Name: שיטות להשוואה בין חומרים מזינים בBeebread נוצרו על ידי דבורים דבש Africanized ואירופאי והשפעות על titers חלבון Hemolymph (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: חקור השוואת ריכוזי חלבון וחומצות אמינו בדבשת ובאבקה בין תת-מיני דבורים אירופאיים ואפריקניים. השיטה מודדת צריכת מזון ורמות חלבון בדם-המוהל לניתוח תזונתי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים למונה צ'יימברס, ג'פרי הידלגו ומוריסה טו טו על עזרתם הטכנית. אנו מודים גם לד"ר ארל ווייט על ניתוח חומצות אמינו, לד"ר רוג'ר סימונדס על ניתוח אבקה לחומרי הדברה, ולד"ר סטנלי ס. שניידר, ונסה קורבי-האריס וקירק אנדרסון על סקירותיהם ודיון בגרסאות מוקדמות יותר של כתב היד ועל הצעות מועילות רבות.

1. קבלת Beebread ממושבות AHB וEHB <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים מלכודות אבקה במושבות דבורי דבש ולאסוף אבקה. טוחנים את האבקה לאבקה דקה (בדומה לאבקה לשפוך ממאבקים) באמצעות מטחנת קפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקים מושבות 5 כל אחד מAHB וEHB באזור טיסה סגור (EFA), כך שדבורים ללקט רק באבקה הניתנת. כדי למנוע מעובדים נסחפו בין EHB ומושבות AHB, לחלק את EFA לחלקים נפרדים, כך שדבורים לא יכולים לעבור ביניהם. הנח EHB הבודד או מושבות AHB עם 3,500-4,000 דבורים פועל, מסרק שעווה עם צוף, דבש, להרהר בשלה ומסרק ריק בכל קטע של EFA. הערה: המושבות לא אחסן אבקה כאשר הוקמו. שיעור האבקה שמאוחסן יכול להיות מוגבר על ידי לא כולל מלכת הנחת במושבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להאכיל את אבקת קרקע למושבות על ידי הנחת מגש עם האבקה בכל קטע של EFA. מתפשט על 60 גרם של אבקה על כל מגש כך foragin שדבורי g יכולים לאסוף אותו המון corbicular וכלאחסן את האבקה במושבות שלהם כbeebread. המשך מתן אבקה טרי על כל מגש יומי במשך 3 שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיין beebread מהקולוניות האירופיות כbeebread האירופי (גאות), ומן מושבות Africanized כbeebread Africanized (ABB). </li></ol> 2. דבורים האכלה בכלובים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסגרות מקום להרהר עובד חתום ממושבות AHB וEHB בכלובים נפרדים הופעה בחדר סביבתי נקבעו על 32-34 ° C ו 40% לחות יחסית .. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר העובדים לצאת ועומדים 24 שעות ישנות, להקים 12 כלובי המבדק פרספקס (ממדים = 11.5 x 7.5 x 16.5 סנטימטר 3) ולהוסיף או 100 EHB יצא זה עתה או 100 דבורים פועל AHB יצאו זה עתה לכל כלוב. הנח סעיף של מסרק עם מספר ידוע של תאים או גאות או ABB (24-30 תאים לכל כלוב) בכל כלוב כדי ליצור שילובי הטיפול הבאים: AHB fed ABB, EHB fed ABB, AHB fed גאות וEHB fed גאות. (4 טיפולים; 6כלובים לטיפול; 24 כלובים בסך הכל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף בקבוקונים של מים ודבש 50% ופתרון מים שנוסחו על ידי נפח לכל כלוב. למלא בקבוקוני דבש ומים יומיים לתקופת המחקר 11 היום. </li></ol> 3. דבורים דגימת עבודה וBeebread וצריכת הערכה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדוגמא 10 יצאה זה עתה עובדי EHB וAHB לפני הצבת אותם בכלובים. עיין באלה כ0 דבורי היום ויש להם לשמש כבסיס לריכוזי חלבון hemolymph. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר 10 דבורים מכל כלוב לאחר שהאכיל בגאות או ABB עבור 4, 7, ו -11 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הדבורים חיים בצינורות microcentrifuge בודדים ולהגדיר בשקיות קרח. בחר subsample של ארבעה דבורים לניתוח של ריכוז חלבון hemolymph. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגימת דבורים ביום-11, לספור את מספר תאי מסרק שעדיין מכילים beebread. זהו מדד יחסי של צריכת beebread. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את beebread שנותר מהתאים בכל כלוב ולאחסן בseparאכלתי צינורות microcentrifuge פי כלוב. שמור את דגימות beebread ב -80 ° C עד ניתח עבור pH, ריכוז חלבון מסיס, ותוכן של חומצות אמינו. </li></ol> 4. הערכת pH של אבקה וBeebread <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח שש דגימות 0.3 גרם אקראיות של האבקה המוזנת לדבורים בEFA ולפזר אותו ב300 μl של מים מזוקקים. למדוד את ה- pH באמצעות חנית pH הצומת כפולה עמיד למים עם דיוק של 0.01. