Name: הערכה לא פולשנית של היעילות של ניו Therapeutics למעי פתולוגיות שימוש הדמיה אנדוסקופי סידורי של עכברים חיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: למדו להעריך יעילות טיפולים חדשים בדלקת מעי וסרטן באמצעות אנדוסקופיה סידורית בעכברים חיים. שיטה זו מאפשרת מעקב אישי לאורך זמן ומפחיתה את הצורך בקבוצות ניסוי מרובות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לחברת CSL בע"מ על תמיכתה ברכישת ציוד האנדוסקופיה. המחקר במעבדה של ME נתמך על ידי מכון לודוויג לחקר הסרטן, והמעבדות של TP ו-ME נתמכות על ידי תמיכת התשתית התפעולית של ממשלת מדינת ויקטוריה והמועצה הלאומית לבריאות ומחקר רפואי של אוסטרליה. ME הוא עמית מחקר בכיר ב-NHMRC.

<ol><li>Tenesa, A., Dunlop, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+aetiology+of+colorectal+cancer+from+genome-wide+association+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">New insights into the aetiology of colorectal cancer from genome-wide association studies.</a> Nat Rev Genet. 10, 353-358 (2009).</li>
<li>Rustgi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+hereditary+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The genetics of hereditary colon cancer.</a> Genes Dev. 21, 2525-2538 (2007).</li>
<li>Rutter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severity+of+inflammation+is+a+risk+factor+for+colorectal+neoplasia+in+ulcerative+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Severity of inflammation is a risk factor for colorectal neoplasia in ulcerative colitis.</a> Gastroenterology. 126, 451-459 (2004).</li>
<li>Eaden, J. A., Abrams, K. R., Mayberry, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+colorectal+cancer+in+ulcerative+colitis%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">The risk of colorectal cancer in ulcerative colitis: a meta-analysis.</a> Gut. 48, 526-535 (2001).</li>
<li>Lakatos, P. L., Lakatos, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+for+colorectal+cancer+in+ulcerative+colitis%3A+changes%2C+causes+and+management+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Risk for colorectal cancer in ulcerative colitis: changes, causes and management strategies.</a> World J Gastroenterol. 14, 3937-3947 (2008).</li>
<li>Xiang, B., Snook, A. E., Magee, M. S., Waldman, S. A. Colorectal cancer immunotherapy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aXiang%2C+B+%22Discov+Med%22">Discov Med</a>. 15, 301-308 (2013).</li>
<li>Feng, Q. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-EGFR+and+anti-VEGF+agents%3A+Important+targeted+therapies+of+colorectal+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Anti-EGFR and anti-VEGF agents: Important targeted therapies of colorectal liver metastases.</a> World J Gastroenterol. 20, 4263-4275 (2014).</li>
<li>Dinarello, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+Agents%3A+Present+and+Future%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory Agents: Present and Future.</a> Cell. 140, 935-950 (2010).</li>
<li>Grivennikov, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoma-linked+barrier+defects+and+microbial+products+drive+IL-23%2FIL-17-mediated+tumour+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adenoma-linked barrier defects and microbial products drive IL-23/IL-17-mediated tumour growth.</a> Nature. 491, 254-258 (2012).</li>
<li>Putoczki, T., Thiem, S., Loving, A., Busuttil, R. A., Wilson, N. A., Ziegler, P., Nguyen, P., Preaudet, A., Farid, R., Edwards, K., Boglev, Y., Luwor, R. B., Jarnicki, A. J., Horst, D., Boussioutas, A., Heath, J., Sieber, O., Nash, A., Greten, F., McKenzie, B. S., Ernst, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-11+is+the+dominant+IL-6+family+cytokine+during+gastrointestinal+tumorigenesis+and+can+be+targeted+therapeutically%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Interleukin-11 is the dominant IL-6 family cytokine during gastrointestinal tumorigenesis and can be targeted therapeutically.</a> Cancer Cell. 24, 257-271 (2013).</li>
<li>Perse, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model%3A+traps+and+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 718617(2012).</li>
<li>Rose, W. A. 2nd, Sakamoto, K., Leifer, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifunctional+role+of+dextran+sulfate+sodium+for+in+vivo+modeling+of+intestinal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Multifunctional role of dextran sulfate sodium for in vivo modeling of intestinal diseases.</a> BMC Immunol. 13, 41(2012).</li>
<li>Laroui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+%28DSS%29+induces+colitis+in+mice+by+forming+nano-lipocomplexes+with+medium-chain-length+fatty+acids+in+the+colon%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate (DSS) induces colitis in mice by forming nano-lipocomplexes with medium-chain-length fatty acids in the colon.</a> PLoS One. 7, e32084(2012).</li>
<li>Miyazawa, F., Olijnyk, O. R., Tilley, C. J., Tamaoki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+dextran+sulfate+and+Escherichia+coli+ribosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Interactions between dextran sulfate and Escherichia coli ribosomes.</a> Biochim Biophys Acta. 145, 96-104 (1967).</li>
<li>Peterson, L. W., Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cells%3A+regulators+of+barrier+function+and+immune+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cells: regulators of barrier function and immune homeostasis.</a> Nat Rev Immunol. 14, 141-153 (2014).</li>
<li>Neufert, C., Becker, C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inducible+mouse+model+of+colon+carcinogenesis+for+the+analysis+of+sporadic+and+inflammation-driven+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression.</a> Nat Protoc. 2, 1998-2004 (2007).</li>
<li>Schwitalla, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+p53+in+Enterocytes+Generates+an+Inflammatory+Microenvironment+Enabling+Invasion+and+Lymph+Node+Metastasis+of+Carcinogen-Induced+Colorectal+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Loss of p53 in Enterocytes Generates an Inflammatory Microenvironment Enabling Invasion and Lymph Node Metastasis of Carcinogen-Induced Colorectal Tumors.</a> Cancer Cell. 23, 93-106 (2013).</li>
<li>Fiala, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigations+into+the+metabolism+and+mode+of+action+of+the+colon+carcinogens+1%2C2-dimethylhydrazine+and+azoxymethane%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Investigations into the metabolism and mode of action of the colon carcinogens 1,2-dimethylhydrazine and azoxymethane.</a> 40, 2436-2445 (1977).</li>
<li>Chen, J., Huang, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+signal+pathways+in+azoxymethane-induced+colon+cancer+and+preventive+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">The signal pathways in azoxymethane-induced colon cancer and preventive implications.</a> Cancer Biol Ther. 8, 1313-1317 (2009).</li>
<li>Bollrath, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((gp130-mediated+Stat3+activation+in+enterocytes+regulates+cell+survival+and+cell-cycle+progression+during+colitis-associated+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">gp130-mediated Stat3 activation in enterocytes regulates cell survival and cell-cycle progression during colitis-associated tumorigenesis.</a> Cancer Cell. 15, 91-102 (2009).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li>
<li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+intestinal+Th17+cells+by+segmented+filamentous+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of intestinal Th17 cells by segmented filamentous bacteria.</a> Cell. 139, 485-498 (2009).</li>
<li>Thiem, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTORC1+inhibition+restricts+inflammation-associated+gastrointestinal+tumorigenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">mTORC1 inhibition restricts inflammation-associated gastrointestinal tumorigenesis in mice.</a> J Clin Invest. 123, 767-781 (2013).</li>
<li>Stuart, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+inhibition+of+Jak+activity+inhibits+progression+of+gastrointestinal+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Therapeutic inhibition of Jak activity inhibits progression of gastrointestinal tumors in mice.</a> Mol Cancer Ther. 13, 468-474 (2014).</li>
<li>De Robertis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+AOM%2FDSS+murine+model+for+the+study+of+colon+carcinogenesis%3A+From+pathways+to+diagnosis+and+therapy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Carcinog%22%5BJournal%5D)">The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies.</a> J Carcinog. 10, 9(2011).</li>
<li>Viennois, E., Chen, F., Laroui, H., Baker, M. T., Merlin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+inhibits+the+activities+of+both+polymerase+and+reverse+transcriptase%3A+lithium+chloride+purification%2C+a+rapid+and+efficient+technique+to+purify+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate inhibits the activities of both polymerase and reverse transcriptase: lithium chloride purification, a rapid and efficient technique to purify RNA.</a> BMC Res Notes. 6, 350(2013).</li>
<li>Kerr, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+inhibition+of+real-time+polymerase+chain+reaction+amplification%3A+a+poly-A+purification+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate inhibition of real-time polymerase chain reaction amplification: a poly-A purification solution.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 344-348 (2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

