזלי ודרך עדשת ציפוי שנייה. לאחר מכן מותקנים מסנני רוחב פס וצפיפות ניטרלית כדי להשיג את אורך הגל ועוצמת האור הרצויים. שימו לב שהמסננים מאפשרים מעבר של טווח צר של אורכי גל המכונה פס גל.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני השיטות הקיימות למתן טיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום, כגון נוריות LED או לייזרים, הוא בכך שהיא מאפשרת מניפולציה מדויקת ומכוילת על פרמטרים של אורך גל ועוצמה. זה מאפשר לנו לייעל את אספקת האור לתוצאות הביולוגיות הטובות ביותר שהמחקר הנוכחי נותן כמו תאים מנותקים. בנוסף, ניתן ליישם אותו גם על מערכות אחרות כגון אורגנוטיפית, מודלים של נוירוטראומה.בעת עבודה עם כל מקור אור בפס רחב בהיר, ודא שאינך מסתכל ישירות לתוך מקור האור מכיוון שהוא עלול לגרום לנזק חזותי קבוע. כדי להכין את מנגנון אספקת האור, חבר מקור אור בפס רחב כגון קסנון או טונגסטן lamp לאספקת חשמל מתאימה. מקם עדשת איסוף מול מקור האור כדי לייצר אלומת אור שנאספה.העבירו את האור דרך מסנן חום נוזלי כדי להסיר את רוב החום מקרן האור. מקמו עדשת איסוף לפני מקור האור כדי לייצר אלומת אור שנאספה. העבירו את האור דרך מסנן חום נוזלי כדי להסיר את רוב החום מקרן האור.בהתאם ליישום, מקד את האלומה המורכבת לעורק הכניסה של מוביל אור נוזלי כדי לספק אספקה גמישה יותר של האור. בקצה השני של מוביל האור הנוזלי מקם עדשת ציפוי שנייה ולאחר מכן מחזיק למסנני ההפרעות והצפיפות הנייטרלית. סידור זה אמור לייצר נקודת אור מוארת באופן שווה של פס הגל והעוצמה הרצויים.ייתכן שהמרחק בין קצה מוביל האור למישור הדגימה יצטרך להשתנות בהתאם לאזור שיש להאיר. חשוב לזכור שבהתאם לחוק הריבוע ההפוך, ככל שהמרחק מקצה מוביל האור גדל, עוצמת האור תפחת במחקר הנוכחי. מרחק זה הוא 14 סנטימטרים, מה שמביא לייצור חתך קרן המאיר באופן שווה שטח באר של שלוש על שלוש על צלחת תרבית רקמות של 96 בארות.ודא שאור תועה מהמנורה ורכיבים אופטיים נלווים אינו מסוגל להגיע לדגימות אחרות, למשלample, באמצעות קרטון שחור. לאחר בניית המכשיר, הפעל את מצנן המים עבור מסנן החום הנוזלי וודא שיש חילופי מים דרך מעטפת המסנן. הפעל את המנורה מקור החשמל והמתן לפחות חמש דקות למקור האור בפס רחב.כדי לייצב, בחר מסנן הפרעות פס צר כדי ליצור את פס הגל הרצוי של התאורה. מדוד את האור המופק על ידי המנורה במישור שבו יש למקם את הדגימה. במהלך הטיפול.האור נמדד באמצעות בדיקת קרינה מכוילת המחוברת לספקטרום מתאים. רדיומטר. השתמש במסנני צפיפות ניטרלית כדי להתאים את עוצמת האור עד לקבלת התפוקה הרצויה. במחקר הנוכחי, עוצמת האור המועברת על ידי כל מסנן הפרעות מותאמת כדי לתת פלט איכותי שווה בכל אחת מארבעת רצועות גל הטיפול.ניתן ליישם את שיטת הטיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום המתוארת על כל סוג תא או מערכת מודל במבחנה. כאן אנו מראים את הטכניקה שלנו להעברת אור לתאים באמצעות פאוכרומוציטומה או תאי PC 12. כדוגמה, תאי תרבית באמצעי גידול.ב 96, מגשים היטב מצופים בפוליאול ליזין עד שהם מתכנסים 70 עד 80%. הכן את הריכוז הרצוי של גלוטמט או גורם לחץ חלופי במצע תרבית גדילה מלאה. כאן אנו משתמשים ב-10 מילי-מולרי גלוטמט.הסר את המדיה מהתאים ושטוף אותם בעדינות שלוש פעמים עם מי מלח פוספט. לאחר הכביסה יש להוסיף מדיה המכילה גלוטמט לנפח כולל של מאה מיקרוליטר לבאר. מיד עם הוספת גלוטמט או גורם הלחץ הנבחר, חשוף תאים לטיפול באור באורכי הגל ובעוצמות הרצויים על ידי הנחת לוחית התרבית מתחת למנגנון אספקת האור המוכן.הקפד לשנות את תפוקת האיכות של אלומת האור באמצעות השילובים הקבועים של מסנני צפיפות ניטרלית. תלוי באורך הגל המנוהל. לאחר סיום הטיפול באור, יש להניח את התאים על משטח ישר ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתנאים מווסתים של פחמן דו חמצני למשך 24 שעות.ניתן לתת גם מינונים נוספים של טיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום. לפני ביצוע הסבב האחרון של טיפול באור, הכינו את הריאגנטים שישמשו לזיהוי מיני חמצן תגובתיים כאינדיקטור למתח חמצוני. כאן אנו משתמשים בדיאטות מסומנות שזוהרות כאשר הן מגיבות עם מגוון מינים תגובתיים, כולל דילו, פלואורסצאין D אצטט, נותנות טיפול באור לתאים כמתואר בשלב הרביעי, מוודאות שהתאים מטופלים בשפעת הרצויה ובאורכי גל של אור.מיד לאחר טיפול קל, יש להסיר את החומר המכיל גלוטמט ולשטוף פעמיים עם PBS. המשך בבדיקות תוך שימוש בצבעי אינדיקטור שזוהרים כאשר הם מגיבים עם מינים תגובתיים בהתאם להוראות היצרן. מדוד את הקרינה שנוצרת על ידי צבעי המחוון באמצעות קורא צלחות המוגדר להגדרות העירור והפליטה המתאימות.השתמש בצבע הערכה המטרית כדי לכמת את ריכוז החלבון בבארות בהתאם להוראות היצרן. ביטוי תפוקות פלואורסצנטיות ביחס לריכוז החלבון עבור כל באר בודדת, ולאחר מכן ניתוח תוצאות באמצעות תוכנה סטטיסטית. פיתוח טכניקה זו סולל את הדרך לחוקרים החוקרים את ההשפעות של אורכי גל ועוצמות מרובות של טיפול באור אדום קרוב לאינפרא אדום על מתח חמצוני.טכניקה זו עשויה לשמש במערך של מערכות מודל, כולל תאים מנותקים או תרביות אורגנוטיפיות.

method-for-assessment-effects-range-wavelengths-intensities-rednear

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מתאר את הטכניקה של הדמיה של עקה חמצונית באורגנואידים בתרבית. עבודה זו מסייעת בהבנת רמת העקה החמצונית עקב הצטברות ROS בסוגי התאים השונים הקיימים באורגנואיד לאחר טיפול במודולטורים שונים של ROS.

בדיקת הדמיה פלואורסצנטית: טכניקה להמחשת עקה חמצונית בתאי אורגנואיד בתרבית של מיני חמצן תגובתי שטופלו על ידי השראת תאים אורגנואידים במעי

סרטון זה מדגים את בדיקת החומרים הריאקטיביים של חומצה תיוברביטורית (TBARS) להערכת עקה חמצונית בדגימות ביולוגיות.

בדיקת חומרים תגובתיים חומצה תיוברביטורית להערכת עקה חמצונית בסרום אנושי

סרטון זה מדגים בדיקת לוחית נקודתית המותאמת להערכת תגובות העקה החמצונית של זני חיידקים. זנים מסוימים מייצרים פיומלנין, פיגמנט נוגד חמצון. לעומת זאת, זנים המטופלים בחומר בדיקה, המוביל לייצור מופחת של פיומלנין, מפגינים רגישות מוגברת לעקה חמצונית, וכתוצאה מכך כדאיות התא פוחתת בהשוואה לזנים מייצרי פיומלנין.

