Name: הפגנת מעבדה לפיזיולוגיה: גלומרולרי סינון שיעור בחולדה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 58 s
Description: למד מדידת קצב סינון גלומרולרי וזרימת שתן בחולדות. פרוטוקול זה מספק הבנה מעשית של פיזיולוגיית הכליות ומדדי בריאות כלייתיים לסטודנטים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מקור המימון להפגנת המעבדה היה מענק NIGMS: GM077119. אנו מודים לד&quot;ר יוסף ר &#39;הייווד וד&quot;ר פיטר קובט על תמיכתם של couse הקצר באינטגרטיבית ואיברי מערכות פרמקולוגיה. כמו כן, אנו מודים לגב &#39;חנה Garver לתמיכה הטכנית שלה הפגנת המעבדה.

לפני כל הליך בעלי חיים, טיפול בבעלי החיים הוועדה המוסדית ושימוש (IACUC) חייבת לאשר את הפרוטוקול. פרוטוקול זה אושר על ידי IACUC אוניברסיטת מדינת מישיגן. 1. הכנת מעבדה-טרום של פתרון FITC-אינולין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 20 מיליליטר של תמיסת מלח חם עד 70 מעלות צלזיוס ולאט לאט מוסיפים של FITC-אינולין (5 מ&quot;ג / מיליליטר FITC-אינולין) 100 מ&quot;ג עד שכל אינולין נמס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון מגניב RT ולהוסיף 800 מ&quot;ג של אלבומין בסרום השור (40 מ&quot;ג / מיליליטר BSA, אבקת lyophilized, בעצם גלובולין רעלן פנימי ללא תשלום, נמוך, טוהר ≥98% על ידי ג&#39;ל אלקטרופורזה agarose). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן את פתרון אינולין-BSA עם נייר סינון (כיתה 1). מניחים את הפתרון המסונן במזרק 20 מיליליטר עם מסנן מזרק-קצה (0.2 מיקרומטר) ומכסה בנייר כסף כדי להגן מפני אור. </li></ol> 2. הרדמה וניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה בתא אינדוקציה מלא isoflurane 5% כדי לגרום להרדמה. שיא דירקטוריוןמשקל y (250-350 ז) ומניח את החולדה על פלטפורמת ניתוח מחוממת נועדה לשמור על 37 מעלות צלזיוס טמפרטורת גוף לאורך כל הניסוי. בעדינות לאבטח את החולדה לפלטפורמה עם קלטת מעבדה על כפות. לשמור על הרדמה עם isoflurane 1-2% עם הכיתה רפואית O 100% 2 בקצב זרימת אוויר של .8-1.0 L / min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס קטטר מחודד (OD תוך-הקצה, 2.7F) לתוך עורק הירך ללחץ דם וניטור קצב לב, ודגימת דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס קטטר (PE-50) לוריד הירך לעירוי אינולין. אבטח את הצנתר לרקמות עם תפר כירורגי משי קלוע 5-O 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את צנתר העורקים למתמר לחץ מד לחץ. לחץ שיא דם וקצב לב באמצעות תוכנת רכישת נתונים ותצוגה על מסך מחשב בזמן אמת. טכניקה זו באה לידי ביטוי בפירוט על וידאו 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את שלפוחית ​​השתן דרך חתך suprapubic. חותך קטןחור בקצה של שלפוחית ​​השתן ולהכניס צינורית (PE-190) עם חום התלקח קצה בתוך שלפוחית ​​השתן לאיסוף שתן. אבטח את הצינורית לשלפוחית ​​השתן עם תפרים טבעתיים. </li></ol> 3. תנו ודם אוסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את