שלושה פרוטוקולים המתוארים שיטות קווי המתאר של אינדוקציה אמינה ושחזור של פתולוגיה מחלה במעי הגס בעכברים. בשילוב עם ניטור אנדוסקופית שיגרתי ואסטרטגיות ההתערבות שתוארו כאן, הפרוטוקולים הללו יספק תובנה פרה-קלינית חזקה ליעילותם של טיפולים. המעבדות שלנו משתמשות באופן שיגרתי כל פרוטוקולים אלה כדי לפקח על ההצלחה של תרופות רומן 10,23,24. ישנם מספר שיקולים בעת בחירת מודל חיה פרה-קליני לבדיקת תרופות חדשות. אלה כוללים את הרלוונטיות של המודל למחלה האנושית, ואת תרומתם של מייקרו-הסביבה של הגידול לפעולה המוצעת של היעד הטיפולי. כאן אנו מספקים שלושה פרוטוקולים להתערבות טיפולית במודלי מחלת מעיים הוקמו. מודלים אלה הם שחזור והאספקה ​​של חומרים כימיים כדי לגרום למחלה היא קלה לניהול. חשוב לציין, המודלים רלוונטיים מאוד<html> להיבטים ושלבים של תחילת קוליטיס, וחניכת גידול ולהתפתחות מרובים. חוקרים צריכים לקחת בחשבון את הרקע הגנטי של זני העכבר משמשים בעת תכנון ניסויים, כמו הרגישות למחלות הנגרמת על ידי DSS ו / או AOM יכול להשתנות במידה ניכרת 25. בנוסף, ייתכן שיש לי קהילות חיידקים שונות יכולות חילוף חומרים שונות בהקשר של AOM, אשר עובר מטבוליזם על ידי חיידקים. אנו מזהירים מפני שימוש בקבוצות שונות של עכברים שנולדו לתוך מתקנים שונים של בעלי חיים (כוללים ספקים מסחריים) בניסוי אחד. באופן דומה, מיקרופלורת השונות בעכברים המשמשים ממתקנים שונים עשויים לעורר תגובת מארח שונה לDSS-Induced נזק מחסום האפיתל 11. יתר על כן, הניתוח המתאים של רקמה (לטיהור הדוגמא RNA) צריך להיות גם נחשב, שכן היכולת של DSS לעכב transcriptase ההפוך ישפיע על הניתוח מולקולרי הבא 26,27. ss = &quot;jove_content&quot;&gt; אנדוסקופיה העכבר היא טכניקה חדשנית לניטור תחילת מחלה והתקדמות שוב ושוב בעכבר בודד. היכולת להקליט קטעי וידאו ולחלץ תמונות סטילס מאפשרת ניטור קל של פרמטרים מחלה מרובים וגידולים. בנוסף לשיפור רווחת בעלי חיים, ניטור אנדוסקופית גם מפחית את הצורך במחזורים רבים של עכברי ניסוי, אשר באופן מסורתי נלקחו בזמן נקודות שונות כדי לעקוב אחר תוצאות מחלה. שיטת הניקוד MEICS אינה מהווה תחליף לניתוח histopathological, אבל מספקת אמצעים חלופיים כדי לפקח על נזק בריאות בעלי החיים ורירי בעכברים חיים. אנדוסקופיה העכבר היא טכניקת מעבדה מיוחדת, וכל הנהלים צריכים להתבצע על ידי צוות מיומן כדי להבטיח מניפולציה וטיפול הולמות בעכברים, וכן כדי לספק איכות עקבית בתמונות המשמשות לניקוד מחלה. בידיו של אישית מוסמך, מצאנו כי אנדוסקופיה גורמת נזק מועט, אם בכלל tumors שיגרום לדימום תוך-tumoral. לפרוטוקולים הטיפוליים שתוארו, אנו רואים אנדוסקופיה יתרון מאוד, שכן הוא מספק דרך כדי לקבוע את נטל גידול הראשוני, ומאפשר לנו קבוצות קבוצה של בעלי חיים עם נטל גידול דומה לפני הממשל של תרופה טיפולית. ניטור רציף של העכברים מאפשר לחוקרים לקבוע את היעילות של טיפולים חדשניים בשלב מוקדם, עם האפשרות של הפסקת ניסויים מוצלחים במועד. כהבנה של מחלת מעי דלקתית וסרטן מעי גס שלנו מראש, מטרות חדשות לטיפול תזוהה. מודלים של בעלי החיים מתאימים יהיו חלק בלתי נפרד מהבטחה שהטיפולים החדשים המבטיחים ביותר מועברים לניסויים קליניים.

