Name: לדוגמא הכנת אסטרטגיות להדמית ספקטרומטריית המסה של מודלי תרבית תאי 3D (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: למדו הכנת תרביות תאים תלת-ממדיות לניתוח באמצעות ספקטרומטריית מסה. הפרוטוקול כולל בניית התרביות, הטמעה בג'לטין, חיתוך בקריוסטט וניתוח MALDI MSI. שיטה זו מאפשרת זיהוי חלבונים, ליפידים ומטבוליטים ללא צורך בסימון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי קרן וולטר לסרטן במסגרת התוכנית לקידום מחקר בסיסי בסרטן למכון הרפר לחקר הסרטן של אוניברסיטת נוטרדאם (DARW) ומענק התחלתי לשנת 2011 מהאגודה לכימאים אנליטיים של פיטסבורג (ABH). תודה גם לצוות המתקן לספקטרומטריית מסה ופרוטאומיקה על דיונים מועילים.

<ol><li>Schober, Y., Guenther, S., Spengler, B., Römpp, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+mass+spectrometry+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Single cell matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry imaging.</a> Anal Chem. 84 (15), 6293-6297 (2012).</li>
<li>Cornett, D., Frappier, S., Caprioli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI-FTICR+imaging+mass+spectrometry+of+drugs+and+metabolites+in+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">MALDI-FTICR imaging mass spectrometry of drugs and metabolites in tissue.</a> Anal Chem. 80 (14), 5648-5653 (2008).</li>
<li>Reyzer, M. L., Hsieh, Y., Ng, K., Korfmacher, W. a, Caprioli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+analysis+of+drug+candidates+in+tissue+by+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Direct analysis of drug candidates in tissue by matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry.</a> J Mass Spectrom. 38 (10), 1081-1092 (2003).</li>
<li>Reyzer, M. L., Chaurand, P., Angel, P. M., Caprioli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+molecular+analysis+of+whole-body+animal+tissue+sections+by+MALDI+imaging+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct molecular analysis of whole-body animal tissue sections by MALDI imaging mass spectrometry.</a> Methods Mol Biol. 656 (18), 285-301 (2010).</li>
<li>Cornett, D., Reyzer, M., Chaurand, P., Caprioli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI+imaging+mass+spectrometry%3A+molecular+snapshots+of+biochemical+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">MALDI imaging mass spectrometry: molecular snapshots of biochemical systems.</a> Nat Methods. 4 (10), 828-833 (2007).</li>
<li>Guenther, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histology+by+mass+spectrometry%3A+label-free+tissue+characterization+obtained+from+high-accuracy+bioanalytical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed+Engl%22%5BJournal%5D)">Histology by mass spectrometry: label-free tissue characterization obtained from high-accuracy bioanalytical imaging.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 49 (22), 3834-3838 (2010).</li>
<li>Schwamborn, K., Caprioli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+by+mass+spectrometry--looking+beyond+classical+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging by mass spectrometry--looking beyond classical histology.</a> Nat Rev Cancer. 10 (9), 639-646 (2010).</li>
<li>Kunz-Schughart, L. a, Kreutz, M., Knuechel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+spheroids%3A+a+three-dimensional+in+vitro+culture+system+to+study+tumour+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Multicellular spheroids: a three-dimensional in vitro culture system to study tumour biology.</a> Int J Exp Pathol. 79 (1), 1-23 (1998).</li>
<li>Hirschhaeuser, F., Menne, H., Dittfeld, C., West, J., Mueller-Klieser, W., Kunz-Schughart, L. a <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+tumor+spheroids%3A+an+underestimated+tool+is+catching+up+again%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multicellular tumor spheroids: an underestimated tool is catching up again.</a> J Biotechnol. 148 (1), 3-15 (2010).</li>
<li>Friedrich, J., Seidel, C., Ebner, R., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid-based+drug+screen%3A+considerations+and+practical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Spheroid-based drug screen: considerations and practical approach.</a> Nat Protoc. 4 (3), 309-324 (2009).</li>
<li>Lee, G. Y., Kenny, P. A., Lee, E. H., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+culture+models+of+normal+and+malignant+breast+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells.</a> Nat Methods. 4 (4), 359-365 (2007).</li>
<li>Yamada, K. M., Cukierman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+tissue+morphogenesis+and+cancer+in+3D%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D.</a> Cell. 130 (4), 601-610 (2007).</li>
<li>Fernandes, T. G., Kwon, S. -J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+culture+microarray+for+high-throughput+studies+of+stem+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell culture microarray for high-throughput studies of stem cell fate.</a> Biotechnol Bioeng. 106 (1), 106-118 (2010).</li>
<li>Meli, L., Jordan, E. T., Clark, D. S., Linhardt, R. J., Dordick, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+a+three-dimensional%2C+microarray+environment+on+human+cell+culture+in+drug+screening+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Influence of a three-dimensional, microarray environment on human cell culture in drug screening systems.</a> Biomaterials. 33 (35), 9087-9096 (2012).</li>
<li>Weaver, E. M., Hummon, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+mass+spectrometry%3A+From+tissue+sections+to+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Imaging mass spectrometry: From tissue sections to cell cultures.</a> Adv Drug Deliv Rev. 65 (8), 1039-1055 (2013).</li>
<li>Li, H., Hummon, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+mass+spectrometry+of+three-dimensional+cell+culture+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Imaging mass spectrometry of three-dimensional cell culture systems.</a> Anal Chem. 83 (22), 8794-8801 (2011).</li>
<li>Liu, X., Weaver, E. M., Hummon, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Therapeutics+in+Three-Dimensional+Cell+Culture+Systems+by+MALDI+Imaging+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Therapeutics in Three-Dimensional Cell Culture Systems by MALDI Imaging Mass Spectrometry.</a> Anal Chem. 85 (13), 6295-6302 (2013).</li>