המזרק של FITC-אינולין במשאבת מזרק עם שיעור זרימת סט של 1 מיליליטר / שעה למשקל גוף 100 גרם (3 מיליליטר / שעה לעכברוש במשקל 300 גרם). צרף את המזרק לקטטר וריד הירך. התחל עירוי אינולין ולאפשר תקופת איזון 1-2 שעות. שמור מזרק מכוסה בנייר כסף כדי להגן מפני אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע אם זרימת שתן השיעור יציב ומתאים לניתוח מדגם (20 μl / min) על ידי איסוף דגימת שתן בבקבוקון אוסף-שקל מראש לתקופה של 10 דקות. לקבוע נפח שתן gravimetrically עם סולם דיגיטלי. נפח שתן נאות לתקופה אוסף 10 דקות הוא 0.2 מיליליטר. תמשיך לאסוף דגימות שתן עד שני אוספים רצופים מצביעים זרימת שתן שיעור של 20 μl / מ &#39;באו יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמאות טרום תרופות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף דגימת שתן במהלך תקופה של 20 דקות. לאסוף דגימת דם (0.5 מיליליטר) מצנתר העורקים בנקודת האמצע של תקופת האיסוף שתן. היזהר ברור לחלוטין צנתר העורקים של תמיסת מלח לפני איסוף דגימת דם בבקבוקון המכיל אוסף 1 הפרין U. השתמש בקבוקוני אוסף עם סימוני נפח כדי להקל על האוסף של 0.5 מיליליטר של דם עורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוקן את הקטטר עורקים עם הפרין-מלוח (20 U / ml) כדי לנקות את הקטטר של דם (כ. 0.1 מיליליטר). אורכו של צנתר העורקים צריך להיות קצר ככל האפשר כדי להגביל את הנפח של הפרין-מלוח הדרוש כדי לשטוף. הערה: דגימות דם מדולל לייצר חישובים מדויקים של GFR והפרשה חלקית של Na וק </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 10 דקות, וחזור על האוסף של שתן טרום תרופה שנייה ודגימת דם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות האוסף של שתי דגימות טרום תרופה, לנהל DRU משתן<html> g, פורוסמיד (10 מ&quot;ג / קילוגרם), דרך צנתר העורקים. רוקן את הקטטר עורקים עם מלוחים heparinized כדי לנקות את הקטטר של תרופה. לטפל כדי למנוע את הזריקה של אוויר דרך צנתר העורקים. רשום את הזמן של הזרקת פורוסמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמאות פוסט-סמים: בכל אחת מנקודות הזמן 3 להלן, לאסוף דגימת שתן בתקופה אוסף 10 דקות, ודגימת דם (0.5 מיליליטר) בנקודת האמצע של תקופת האיסוף שתן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדוגמא הודעה בסמים 1 - לאסוף חמש דקות לאחר פורוסמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על הודעה בסמים לדוגמא 2 - לאסוף עשר דקות לאחר פורוסמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על הודעה בסמים לדוגמא 3 - לאסוף חמישה עשר דקות לאחר פורוסמיד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל הדגימות נאספו, להרדים את העכברוש בהתאם לנהלים מוסדיים על ידי פתיחת בית החזה וההסרה של הלב. הסר את שני הכליות. Decapsulate (להסיר את הקרום המקיף) ולמחוק את הכליות כדי להסיר דם עודף. לשקול את הכליות. </li></ol>התחת = &quot;jove_title&quot;&gt; 4. ניתוח