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 0.3 מדגם g של beebread שנותר לאחר תקופת ההאכלה 11 היום בכל כלוב. ממיסים את beebread ב300 μl של pH מים והמידה מזוקק כפי שתואר לאבקה (4.1). </li></ol> ניתוח 5. חלבון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח שש דגימות של האבקה ומדגם של גאות וABB מכל כלוב. דגימות חנות ב -20 ° C עד ניתחו לריכוז חלבון מסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 20 מ&quot;ג של אבקה או או beebread עם 1,000 μl של 0.1 פתרון M פוספט חיץ (PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ווrtex התערובת במשך 10 שניות ו צנטריפוגות ב XG 571.2 דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מדגם 10 μl של supernatant והמקום בבארות של צלחת 96 גם שטוחה תחתונה EIA / RIA קלקר. לשכפל כל דגימה בשלוש בארות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצייר hemolymph מדבורים שנאספו מכל כלוב על ידי החדרת צינור נימי 20 μl (שחומם ומשך לנקודת מחט החדה) לחלק לרוחב תקין של בית החזה ליד נקודת ההתקשרות של הכנפיים. לאסוף hemolymph נוסף, במידת צורך, על ידי החדרת הצינור לתוך הקרום בין tergites הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 μl של hemolymph עד 9 μl של 0.1 M PBS. אחסן את פתרון hemolymph ב -20 ° C עד לניתוח לחלבון מסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע ריכוזים כולל חלבון מסיס באבקה, beebread, ודגימות hemolymph באמצעות ערכה assay החלבון מסחרית ברדפורד. בצע את הוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקמת עקומת סטנדרט להעריך מסיס ג חלבוןoncentration בדגימות על ידי מדידת ספיגת חלבון עם ריכוזי חלבון ידועים באלבומין בסרום שור (BSA). למדוד ספיגת חלבון ב595 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר. </li></ol> 6. חומצת אמינו ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמאות בודדות בריכה מתאי מסרק של כל מושבה כדי ליצור מדגם מייצג של גאות וABB לניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח אבקת 50 מ&quot;ג או מדגם beebread שקל לתוך צלוחיות autosampler, ולהוסיף 1 מיליליטר של מים מזוקקים לבקבוקון, יחד עם פתרון 50 ng / μl הפנימי סטנדרטי בהיקף של ד 4 -alanine 100 μl, ד 23 חומצת -lauric, 13 C -glucose 6 וד 39 חומצת -arachidiac. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כובע המדגם sonicate במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתנות מחסנית HLB על ידי הוספת 1 מיליליטר של מתנול, equilibrated על ידי הוספת 1 מיליליטר של מים מזוקקים ואחריו התוספת של 1 מיליליטר של מדגם beebread או אבקה. לשטוף את המחסנית עם 1 מיליליטר של 5.0% MeOH / H 2 O וelute עם 1 מיליליטר של 80% MeOH / H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתאדות המדגם ליובש תחת זרם של חנקן. מחדש את המדגם עם 50 μl של פירידין ושל N, trifluoroacetamide O-Bis (trimethylsilyl) + Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS) 100 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כובע דגירה המדגם ב 70 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר את המדגם כדי לקרר ולהעביר אותו לבקבוקון autosampler נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כובע ומניחים את המדגם לתוך מסת סלקטיבי גלאי ממשק לגז כרומטוגרף לנתח הדגימות הן לתרכובות נדיפות וחומצות אורגניות. הפרד את חומצות סוכר ואורגניים הבאים derivatization TMS עם BSTFA + TMCS באמצעות טור (id 30 mx 0.25 מ&quot;מ) בעובי 1.0 מיקרומטר סרט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את תנור הטור ב 50 צלזיוס למשך 2 דקות, ולאחר מכן להעלות את הטמפרטורה באופן ליניארי 290 ° C ב 5 C / min. ולהחזיק במשך 7 דקות. הגדר את מזרק GC וממשק / MS GC 250 ° C ו- 290 ° C, בהתאמה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בהליום כנשא בפלהשיעור w של 1.0 מיליליטר / דקה. הגדר את טמפרטורת מקור MS 230 מעלות צלזיוס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנגינה ולכייל את ספקטרומטר המסה יומי עם Perfluorotributylamine (PFTBA). השתמש בהזרקת μl 1 של PFTBA בסריקה המלאה (35-700 האמו) מצב יון חיובי לקבל נתונים על הנוכחות וריכוזים של חומצות אמינו. </li></ol>