<li>Ahlf, D. R., Masyuko, R. N., Hummon, A. B., Bohn, P. Correlated Mass Spectrometry Imaging and Confocal Raman Microscopy for Studies of Three-Dimensional Cell Culture Sections. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAhlf%2C+DR+%22Analyst%22">Analyst</a>. 139 (18), 4578-4585 (2014).</li>
<li>Derda, R., Tang, S. K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multizone+paper+platform+for+3D+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Multizone paper platform for 3D cell cultures.</a> PloS one. 6 (5), 18940(2011).</li>
<li>Imbeault, S., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. aL. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localizing+protein+in+3D+neural+stem+cell+culture%3A+a+hybrid+visualization+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Localizing protein in 3D neural stem cell culture: a hybrid visualization methodology.</a> J Vis Exp. 2 (46), 2-7 (2010).</li>
<li>He, W., Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+Comparison+of+3D+and+2D+Glioma+Models+Reveals+Increased+HLA-E+Expression+in+3D+Models+is+Associated+with+Resistance+to+NK+Cell-Mediated+Cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Proteomic Comparison of 3D and 2D Glioma Models Reveals Increased HLA-E Expression in 3D Models is Associated with Resistance to NK Cell-Mediated Cytotoxicity.</a> J Proteome Res. 13 (5), 2272-2281 (2014).</li>
<li>Chen, R., Cape, S. S., Sturm, R. M., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+Spectrometric+Imaging+of+Neuropeptides+in+Decapod+Crustacean+Neuronal+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Mass Spectrometric Imaging of Neuropeptides in Decapod Crustacean Neuronal Tissues.</a> Methods Mol Biol. 656, 451-463 (2010).</li>
<li>DeKeyser, S. S., Kutz-Naber, K. K., Schmidt, J. J., Barrett-Wilt, G. A., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Mass+Spectrometry+of+Neuropeptides+in+Decapod+Crustacean+Neuronal+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging Mass Spectrometry of Neuropeptides in Decapod Crustacean Neuronal Tissues.</a> J Proteome Res. 6 (5), 1782-1791 (2007).</li>
<li>Van Hove, E. R. A., Smith, D. F., Fornai, L., Glunde, K., Heeren, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+paper+based+tissue+washing+method+for+mass+spectrometry+imaging%3A+localized+washing+and+fragile+tissue+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">An alternative paper based tissue washing method for mass spectrometry imaging: localized washing and fragile tissue analysis.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 22 (10), 1885-1890 (2011).</li>
<li>Yang, J., Caprioli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+Sublimation%2FRecrystalization+for+Imaging+Proteins+by+Mass+Spectrometry+at+High+Spatial+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Matrix Sublimation/Recrystalization for Imaging Proteins by Mass Spectrometry at High Spatial Resolution.</a> Anal Chem. 83 (14), 5728-5734 (2012).</li>
<li>Seeley, E. H., Oppenheimer, S. R., Mi, D., Chaurand, P., Caprioli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+protein+sensitivity+for+MALDI+imaging+mass+spectrometry+after+chemical+treatment+of+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Enhancement of protein sensitivity for MALDI imaging mass spectrometry after chemical treatment of tissue sections.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 19 (8), 1069-1077 (2008).</li>
<li>Gemperline, E., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI-mass+spectrometric+imaging+for+the+investigation+of+metabolites+in+Medicago+truncatula+root+nodules%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">MALDI-mass spectrometric imaging for the investigation of metabolites in Medicago truncatula root nodules.</a> J Vis Exp. 1 (85), 1-11 (2014).</li>
<li>Deutsch, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mzML%3A+a+single%2C+unifying+data+format+for+mass+spectrometer+output%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">mzML: a single, unifying data format for mass spectrometer output).</a> Proteomics. 8 (14), 2776-2777 (2008).</li>
<li>Pedrioli, P. G. a, Eng, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+common+open+representation+of+mass+spectrometry+data+and+its+application+to+proteomics+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A common open representation of mass spectrometry data and its application to proteomics research.</a> Nat Biotechnol. 22 (11), 1459-1466 (2004).</li>
<li>Lin, S., Zhu, L., Winter, A., Sasinowski, M., Kibbe, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+mzXML+good+for%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Proteomics%22%5BJournal%5D)">What is mzXML good for.</a> Expert Rev Proteomics. 2 (6), 839-845 (2005).</li>
<li>Orchard, S., Hoogland, C., Bairoch, A., Eisenacher, M., Kraus, H. -J., Binz, P. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Managing+the+data+explosion.+A+report+on+the+HUPO-PSI+Workshop.+August+2008%2C+Amsterdam%2C+The+Netherlands%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Managing the data explosion. A report on the HUPO-PSI Workshop. August 2008, Amsterdam, The Netherlands.</a> Proteomics. 9 (3), 499-501 (2009).</li>
<li>Robichaud, G., Garrard, K. P., Barry, J. a, Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MSiReader%3A+an+open-source+interface+to+view+and+analyze+high+resolving+power+MS+imaging+files+on+Matlab+platform%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">MSiReader: an open-source interface to view and analyze high resolving power MS imaging files on Matlab platform.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 24 (5), 718-721 (2013).</li>
<li>Andersson, M., Groseclose, M. R., Deutch, A. Y., Caprioli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+mass+spectrometry+of+proteins+and+peptides+3D+volume+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging mass spectrometry of proteins and peptides 3D volume reconstruction.</a> Nat Methods. 5 (1), 101-108 (2008).</li>
</ol>

