Name: הליך כירורגי לResecting צלעות העכבר: מודל לתיקון עצם ארוך בקנה מידה גדולה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: למדו הליך כירורגי לכריתת צלעות בעכבר לחקר תיקון שלד בקנה מידה גדול. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר אירועים תאיים ומולקולריים במהלך ריפוי עצם בחי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לחברי מעבדת מריאני על הקריאה הביקורתית של כתב היד. מקורות המימון שלנו היו: מלגת מחקר של חוקר רפואי בקסטר (ל-M.K.S.), מלגות לתואר ראשון ב-USC ומלגות הפרובוסט, הדיקנית ג'ואן מ. שפר ומלגות רוז הילס, (ל-M.K.S). אנו מכירים גם במלגת CIRM BRIDGES דרך מכללת פסדינה סיטי (ל-T.T.T). וקרן המחקר והחדשנות של ג'יימס ה. זומברג', יוזמת הרפואה הרגנרטיבית של USC ו-NIAMS NIH תחת פרס מספר R21AR064462 (ל-F.V.M).

הערה: כל הנהלים הנן בהתאם לפרוטוקול בעלי חיים אושר על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) באוניברסיטת הדרום קליפורניה. 1. הכנה לניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הכלים כירורגיים ההכרחיים ומתכלות (מעוקר, פריטי 1-18 ברשימת חומרים) ולסדר מיקרוסקופ לנתח וטראנס-מאייר סיבים אופטי במנדף או על שולחן downdraft. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר לבגרות מינית (20 - 30 גר &#39;, 1-3 חודשים) בחדר אינדוקציה עם isoflurane 4% כדי לגרום להרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר הרדמה עם כפה ו / או בדיקת קמצוץ זנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה לעיניו של העכבר, כדי למנוע יובש בעיניים במהלך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את העכבר לבמה מיקרוסקופ. מניחים את העכבר לחרטומו של צינור התחזוקה ומקם רוחבי. לספק נרתיק התחממות סמוך לבעלי החיים כדי לעזור לשמור על טמפרטורת גוף. לאE:. מיקום של העכבר הוא תלוי בהעדפה ו / או שרירות לבו של המנתח אישי, צד או שמאלה או ימינה הוא בסדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם isoflurane - 2, 3% לתחזוקה, ולצפות בקצב נשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק עצירות תת עורי (אגף לרוחב של הרגל) (0.05 מ&quot;ג / קילוגרם) על כאבים שלאחר ניתוח עם מחט 25 G. הרגל עשויה עווית שהיא תגובה נורמלית. </li></ol> חתך 2. פתיחה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות את הצלעות הרצויות על ידי מישוש, ולנקות את השטח של שיער עם מכונת גילוח. הערה: צלעות 8-10 מומלצות מאז צלעות 1-7 קרובות יותר לריאות ו11-13 הם קצר באופן משמעותי. ספירת הצלעות צריכה להתחיל עם הצלעות מקורי ביותר כמספר 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את האזור עם לסירוגין povidone- יוד וisopropanol (70%) בניקוי (3x מומלץ לעתים קרובות על ידי שימוש בבעלי חיים פרוטוקולים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך חתך 2 סנטימטרים דרך העור, ישירות מעל ומקביל לצלע הרצויה עם מספריים מיקרוכירורגיה בגודל בינוניים. Incisדואר דרך שכבות שרירים ושומן הבסיסיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את כל 3 השכבות (עור, שרירים, שומן) למפשק לחשוף את אזור הניתוח, תוך מזעור גודל החתך. </li></ol> 3. מוציא את הצלעות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את השרירים הבין- מעל את החלק הרצוי צלעות עם אזמל 5.0 מ&quot;מ. מיקום חתך זה כ -5 מ&quot;מ הפרוקסימלי למפרק chondrocostal כמו זה שבי הצלעות היא לא כמעוקלת מאוד. בזהירות להפריד את השריר מהעצם עם מלקחיים טיפ נאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי ליצור כריתה תוך שמירה על קרום העצם בבעלי החיים, לחתוך את קרום העצם, לאורכו של צלע עם אזמל 5.0 מ&quot;מ. בזהירות להפריד periosteum מעצם הבסיס רוחבי עם מלקחיים טיפ נאה. להתקדם בזהירות, כperiosteum הוא מאוד עדין ויש לו עקביות דביקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבא לעשות חתך דרך העצם בקצה אחד עם מיקרו מספריים בסדר. במידת הצורך, למדוד את הכריתה עםreticle במיקרוסקופ או מד סוג השליט. לאחר מכן, הרם בזהירות את העצם מתוך periosteum ולחתוך את הקצה השני. הערה: המשך בזהירות. זהו הצעד העדין ביותר, כמו משיכת ללא מוציא את הצלעות מתחת יקרע את קרום pleural ולגרום לחזה אוויר. אם קרום pleural נקרע זה יהיה ברור בקלות כמו הפנים של חלל בית החזה יהיו גלויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם דימום מתרחש כתוצאה מחיתוך העצם, להפעיל לחץ בסוף לחתוך עם מקל אוזניים ל4-5 שניות כדי לעצור את הדימום. הערה: בהזדמנות נדירה שהדימום ממשיך, ייתכן שתהיה צורך לעצור ולהרדימו איבוד דם משמעותי כיתפשר התאוששות (ללא החלפת נוזל, מקסימום הדם אשר ניתן בצורה בטוחה לאיבוד הנפח הוא 10% מכלל נפח הדם או 7.7 -. 8 μl / g לעכבר 25 גרם, זה שווה ערך לכ 180-200 μl 9). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד למקם את הצלעות הוסרו ל4% PFA לניתוח בעתיד. הערה: אם הכריתה של שתי העצמות וperiosteum היא להתבצע, להשמיט את החתך והפרדה (שלב 3.2) periosteum. מאז periosteum מצורף מאוד הדוק לקרום pleural להתקדם בזהירות, מתגרה הצלעות מהקרום pleural עם מלקחיים כדי למנוע קריעה. </li></ol> 4. סגירת החתך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר את השרירים הבין- מעל שרוול periosteal נותר עם 9-0 תפרים (2 תפרים הם בדרך כלל מספיק). הנח את התפרים ישירות מעל קצות החתך של הצלעות, לפעול כמדדים למיקום ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מפשק. תפר את השרירים ושומן שמעליה עם 9-0 תפרים (3-4 תפרים הם בדרך כלל מספיק). בעכברים עם שכבות עבות במיוחד של שריר ו / או שומן, תפר כל שכבה בנפרד (לדוגמא, שכבת 1 של תפרים לשכבה השרירית ושכבה 1 של תפרים לשכבת השומן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור אתעור עם תפרי 7-0 (4-5 תפרים הם בדרך כלל מספיק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את החתך עם דבק תפר, צובט את הקצוות יחד עם מלקחיים גדולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לגמול את העכבר מעל isoflurane ידי ההתאמה ראשונה ל -1% לכמה דקות ואז לכבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר תחת מנורת חום ולהשאיר עד התודעה הוא חזר, 5 - 10 דקות. לאחר ההכרה הוא חזרה ובמהלך כל תקופת ההחלמה, העכבר צריך לעבור וambulate כרגיל ולא מראה סימנים של מצוקה. </li></ol> שחזור 5. וניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק ניהול כאב שלאחר ניתוח כולל הממשל של עצירות בצורת ג&#39;לטין פה ב 0.5 מ&quot;ג / קילוגרם כל 12 שעות במשך 48 שעות. אוראלי אינו דורש ריסון בעלי החיים שעלולים לגרום לכאב באזור בית החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על העכבר בכלוב עם גישה חופשית למזון ומים בתקופת ההחלמה. לאחר החתך הוא יבש, יכולות להיות שותף שוכנו חיות נשיות ואילו גברs חייבת להישאר מבודדת כדי למנוע לחימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תקופת ההחלמה, בצע את ההליך שאושר להמתת חסד. הסר את כלוב הצלעות לקיבעון וניתוח. </li></ol>

