ניסוי הגלאוקומה נגרמת על ידי הזרקת Ocular של מיקרוסכמות מגנטית

אנו מציגים שיטה להשראת לחץ תוך עיני מוגבר (IOP), על ידי הזרקת מיקרוספירות מגנטיות לעין העכברוש, כדי ליצור מודל של גלאוקומה. זה מוביל לעליית לחץ חזקה, ולמוות עצבי נרחב. פרוטוקול זה קל לביצוע, אינו דורש זריקות חוזרות ומייצר עליות IOP יציבות לאורך זמן.

מטרת הליך זה היא לגרום ללחץ תוך עיני מוגבר בחולדה באמצעות הזרקת מיקרוספירות פרמגנטיות לחדר הקדמי של העין. ראשית הניחו טבעת מגנטית סביב העין של חיה מורדמת, שטפו את המיקרוספירות המגנטיות, השעו אותן מחדש בתמיסה ואז העמיסו אותן למזרק. לאחר מכן, הזריקו את המיקרוספירות המגנטיות לחדר הקדמי של העין.

הסר את הטבעת המגנטית במהלך ההתאוששות. נתוני התהליך המתקבלים מניתוחים היסטולוגיים כמו צביעת מנהרה או צביעת עצב ראייה יכולים למדוד את המוות של תאי גנגליון ברשתית הנובע מלחץ תוך עיני מוגבר. שטפו את חרוזי המיקרוספירה המגנטית המעוקרים של שמונה מיקרון שלוש פעמים במיליליטר אחד של תמיסת המלח המבודדת של האנק על ידי ראוס, השעיה וצנטריפוגה ב-10,000 פעמים G למשך חמש דקות.

ואז ראוס השעו 0.5 מיליליטר HBSS לתמיסה של 30 מיליגרם למיליליטר. כעת, באמצעות סונומטר ריבאונד מכויל לשימוש בעין העכברוש, בצע חמש מדידות IOP בסיסיות בבעלי חיים ערים. לאחר ההרדמה, החולדות מורחות משחה עינית על העין הנגדית הלא מדורגת כדי לשמור עליה לחה.

במהלך ההרדמה יש למרוח 0.5% פרופאן הידרוכלוריד, הרדמה מקומית על העין הניתוחית. לאחר מכן, שטפו את העין עם יוד 5% פובידון במים. לאחר חמש דקות יש להסיר את הפובידון יוד ולשטוף את העין בתמיסת מלח סטרילית של 0.9%.

שמור על לחות העין במהלך ההרדמה עם מריחה קבועה של מי מלח סטריליים. כעת הניחו מגנט סטרואידלי סביב העין כדי למזער את הסיכון לטראומה בקשתית ולמזער את אובדן החרוזים. כוון את המחט המשיקה למשטח הקרנית במקביל ככל האפשר לקשתית.

המשך להזריק 25 מיקרוליטר של 30 מיליגרם למיליליטר, מיקרוספירות מגנטיות מוקרנות גמא לתוך החדר הקדמי. השאירו את המחט במקומה למשך דקה אחת לאחר ההזרקה כדי להבטיח שהחרוזים ישקעו בזווית הקרנית של ה-IOC כדי לעכב ניקוז מימי מהרשת הטרבקולרית. עבוד בזווית קלה של המחט כמה שניות לאחר שהחרוזים התייצבו בתחילה כדי לאפשר דליפה מסוימת של מים וכדי למזער עליות חולפות בלחץ התוך עיני.

כדי להבטיח את המשך השימוש במחט בהליכים נפרדים, יש לשטוף את המחט עם PBS. לאחר מכן 70% אתנול, ואחריו מים מזוקקים בשלב זה. במידת הצורך, הסר את המגנט והשתמש בו כדי לצייר חרוזים לאזורים עם כיסוי לא שלם.

השאירו את המגנט במקומו סביב העין למשך 10 דקות נוספות לאחר ההזרקה. כדי להבטיח שהחרוזים ישקעו היטב בזווית הקרנית האירידית. הרדמה הפוכה באמצעות 0.25 מיליגרם לק"ג ESOL הידרוכלוריד.

יש לתת 0.5 פרופאן הידרוכלוריד לשיכוך כאבים ומשחת כלורמפניקול באופן מקומי למניעת זיהום. השאירו את בעלי החיים להתאושש על מחצלת חום עד שהם יחזרו לתנועה. ואז מעבירים לקופסה חמה.

השתמש בעין הנגדית כבקרה לא מדורגת. חזור על מדידות IOP כל יומיים-שלושה לאחר מתן החרוזים וכל יומיים-שלושה לאחר מכן, הגדר את הקריטריונים להכללת עיניים במחקרים, כולל ה-IOP מוגבה מעל לחץ הבקרה הנגדי בחמישה מילימטרים של כספית, וה-IOP אינו עולה על 60 מילימטרים של עיני כספית שבהן הלחץ חוזר לנקודת ההתחלה שבוע לאחר ההזרקה. עם זאת, ניתן להזריק מחדש חרוזים בעיניים שאינן מפתחות IOP גבוה אם רוצים.

תקן את העיניים המנותחות ועצב הראייה ב-4% פרלדהיד, והעריך את הנזק לנוירון הרשתית על ידי צביעת מנהרה ואת הנזק לעצב הראייה על ידי כחול טואין. מכתים. בניסוי זה, הזרקת חרוזים מגנטיים לזווית הקרנית גרמה באופן עקבי לעלייה ממושכת וחזקה בלחץ. יתר על כן, עליית הלחץ נשמרה לאורך כל הניסוי.

ה-IOP הממוצע לאורך כל הניסוי עבור עיני ביקורת שלא הוזרקו חרוזים היה 19.7 פלוס מינוס 0.3 מילימטר כספית ו-40.5 פלוס מינוס 2.8 מילימטר כספית עבור עיניים מוזרקות חרוזים. בנוסף, שיא ה-IOP עלה מ-22.8 פלוס מינוס 0.3 מילימטר כספית ל-49.9 פלוס מינוס 2.3 מילימטר כספית כדי לקבוע אם עלייה ב-IOP מובילה למוות של תאי גנגליון ברשתית. צביעת מנהרה בוצעה ברשתית והיסטולוגיה במקטעים רוחביים של עצב הראייה ברשתית.

ראינו עלייה בכתמי מנהרה בעיניים מוזרקות חרוזים עם IOP מוגבר. מספר הגרעינים האפופטוטיים עלה בערך פי 15 מהרשתית עם יתר לחץ דם קונטרלטרלי כצפוי בעיניים בהן הוזרקו חרוזים מגנטיים ללא לחץ, מספר התאים החיוביים למנהרה לא היה שונה באופן משמעותי מאלה של בקרות שהוזרקו. חקירה נוספת של הפתולוגיה של עצב הראייה במודל הגלאוקומה הראתה הצטברות של אודין כחול ברבים מהאקסונים המעידה על ניוון של תהליכים תאיים אלה.