מאמר זה הוא חלק מגיליון מיוחד בנושא הדמיה פרה-קלינית רב-מודאלית, בחסות Bruker Biospin. מערכת MALDI-TOF המשמשת להשגת התוצאות המייצגות היא Bruker AutoFlex III.

שימוש בשיטות שתוארו לעיל, תרביות תאי 3D עשויות להיות מבוגרות וניתחו עם MALDI-MSI. שורות תאים הנציחו רבים יהוו מבני 3D כאשר בתרבית כראוי. יש להקפיד 9,10 לטפח תאים שלא עברו יותר מדי פעמים, כלומר, יש לי מספרי מעבר נמוכים. באופן כללי, תאים עם מספרי חלוף עשר ותחתונים הם אופטימליים לגידול תרביות תאי 3D. גידול תרביות תאי 3D בתמיכת agarose מסורתית מספק דרך חסכונית לקבוצות מחקר המתעניייינות בתרבית תאי 3D לנסות מערכת זו. בשיטה זו משתמשת כמה רכיבים לא כבר ברוב מעבדות תרבית תאי יונקים. תשומת לב קפדנית צריכה להיות משולם להכנת צלחות agarose לצמיחה, כך שתרביות תאי 3D עולות בקנה אחד בגודל ובצורה; כמה היבטים שדורשים תשומת לב קפדנית כוללים בדיקה שאין בועות אוויר וממולכד לתערובת וכי המניסקוס נכון נוצר בתחתית כל well. אם המניסקוס לא יתבצע כראוי, התאים עשויים לגדול בצורות שאינן אליפטית או בגושים קטנים. כמו כן, יש לקחת לא למקום PBS לתוך הג&#39;לטין עם spheroids טיפול. אם זה יקרה, להסיר את PBS מהחלק העליון של ג&#39;לטין בעזרת פיפטה 200 μl. אם העלות היא לא גורם, צלחות תחתונה נמוכות במיוחד מחייבות עגולות הם זמינות מסחריות ומציעות פישוט הפעולות הבאות. בעוד שיטות הטבעת רקמות אחרות יכולות להיות גם ספקטרומטריית יקרה ולא המונית תואמות, ג&#39;לטין-הטבעה הוכח להיות גם זול ורבים-תכליתי. אסטרטגיות הכנה שתוארו לעיל כבר מותאמות לתרביות תאי 3D להשיג נתונים באיכות הגבוהות ביותר. בעוד ג&#39;לטין-הטבעה הוכח להיות תואם לניתוח ספקטרומטריה, תהליך זה אמנם מצמצם מטריצות הזמינות בשל שיתוף התגבשות. ברגע קפוא, תרביות תאי 3D יציבות במשך חודשים, כל עוד הם לא בהקפאה מופשרות. ג&#39;לטין הופך אטום כאשר קפוא, ותא 3Dתרבויות הן בצבע דומה, ולכן רצוי לפני ההקפאה לתעד את מיקום תרבית תאי 3D כדי לסייע בחיתוך. בעת הכנת שקופיות, מטריצה ​​יכולה להיות מיושמת במספר שיטות שונות, אך יש לציין כי חלק מהמטריצות נמצאו לשתף להתגבש עם ג&#39;לטין, כגון חומצת ferulic, עיבוד המדגם לא שמיש. גבישי מטריצה ​​קטנים יותר לייצר ספקטרום מסה עקבי יותר. בעוד handspotting היא השיטה הפשוטה של ​​יישום מטריצה, נפח הממס הגדול יותר יכול לגרום לגדלי גביש גדולים יותר והגירה אנליטי משמעותית. בספקטרומטר המסה, התקדמות בטכנולוגיות MALDI-MSI צמצם את המומחיות הנדרשת לתחילת ניתוח. רכישת נתונים וניתוח הוא פשוט ברוב המערכות, המאפשרות אפילו טירון כדי להשיג מידע באיכות גבוהה משקופיות מצופות איטו. בחירה זהירה של הפרמטרים המכשיר, מותאמת בcultur תא הסמוך שאינה תמונה 3D הראויes, הוא קריטי לקבלת נתונים באיכות גבוהה. לדוגמא, הגדלת כוח הלייזר עלולה להגביר עוצמת שיא אבל ירידת כוח הלייזר עשויה לשפר את הרזולוציה ולתת צורות שיא סימטריות יותר. יש להשתמש בתרביות תאי 3D במהירות לאחר חיתוך על מנת להבטיח איכות מדגם אופטימלית. השפלה של אות חלבון ניתן לראות בפחות משבוע ללא אחסון נאות (dessicator / -80 ° C במקפיא), בעיקר באזור המסה הגבוה (מעל 20 KDA). בשל ביקוש ההולך וגדל, תוכנת הדמיה תוכניות רבות ושונות פותחו וחופשיים לציבור המחקר. רוב ספקטרומטרים מסת ההדמיה התקינו את התוכנה דרושה כדי לחזות המונים יחידים עם הפורמטים קנייניים בשימוש בכל מכשיר. תוכנות אלו עשויות לשמש כדי להשיג תמונות חדה-מסה ולייצא את הנתונים. רוב התוכנות תאפשר גם את השכבה של שניים או יותר המונים של עניין. בנוסף, צופים רבים ושונים לנתונים MSI הם להורדה בחינם, כגון MSiReaderד BioMap. 32,33 נתונים ספקטרומטר המסה שהושגו עשוי גם להיות מעובד לאחר רכישה בקלות, הבאת מידע שימושי יותר לחזית. מתרופות לשומנים לחלבונים, המערכת שתוארה לעיל מאפשרת רכישה מהירה של נתונים על מנת להעריך את ההפצה של מולקולות של עניין על פני מבנה תרבית תאי 3D. ניתן לקחת קטעי סדרתי לתמונת מבנה 3D כולו על ידי בנייה מכל תמונת 2D של פרוסת תרבית תאי 3D. הטכניקות והערות בפרוטוקול יהיו שימוש לחוקרים המעוניינים להתחיל תרבית תאים תלת ממדי כגשר בין תרבות monolayer ומודלים של בעלי חיים. ברגע שמשתלט עליו, יכולות להיות מיושמות בטכניקות אלה לסוגים שונים של תרבויות 3D תא, רקמות, ותרביות תאים, המאפשרות לחוקרים תמונה לפי דוגמאות שהם בוחרים.