מדגם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את כל כרכי דגימת שתן gravimetrically עם סולם דיגיטלי, ומשקלי שיא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות דם כל צנטריפוגה עם צנטריפוגה בטבלה העליונה (1,800 XG) להפריד פלזמה. העבר את דגימות פלזמה לבקבוקונים קטנים שכותרתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח ריכוזי Na ו- K בדגימות שתן ופלזמה עם מנתח נתרן / אשלגן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדידה של FITC-אינולין בפלזמה ובשתן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את שתן מראש סמים (מ1: 200 עד 1: 400), ושתנו לאחר סמים (01:10) עם חיץ HEPES (500 מ&quot;מ, pH 7.4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 40 μl של μl הסטנדרטי או מדגם ו -60 של חיץ HEPES בצלחת גם 96 (מדגם אחד לכל היטב) ולאפשר לערבב למשך 10 דקות בזמן מכוסה ברדיד אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליצור עקומה סטנדרטית עבור FITC-אינולין לריכוזים של 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 מיקרוגרם / מיליליטר (איור 1). לקבוע הקרינה FITC-אינולין בדגימות וסטנדרטים באמצעות קורא microplate עם האקסאורכי גל ציטוט ופליטה של ​​485 ו538 ננומטר, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את ערכי ניאון לסטנדרטים לניתוח רגרסיה פונקציה לוגיסטית 4 paramter. הפרמטרים פונקצית רגרסיה משמשים לחישוב ריכוז FITC-אינולין בדגימות פלזמה ובשתן (טבלה 1). </li></ol></li></ol> ניתוח מעבדה ההודעה 5. תוצאות: חישובים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את שיעור זרימת שתן (UV; מיליליטר / דקה): [נפח השתן שנאסף (מיליליטר)] ÷ [זמן של אוסף (דקות)] </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב גלומרולרי סינון שיעור (GFR; מיליליטר / דקה): [ריכוז שתן אינולין (מיקרוגרם / מיליליטר) x UV (מיליליטר / דקה)] ÷ [קונצרט כלשהו אינולין פלזמה. (מיקרוגרם / מיליליטר)] </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב טען נתרן מסונן (μmol / min): ריכוז נתרן פלזמה GFR (μmol / מיליליטר) x (מיליליטר / דקה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב נתרן הפרשה שיעור (U Na V; μmol / min): ריכוז נתרן שתן (μmol / מיליליטר) x UV (מיליליטר / דקה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב שברי הפרשה של נתרן (Na FE;%): [U Na V (μmol / min)] ÷ [טען נתרן מסונן (μmol / min)] x 100 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב טען מסונן אשלגן (μmol / min): ריכוז אשלגן פלזמה (μmol / מיליליטר) x GFR (מיליליטר / דקה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב אשלגן הפרשה שיעור (U K V; μmol / min): ריכוז אשלגן שתן (μmol / מיליליטר) x UV (מיליליטר / דקה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב שברי הפרשה של אשלגן (FE K;%): [U K V (μmol / min)] ÷ [טען אשלגן מסונן (μmol / min)] x 100 </li></ol>