סרטן מעי גס (CRC) הוא הסיבה השכיחה ביותר 4 th של ממאירות בעולם 1. למרות ההתקדמות המשמעותית בהבנה של הבסיס המשפחתי של מחלה זו שלנו, נטייה גנטית תורמת רק ל~ 20% מהמקרים CRC 2. היתרה מיוחסת לגורמים חיצוניים וסביבתיים רבים, כוללים דלקת כרונית. בבני אדם, את הקשר בין דלקת כרונית וסרטן מעי גס ניכר בקוליטיס כיבית (UC) חולים, שיש להם סיכון גבוה יותר לפתח סרטן המעי הגס הקשורים קוליטיס (CAC), בהתאם לתקופה, של המחלה הדלקתית 3 המידה והחומרה -5. בהתאם לכך, טיפולים חדשניים בפיתוח לשלוט תגובה החיסונית והייצור הקשורים של גורמי גדילת קידום על ידי מייקרו-הסביבה של הגידול הדלקתי 6-8. יש דרישה הולכת וגוברת למודלים של בעלי חיים פרה-קליניים מתאימים לאפיין את היעילות הטיפולית שלתרופות אלו נגד ההתפתחות וההתקדמות של מחלה. המודלים של עכברים באופן חד משמעי הוכיחו כי מייקרו-הסביבה הדלקתית תורם להתקדמות CRC, גם בהעדר של דלקת גלויה 9,10. מודלים אלה כוללים את השימוש של נתרן גופרתי dextran פוליסכריד (DSS), ובלבד במי השתייה של עכברים, לדגמן פגיעת אפיתל ומחלת מעי הדלקתי חריפה וכרונית (IBD) 11,12. למרות שהמנגנון שבאמצעותו DSS גורם נזק לרירית וקוליטיס אינו מובן לחלוטין, חלק מהמחקרים מצביעים על כך שDSS מעכב את פעילות transcriptase וribonuclease הפוכה סלולרית בתוך תאים, או מקדם את הקמתה של מתחמי ננו-שומנים שלהתמזג עם קרום המעי הגס מוביל לאפיתל נזק 13,14. גם שינויים במודל DSS הסטנדרטי סיפקו תובנה משמעותית המנגנונים שבאמצעותם תאי אפיתל במעי הגס לשמור על הומאוסטזיס וregu רקמהתגובה חיסונית ברירית מאוחר 15. ממשל Intraperitoneal של azoxymethane (AOM) לבד, או בשילוב עם DSS, מספק מודל לבחינת יחסי הגומלין בין מוטציות סומטיות ברירית האפיתל ומייקרו-הסביבה הדלקתית וסטרומה 16,17. AOM הוא מטבוליט של קרצינוגן 1,2-dimethylhydrazine (DMH) שאינו ישירות לגרום למוטציות בדנ&quot;א. במקום זאת, AOM הוא הידרוליזה לmethylazoxymethanol (MAM) על ידי איזופורם ציטוכרום CYP2E1 בכבד, שבו הוא MAM מצומדות עם חומצת glucuronic ולאחר מכן הועבר למעי דרך הפרשות מרה 18. הוא חשב כי β-glucuronidase החיידקים תורם לזילות של MAM וכתוצאה מכך אלקילציה DNA וההצטברות של מוטציות בתאי האפיתל 19. רוב הגידולים במעי הגס הנגרם AOM נמל מוטציות missense בגן המקודד β-קטנין, עיבוד החלבון עמיד לdegradati proteasomalב, שתוצאת ההפעלה חריגה של מסלול Wnt-האיתות הקנונית 20. כאשר הפעילות של AOM היא בשילוב עם הנזק לרירית שהושרו על ידי DSS, הפצע שהתפתח ריפוי תגובה יוצר מייקרו-סביבה כי הוא מסייע לצמיחה וההתרחבות של האפיתל mutagenized. בוריאציה של מודל זה, ממשל חוזר ונשנה של AOM על פני תקופה של מספר שבועות בלבד יכול לשמש מודל סרטן מעי גס סדיר, בהעדר קוליטיס המושרה DSS 10,17. שני דגמים מחמיאים אלה מספקים הגדרות ניסיוניות ללמוד CAC וCRC סדיר בהתאמה, שניהם קשורים למייקרו-סביבה של גידול פרו-דלקתי 10. השימוש באנדוסקופיה הסידורי בעכברים היה חלוץ ידי בקר ועמיתים 21, ומאפשרת ניטור אורך של קוליטיס והתקדמות גידול. כאן אנו מספקים שלושה פרוטוקולים פרה-קליניים המבוססים על נזק הנגרם DSS הרירי ו / או tu תיווך AOMמור אינדוקציה לגרום reproducibly פתולוגיות מעי הגס ספציפיות. הפרוטוקול הראשון מתאר גרימת נזק לרירית חריפה בתגובה לממשל DSS לעורר רב של תכונות histopathological הקשורים במחל מעי דלקתי. הפרוטוקול השני מבוסס על שלושה מחזורים רצופים של ממשל DSS לחקות את הזיקוקים של דלקת נפוצה שנצפתה בחולים במחל מעי דלקתיים, ויכול להתבצע בשיתוף עם מוטציות הנוצר על-AOM. הפרוטוקול הסופי מבוסס על מוטציות אפיתל לא סדירות הנוצר על-AOM. עבור כל אחד מהפרוטוקולים הללו, אנו מרחיבים על הנהלים סטנדרטיים הרלוונטיים לכוללים שיטות התערבות מניעתית וטיפוליות שפיתחנו כדי לפקח על היעילות של תרופות חדשות.