<ol><li>Philip, S. J., Kumar, R. J., Menon, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+study+of+rib+regeneration+following+costectomy+in+adolescent+idiopathic+scoliosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Spine+J%22%5BJournal%5D)">Morphological study of rib regeneration following costectomy in adolescent idiopathic scoliosis.</a> Eur Spine J. 14 (8), 772-776 (2005).</li>
<li>Munro, I. R., Guyuron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Split-rib+cranioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Split-rib cranioplasty.</a> Ann Plast Surg. 7 (5), 341-346 (1981).</li>
<li>Taggard, D. A., Menezes, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+use+of+rib+grafts+for+cranioplasty+in+children.+Pediatric+neurosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Successful use of rib grafts for cranioplasty in children. Pediatric neurosurgery.</a> 34 (3), 149-155 (2001).</li>
<li>Head, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+Regeneration+fo+the+Ribs%3A+A+problem+in+thoracic+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Prevention of Regeneration fo the Ribs: A problem in thoracic surgery.</a> Archives of Surgery. 14 (6), 1215-1221 (1927).</li>
<li>Kawanabe, Y., Nagata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+of+costal+cartilage+harvest+for+total+auricular+reconstruction%3A+part+I.+Avoidance+and+prevention+of+intraoperative+and+postoperative+complications+and+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+reconstructive+surgery%22%5BJournal%5D)">A new method of costal cartilage harvest for total auricular reconstruction: part I. Avoidance and prevention of intraoperative and postoperative complications and problems.</a> Plastic and reconstructive surgery. 117 (6), 2011-2018 (2006).</li>
<li>Cheung, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+externally+fixed+femoral+fracture+model+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+orthopaedic+research+%3A+official+publication+of+the+Orthopaedic+Research+Society%22%5BJournal%5D)">An externally fixed femoral fracture model for mice.</a> Journal of orthopaedic research : official publication of the Orthopaedic Research Society. 21 (4), 685-690 (2003).</li>
<li>Matthys, R., Perren, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+fixator+for+use+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Injury%22%5BJournal%5D)">Internal fixator for use in the mouse.</a> Injury. 40, Suppl 4. S103-S109 (2009).</li>
<li>Cooper, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+the+critical+size+in+calvarial+bone+defects%3A+revisiting+the+concept+of+a+critical-size+defect%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+reconstructive+surgery%22%5BJournal%5D)">Testing the critical size in calvarial bone defects: revisiting the concept of a critical-size defect.</a> Plastic and reconstructive surgery. 125 (6), 1685-1692 (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ask+the+Vet%5BTitle%5D)+AND+%22JAX+NOTES%22%5BJournal%5D)">Ask the Vet.</a> JAX NOTES. 499, Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://jaxmice.jax.org/jaxnotes/archive/499c.html">http://jaxmice.jax.org/jaxnotes/archive/499c.html</a> (2005).</li>
<li>Flecknell, P. A., Roughan, J. V., Stewart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+oral+buprenorphine+%28%27buprenorphine+jello%27%29+for+postoperative+analgesia+in+rats--a+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animals%22%5BJournal%5D)">Use of oral buprenorphine ('buprenorphine jello') for postoperative analgesia in rats--a clinical trial.</a> Laboratory animals. 33 (2), 169-174 (1999).</li>
<li>Rigueur, D., Lyons, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-mount+skeletal+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Whole-mount skeletal staining.</a> Methods in molecular biology. 1130, 113-121 (2014).</li>
<li>Evans, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+somitic+cells+to+the+avian+ribs%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Contribution of somitic cells to the avian ribs.</a> Developmental biology. 256 (1), 114-126 (2003).</li>
<li>Colnot, C., Thompson, Z., Miclau, T., Werb, Z., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+fracture+repair+in+the+absence+of+MMP9%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Altered fracture repair in the absence of MMP9.</a> Development. 130 (17), 4123-4133 (2003).</li>
<li>Lu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+basis+for+age-related+changes+in+fracture+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+orthopaedic+research+%3A+official+publication+of+the+Orthopaedic+Research+Society%22%5BJournal%5D)">Cellular basis for age-related changes in fracture repair.</a> Journal of orthopaedic research : official publication of the Orthopaedic Research Society. 23 (6), 1300-1307 (2005).</li>
<li>Zilberman, Y., Gafni, Y., Pelled, G., Gazit, Z., Gazit, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+imaging+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent imaging in bone.</a> Methods in molecular biology. 455, 261-272 (2008).</li>
<li>Pelled, G., Gazit, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+using+osteocalcin-luciferase%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+musculoskeletal%22%5BJournal%5D)">Imaging using osteocalcin-luciferase.</a> Journal of musculoskeletal. 4 (4), 362-363 (2004).</li>
<li>Elefteriou, F., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+mouse+models+for+bone+studies--strengths+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Genetic mouse models for bone studies--strengths and limitations.</a> Bone. 49 (6), 1242-1254 (2011).</li>
<li>Srour, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+large-scale+regeneration+of+rib+cartilage+in+a+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Miner%22%5BJournal%5D)">Natural large-scale regeneration of rib cartilage in a mouse.</a> J. Bone Miner. , (2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף

כאשר לומדים פרוטוקול זה ראשון, לקבוע היכן לאתר את החתך הראשוני יכול להיות מאתגר. עם זאת, בפועל על עכברים מורדמים עוזר המנתח ללמוד היכן למקם את החתך הראשוני ולחשוף את הצלעות הרצויות כך שעברו כריתה. עבודה על גופות גם משפרת את המיומנויות המוטוריות העדינה הדרושות כדי להסיר את חלק הצלעות עם או בלי קרום העצם. בנוסף, מישהו חדש להליך זה עלול למצוא את המניפולציה של הכלים העדינים ודקים תפרים להיות קשה. בעוד קשירה מ, עודף משיכת התפר יכולה לקרוע את הרקמות. לכן, כמה תפירה בפועל גם על גופות יכו...

מתיש פגיעה בשלד, דלקת מפרקים ניוונית כרוניות, והבעיות החמורות הקשורות לניתוח שחזור להשפיע על יעילות כלכלית, משפחת רווחה, ואיכות החיים. בעוד הפסקות קטנות ונגעים יכולים לרפא די טובה, בני האדם אינם מסוגלים לתקן את הפגמים גדולים, ולכן יש להסתמך על נהלי שחזור כדי לשחזר מבנה ותפקוד. שחזור עשוי להיות כרוך בשתלים אלוגנאית או heterogeneic, עצם morcellized, פיגומים מושתלים, או הארכת עצמות. למרבה הצער, הם לא רק שם גורמי תחלואת persistant כרוכים בטיפולים אלה, אך הכוח המקורי של עצם תיקון מושגת רק לעתים רחוקות. לפיכך, גישות קליניות חדשות יש צורך. כיוון אחד לפתח שיטות חדשניות לטיפול בפגמים מגזריים הוא ללמוד מצבים שבהם תיקון בקנה מידה גדולה מתרחש באופן טבעי. דו-חיים מפורסמים יכולים להתחדש אלמנטי שלד, ואילו יונקים נחשבים מוגבלים בההוא יכולת. עם זאת, מאז תחילת המאה ה -20, כמה דיווחים על ההתחדשות בצלע האדם שפורסמו מצביעים על כך שבני האדם לא יכול להיות כל כך מוגבל 1-4. נכון לעכשיו תופעה זו ידועה בעיקר על ידי מנתחים פלסטיים המשתמשים בחומר צלעות ללסת, פנים ואוזן שיקום, אך הוא לא זוכה להערכה 5 באופן רחב יותר. כדי ללמוד תיקון זה בפירוט רב יותר, פיתחנו מודל כירורגית באמצעות העכבר. שימוש בפרוטוקול זה, חוקרים יכולים לזהות את הגורמים המולדים המעורבים ולהשתמש במידע זה כדי להקל על ריפוי שלד במקומות אחרים. ישנם יתרונות רבים לשימוש בצלעות כמודל ללימוד תיקון שלד. ראשית, צלעות המקיפות לספק, קיבוע טבעי (בהשוואה לכריתה של עצם הירך 6,7). זה מקטין את הסיכון לתחלואה של תופסנים פנימיים וחיצוניים ומפשט את ההליך כירורגי. שנית, שכבות שרירים דקות של wa החזהיהיה לספק לגישה קלה וראות מצוינת ההופכת את assay להשוות את הנוחות של כריתות calvarial 8. שלישית, בניגוד לcalvariae המהווים על ידי התאבנות intramembranous, צורת הצלעות ידי התאבנות endochondral ולגדול באורך באמצעות הארכה בצלחות גידול נמצאים בשני קצוות של diaphysis מרכזי. לכן, תיקון של הצלעות עשוי להיות דומה יותר לתיקון של עצמות השלד התוספים הארוכות. יתר על כן, מצאנו כי בהשוואה לעצם הירך, periosteum של הצלעות עבה יותר וניתן להשפיע בקלות רבה יותר. לפיכך, חוקרים המבקשים assay תיקון עצם לצורך לימוד periosteum או בדיקת טיפולים בתאים, סוכנים תרופתיים, ו / או פיגומי רקמה עלולים למצוא את מודל כירורגים זה שימושי. לסיכום, מודל כריתת צלע זו מספק הקשר שבתוך ללמוד תיקון עצם בקנה מידה גדולה טבעית ביונקים כמו שאף כזה מודל בשימוש כללי קיים כיום.