<ol><li>Brodschneider, R., Crailsheim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrition+and+health+in+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Nutrition and health in honey bees.</a> Apidologie. 41 (3), 278-294 (2010).</li>
<li>Spivak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+success+of+Africanized+and+European+honey-bees+over+a+range+of+life-zones+in+Costa+Rica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Ecol%22%5BJournal%5D)">The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica.</a> J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).</li>
<li>Schneider, S. S., McNally, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+foraging+patterns+and+colony+energy+status+in+the+African+honey+bee+Apis+mellifera+scutellata%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Behav%22%5BJournal%5D)">Spatial foraging patterns and colony energy status in the African honey bee Apis mellifera scutellata.</a> J. Insect Behav. 6 (2), 195-210 (1993).</li>
<li>Becerra-Guzman, F., Guzman-Novoa, E., Correa-Benitez, A., Zozaya-Rubio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Length+of+life%2C+age+at+first+foraging+and+foraging+life+of+Africanized+and+European+honey+bee+%28Apis+mellifera%29+workers%2C+during+conditions+of+resource+abundance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Api.+Res%22%5BJournal%5D)">Length of life, age at first foraging and foraging life of Africanized and European honey bee (Apis mellifera) workers, during conditions of resource abundance.</a> J. Api. Res. 44 (4), 151-156 (2005).</li>
<li>Saltykova, E. S., Lvov, A. V., Ben’kovskaya, G. V., Poskryakov, A. V., Nikolenko, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interracial+differences+in+expression+of+genes+of+antibacterial+peptides%2C+Abaecin%2C+Hymenoptaecin%2C+and+Defensin%2C+in+bees+Apis+mellifera+mellifera+and+Apis+mellifera+caucasica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Evol.+Biochem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Interracial differences in expression of genes of antibacterial peptides, Abaecin, Hymenoptaecin, and Defensin, in bees Apis mellifera mellifera and Apis mellifera caucasica.</a> J. Evol. Biochem. Phys. 41 (5), 506-510 (2005).</li>
<li>Decanini, L. I., Collins, A. M., Evans, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+and+heritability+in+immune+gene+expression+by+diseased+honeybees%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hered%22%5BJournal%5D)">Variation and heritability in immune gene expression by diseased honeybees.</a> J. Hered. 98 (3), 195-201 (2007).</li>
<li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiology+of+pollen+and+beebread%3A+the+genus+Bacillus%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Microbiology of pollen and beebread: the genus Bacillus.</a> Apidologie. 10 (3), 269-274 (1979).</li>
<li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiology+of+pollen+and+beebread%3A+the+yeasts%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Microbiology of pollen and beebread: the yeasts.</a> Apidologie. 10 (3), 43-53 (1979).</li>
<li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+roles+of+non-pathogenic+microflora+associated+with+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiology+Letters%22%5BJournal%5D)">Identification and roles of non-pathogenic microflora associated with honey bees.</a> FEMS Microbiology Letters. 155 (1), 1-10 (1997).</li>