<table><tbody><tr><td>נתרן דקסטרן סולפט (MW 36,000-50,000)</td><td>MP Biochemicals</td><td>160110</td><td>דורש בדיקת אצווה.</td></tr><tr><td>אזוקסימתאן</td><td>סיגמא</td><td>A5486-100MG</td><td>דורש בדיקת אצווה.</td></tr><tr><td>שייק חלבון וניל</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>ניתן להשיג בבתי מרקחת של בתי חולים.</td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>PPC</td><td>M60303</td><td>זהו מגיב מוגבל, אותו יש לאחסן תחת מנעול ומפתח.</td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>ריאגנט מעבדה סטנדרטי.</td></tr><tr>מערכת <td></td><td></td><td></td><td>מיניאנדוסקופית Coloview</td></tr><tr><td>Endovision Tricam</td><td>Karl Storz</td><td>20212001-020</td><td></td></tr><tr><td>קסנון 175 מקור אור עם משאבה נגד ערפל</td><td>קארל סטורץ</td><td>20134001</td><td></td></tr><tr><td>HOPKINS טלסקופ ישר קדימה</td><td>קארל סטורץ</td>, <td>64301AA</td><td></td></tr><tr><td>נדן אנדוסקופי (קוטר כולל 3 מ"מ)Kalr</td> <td>Stroz</td><td>61029C</td><td></td></tr><tr><td>כבל אור סיבים אופטיים</td><td>Kalr Stroz</td><td>69495ND</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת מחשב ונגן מדיה</td><td>Apple</td><td></td><td>iMovie</td></tr><tr><td>Scale</td><td>כל</td><td></td><td>משקל מתאים לשקילת עכברים.</td></tr></tbody></table>

הערכה לא פולשנית של היעילות של ניו therapeutics למעי פתולוגיות שימוש הדמיה אנדוסקופי סידורי של עכברים חיים

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

מודלים של בעלי חיים של מחלות מעי דלקתיות (IBD) וסרטן המעי הגס (CRC) סיפקו תובנה משמעותית לגבי המנגנונים הפנימיים והחיצוניים של התא התורמים להופעת והתקדמות מחלות מעיים. זיהוי מולקולות חדשות המקדמות פתולוגיות אלה הוביל לגל של פעילות המתמקדת בפיתוח טיפולים חדשים פוטנציאליים לעיכוב תפקודם. כתוצאה מכך, מודלים שונים של עכברים פרה-קליניים עם מערכת חיסון שלמה ומיקרו-סביבה סטרומלית נמצאים כעת בשימוש רב. כאן אנו מתארים שלושה פרוטוקולים ניסיוניים לבדיקת היעילות של טיפולים חדשים במודלים פרה-קליניים של (1) נזק חריף לריריות, (2) קוליטיס כרונית ו/או סרטן המעי הגס הקשור לקוליטיס, ו-(3) סרטן המעי הגס הספורדי. אנו גם מתארים נהלים לבדיקה אנדוסקופית סדרתית שניתן להשתמש בהם כדי לתעד את התגובה הטיפולית של גידול בודד ולניטור בריאותם של עכברים בודדים. פרוטוקולים אלה מספקים פלטפורמות ניסוי משלימות לבדיקת היעילות של תרכובות טיפוליות שהוכחו כנסבלות היטב על ידי עכברים.