<table><tbody><tr><td>מספריים מיקרו-דיסקציה בגודל בינוני (Vannas-T&uuml; מספריים קפיציים bingen 5 מ"מ)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו-דיסקציה עדינים (Vannas Spring Scissors - קצה חיתוך 2 מ"מ)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-04</td><td>קצה מעוקל מועיל</td></tr><tr><td>מיקרו-אזמל 5.0 מ"מ</td><td>Fine Science</td><td>Tools 10315-12</td><td>ניתן להחליף אזמלים עדינים אחרים</td></tr><tr><td>Dumont 55 מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>מפרק&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>17004-05</td><td>יכולת כוונון נוחה</td></tr><tr><td>מחזיקי מיקרו מחטים</td><td>Fine Science Tools</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>9.0 תפרי ניילון (Ethilon), נקודת התחדדות הטובה ביותר</td><td>Ethicon</td><td>2819G או</td><td>נקודת התחדדות דומה הטובה ביותר אך חיתוך הפוך הוא גם טוב</td></tr><tr><td>7.0 תפרי פרולן (פרולן)</td> ניתן להשתמש גם <td>ב-Ethicon</td><td>8700H או דומה</td><td>6-0, נקודת המחט יכולה להשתנות</td></tr><tr><td>מלקחיים גדולים (מלקחיים של אדסון)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11006-12</td><td>מותגים אחרים הם משחת עיניים סיכה משובחת</td></tr><tr><td>(דמעות אקווה)</td><td>Akorn</td><td>17478-062-35</td><td></td></tr><tr><td>דבק תפרים (דבק רקמות מקומי GLUture)</td><td>ל-Abbot</td><td>32046-01</td><td>יש זמן עבודה מצוין</td></tr><tr><td>Shaver</td><td>Wahl</td><td>9918-6171 או מנורת</td> מהדק דומה <td></td></tr><tr><td></td><td>Zoo Med</td><td>LF-5</td><td></td></tr><tr><td>נורת אינפרא אדום, 75W</td><td>Zoo Med</td><td>RS-75</td><td></td></tr><tr><td>RC2 מערכת הרדמת מכרסמים</td><td>VetEquip&nbsp;</td><td>922100</td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo (Isoflurane)</td><td>Abbot</td><td>05260-05</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין (בופרנקס)</td><td>רקיט בנקיזר</td><td>12496-0757-1</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Purdue Frederick</td><td>67618015017</td><td></td></tr><tr><td>ג'לטין בטעם, ג'לי פטל</td><td></td><td>B000E1FYL0</td><td>מורכב ממוצק, לעקביות של 'ג'יגלרים'</td></tr></tbody></table>

הליך כירורגי לresecting צלעות העכבר: מודל לתיקון עצם ארוך בקנה מידה גדולה

A Surgical Procedure for Resecting the Mouse Rib: A Model for Large-Scale Long Bone Repair

פרוטוקול זה מציג חוקרים למודל חדש לתיקון עצם בקנה מידה גדולה ניצול צלעות העכבר. הנוהל מפרט את הפעולות הבאות: הכנת בעלי החיים לניתוח, פתיחת קיר גוף החזה, חושף את הצלעות הרצויות מהשרירים הבין- שמסביב, מוציא את החלק הרצוי צלעות ללא גרימת pneumothorax, וסוגר את החתכים. בהשוואה לעצמות השלד התוספים, הצלעות נגישות מאוד. בנוסף, לא, קיבוע פנימי או חיצוני הוא הכרחי שכן הצלעות הסמוכות מספקות קיבוע טבעי. הניתוח משתמש באופן מסחרי אספקה ​​זמינה, הוא פשוט ללמוד, ונסבל היטב על ידי בעלי החיים. ההליך יכול להתבצע עם או בלי הסרת קרום העצם שמסביב, ולכן התרומה של periosteum לתיקון ניתן להעריך. תוצאות מצביעות על כך שאם periosteum נשמר, תיקון חזק מתרחש ב1-2 חודשים. אנו מצפים כי שימוש בפרוטוקול זה לאעידוד מחקר לתיקון צלעות ושהממצאים יאפשרו פיתוח הדרכים חדשות כדי לעורר תיקון עצם במקומות אחרים בגוף.

בעלי חיים בדרך כלל להתאושש במהירות מהליך זה, חתך מחלים טוב, ובעלי החיים מפגינים התנהגות נורמלית. ההליך משתמש אספקה ​​זמינה באופן מסחרי ואחרי אימון, ניתן להשלים בתוך פחות 1 שעה. לפני השימוש בהליך זה כדי להפיק נתונים ניסיוניים, חשוב לנתח את הכריתה בנקודת זמן יום 0 כדי לקבוע אם כל שברי עצמות גדולים עשויים להישאר באזור הכריתה. אחת דרכים להעריך הליך נכון היא להעריך את בעלי החיים על ידי X-ray או ההדמיה microCT לאחר הניתוח, אם כי זה בדרך כלל דורש אישורי בטיחות קרינה מיוחדים. במקום זאת, נ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לכרות בהצלחה חלק מהעצם מצלע של עכבר. ההליך פותח כמודל לחקר תיקון עצמות ארוכות בקנה מידה גדול.

הליך כירורגי לResecting צלעות העכבר: מודל לתיקון עצם ארוך בקנה מידה גדולה

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation ...