בדיקת צלחת נקודתית להערכת תגובות עקה חמצונית בזני חיידקים

אנו מציגים גישה ספקטרוסקופית אופטית מפוזרת (DOS) המספקת סמנים ביולוגיים אופטיים כמותיים של תגובת העור לקרינה. אנו מתארים תכנון מכשור DOS, אלגוריתמי מיצוי פרמטרים אופטיים ונהלי הטיפול בבעלי חיים הנדרשים כדי להפיק נתונים מייצגים ממודל עכבר פרה-קליני של אריתמה הנגרמת על ידי קרינה.

מפוזר ספקטרוסקופיה אופטית עבור הערכה כמותית של רעילות העור לקרינה מייננת מושרה חריפה שימוש במודל של עכברים

כתב יד זה מתאר את השימוש fluorogenic מקודד גנטית כתבים ביישום של הדמיה לחיות תאים עבור הבחינה של xenobiotic-induced סטרס חמצוני. זו גישה נסיונית מציע רזולוציית ייתכן ללא תחרות, רגישות וספציפיות תוך הימנעות רבים את חסרונותיה של שיטות קונבנציונליות המשמש את הגילוי של רעילות סטרס חמצוני.

הדמיה גישות הערכות של רעילות לחץ חימצוני באמצעות חיישנים Fluorogenic מקודד גנטית

אנו מתארים יישום לא פולשנית ויוו הדמיה פרוטוקול מאופין בעיצוב חסכוני, ניצול L-012, chemiluminescent הלומינול-אנלוגי, כדי להמחיש ולכמת מינים חמצן תגובתי (ROS) שנוצר במודל של עכברים excisional פצע.

אין ויוו הדמיה של מינים חמצן תגובתי ב מאתר פצע מודל

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לזהות סה כ חמצן הסלולר מינים (ROS) באמצעות 2 ', 7 '-diכלור דיהידרוטסטוסטרון diאצטט (DCFH-DA). שיטה זו יכולה להמחיש לוקליזציה של רוס הסלולר בתאי חסיד עם מיקרוסקופ פלואורסצנטית ועוצמה ROS מכמת עם קורא צלחת הקרינה. פרוטוקול זה הוא פשוט, יעיל וחסכוני.

גילוי של מינים החמצן תגובתי כוללת בתאי חסיד על ידי 2 ', 7 '-Diכלור דיהידרוטסטוסטרון di, מכתים

פרוטוקול זה מתאר את ההערכה של מצב החמצון הייחודי של תא משנה בתוך התא. בדיקה פלואורסצנטית תלויית-חמצון רגישה מאפשרת ניתוח טימטרי נוח בתאים שלמים.

הערכה של חמצון הסלולר באמצעות מערכת משנית ספציפי לחמצון-רגיש ירוק פלורסנט ירוקה

פרוטוקול זה מתאר שיטה חדשנית לכימות מיני חמצן תגובתי תוך-תאי (ROS) באמצעות דיהידרואתידיום (DHE) כבדיקת צבע פלואורסצנטי באמצעות גישת סינון בתפוקה גבוהה. הפרוטוקול מתאר את השיטות להערכה כמותית של מיני חמצן תגובתי תוך-תאי (ROS) בשלושת קווי תאי הקרצינומה ההפטוצלולרית השונים.

הערכת סינון בתפוקה גבוהה של ייצור מיני חמצן תגובתי (ROS) באמצעות צבע פלואורסצנטי Dihydroethidium (DHE)

כימות של צורות מחומצנות ומופחתות של גלוטתיון (GSSG ו-GSH, בהתאמה) הושג באמצעות שימוש באורתו-פתאלדהיד (OPA). OPA הופך להיות פלואורסצנטי מאוד ברגע שהוא מצומד ל-GSH אך אינו מסוגל להצמיד GSSG עד שהוא מופחת. כאן, אנו מתארים בדיקה רב-פרמטרית לכימות שניהם באמצעות כימות חלבונים לנורמליזציה.

כימות מהיר של צורות מחומצנות ומופחתות של גלוטתיון באמצעות אורתו-פתאלדהיד בתאי יונקים בתרבית במבחנה

למד שיטה חדשנית להערכת השפעות טיפול באור אדום ואינפרה-אדום קרוב על סטרס חמצוני בתאים מגודלים במבחנה. השיטה מאפשרת שליטה מדויקת באורכי גל ובעוצמות לייעול תוצאות ביולוגיות.

שיטה להערכת ההשפעות של טווח של אורכי גל ועוצמות של אדום / טיפול באור האינפרה-אדום קרוב בסטרס חמצוני במבחנה

גלה סרטונים נוספים