<ol><li>Silverthorn, D. U. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSilverthorn%2C+DU+%22Human+Physiology%3A+An+integrated+approach%22">Human Physiology: An integrated approach</a>. , Pearson. (2012).</li>
<li>Hall, J. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHall%2C+JE+%22Guyton+and+Hall+Textbook+of+Medical+Physiology%22">Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology</a>. , 303-344 (2011).</li>
<li>Levey, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+renal+function+in+chronic+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Measurement of renal function in chronic renal disease.</a> Kidney International. 38 (1), 167-184 (1990).</li>
<li>Thurau, K., Valtin, H., Schnermann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Kidney.</a> Annual Review of Physiology. 30, 441-524 (1968).</li>
<li>Shannon, J. A., Smith, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+excretion+of+inulin%2C+xylose%2C+and+urea+by+normal+and+phoriziniaed+man%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The excretion of inulin, xylose, and urea by normal and phoriziniaed man.</a> Journal of Clinical Investigation. 14, 393-401 (1935).</li>
<li>Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+arterial+and+venous+catheterization+for+blood+sampling%2C+drug+administration+and+conscious+blood+pressure+and+heart+rate+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements.</a> Journal of Visualized Experiments. (59), (2012).</li>
<li>Sterner, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+%27true%27+glomerular+filtration+rate+in+healthy+adults+using+infusion+of+inulin+and+comparing+it+with+values+obtained+using+other+clearance+techniques+or+predictive+equations%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Urology+and+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Determining 'true' glomerular filtration rate in healthy adults using infusion of inulin and comparing it with values obtained using other clearance techniques or predictive equations.</a> Scandinavian Journal of Urology and Nephrology. 42, 278-285 (2008).</li>
<li>Toto, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conventional+measurement+of+renal+function+utilizing+serum+creatinine%2C+creatinine+clearance%2C+inulin+and+para-aminohippuric+acid+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Nephrology+and+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Conventional measurement of renal function utilizing serum creatinine, creatinine clearance, inulin and para-aminohippuric acid clearance.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 4 (6), 505-509 (1995).</li>
<li>Matavelli, L. C., Kadowitz, P. J., Navar, L. G., Majid, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+hemodynamic+and+excretory+responses+to+intra-arterial+infusion+of+peroxynitrite+in+anesthetized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Renal hemodynamic and excretory responses to intra-arterial infusion of peroxynitrite in anesthetized rats.</a> Americam Journal of Physiology. 296, F170-F176 (2009).</li>
<li>Davidson, W. D., Sackner, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplification+of+the+anthrone+method+for+the+determination+of+inulin+in+clearance+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory%2C+%26+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Simplification of the anthrone method for the determination of inulin in clearance studies.</a> Journal of Laboratory, & Clinical Medicine. 62, 351-356 (1963).</li>
<li>Symes, A. L., Gault, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+of+inulin+in+tissues+using+anthrone%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Assay of inulin in tissues using anthrone.</a> Clinical Biochemistry. 8 (1), 67-70 (1975).</li>
<li>Shalmi, M., Lunau, H. E., Petersen, J. S., Bak, M., Christensen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suitability+of+tritiated+inulin+for+determination+of+glomerular+filtration+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Suitability of tritiated inulin for determination of glomerular filtration rate.</a> Americam Journal of Physiology. 260 (2 Pt 2), F283-F289 (1991).</li>
<li>Denton, K. M., Anderson, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+untrafiltration+in+rabbits+with+superficial+glomeruli%5BTitle%5D)+AND+%22EUropean+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glomerular untrafiltration in rabbits with superficial glomeruli.</a> EUropean Journal of Physiology. 419 (3-4), 235-242 (1991).</li>
<li>Jobin, J., Bonjour, J. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+unrestrained+rats+with+inulin+infused+by+implanted+osmotic+pumps%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Measurement of glomerular filtration rate in conscious unrestrained rats with inulin infused by implanted osmotic pumps.</a> Americam Journal of Physiology. 248 (5 Pt 2), F734-F738 (1985).</li>
<li>Lorenz, J. N., Gruenstein, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+nonradioactive+method+for+evaluating+single-nephron+filtration+rate+using+FITC-inulin%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin.</a> Americam Journal of Physiology. 276 (1 Pt 2), F172-F177 (1999).</li>
<li>Qi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+determination+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+mice+using+FITC-inulin+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance.</a> Americam Journal of Physiology. 286 (3), F590-F596 (2004).</li>
<li>Bivona, B. J., Park, S., Harrison-Bernard, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+filtration+rate+determinations+in+conscious+type+II+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glomerular filtration rate determinations in conscious type II diabetic mice.</a> Americam Journal of Physiology. 300 (3), F618-F625 (2011).</li>
<li>Rosen, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+anaesthesia+and+surgery+on+renal+hemodynamics%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Effects of anaesthesia and surgery on renal hemodynamics.</a> British Journal of Anesthesiology. 44, 252-258 (1972).</li>
<li>Cousins, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+and+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Anaesthesia+and+intensive+care%22%5BJournal%5D)">Anesthesia and the kidney.</a> Anaesthesia and intensive care. 11 (4), 292-320 (1983).</li>
<li>Walter, S. J., Zewde, T., Shirley, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+anaesthesia+and+standard+clearance+procedures+on+renal+function+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Quarterly+Journal+of+Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">The effect of anaesthesia and standard clearance procedures on renal function in the rat.</a> Quarterly Journal of Experimental Physiology. 74, 805-812 (1989).</li>
<li>Rieg, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+method+for+measurement+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A high-throughput method for measurement of glomerular filtration rate in conscious mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (75), (2013).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים. הדעות או הטענות הכלולות במסמך זה הן את הדעות פרטיות של המחבר ואינם להתפרש רשמי או כמשקפים את הדעות של המחלקה לצבא או משרד ביטחון.