מטרת הליך זה היא ליצור כריתה רחבה בחלק העظمני של צלע כמודל לשיקום שלד. פעולה זו מבוצעת תחילה על ידי ביצוע ופתיחת חתך דרך העור בצד הלטרלי של בעל החיים. השלב השני הוא חשיפת עצם הצלע המיועדת להסרה.בשלב הבא, מסירים חלק מעצם הצלע, אם יחד עם נדן רקמת החיבור המקיפה אותה או עם הפריאוסטאום (periosteum), ואם תוך השארת הפריאוסטאום במקומו. השלב האחרון הוא סגירת החתכים ומתן אפשרות לבעל החיים להתאושש. בסופו של דבר, ניתן להשתמש במודל זה לתיקון עצם כדי להדגים את האירועים התאיים והמולקולריים המתרחשים במהלך תיקון שלד בהיקף נרחב.בממליק הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן תפעול כלי הניתוח דורש דיוק וניתוח מוצלח תלוי בידיעה היכן ממוקמים הרקמות השונות. את הפרוצדורה ידגימו Marissa Roar ו-Nikita Tripper, שניהם סטודנטים לתארים מתקדמים במעבדתי. לאחר הכנת אזור הניתוח והכלים והציוד הסטריליים הדרושים, גרמו להרדמה על ידי הנחת עכבר לתוך תא השראה עם 4% isoflurane.לאחר הרדמת העכבר, יש למרוח פומדה על עיניו של העכבר ולוודא את עומק ההרדמה. בביצוע צביטה של בהונות, לא אמורה להיות תגובה לצביטה. יש להניח את העכבר על משטח חימום או בסמיכות אליו על במת מיקרוסקופ דיסקציה, כאשר קונו האף של צינור תחזוקת ההרדמה מונח מעל אפו של העכבר.יש לוודא שהעכבר נמצא במנח צדי. כוון את ה-isof fluorine ל-2% עד 3% לצורך תחזוקה ועקוב אחר קצב הנשימה. לאחר מכן, הזרק buprenorphine תת-עורית באמצעות מחט בכיול 25 gauge.בשל כאבים פוסט-כירורגיים צפויים, הרגל עשויה לרעוד, תגובה שנחשבת לנורמלית. ראשית, בחרו את הצלע הרצויה באמצעות מישוש החל מהצלע הרוסטרלית ביותר, הנספרת כצלע מספר אחת. בסרטון זה, חלק מצלע מספר 10 יוסר.גלחו את האזור מעל הצלע ולאחר מכן נקו עם povidone iodine, ולאחר מכן עם isopropanol שלוש פעמים. לאחר ביצוע חתך של שני סנטימטר דרך שכבות העור, השריר והשומן מעל הצלע המיועדת לכריתה, הניחו את שלוש השכבות בתוך רטרקטור (מסיח) כדי לחשוף את אזור הניתוח תוך מזעור גודל החתך. לאחר מכן, השתמשו בסכין מנתחים של חמישה מילימטר כדי לחתוך דרך השרירים הבינ-צלעיים מעל הצלע במיקום הנמצא חמישה מילימטר פרוקסימלית למפרק ה-chocos, שם הצלע אינה מעוקלת בצורה חדה. לאחר מכן, הפרידו בזהירות את השריר מהעצם בעזרת פינצטה בעלת קצה דק.כדי ליצור כריתה תוך שמירה על הפריאוסטום (periosteum) בבעל החיים, חתכו את הפריאוסטום לאורך הצלע. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה בעלת קצה דק כדי להפריד בזהירות רבה את הפריאוסטום העדין לצדדים מהעצם שמתחתיו. במידת הצורך, מדדו את הכריתה בעזרת מיקרוסקופ או מד סרגל.לאחר מכן, השתמש במספרי מיקרו עדינים כדי לבצע חתך רוחבי דרך העצם. בקצה אחד, הרם בזהירות את העצם מתוך הפריאוסטום (periosteum) וגזור מיד את הקצה השני. העבר את הצלע שהוסרה ל-4%paraldehyde לצורך אנליזה עתידית.אם מתרחש דימום כתוצאה מחיתוך העצם, הפעל לחץ בקצה החתוך באמצעות מקלון צמר למשך ארבע עד חמש שניות כדי לעצור את הדימום. לסגירת החתך, תפר את השרירים הבין-צלעיים מעל שרוול הפריאוסטים שנותר באמצעות שלוש או 4 תפרי 9 0 לא רציפים. מקם את התפרים ישירות מעל הקצוות החתוכים של הצלע כדי שישמשו כסימנים למיקום הניתוח.