הרזיה משמשת כפרמטר סטנדרטי כדי לפקח על מחלות הקשורות לדלקת מעי גס, המשמש באופן שיגרתי כדי לפקח על הבריאות הכללית של עכברים. בעלי חיים בדרך כלל לשמור על משקלם, תוך DSS המכיל מים מנוהל, ורק מתחילים משקל רופף כאשר הם חזרו למים שתייה רגילים. פרמטרים לירידה במשקל צריכים להיות מקובלים שהוקמו בהתאם לועדת האתיקה של בעלי החיים של המוסד. על מנת למנוע ההתייבשות קשורה בשלשולים ממושכים, השתמש בהוראה השגרתית של mash (כדורי מזון מרוסקים ומעורבבים עם מים שתייה) בתוספת שייק חלבון בנוסף למים שתייה רגילים. כפי שניתן להשתמש בי הרדמה חלופית, קטמין / xylazine או סוכנים דומים, אם ציוד isoflurane אינו זמין. בשל אופייה הנוקשה של האנדוסקופ, נהלים אלה מאפשרים רק להדמיה של 3 סנטימטר דיסטלי ביותר של מעי גס עכבר. אנדוסקופים חדשים יותר עם<html> יכולות נוספות (כולל גמישות וקרינה) זמינות בהתאם לצרכים של הניסוי. עם זאת, מאז ההשפעות המזיקות של DSS מוגבלים בעיקר למעי הגס הדיסטלי של עכברים, עם הפתולוגיה מתונה יותר נצפתה במעי גס האמצע, אנדוסקופ הקשיח לא לעכב ניטור של הבריאות הרירית של עכברים בודדים. למרות שאנו מתארים פרוטוקול לטיפול מניעתי לקוליטיס מושרה DSS החריף, פרוטוקול זה יכול בקלות להיות שונה כדי לבדוק את אסטרטגיות טיפול התערבות. יעילותה של תרופה שנועדה להקל על הנזק וקוליטיס אפיתל ניתן לנטר longitudinally בעכברים בודדים ולכמת מבוססת על הפרמטרים שתוארו ניקוד (איור 5). זה יש יתרון על פני עיצובים ניסיוניים מסורתיים, הדורשים קולינג של עכברים בנקודות זמן מסוימים במהלך פרוטוקול הניסוי, ואינו מאפשר אפיון של תגובת המחלה לטיפול לאורך זמן. <html> t &quot;&gt; מחקרים קליניים בבני האדם הדגישו שונות רבות באופן שונה בגידולים במטופל מגיב לטיפולים. ההליכים המתוארים כאן לספק אמצעי לניטור נטל כולל גידול, כמו גם את התגובה לטיפול בגידולים בודדים במהלך של ניסוי. חשוב לקחת בחשבון כי פרוטוקולי ההתערבות שהתוו עבור דגמי הסרטן לא לוקחים בחשבון את ההשפעות של טיפול על התחלה של גידול. פרוטוקולי מניעתי, עם הטיפול הניתן לפני כאשר הגידולים להיות גלויים על ידי אנדוסקופיה, נדרשים כדי להשיג מידע זה. הפרוטוקולים המפורטים כאן מספקים מידע על השפעות טיפוליות על על ההתקדמות (שנמדד על ידי גודל גידול) של גידולים בודדים. רגרסיה הגידול גם יכולה להיות מצויינים על ידי ירידה במספרם של גידולים גלויים. ז &quot;/&gt; איור 1:. ניטור היעילות של טיפול טיפול מונע במודל של נזק במעי הגס חריף (א) פרוטוקול הניסוי מחייב 8 ימים מתחילתו ועד סיומו. Therapeutics מנוהל (ב) מיום 1 לטיפולים מניעתיים. DSS מסופק במי השתייה (ג) מיום 3 לפרוטוקול הניסוי. אנדוסקופיה מבוצעת (ד) כדי לפקח על התקדמות המחלה בבעלי החיים. נקודתי זמן הציע כוללות יום 0 (ללא טיפול) ויום 2 (ניטור בריאות), יום 5 ו -8 (כדי לקבוע נטל מחלה). הניסוי הופסק (ה) בבוקרו של יום 8. בעכבר wild-type (ו) את ההתקדמות של מחלה עולה עם זמן. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig2highres.jpg" /> איור 2: ניטור את היעילות של טיפול התערבות בo מודלf קוליטיס הקשורים לסרטן. (א) פרוטוקול הניסוי מחייב 72 ימים מתחילתו ועד סיומו. Therapeutics (ב) מנוהל לעכברים עם גידולים שהוקמו מיום 46 לטיפולי התערבות. AOM (ג) מוזרק ביום 1, וDSS מסופק במי השתייה במהלך שלושה מחזורים של פרוטוקול הניסוי, המתחיל ביום 8. אנדוסקופיה (ד) מבוצעת כדי לפקח על התקדמות המחלה בבעלי החיים. נקודתי זמן הציע כוללות יום 0 (ללא טיפול), 20 (ניטור בריאות) היום, ויום 40 (לבעלי חיים קבוצה על פי נטל גידול). אנדוסקופיה מבוצעת שבועית במהלך הטיפול הרפואי כדי לפקח על תוצאות מחלה. הניסוי (ה) הסתיימה בבוקרו של יום 72. בניטל גידול עכבר wild-type (ו) מגבירה מיום 40 ואילך. <img alt="איור 3"src = &quot;/ קבצים / ftp_upload / 52,383 / 52383fig3highres.jpg&quot; /&gt; איור 3:. ניטור את היעילות של טיפול התערבות במודל של סרטן מעי גס ספונטני פרוטוקול הניסוי (א) דורש&gt; 50 שבועות מתחילתו ועד סיומו. Therapeutics (ב) מנוהל לעכברים עם גידולים שהוקמו לטיפולי התערבות. AOM (ג) מוזרק ביום 1, ולאחר מכן שבועי למשך 6 זריקות רצופות במהלך פרוטוקול הניסוי. אנדוסקופיה (ד) מבוצע כדי לפקח על התקדמות המחלה בבעלי החיים. נקודתי זמן הציע כוללות יום 0 (ללא טיפול) ושבוע 8 (ניטור גידול) ודו-שבועי לשם אחרי (להקמת נטל גידול). אנדוסקופיה מבוצעת שבועית במהלך הטיפול כדי לפקח על תוצאות טיפוליות. הניסוי (ה) הסתיים בשבוע 50. בניטל גידול עכבר wild-type (ו) מגביר משבוע 40 ואילך. </<html> p&gt; <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig4highres.jpg" width="650" /> איור 4:. הגדרת ציוד ניסיוני ההגדרה (א) ליחידה אנדוסקופית, עם יצירות בודדות של ציוד מצויינים. אנדוסקופ הקשיח (ב), עם רכיבים בודדים שצוין. בר = 2.5 סנטימטרים בהיקף. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52383/52383fig4highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig5highres.jpg" width="650" /> איור 5:. פרמטרים מחלה ניקוד על ידי אנדוסקופיה מתאר (א) לMurine אנדוסקופי מדד קוליטיס החומרה (MEICS). מתווה (ב) לפרמטרי ניקוד גידול הבודדים.es / ftp_upload / 52,383 52383fig5highres.jpg &quot;target =&quot; / _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig6highres.jpg" width="650" /> איור 6: טיפולים טיפוליים נציג ירידה במשקל-נציג, תמונות אנדוסקופית וציונים ל:. (א) אקוטי DSS-Induced נזק לרירית (ב) גידולים שהתפתחו בעקבות AOM הפרוטוקול / DSS גידולים (ג) שהתפתחו בעקבות רציף.. פרוטוקול AOM. N = 3 עכברים בכל קבוצה. * P &lt;0.05, *** P &lt;0.001 (מבחן t). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52383/52383fig6highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