סמן מתאים למדידת GFR לעמוד בארבעה קריטריונים: להיות מסונן באופן חופשי בglomerulus, להיות מאוגד לחלבוני פלזמה, ולא ייקלט ולא מופרש בנפרון. אינולין הוא פולימר פרוקטוז אשר עונה על קריטריונים אלה. כתוצאה מכך, הפינוי כלייתי של אינולין נחשב תקן הזהב למדידת GFR 7. הטכניקה הפגינה מייצגת את הגישה המסורתית של קביעת הפינוי כלייתי של אינולין באמצעות אוספי שתן מתוזמן במהלך עירוי קבוע של אינולין 8,9. מדידות אינולין מסורתיות נעשו שימוש בשיטת anthrone לייצר נחישות colorimetr...

התפקיד החשוב ביותר של הכליה הוא ויסות הומאוסטטי של תכולת המים והאלקטרוליטים החוץ-תאיים. הכליות מווסתות מקרוב מים חוץ-תאיים, נתרן (Na) ואשלגן (K) כדי לשמור על רמות פיזיולוגיות תקינות. הפרעות בתפקוד הכליות עלולות לגרום להפרעות מטבוליות חמורות שעלולות להיות קטלניות. התהליך הכלייתי הבסיסי מתרחש בנפרון ומתחיל בסינון פלזמה בגלומרולוס ומסתיים בהפרשת שתן. תהליכים נוספים הקובעים את הריכוז הסופי של מים, Na ו- K בשתן הם הפרשה וספיגה חוזרת בתוך הנפרון. מדידות של קצב סינון גלומרולרי (GFR) והפרשה חלקית של Na ו-K הן קריטיות להערכת תפקוד הכליות בבריאות ובמחלות. הקורא מופנה למאמרי סקירה וספרי לימוד שפורסמו בעבר לדיון מעמיק יותר בתפקוד הכליות1-4. 
ניתן למדוד GFR כפינוי כלייתי במצב יציב של אינולין המסונן בגלומרולוס, אך אינו מופרש או נספג מחדש לאורך הנפרון5. בעוד שטכניקה זו דורשת הרדמה, הכנה כירורגית וניסוי סופי, היא נחשבת לתקן הזהב של מדידת GFR. באמצעות אינולין המתויג עם פלואורסצאין-איזותיוציאנט (FITC), ניתן למדוד בקלות את ריכוז הפלזמה והשתן של FITC-אינולין בנפחים קטנים ולהשתמש בו לחישוב GFR במהלך נקודות זמן מרובות של ניסוי. ניתן לקבוע את ההפרשה החלקית של Na ו- K מריכוז Na ו- K בפלזמה ובשתן. 
ניתן להדגים בקלות את ההבנה המושגית כיצד למדוד תפקוד כלייתי במעבדה קצרה שנועדה לאפשר לתלמידים להשתתף באופן פעיל בהיבטים מסוימים של הניסוי. סרטון זה מתאר את ההכנה לפני המעבדה, הדגמת תפקוד הכליות והערכת התוצאות לאחר המעבדה. הטכניקות הכירורגיות הדרושות לביצוע מדידות של GFR מודגמות בחולדה מורדמת. בנוסף, חישובים לדוגמה עבור GFR, והפרשה חלקית של Na ו- K מוצגים לפני ואחרי מתן תרופה משתן.