הסר את המרחיב (retractor) ולאחר מכן תפר את השריר והשומן העליונים באמצעות תפרים מקטעים בחוט 9-0. בעכברים עם שכבות שריר או שומן עבות במיוחד, תפר כל שכבה בנפרד. סגור את העור באמצעות 4 עד 5 תפרים בחוט 7-0, ולאחר מכן אבטח את החתך באמצעות דבק רקמות.לחיצת הקצוות יחד באמצעות פינצטה גדולה. גמילה איטית של העכבר מ-isof fluorine על ידי התאמת הריכוז ל-1% למשך מספר דקות, ולאחר מכן כיבוי ה-isof fluorine. הנחת העכבר תחת מנורת חימום והשארתו עד להסרה מלאה של ההרדמה והחזרת ההכרה.לאחר החזרת ההכרה ובמהלך תקופת ההחלמה, העכבר אמור לנוע ולהסתובב כרגיל ולא להראות סימני מצוקה. ברגע שהחתך יבש, יש להחזיק את העכבר בכלוב נקי עם גישה חופשית למזון ומים. ניתן להחזיק נקבות יחד, אך יש להחזיק זכרים בנפרד כדי למנוע לחימה; יש לספק ניהול כאב לאחר הניתוח, כולל מתן buprenorphine בצורה של ג'ל אוראלי במינון של 0.5 milligrams per kilogram בכל 12 שעות למשך 48 שעות.מתן תרופה דרך הפה אינו מחייב קיבוע של בעל החיים, דבר שעלול לגרום לכאב באזור בית החזה. תמונה זו מציגה כריתת צלע באורך 4.5 מילימטר שנאספה מיד לאחר הניתוח. לא נותרו שברי עצם.הדגימה נצבעה ב-zarin red ועברה בירירות ב-80% glycerol. ראש החץ מצביע על מיקום הקצוות החתוכים. זהו חלק הצלע שהוסר מכלוב הצלעות בתמונה הקודמת, ללא הפריוסטאום (periosteum) המחובר אליה.הסניט ההיסטולוגי הצבוע בהמטין ואאוסין המוצג כאן מדגים כי ישנו פריאוסטום (periosteum) מינימלי הצמוד לעצם, כפי שמסומן על ידי ראש החץ הצהוב משמאל, ואין פריאוסטום מימין. הכוכבית הצהובה מציינת את חלל מוח העצם. תמונה זו מראה חלק שהוסר מצלע כאשר הפריאוסטום עדיין צמוד אליה, וסניט היסטולוגי זה מראה את הפריאוסטום השלם המכסה את העצם, כפי שמסומן על ידי הסוגריים הצהובים.הכוכבית הצהובה מצביעה שוב על חלל מוח העצם. תמונה זו מציגה דגימה שלדית לאחר חודשיים של ריפוי בעקבות כריתה עם פריאוסטאום (periosteum) שלם בתוך העכבר, שבה ניתן להבחין בריפוי מלא של האזור. חתך היסטולוגי זה של הדגימה השלדית שהוצגה זה עתה מדגים שחזור של דפנות העצם הלמינריות ושל חלל מוח העצם.תמונה זו מציגה הכנה שלדית לאחר שלושה חודשי ריפוי. לאחר הסרה של חלק מצלע ושל הפריאוסטאום שסביבה, נראה תיקון מינימלי בלבד בקצה החתוך המוצג בצד שמאל של הלוח. ראש החץ הצהוב מצביע על מפרק ה-chocos.חתך היסטולוגי זה של ההכנה השלדית שהוצגה קודם לכן מראה גרנולומה, רקמת שומן ותאי שריר הממלאים את אתר הכריתה. לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע אותה בפחות משעה אם היא מבוצעת כראוי בהתאם לנוהל זה. ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון יצירת כריתה בחלק הסחוס של הצלע, כדי לענות על שאלות נוספות כגון, כיצד מתבצע תיקון רחב היקף של סחוס?לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו יוצרים כריתה בחלק העצמי של הצלע, במטרה לחקור תיקון שלד.