אנו מתארים שיטות לניטור אורך של יעילות הטיפולים לטיפול בפתולוגיות של המעי הגס בעכברים באמצעות אנדוסקופ קשיח. פרוטוקול זה יכול לשמש בקלות לאפיון התגובה הטיפולית של גידול בודד בעכברים חיים וגם לניטור הישנות פוטנציאלית של המחלה.

הערכה לא פולשנית של היעילות של ניו Therapeutics למעי פתולוגיות שימוש הדמיה אנדוסקופי סידורי של עכברים חיים

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא לבחון את היעילות של טיפולים תרופתיים חדשים במודלים של קוליטיס וסרטן, באמצעות השראת המחלה בעכברים כדי לחקור טיפולים המעכבים את הפתולוגיה המושרה. התרופה ניתנת באופן מניעתי. בסרטון זה, נעשה שימוש בחלבון recombinant human interleukin 11, ולאחר מכן ניתן dextran sulfate sodium או DSS במי השתייה כדי לגרום לנזק רירי חריף ולרבים מהמאפיינים ההיסטופתולוגיים הקשורים למחלה דלקתית של המעיים.בשלב הבא, שינויים במחלה מנוטרים באמצעות אנדוסקופיה כדי לקבוע את היעילות הטיפולית. בסופו של דבר, התוצאות מראות עומס מחלה מופחת בהתבסס על ניטור ודירוג אנדוסקופיים לאחר טיפול תרופתי בעכברים עם פתולוגיה של מחלה מושרית. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא היכולת לנטר עכבר בודד לאורך כל הניסוי בהשוואה לטכניקות סטנדרטיות להיסטולוגיה.נדרשת בדיקה של מספר קהרות של בעלי חיים. מתודולוגיה זו יכולה לסייע לנו לשאול ולענות על שאלות מפתח בנושאי דלקת וסרטן של המעי הגס, ובפרט לנסות לבסס כיצד מניפולציה טובה יותר של סיגנל ציטוקינים עשויה להשפיע על התקדמות המחלה. חשוב להשתמש במודלים פרה-קליניים אלו כדי להעריך את יעילותם של תרופות ותרכובות, דבר המאפשר לנו לבחון את אותה עכברה במספר נקודות זמן ולראות האם לתרכובות אלו יש פעילות.אדגים את ההליך הזה יחד עם ג'ובאני צ'יאנו, טכנאי בעלי חיים מהמכון שלנו. ביום הראשון, ניתן את הטיפול הרפואי הרלוונטי ואת ביקורת הנשאי המתאימה. בהדגמה זו, 5 µg של חלבון recombinant human interleukin 11 הומסו ב-200 µL של phosphate buffered saline והוחדרו באופן אינטריפרוניאלי. קבעו את התזמון ואת תדירות המתן, אשר יהיו תלויים בפרופיל הפארמקוקינטיקה שנקבע עבור הרכיב הטיפולי הנבדק. מוצג כאן מתווה של טיפול מניעתי באמצעות הזרקות אינטריפרוניאליות פעמיים ביום לאורך הניסוי.יש לעקוב אחר עקביות הצואה ונוכחות של דם, ולשקול כל עכבר מדי יום. בימי הטיפול, השקילה צריכה להתבצע במקביל למתן התרופה הטיפולית כדי למזער את הסטרס הנגרם לעכברים כתוצאה מטיפול חוזר. ביום השלישי, יש להכין תמיסת 2.5% dextran sulfate sodium או DSS במי השתייה המסופקים באופן שגרתי לעכברים על ידי מתקן בעלי החיים.עבור הניסוי נדרשים כ-5 mL של תמיסת DSS לעכבר ליום. צריכת מי ה-DSS עשויה להשתנות אם טמפרטורת הסביבה במכון לבעלי חיים תשתנה. ספקו לעכברים DSS טרי.העבירו את ה-Liam לבקבוקי מים נקיים למשך חמישה ימים רצופים, ובערב של היום החמישי ספקו מי שתייה רגילים בנוסף לכופתיות מזון מעוכות ותוסף חלבון שסופקו בצלחות פטרי קטנות. בבוקר של היום השמיני.בצעו המתנזיה לעכברים כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב כדי לאסוף רקמות לניתוח היסטולוגי בהמשך. בצעו בדיקות שגרה למנות (batch testing) כדי לקבוע את מינון ה-DSS המתאים ולמנוע שונות בין מנות שונות. המינון המתאים צריך להתבסס על איבוד משקל ולהיות מאומת על ידי היסטופתולוגיה של קוליטיס.כווננו את מינון ה-DSS לטווח שבין 1% ל-4% משקל לנפח, בהתאם למיקרופלורה של מתקן גידול בעלי החיים ולסדרת ה-DSS. יש להרכיב את ציוד האנדוסקופיה בהתאם לנהלים הסטנדרטיים.