הדמיית ספקטרומטריית מסה (MSI) היא טכניקה רבת עוצמה לבחינת התפלגות מינים מולקולריים על פני דגימות מעניינות. חוקרים צילמו דגימות ביולוגיות מבעלי חיים שלמים עד לתאים בודדים בטכניקה זו. 1-4 באמצעות MSI ניתן לדמות מאות אנליטים בבת אחת, במקום טכניקות של סובסטרט יחיד הדורשות פיתוח של פלואורופורים נוספים למיקרוסקופיה קונפוקלית מסורתית, או צביעה להיסטולוגיה. 5-7 בנוסף, ניתן להשתמש ב-MSI באופן ממוקד או מבוסס תגלית, מה שהופך אותה לגישה אטרקטיבית לבחון את החפיפה בין התפלגות המינים הכימיים. בפנים מוצגות שיטות לגידול, הכנה והדמיית יינון/ספיגה בלייזר בעזרת מטריצה (MALDI) של דגימות קטנות (בקוטר ~1 מ"מ) של תרביות תאים רב-תאיות תלת מימדיות. 8–11
תרביות תאים תלת-ממדיות מעניינות במיוחד את הקהילה הביולוגית כמתווכת בין תרבית חד-שכבתית מסורתית לגידולים in vivo. כפי שהשם מרמז, תרביות תאים תלת מימדיות הן אגרגטים תאיים הטרוגניים המכילים רבים מהשיפועים הכימיים במיקרו-סביבה הנצפים בגושי גידול אווסקולריים קטנים, מה שהופך אותם למערכת מודל מציאותית יותר לסביבת הגידול המקורית מאשר תרבית חד-שכבתית. 10 ניתן לגדל קווי תאים אנושיים רבים כתרביות תלת-ממדיות, כולל קווי תאים שמקורם ברקמות המעי הגס, השד, השחלות, הערמונית, הכליות והריאות. 10 ישנם אתגרים מובנים בהדמיית תרביות תאים תלת מימדיות מכיוון שהן קטנות יותר מדגימות רבות המשמשות בדרך כלל להדמיית ספקטרומטריית מסה ולכן דורשות הכנת דגימה מדוקדקת. 7 עם זאת, היתרונות של מערכות מודלים ניתנות לביצוע אלה כוללים עלות נמוכה יותר וזמן גידול וניתוח מהירים יותר בהשוואה למודלים של בעלי חיים. כתוצאה מכך, מחקרים הכוללים תרביות תאים תלת מימדיות יכולים להיות בעלי תפוקה גבוהה יותר ממחקרים מסורתיים בבעלי חיים. 12–14
כל היתרונות הללו הביאו לפופולריות גוברת של תרביות תאים תלת-ממדיות במחקר הביולוגי; יש צורך מקביל לפתח אסטרטגיות אנליטיות חדשות כדי לחקור הן את ההרכב והן את ההתפלגות המרחבית של מולקולות במערכות אלה. 12,15–21 מטרת כתב היד הזה היא לתאר את ההתאמה של שיטות הדמיה של ספקטרומטריית מסה והכנת דגימות לתרביות תאים תלת מימדיות.