a-surgical-procedure-for-resecting-mouse-rib-model-for-large-scale

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מגבלה אחת של מחקר פרה-קליני בתחום תיקון העצם היא היעדר שליטה ניסויית על הסביבה המכנית המקומית בתוך נגע עצם מרפא. אנו מדווחים על תכנון ושימוש בקיבוע חיצוני לתיקון עצם עם יכולת לשנות את קשיחות הקיבוע in vivo.

נוקשות מתכוונן, תופסנים חיצוניים למודלים של עכברי ירך osteotomy ומגזרי עצם הפגם

מודלים של בעלי חיים משמשים לעתים קרובות כדי לחקות פגיעה חמורה בעצמות במחקר ביו-רפואי. בשל גודלם הקטן, הקמת נגעי עצם מיוצבים בעכברים היא מעבר ליכולותיהן של רוב קבוצות המחקר. כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה לביסוס וניתוח פגמים ניסיוניים בעצם הירך בעכברים.

דגם פגם עצם הירך קריטית בגודל פשוט בעכברים

למרות שמודלים של עכברים הם כלים יקרי ערך להנדסת רקמות עצם, מודלים של פגמים בעצמות ארוכות הם דלילים. צורך זה הניע את פיתוח הפרוטוקול הנוכחי המשתמש בלוחית נעילה עם ארבעה ברגים וג'יג ייעודי לביצוע וייצוב פגם בגודל קריטי הניתן לשחזור, עצם הירך עם תחלואה נמוכה.

הקמת דגם פגם קריטי בגודל הירך מגזרית עכברים מיוצב על ידי פלייט Osteosynthesis

הערכת התפתחות רקמת ב קסם שבר במהלך הריפוי עצם endochondral חיוני לעקוב אחר תהליך הריפוי. כאן, אנחנו מדווחים על השימוש תהודה מגנטית הדמיה (MRI)-fixator חיצוני תואם את אתי העכבר כדי לאפשר MRI סריקות במהלך התחדשות העצם בעכברים.

אין ויוו הערכה של שבר פיתוח קסם במהלך עצם הריפוי בעכברים שימוש בהתקן התואם ל- MRI Osteosynthesis את העכבר אתי

פרוטוקול זה מתאר מודל העכבר של כירורגיה אורתופדית, שבו נעשה שימוש כדי לחקור מנגנונים של neuroinflammation לאחר הניתוח, שינויים התנהגותיים, וכאשר בשילוב עם parabiosis, ללמוד התחדשות רקמות במהלך ההזדקנות.

דגם העכבר של כירורגיה אורתופדית ללמוד לאחר הניתוח בתפקוד הקוגניטיבי ו התחדשות רקמות

פרוטוקול זה מתאר שיטה osteosynthesis פולשנית באמצעות בורג אורתופדיים עבור מתוקננת ייצוב הירך שברים, אשר ניתן להשתמש כדי לנתח את עצם endochondral ריפוי בעכברים.

מודל פולשנית לניתוח שבר Endochondral ריפוי בעכברים בתנאים מתוקננים ביו-מכני

אנו מציגים מודל פרכת הסחת דעת הטיביאלי העכבר פותח באמצעות של distractor בהזמנה אישית. השימוש של עכבר בתור מטרה ניתוח הוא יתרון לקידום המחקר.

מודל פרכת העכבר הסחת דעת

המודל מאתר סגור בשביליאתה לא רואה שיש הוא כלי עוצמתי ללמוד ריפוי השבר ואסטרטגיות טיפוליים חדשניים כדי להאיץ התחדשות העצם. המטרה של פרוטוקול כירורגי זה היא לייצר חד צדדית שברי הירך סגור בעכברים באמצעות של פלדה מוט. לייצב את עצם הירך.

הדור של שברי הירך סגור בעכברים: מודל ללמוד ריפוי עצם

פרוטוקול זה מתאר שיטה לביצוע שברים בעכברים בוגרים ולמעקב אחר תהליך הריפוי.

שבר רוחבי של עצם הירך של העכבר עם פין מייצב

פרוטוקול זה מתאר הליך כירורגי להקמת שבר דיאפיזיאלי בעצם הירך של עכברים, המיוצב באמצעות חוט תוך מדולרי, לצורך מחקרי ריפוי שברים.

ביסוס מודל שבר עצם הירך הדיאפיזי בעכברים

פרוטוקול זה מציג שיטה מקיפה ויעילה לניתוח תיקון עצם המנדיבולרית. אנו מתארים טכניקה הניתנת לשחזור עבור שבר מנדיבולרי לא מיוצב במודל עכבר, המאפשר ניתוח של תהליך תיקון עצם אנדוכונדרלית עם נזק מינימלי לרקמות ואובדן עצם.

טכניקה פחות פולשנית לשבר מנדיבולרי לא מיוצב במודלים של עכברים

למדו הליך כירורגי לכריתת צלעות בעכבר לחקר תיקון שלד בקנה מידה גדול. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר אירועים תאיים ומולקולריים במהלך ריפוי עצם בחי.

הליך כירורגי לResecting צלעות העכבר: מודל לתיקון עצם ארוך בקנה מידה גדולה

גלה סרטונים נוספים