יש לעקר ולנקות את גשש האנדוסקופ באמצעות 70% ethanol או חומר סיכוך אנטי-בקטריאלי. ניתן להקליט סרטונים באמצעות מחשב נייד או מחשב שולחני ותוכנת מדיה סטנדרטית כגון iMovie. מסך מחשב סטנדרטי, ולאו דווקא מסך בדרגה רפואית, מספיק להדמיית המעי הגס במהלך הליך האנדוסקופיה.הרדמו קבוצות של חמישה עד שישה עכברים בו-זמנית בתא עם 3% isoflurane ב-100% חמצן בקצב של 0.2 עד 0.4 ליטר לדקה. לאחר שהעכברים הורדמו, דבר שמאומת באמצעות צביטה בבהו לבה, יש לשנות את רמות ה-isoflurane לטווח שבין 0.5 ל-2% לצורך תחזוקת ההרדמה. הוציאו עכבר בודד מהתא והניחו אותו כאשר צדו הגחוני פונה כלפי מעלה וראשו מקובע בקונוס לאף; יש לנטר הרדמה מלאה ולסדר את הרגליים האחוריות כך שיהיו מתוחות מאחורי העכבר. מרחו פומדת וזלין על עיני העכברים כדי למנוע התייבשות.החזיקו את זנב העכבר בנקודת חיבורו לעמוד השדרה התחתון כדי לחשוף בבירור את פי הטבעת. זרימת האוויר תגרום לנפיחות של המעי הגס אם זרימת האוויר תהיה חזקה מדי. אוויר יונחב אל תוך קיבתו של העכבר.הכנס בעדינות את מעטפת האנדוסקופ הקשיחה לרקטום. בדרך כלל, ניתן להכניס את האנדוסקופ עד למרחק של שלושה סנטימטרים, נקודה שבה המעי הגס בעכברים מתעקל ואינו נגיש לאנדוסקופ הקשיח. קושי נפוץ במהלך הליכי אנדוסקופיה הוא חסימה של הגישה ללומן של המעי הגס עקב נוכחות של תוצרי פסולת (צואה).ניתן למנוע זאת על ידי עיסוי עדין של בטן העכברים לפני הפרוצדורה כדי לעודד הפרשת צואה. התחילו את הקלטת הווידאו בכל שלב של הליך האנדוסקופיה. ניתן לתעד את מדד חומרת המחלה (Disease scoring) על ידי עוזר מנוסה במהלך הפרוצדורה או במועד מאוחר יותר מקובצי הווידאו; ודאו שפעולות אלו מבוצעות על ידי מדען מנוסה.כל הליך אנדוסקופי יארך כד שתי דקות לכל עכבר לאחר הבדיקה האנדוסקופית. החזירו את העכברים לכלוב שלהם ועקבו אחריהם במהלך ההתאוששות מההרדמה. בעלי החיים בדרך כלל מתעוררים וניידים תוך שתי דקות לאחר הסרת חרוט האף להגשת isof Lorraine המוצג כאן; התוצאות המודגמות הן תוצאות מייצגות מעכברים שנחשפו ל-DSS כדי לדמות מחלה דלקתית מעיים חריפה.ביום השמיני של הפרוטוקול, לעכברים לא מטופלים מסוג הטיפוס הפראי (Wild type) יש קוליטיס כמצופה. מוצגים כאן איבודי משקל, תמונות אנדוסקופיות ומדדי חומרת קוליטיס אנדוסקופיים של עכברי ביקורת ושל עכברים שעברו טיפול בחלבון recombinant human interleukin 11. איבוד משקל משמש כפרמטר סטנדרטי לניטור מחלה הקשורה לקוליטיס, ומשמש באופן שגרתי לניטור הבריאות הכללית של העכברים, כפי שבא לידי ביטוי בירידה במדד חומרת הקוליטיס האנדוסקופית.הפחתה בחומרת המחלה ניכרת לאחר טיפול תרפויטי בעכברים עם פתולוגיה של מחלה מושרית. ברגע שתשלטו בטכניקה זו, אתם אמורים להיות מסוגלים להעריך את העכבר בערך תוך שתי דקות. ובאופן כללי, הדבר מאפשר לכם לבחון ביעילות רבה האם לטיפולים אלו יש השפעה על דלקת וסרטן במודל פרה-קליני רלוונטי.

non-invasive-assessment-efficacy-new-therapeutics-for-intestinal

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ileus לאחר הניתוח (POI) הוא סיבוך של ניתוח בטן מוביל לתחלואה ואשפוז ממושך. בגלל אסטרטגיות מניעות או טיפול חסרות מחקר התעצם הוא הכרחי. לכן הקמנו מודל עכבר סטנדרטי וריאלי כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של POI וללמוד אפשרויות טיפוליות פוטנציאליות.

הערכה תפקודית של תנועתיות מעיים ודלקת דופן מעי במכרסמים: ניתוח בדגם סטנדרטי של מניפולצית מעיים

במהלך השנים האחרונות, אנדוסקופים דור חדשים צמחו כעזרי מחקר אבחונים חשובים להערכת קוליטיס העכברי וגידולי מעי גס. אנו מציגים במסמך פרוטוקול מפורט לשיטת ניקוד חדשה שמשתמשת במזהים עשרוניים לתעד את החומרה אנדוסקופית של קוליטיס וגידולי מעי גס הערכה אנדוסקופית של דלקת וגידולי מעי גס בעכברים, כמו גם.