<table><tbody><tr><td>HCT116 קו תאים</td><td>ATCC</td><td>ATCC CCL-247</td><td>סכנה פוטנציאלית, טפל בזהירות</td></tr><tr><td>במדיה 5A של מקוי</td><td>Gibco</td><td>16600-108</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>HyClone</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>0.25% תמיסת טריפסין-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9539</td><td></td></tr><tr><td>פוספט </td><td>ג'יבקו</td><td>10010049</td><td></td></tr><tr><td>ג'לטין,</td><td>נוקס</td><td></td> ללא טעם <td>זמין ברוב חנויות המכולת בחבילות בודדות</td></tr><tr><td>מגלשות זכוכית מצופות ITO</td><td>Delta Technologies, Limited</td><td>CG-90IN-S115</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-Cyano-4-hydroxycinnamic acid (CHCA)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8982</td><td></td></tr><tr><td>חומצה סינאפית</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85429</td><td></td></tr><tr><td>0.3 מ"מ הזנת כוח הכבידה סט ערכת אקדח ריסוס צבע מברשת אוויר כפולה</td><td>RoyalMax</td><td></td><td>אפשרויות רבות זמינות באתרים כגון Amazon.com</td></tr></tbody></table>

לדוגמא הכנת אסטרטגיות להדמית ספקטרומטריית המסה של מודלי תרבית תאי 3d

Sample Preparation Strategies for Mass Spectrometry Imaging of 3D Cell Culture Models

תרביות תאים תלת-ממדיות הן מודלים אטרקטיביים למחקר ביולוגי. הם משלבים את הגמישות והעלות-תועלת של תרבית תאים עם חלק מהמורכבות המרחבית והמולקולרית של הרקמה. לדוגמה, קווי תאים רבים יוצרים מבנים תלת מימדיים הניתנים בתנאי מבחנה מתאימים. קווי תאים של סרטן המעי הגס יוצרים ספרואידים תלת מימדיים של תרבית תאים, חיקוי במבחנה של גושי גידול אווסקולריים. בעוד שאימונוהיסטוכימיה ושיטות הדמיה קלאסיות אחרות פופולריות לניטור התפלגות של אנליטים ספציפיים, הדמיה ספקטרומטרית מסה בוחנת את התפלגות מחלקות המולקולות בצורה בלתי מוטה. בעוד שהדמיה ספקטרומטרית מסה של MALDI פותחה במקור כדי לחקור דגימות שהתקבלו מבני אדם או ממודלים של בעלי חיים, דוח זה מתאר את הניתוח של תרביות תאים תלת מימדיות במבחנה, כולל שיפורים באסטרטגיות הכנת הדגימה. להלן מתוארות שיטות לגידול, קציר, חתך, שטיפה וניתוח של תרביות תאים תלת מימדיות באמצעות הדמיית לייזר בעזרת מטריצה/יינון-ספקטרומטריית מסה (MALDI-MS). באמצעות תרביות תאים תלת מימדיות של קרצינומה של המעי הגס כמערכת מודל, פרוטוקול זה מדגים את היכולת לנטר אנליטים בצורה בלתי משוחדת על פני מערכת תרביות התאים התלת מימדיות עם MALDI-MSI.

<html> יש הדמיה MSI הפוטנציאל לחשוף הפצה מולקולרית רבות ושונה בתרביות תאי 3D. תוך שימוש בשיטה שתוארה לעיל, מינים ממולקולות קטנות (איור 1) לחלבונים גדולים (איור 2) עשויים להיות במעקב על פני התרבות. תוצאות אלו מראות הדמיה של יון יחיד עם כלי חינם MSiReader. 32 תוצאות עשויות להיות מנותחות ליונים בודדים של עניין על פני תרבית תאי 3D עם תוכנת הדמיה או באזור של עניין או האזור שנסרק כולו. בנוסף רוב התוכנות באופן אוטומטי לדמיין יונים מעל לסף מסוים שנקבע על ידי המשתמש, אשר עשוי לסייע במאמצי גילוי. ברגע שמפות יון בודדים מתקבלות, רוב התוכנות כוללות יכולת כיסוי התמונות לצפייה בcolocalization של יונים. כך או בגישות גילוי מבוסס או באופן ממוקד, ההדמיה ספקטרומטריית מסה היא כלי רב עוצמה כדי לנתח תרביות תאי 3D. בתוך-page = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52313/52313fig1highres.jpg" /> איור 1. תוצאות נציג של צמיחת תרבית תאי 3D וחתך. תמונה אופטית של מבנה מעי גס שלם HCT-116 3D תרבית תאים כפי שנצפו ביום 14 לפני קציר שמאל). מימין) תמונה אופטית של הפרוסה כ משווני של הפשרה תרבית תאי 3D מעי גס רכובה על גבי שקופית מצופה איטו להדמיה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52313/52313fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52313/52313fig2highres.jpg" /> איור 2. תוצאות נציג של מולקולה הקטנה MALDI-MSI של סעיף קו המשווה של תרבית תאי 3D. ספקטרה ההמונית הממוצעת שהושגה עם α-CHCA בטווח מסה נמוכה (מולקולה קטנה) למעלה). ) נציג תמונות תחתיתמסה אחת: 327.8 מ &#39;/ z מקומי בעיקר הפנים של תרבית תאי 3D ו429.7 מ&#39; / z מקומי בעיקר לקצה של תרבות תא 3D. קו מקווקו מציין את הקצה המשוער של אליפטית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52313/52313fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52313/52313fig3highres.jpg" /> איור 3. נציגי תוצאות של הדמיה חלבון על ידי MALDI-MSI של סעיף קו המשווה של תרבית תאי 3D. למעלה) ספקטרה ההמונית הממוצעת שהושגה עם חומצת sinapic בטווח מסת חלבון) (גבוה יותר. תחתון) נציג תמונות של מסה אחת: 10871 מ &#39;/ z מקומי בעיקר לקצה אליפטית, ו12,184 מ&#39; / z מקומי יותר לכיוון הפנים של אליפטית. קו מקווקו מציין את הקצה המשוער של אליפטית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52313/52313fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