<table><tbody><tr><td>5-0 תפר כירורגי משי קלוע</td><td>התמחויות כירורגיות Corp</td><td>SP1033</td><td></td></tr><tr><td>צלחת בדיקה, 96 בארות</td><td>Costar&nbsp;</td><td>3922</td><td></td></tr><tr><td>בקר סרום אלבומין</td><td>סיגמא כימיקל ושות</td>' <td>A2934-25G</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>בקמן קולטר</td><td>מיקרופוגה 18, 357160</td><td></td></tr><tr><td>צינורות דגימה חרוטיים</td><td>Dot Scientific Inc.&nbsp;</td><td>#711-FTG</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים עם קצה כותנה</td><td>Solon Manufacturing Co</td><td>56200</td><td></td></tr><tr><td>תוכנה לרכישת נתונים</td><td>ADInstruments</td><td>LabChart Pro 7.0</td><td></td></tr><tr><td>משקל דיגיטלי&nbsp;</td><td>Denver Instrument</td><td>APX-4001</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Inulin</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>F3272-1G</td><td></td></tr><tr><td>ספוגי גזה</td><td>Covidien</td><td>2146</td><td></td></tr><tr><td>מיטה כירורגית מחוממת</td><td>EZ-Anesthesia</td><td>EZ-212</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sagnet</td><td>NDC 25021-402-10</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Animal Health</td><td>IsoFlo, 5260-04-05</td><td></td></tr><tr><td>וופורייזר איזופלורן</td><td>EZ-הרדמה</td><td>EZ-190F</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו מלקחיים לניתוח מלקחיים</td><td>ביו-רפואיים מכשירי מחקר בע"מ</td><td>70-1020</td><td></td></tr><tr><td>Microplate Reader - Fluoroskan</td><td>ThermoScientific</td><td>Ascent FL, 5210460</td><td></td></tr><tr><td>NOVA 5+ מנתח נתרן/אשלגן</td><td>NOVA BioMedical</td><td>14156</td><td></td></tr><tr><td>מחזיקי מחט Olsen-Hegar עם מספריים</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>PE-190 (לצנתר שלפוחית השתן)</td> <td>BD מתמר</td><td>לחץ 427435</td><td></td>רפואי</tr> BD&<tr><td> נ.ב.פ;</td><td>ADInstruments</td><td>MLT1199</td><td></td></tr><tr><td>צינורות תרבות פיירקס</td><td>קורנינג בע"מ</td><td>99445-12</td><td></td></tr><tr><td>צנתר עורקי ירך עכברוש יישומים</td><td>אסטרטגיים בע"מ</td><td>RFA-01</td><td></td></tr><tr><td>Salix Furosemide 5%</td> <td>Intervet</td><td>#34-478</td><td></td></tr><tr><td>מספריים פזילה</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>14075-11</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים לסטודנטים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>91402-12</td><td></td></tr><tr><td>כפפות כירורגיות</td><td>קימברלי-קלארק</td><td>סטרלינג כפפות</td><td></td>ניטריל</tr><tr><td>משאבת מזרק</td><td>Razel Scientific</td><td>R99-E</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לרקמות</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>91121-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים לרקמות</td><td>ג'ורג' טימן&nbsp; Co</td><td>105-420</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">5-0 תפר כירורגי משי קלוע התמחויות כירורגיות Corp SP1033 צלחת בדיקה, 96 בארות Costar&nbsp; 3922 סרום בקר אלבומין סיגמא כימיקל ושות 'A2934-25G צנטריפוגה בקמן קולטר מיקרופוג 18, 357160 צינורות דגימה חרוטיים נקודה מדעית בע"מ&nbsp; #711-FTG אפליקטורים עם קצה כותנה Solon Manufacturing Co 56200 תוכנת רכישת נתונים ADInstruments LabChart Pro 7.0 דיגיטלי קנה מידה&nbsp; Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulin Sigma Chemical Co F3272-1G ספוגי גזה Covidien 2146 מיטת ניתוח מחוממת EZ-הרדמה EZ-212 Heparin Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurane Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 וופורייזר איזופלורן EZ-הרדמה EZ-190F מיקרו מלקחיים לניתוח מכשירי מחקר ביו-רפואיים בע"מ 70-1020 קורא מיקרו-פלטות - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ מנתח נתרן/אשלגן NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar מחזיקי מחטים עם מספריים Fine Science Tools 12002-12 PE-190 (לצנתר שלפוחית השתן) BD Medical 427435 מתמר לחץ&nbsp; ADInstruments MLT1199 צינורות תרבית פיירקס קורנינג בע"מ 99445-12 קטטר עורק מחודד עכברוש יישומים אסטרטגיים בע"מ RFA-01 Salix Furosemide 5% Intervet #34-478 מספריים פזילה כלים מדעיים עדינים 14075-11 מספריים כירורגיים לסטודנטים כלי מדע עדינים 91402-12 כפפות כירורגיות קימברלי-קלארק סטרלינג כפפות ניטריל משאבת מזרק Razel Scientific R99-E מלקחיים לרקמות כלים מדעיים עדינים 91121-12 מספריים לרקמות ג'ורג' טימן&nbsp; CO 105-420< לעמ></td></tr></tbody></table>