קולונוסקופיה גמישה בעכברים כדי להעריך את חומרת קוליטיס ומעי הגס גידולים באמצעות מערכת Validated אנדוסקופי ניקוד

טכניקות הדמיה חיה קטנות מאפשרות בדיקות אבחון סדרתי והתערבויות טיפוליות in vivo. לאחרונה, היקף היישומים התרחב באופן משמעותי וכיום כולל הערכה של התפתחות גידולים במעי הגס, ריפוי פצעים וניטור של דלקת. פרוטוקול זה מדגים יישומים פוטנציאליים המגוונים אלה של אנדוסקופיה העכברית.

העכברי אנדוסקופיה ל בVivo ריפוי Multimodal הדמיה של היווצרות הסרטן וההערכה של מעיים פצע ודלקת

על ידי שימוש בעכברים מדווחים טרנסגניים ותוויות פלואורסצנטיות הניתנות להזרקה, מיקרוסקופיה קונפוקלית של דיסק מסתובב תוך-חיוני לטווח ארוך מאפשרת הדמיה ישירה של התנהגות התאים המיאלואידיים לאדנומה של המעי הגס במודל סרטן המעי הגס Apc Min/+.

הדמיה של Dynamics התאים מיאלואידית בזמן אמת Apc מינימום / + מעיים גידולים על ידי דיסק מסתובב Confocal מיקרוסקופית

מאמר זה מתאר טכניקת הדמיית וידאו ומיפוי מרחבי-זמני ברזולוציה גבוהה לזיהוי שינויים בוויסות העצבי של תנועתיות המעי הגס בעכברים בוגרים. ניתן לזהות השפעות עדינות על תפקוד מערכת העיכול באמצעות גישה זו בתכשירי רקמות מבודדים כדי לקדם את ההבנה שלנו לגבי מחלות מערכת העיכול.

הדמיה וידאו ומפות Spatiotemporal לנתח תנועתיות מערכת העיכול של עכברים

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול מתאר השתלת תא גזע allogeneic hematopoietic ומאפשרת חוזרות הערכות מיני-אנדוסקופית של המעי הגס דיסטלי באתרו נוכחות, מאפיינים של חומרת דלקת מעי בתוך בשידור חי עכברים הסובלים מעיים שתל – מול – מארח מחלות.

אינדוקציה של מעיים שתל – מול – מארח מחלות והערכה מיני-אנדוסקופית שלה בעכברים בשידור חי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להקמת נקודות קצה חשובות וסמנים מתרבים של נזקי מעיים קטנים ופיצוי יתר באמצעות מודל של mucositis המושרה כימותרפיה. אנו להדגים את הזיהוי של תאים מתרבים באמצעות מחזור התא סמן מסוים באמצעות משקל המעי קטן, עומק קריפטה, ו בגובה ליה כנקודות קצה.

חשוב נקודות קצה וסמנים ההתרבות כדי להעריך פגיעה במעיים קטנים והסתגלות באמצעות מודל העכבר של Mucositis הנגרמת כימותרפיה

אנו מתארים שיטה כדי להמחיש gfp γδ iels התווית באמצעות הדמיה intravital של המעי הדק מורטין על ידי מיקרוסקופית הפוכה דיסק מיקרוסקופ קונפוקלית. טכניקה זו מאפשרת מעקב של תאים חיים בתוך רירית עד 4 h והוא יכול לשמש כדי לחקור מגוון של אינטראקציות מעיים החיסונית-אפיתל.

אינטרטל הדמיה של לימפוציטים תוך-אפיתל במעי קטן מוריין

תוך ניצול של מיקרוסקופ תוך-ויטאל, השיטה המוצגת כאן מאפשרת הדמיה בזמן אמת של שפיכת תאי אפיתל במעיים בבעלי חיים חיים. לכן, רירית מעיים מוכתמת topically (acriflavine ו rhodamineB-dextran) של עכברים מרדימים הוא תמונה עד רזולוציה של תא יחיד באמצעות מיקרוסקופית confocal.

גישה תוך-ויטאלית המבוססת על מיקרוסקופיה להערכת חמלה במעיים וביצועי שפיכת תאים אפיתל

כאן, אנו מספקים תיאור מפורט של ההליך כדי לגרום ביופסיות צביטה מונחה קולונוסקופית בעכברים ולעקוב אחר סגירת פצע בזמן אמת. בנוסף, מסופקות שיטות להכנת רקמות לניתוחים היסטולוגיים, אימונוהיסטוכימיים ומולקולריים של מיטת הפצע.

ביצוע ביופסיות צביטה קולונוסקופיות מונחות בעכברים והערכת שינויים ברקמות הבאים

תפקוד מחסום אפיתל מעיים Dysregulated ותגובות חיסוניות הם סימני היכר של מחלות מעי דלקתיות שנותרו נחקרות בצורה גרועה בשל מחסור במודלים פיזיולוגיים. כאן, אנו מתארים מודל לולאת מעיים של עכברים המעסיק מקטע מעיים בעל כלי דם וחיצוניים כדי לחקור חלחיליות רירית וגיוס לויקוציטים ב- vivo.

הערכה תפקודית של חלחיליות מעיים ונדידה טרנס-אפיתלית נויטרופילית בעכברים באמצעות מודל לולאת מעיים מתוקננת

למדו להעריך יעילות טיפולים חדשים בדלקת מעי וסרטן באמצעות אנדוסקופיה סידורית בעכברים חיים. שיטה זו מאפשרת מעקב אישי לאורך זמן ומפחיתה את הצורך בקבוצות ניסוי מרובות.

הערכה לא פולשנית של היעילות של ניו Therapeutics למעי פתולוגיות שימוש הדמיה אנדוסקופי סידורי של עכברים חיים

גלה סרטונים נוספים