<li>Loper, G. M., Standifer, L. N., Thompson, M. J., Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemistry+and+microbiology+of+bee-collected+almond+%28Prunus+dulcis%29+pollen+and+beebread.+I.+Fatty+acids%2C+sterols%2C+vitamins%2C+and+minerals%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Biochemistry and microbiology of bee-collected almond (Prunus dulcis) pollen and beebread. I. Fatty acids, sterols, vitamins, and minerals.</a> Apidologie. 11 (1), 63-73 (1980).</li>
<li>Khachatryan, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominant+role+of+host+genetics+in+controlling+the+composition+of+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Predominant role of host genetics in controlling the composition of gut microbiota.</a> PLoS ONE. 3 (8), e3064(2008).</li>
<li>Turnbaugh, P. J., Ley, R. E., Mahowald, M. A., Magrini, V., Mardis, E. R., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+obesity+associated+gut+microbiome+with+increased+capacity+for+energy+harvest%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An obesity associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest.</a> Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).</li>
<li>Ley, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+alters+gut+microbial+ecology%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Obesity alters gut microbial ecology.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 102 (31), 11070-11075 (2005).</li>
<li>Ley, R. E., Peterson, D. A., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecological+and+evolutionary+forces+shaping+microbial+diversity+in+the+human+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ecological and evolutionary forces shaping microbial diversity in the human intestine.</a> Cell. 124 (4), 837-848 (2006).</li>
<li>Standifer, L. N., McCaughey, W. F., Dixon, S. E., Gilliam, M., Loper, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemistry+and+microbiology+of+pollen+collected+by+honey+bees+%28Apis+mellifera+L.%29+from+almond%2C+Prunisdulcis.+II.+Protein%2C+amino+acids+and+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Biochemistry and microbiology of pollen collected by honey bees (Apis mellifera L.) from almond, Prunisdulcis. II. Protein, amino acids and enzymes.</a> Apidologie. 11 (2), 163-171 (1980).</li>
<li>Human, H., Nicolson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+content+of+fresh%2C+bee-collected+and+stored+pollen+of+Aloe+greatheadii+var+davyana+%28Asphodelaceae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochem%22%5BJournal%5D)">Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae).</a> Phytochem. 67 (14), 1486-1492 (2006).</li>
<li>Schneider, S. S., DeGrandi-Hoffman, G., Smith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+African+honeybee%3A+Factors+contributing+to+a+successful+biological+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">The African honeybee: Factors contributing to a successful biological invasion.</a> Ann. Rev. Entomol. 49, 351-376 (2004).</li>
<li>Winston, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+and+management+of+Africanized+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">The biology and management of Africanized honey bees.</a> Annu. Rev. Entomol. 37, 173-193 (1992).</li>
<li>Woyke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brood-rearing+ef%EF%AC%81ciency+and+absconding+in+Indian+honeybees%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Apic.+Res%22%5BJournal%5D)">Brood-rearing efﬁciency and absconding in Indian honeybees.</a> J. Apic. Res. 15 (3/4), 133-143 (1976).</li>
<li>Fletcher, D. J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brood+rearing+and+absconding+of+tropical+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22African+Bees%22%5BJournal%5D)">Brood rearing and absconding of tropical honey bees.</a> African Bees. , Apimondia. Pretoria, South Africa. 96-102 (1977).</li>