הפגנת מעבדה לפיזיולוגיה: גלומרולרי סינון שיעור בחולדה

Physiology Lab Demonstration: Glomerular Filtration Rate in a Rat

מדידות של קצב הסינון הגלומרולרי (GFR), וההפרשה החלקית של נתרן (Na) ואשלגן (K) הן קריטיות להערכת תפקוד הכליות בבריאות ובמחלות. GFR נמדד כפינוי כלייתי במצב יציב של אינולין המסונן בגלומרולוס, אך אינו מופרש או נספג מחדש לאורך הנפרון. ניתן לקבוע את ההפרשה החלקית של Na ו- K מריכוז Na ו- K בפלזמה ובשתן. ניתן להדגים את הפינוי הכלייתי של אינולין בחיה מורדמת שיש לה צנתרים בעורק הירך, בווריד הירך ובשלפוחית השתן. הציוד והאספקה המשמשים להליך זה הם אלה הזמינים בדרך כלל במתקן ליבת מחקר, ובכך הופכים הליך זה לאמצעי מעשי למדידת תפקוד הכליות. מטרת סרטון זה היא להדגים את ההליכים הנדרשים לביצוע הדגמת מעבדה בה מעריכים את תפקוד הכליות לפני ואחרי תרופה משתן. ניתן להשתמש בטכניקה המוצגת כדי להעריך את תפקוד הכליות במודלים של חולדות של מחלת כליות.

משתן משמש בהפגנת המעבדה היה פורוסמיד אשר מעכב את הספיגה של של Na ו- K המסוננת על ידי הכליות וכתוצאה מכך גדל Na, K, והפרשת מים בתוך דקות של מתן תרופה מהר מאוד. על ידי המנגנון העיקרי שלה, פורוסמיד צריך להיות השפעות מינימליות על GFR והעומס המסונן של Na ו- K, אבל יגביר את זרימת שתן, והפרשה חלקית של Na וק תוצאות הנציג בטבלה 3 מראות כי בעכברוש הרדים, הממוצע של הערכים מראש התרופה לGFR היה 3.2 מיליליטר /...

מטרת פרוטוקול זה היא להדגים את העקרונות והטכניקות למדידה וחישוב קצב הסינון הגלומרולרי, קצב זרימת השתן והפרשת נתרן ואשלגן בחולדה. ניתן להשתמש בהדגמה זו כדי לספק לתלמידים הבנה מושגית כוללת כיצד למדוד תפקוד כליות.

Measurements of glomerular filtration rate (GFR), and the fractional excretion of sodium (Na) and potassium (K) are critical in assessing renal function ...

physiology-lab-demonstration-glomerular-filtration-rate-in-a-rat

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

טכניקת ניצול הרזולוציה הגבוהה intavital מיקרוסקופיה 2 פוטונים ישירות לדמיין ולכמת סינון gloemrular במשטח glomeruli. שיטה זו מאפשרת קביעה ישירה של מאפייני חדירות של מולקולות במצבים נורמלים ובחולים.

כימות חדירות גלומרולרי של מקרומולקולות פלורסנט באמצעות מיקרוסקופ 2-פוטון בחולדות Wistar מינכן

מדידה של קצב סינון גלומרולרי (GFR) היא תקן הזהב להערכת תפקוד כליות. כאן אנו מתארים שיטת תפוקה גבוהה המאפשרת קביעת GFR בעכברים מודעים באמצעות זריקה אחת בולוס, קביעת isothiocyanate ההעמסה (FITC)-אינולין בפלזמה וחישוב GFR ידי מודל דעיכה מעריכית שני שלבים.