ניתן לגדל שורות תאי סרטן הונצחו כתרביות תאי 3D, מודל רב-ערך למחקר ביולוגי. פרוטוקול זה מתאר הדמיה ספקטרומטר מסה של תרביות תאי 3D, כולל שיפורים בפלטפורמת הכנת מדגם. המטרה של פרוטוקול זה היא להנחות את המשתמשים כדי להכין תרביות תאי 3D לניתוח הדמיה ספקטרומטר מסה.

לדוגמא הכנת אסטרטגיות להדמית ספקטרומטריית המסה של מודלי תרבית תאי 3D

Three dimensional cell cultures are attractive models for biological research. They combine the flexibility and cost-effectiveness of cell culture with ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להכין תרביות תאים תלת-ממדיות ולנתח אותן באמצעות דימיון ספקטרומטריית מסות. זאת על ידי הקמה ראשונית של תרביות תאים תלת-ממדיות ומתן אפשרות לצמיחתן עד לגודל הרצוי. השלב השני הוא קציר והטמעה של תרביות התאים התלת-ממדיות בג'לטין.בשלב הבא, תרביתי התאים התלת-ממדיות נחתכות בטמפרטורה של 30- מעלות צלזיוס, באמצעות קריוסטט, ומועמדות על שקופיות מוליכות. השלב האחרון הוא ניתוח הפרוסות באמצעות מכשיר Maldi MSI וביצוע אנליזה של המולקולות שהזוהו. לבסוף, נעשה שימוש בדימוי ספקטרומטריית מסות כדי להראות את השינויים בהתפלגות של אנליטים מהרכבים שונים של ביו-מולקולות ברחבי תרבית התאים התלת-ממדית.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון מיקרוסקופיה או אוטורדיוגרפיה, הוא שמיפוי באמצעות ספקטרומטריית מסות מאפשר זיהוי ואיתור של מספר אנליטים, כגון חלבונים, ליפידים, תרופות ומטבוליטים, בניסוי בודד ללא צורך בסימון עם נוגדנים. את הפרוצדורה יעמידוה דורותי אלף ויהיטקראפט, אני, פוסט-דוקטוראנט, ושין לי, סטודנט לתואר מתקדם ממעבדתו שלהמן. לפני תחילת הפרוצדורה, יש לגדל קו תאים מתאים, כגון קו תאי קרצינומה של המעי הגס HCT 116, בתרבית מונו-שכבה דו-ממדית. לאחר מכן, יש להוסיף 0.19 גרם של aros ל-10 מיליליטר של מצע סטנדרטי בתוך מבחנה קונית בנפח 50 מיליליטר.הבטיחו שילוב על ידי ערבוב עדין, ולאחר מכן בצעו עיקור באוטוקלאב למצעי ה-agros במסבב מים למשך 20 דקות. שאבו בעזרת פפית רב-ערוצית 50 µL מתערובת מצע ה-Agros ל-60 הבארות המרכזיות של פלטת תרבית בעלת 96 בארות עם תחתית שטוחה. מאחר שבבארות בשולי הפלטה קיימים שיעורי התאיידות גבוהים מעט יותר, הוסיפו לבארות אלו 200 µL של phosphate buffered saline בריכוז 1x במקום את ה-aros.לאחר הוספת תערובת ה-aros לבארות הפנימיות, יש להניח את הפלטה בצד להתרבק לסביבות 37 °C לפני הוספת התאים. בשלב זה, יש להוסיף 200 µL של תמיסת התאים המתאימה לפלטת 96 בארות מצופה aros, לכסות את הפלטה ולהניחה באינקובטור לח עם 5% carbon dioxide בטמפרטורה של 37 °C לצמיחת התאים. לאחר האינקובציה, יש להחליף את המצע על ידי שאיבה זהירה של המצע הישן מסביב לתרבית התאים התלת-ממדית הקטנה בתחתית ה-aros.לאחר מכן, הוסיפו בעדינות 200 µL של מצע טרי מעל לתרבית התאים התלת-ממדית. הכינו תמיסה של כ-175 mg/mL ג'לטין במים בדרגת טוהר גבוהה. ערבבו את הג'לטין בעוצמה לאחר שהתמיסה הפכה לצמיגית וקשה לטיפול.הנח את המבחנה בבן-מריה בטמפרטורה של כ-60 °C עד שהתמיסה תהפוך לצלולה וניתנת לשאיבה בקלות. באמצעות פיפט סרולוגי של 2 mL, העבר 0.6 mL של תמיסת הג'לטין החמה אל בארות של פלטה בעלת תחתית שטוחה עם 24 בארות. הנח את תרביות התאים התלת-ממדיות השטופות מיד על גבי שכבת הג'לטין, תוך שימוש בפיפט של 2 mL נפרד כדי למנוע את פגיעתו של המבנה התלת-ממדי.