שיטת תפוקה גבוהה למדידה של קצב סינון הגלומרולרי בעכברים בהכרה

שינויים ברמות הסידן התוך-תאיות בפודוציטים הם אחד האמצעים החשובים ביותר לשליטה בתפקוד הסינון של גלומרולים. כאן אנו מסבירים גישה בעלת תפוקה גבוהה המאפשרת זיהוי של טיפול בסידן בזמן אמת ופעילות תעלות יונים בודדות בפודוציטים של הגלומרולים הטריים שבודדו.

ערוץ יחיד הדמיה ניתוח וסידן בPodocytes של glomeruli מבודדת טרי

קביעת קצב הסינון הגלומרולרי (GFR) היא תקן הזהב להערכת תפקוד הכליות הכללי. עם זאת, הליכים מסורתיים למדידת פרמטר זה הם מסורבלים ודורשים השקעה גדולה של זמן. כאן אנו מתארים שיטה מהירה וזעיר פולשנית לקביעת GFR דרך העור.

הערכת Transcutaneous של תפקוד כלייתי במכרסמי Conscious

פרוטוקול זה מתאר של הכליה מלא עבודה מעלה כי צריך להתבצע במודלים של העכבר של מחלת glomerular. השיטות מאפשרים ניתוח פונקציונלי, מבניים מכניסטית מפורט של הפונקציה glomerular, אשר ניתן להחיל על כל הדגמים העכבר של המחלה glomerular.

הערכה של תפקוד כליות במודלים של העכבר של מחלת Glomerular

המוקד העיקרי של פרוטוקול זה הוא לבודד ביעילות glomeruli העיקרי קיימא תרבויות עם מזהמים מינימלית לשימוש במגוון רחב של יישומים במורד הזרם. Glomeruli מבודד שומרים על קשרים מבניים בין סוגי תאים רכיב וניתן בתרבית שמחוץ לזמן קצר.

דרך יעילה Sieving כדי לבודד Glomeruli ללא פגע מן החולדה למבוגרים כליות

כאן נתאר פרוטוקול כדי למדוד את קצב הסינון glomerular (GFR), בהכרה, לנוע בחופשיות עכברים באמצעות צג GFR דרך העור.

Transdermal מדידה של קצב הסינון Glomerular בעכברים

בעכברים המשתמשים במעקב. רגיש ולא רדיואקטיבי שיטה זו מאפשרת ניתוחי שתן חוזרים ונשנים עם כמויות שתן קטנות.

מדידה רגישה מאוד של חדירות הפקאוליות בעכברים עם פלואורואסעין איזוטיקריאט-פוליסוכרוז 70

כאן אנו מציגים פרוטוקול המשתמש במיקרוסקופיה של 2 פוטונים בחולדות Wistar Fromter במינכן עם גלומרולי פני השטח כדי לכמת את ההשפעות של חסימת שופכה ממושכת על הדינמיקה והתפקוד של גלומרולרי.

שימוש במיקרוסקופיה של 2-פוטונים כדי לכמת את ההשפעות של חסימת שופכה חד-צדדית כרונית על תהליכים גלומרולריים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מדידה רציפה ארוכת טווח של זרימת הדם הכלייתית בחולדות מודעות ובמקביל רישום לחץ דם עם צנתרים מושתלים (מלאים בנוזלים או בטלמטריה).

מדידה מתמשכת ארוכת טווח של זרימת הדם הכלייתית בחולדות מודעות

קצב סינון גלומרולרי (GFR) הוא הסמן האידיאלי להערכת תפקוד הכליות. עם זאת, שיטת המדידה הסטנדרטית באמצעות הזרקת אינולין עם ניתוח דם ושתן סדרתי אינה מעשית. מאמר זה מתאר שיטה מעשית למדידת GFR באופן טרנסדרמלי בחזירונים.

מדידה טרנסדרמלית של קצב סינון גלומרולרי בחזירונים מאווררים מכנית

למד מדידת קצב סינון גלומרולרי וזרימת שתן בחולדות. פרוטוקול זה מספק הבנה מעשית של פיזיולוגיית הכליות ומדדי בריאות כלייתיים לסטודנטים.

הפגנת מעבדה לפיזיולוגיה: גלומרולרי סינון שיעור בחולדה

גלה סרטונים נוספים