לאחר הנחת תרביות התאים על פני שכבת הג'לטין, העבירו בזהירות באמצעות פיפטה 0.6 milliliters נוספים של תערובת הג'לטין החמה מעליהם, באופן שלא יסיט את מיקומם. לאחר מכן הקפיאו את תרביות התאים התלת-ממדיות המוטמעות בג'לטין בטמפרטורה של minus 80 °C.לאחר הוצאת פלטת 24 הבארים המכילה את תרביתי התאים מהמקפיא, חממו את תחתית הפלטה בעזרת היד עד שניתן יהיה להחליק את הפינצטה בעדינות במורד דופן הבאר. לאחר מכן, החליקו את הפינצטה בצורה חלקה מסביב לדיסקה כדי לשחרר את הג'לטין מבלי להפשיר את המרכז.הוסיפו טיפה של מים לתמיכת הקריוסטט והדביקו את דיסקי הג'לטין לתמיכה. לאחר מכן, הכניסו לקריוסטט להקפאה. לאחר הסרת עודפי הג'לטין כדי לחשוף את תרביות התאים התלת-ממדיות, חתכו אותן באיטיות בתנועה חלקה לפלחים בעובי 12 עד 16 µm.לאחר הפשרת הפרוסות, הצמידו אותן לשקופיות זכוכית מצופות אינדיום טיטניום אוקסיד. לאחר סימון השקופיות, אחסנו אותן בדססיקטור לצורך זיהוי חלבונים שלמים. שטפו את הפרוסות באצטון קר כדי להסיר מולקולות קטנות, כגון ליפידים, העלולות להסוות את האות.הכינו את המטריצה בתמיסה של ממס אורגני ומים עם 0.1%trichloroacetic acid. השתמשו במזרק בעל קצה דק כדי להנח 0.5 µL מתמיסת המטריצה על פרוסת תרבית התאים התלת-ממדית. לאחר מתן זמן למטריצה להתגבש, ייבשו את השקופיות במייבש (desiccate) למשך 30 דקות לפחות לפני ביצוע Maldi MSI.בשלב זה של הניתוח, הכניסו את השקופיות למתאם שנועד להחזיק בבטחה שקופיות בגודל 75 millimeter על 25 millimeter, על מנת לדגום את פרוסות תרבית התאים התלת-ממדיות. לאחר מכן, העמיסו את מתאם השקופיות למכשיר. לאחר פיתוח שיטות רכישת נתונים מתאימות, כוון את טווח המסה עבור רכישת נתוני מולקולות קטנות בין 101,000 m/z ועבור חלבונים בין 8,020 ל-5,000 m/z.לאחר מכן, כוון את עוצמת הלייזר, התדר, מספר פולסות הלייזר וגודל הנקודה באמצעות תמיססת כיול ופרוסה סמוכה של תרבית תאים תלת-ממדית המשמשת כדגימת הקרבה. שמור שיטה זו לשימוש בתוכנת ההדמיה המסופקת על ידי יצרן המכשיר. פתח שיטות לרכישת נתוני חלבונים עבור טווח המסות הנבחר, כפי שתואר בעבר.לאחר מכן, הגדירו את הפרמטרים הספציפיים של מכשיר ה-MS באמצעות תוכנת הדימות. לאחר בחירת פרמטרי המכשיר והגדרת מיקום שיטת הבקרת המכשיר, קבעו היכן לסרוק את תרבית התאים התלת-ממדית. לאחר מכן, בחרו שלוש נקודות ייחוס (teach points) מתאימות על הדגימה והזיזו את הלייזר לכל אחת מהן.בשלב הבא, השג את התצלום האופטי מתוכנת הבקרה של לייזר maldi TOF באמצעות צילום מסך (print screen). לאחר מכן, התחל את תהליך הדמיון באמצעות תוכנת ההדמיה ורכוש ספקטרומי מסה מכל פרוסה לצורך ניתוח ממוקד. בצע ניתוח ידני של הספקטרומים על ידי לחיצה על מסה בספקטרום הממוצע.לבסוף, בצעו ניתוח סטטיסטי עם קבוצות הנתונים שהופקו בתוכנה מתמטית. לדימות בספקטרומטריית מסות יש פוטנציאל לחשוף התפלגויות מולקולריות שונות רבות בתרביתי תאים תלת-ממדיים. באמצעות השיטה שתוארה קודם לכן, ניתן לעקוב אחר מינים, ממולקולות קטנות ועד לחלבונים גדולים, לאורך התרבית.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן ההכנה, הפריסה והניתוח של תרביות תאים תלת-ממדיות באמצעות דימוי בספקטרומטריית מסות.

sample-preparation-strategies-for-mass-spectrometry-imaging-3d-cell

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים לביצוע הדמיית ספקטרומטריית מסה סביבתית (MSI) של רקמות וניתוח MS של תא יחיד (SCMS) באתרו באמצעות בדיקה יחידה, שהיא מכשיר רב תכליתי ממוזער לניתוח טרשת נפוצה.

יישומים של-הבדיקה הבודדה: הדמיה ספקטרומטריית מסה וניתוח תא יחיד בתנאי הסביבה

פרוטוקול זה מתאר שיטה לשחזור אמין עבור הכנת פורמלין קבוע רקמות המיועדים ספקטרומטר מסה דימות מבוסס-סובלימציה.

הכנה אופטימלית של פורמלין קבוע דוגמאות עבור פפטיד מבוסס מטריקס בסיוע לייזר Desorption/יינון ספקטרומטר מסה הדמיה זרימות עבודה

שיטה של הכנת הדוגמא פותחה כדי להתאים coculture תאים ורקמות לזהות מולקולה קטנה exchange באמצעות ספקטרומטר מסה הדמיה.

לכידת תקשורת מולקולה קטנה בין רקמות ותאים באמצעות הדמיה ספקטרומטר מסה

פלטפורמת מניפולציה משולבת תא מפותחת לשימוש בשילוב עם התקנה בודדת המסה בדיקה מאסיבית עבור ניתוח מקוון של תאים ההשעיה בודדים תחת תנאי הסביבה.

משולב תאים מניפולציה פלטפורמה ביחד עם יחיד-בדיקה עבור ניתוח ספקטרומטר המסה של תרופות מטבוליטים בתאים ההשעיה יחיד

כאן, אנו מספקים פרוטוקולים מפורטים, חזקים ומשלימים לביצוע הדמיית צביעה ורזולוציה תת-תאית של מודלים קבועים של תרביות תאים תלת-ממדיות בטווח של 100 מיקרומטר עד מספר מילימטרים, ובכך מאפשרים הדמיה של המורפולוגיה, הרכב סוג התא והאינטראקציות ביניהם.

צביעה והדמיה ברזולוציה גבוהה של מודלים תלת מימדיים של אורגנואידים וכדוריים

פרוטוקול זה מפרט שיטה לייצור של שלושה סוגים שונים של כדוריות באופן שהופך אותם מתאימים להקרנה וניתוח תוכן גבוה בקנה מידה גדול. בנוסף, מוצגות דוגמאות המראים כיצד ניתן לנתח אותם ברמות של כדורי ותאים בודדים.

שיטה איתנה לייצור בקנה מידה גדול של כדורים ליישומי סינון וניתוח בעלי תוכן גבוה

אנו מציגים פרוטוקול לגידול ספרואידים בעלי יכולת שחזור גבוהה ואפיונם הפנוטיפי באמצעות לכידת תמונה ופרוטאומיקה.

ניתוח פנוטיפי חצי אוטומטי של תרביות תאים ספרואידים תלת-ממדיים פונקציונליים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצור תרביות משולבות בהדפסה ביולוגית תלת-ממדית של נוירונים ואסטרוציטים שמקורם ב-iPSC. מודל קוקולטורה זה, שנוצר בתוך פיגום הידרוג'ל בפורמטים של 96 או 384 בארות, מדגים כדאיות גבוהה לאחר ההדפסה וצמיחת עצבים תוך 7 ימים ומראה את הביטוי של סמני בשלות עבור שני סוגי התאים.

הדפסה ביולוגית תלת-ממדית של תרביות נוירון-אסטרוציטים אנושיות שמקורן ב-iPSC עבור יישומי סינון

פרוטוקול זה נועד לשמר מטבוליטים של תאים עבור ספקטרומטריית מסה של תא בודד (SCMS) על ידי שילוב של שטיפת תמיסת מלח נדיפה, מרווה חנקן נוזלי מהיר, ייבוש בהקפאה ואחסון של -8 מעלות צלזיוס. הוא מדגים כי כיבוי חנקן נוזלי חיוני לשמירה על פרופילי מטבוליטים, בעוד שיש למזער אחסון קר ממושך כדי למנוע שינויים מטבוליים.

הכנת מדגם למחקרי מטבולומיקה של ספקטרומטריית מסה של תא בודד: שטיפת תאים משולבת, מרווה, ייבוש ואחסון

פרוטוקול זה מתאר הדמיית ספקטרומטריית מסה חד-תאית של תאי OVCAR-8 באמצעות יינון אלקטרוספריי דספורפציה המחובר לספקטרומטרי מסה Orbitrap לניתוח מטבולומי ברזולוציה מרחבית גבוהה.

הדמיית ספקטרומטריית מסה חד-תאית באמצעות יינון אלקטרוספריי בדסורפציה המשולבת לספקטרומטרי מסה של Orbitrap

למדו הכנת תרביות תאים תלת-ממדיות לניתוח באמצעות ספקטרומטריית מסה. הפרוטוקול כולל בניית התרביות, הטמעה בג'לטין, חיתוך בקריוסטט וניתוח MALDI MSI. שיטה זו מאפשרת זיהוי חלבונים, ליפידים ומטבוליטים ללא צורך בסימון.

לדוגמא הכנת אסטרטגיות להדמית ספקטרומטריית המסה של מודלי תרבית תאי 3D

גלה סרטונים נוספים