<li>Winston, M. L., Otis, G. W., Taylor, O. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absconding+behavior+of+the+Africanized+honey+bee+in%5BTitle%5D)+AND+%22South+America.+J.+Api.+Res%22%5BJournal%5D)">Absconding behavior of the Africanized honey bee in.</a> South America. J. Api. Res. 18 (2), 85-94 (1979).</li>
<li>Schneider, S. S., McNally, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+in%EF%AC%82uencing+seasonal+absconding+in+colonies+of+the+African+honey+bee%2C+Apis+mellifera+scutellata%5BTitle%5D)+AND+%22Insectes+Soc%22%5BJournal%5D)">Factors inﬂuencing seasonal absconding in colonies of the African honey bee, Apis mellifera scutellata.</a> Insectes Soc. 39 (4), 402-423 (1992).</li>
<li>Hepburn, H. R., Reece, S. L., Neumann, P., Moritz, R. F. A., Radloff, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absconding+in+honeybees+%28Apis+mellifera%29+in+relation+to+queen+status+and+mode+of+worker+reproduction%5BTitle%5D)+AND+%22Insectes+Soc%22%5BJournal%5D)">Absconding in honeybees (Apis mellifera) in relation to queen status and mode of worker reproduction.</a> Insectes Soc. 46 (4), 323-326 (1999).</li>
<li>Harrison, J. F., Fewell, J. H., Anderson, K. E., Loper, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+physiology+of+the+invasion+of+the+Americas+by+Africanized+honeybees%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Comp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Environmental physiology of the invasion of the Americas by Africanized honeybees.</a> Integr. Comp. Biol. 46 (6), 1110-1122 (2006).</li>
<li>DeGrandi-Hoffman, G., Eckholm, B. J., Huang, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+bee+bread+made+by+Africaized+and+European+honey+bees+%28Apis+mellifera%29+and+its+effects+on+hemolymph+protein+titers%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">A comparison of bee bread made by Africaized and European honey bees (Apis mellifera) and its effects on hemolymph protein titers.</a> Apidologie. 44 (1), 52-63 (2013).</li>
<li>Cappelari, F. A., Turcatto, A. P., Morais, M. M., DeJong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Africanized+honey+bees+more+efficiently+convert+protein+diets+into+hemolymph+protein+than+do+Carniolan+bee+%28Apis+melliferacarnica%29%5BTitle%5D)+AND+%22Genet.+Mol.+Res%22%5BJournal%5D)">Africanized honey bees more efficiently convert protein diets into hemolymph protein than do Carniolan bee (Apis melliferacarnica).</a> Genet. Mol. Res. 8 (4), 1245-1249 (2009).</li>
<li>Human, H., Nicolson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+content+of+fresh%2C+bee-collected+and+stored+pollen+of+Aloe+greatheadii+var+davyana+%28Asphodelaceae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochem%22%5BJournal%5D)">Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae).</a> Phytochem. 67, 1486-1492 (2006).</li>
<li>Bonvehi, J. S., Jorda, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrient+composition+and+microbiological+quality+of+honeybee-collected+pollen+in+Spain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Nutrient composition and microbiological quality of honeybee-collected pollen in Spain.</a> J. Agric. Food Chem. 45 (3), 725-732 (1997).</li>
<li>Anderson, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+ecology+of+the+hive+and+pollination+landscape%3A+Bacterial+associates+from+floral+nectar%2C+the+alimentary+tract+and+stored+food+of+honey+bees+%28Apismellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Microbial ecology of the hive and pollination landscape: Bacterial associates from floral nectar, the alimentary tract and stored food of honey bees (Apismellifera).</a> PLoS ONE. 8 (12), e83125(2013).</li>
<li>Southwick, E. E., Roubik, D. W., Williams, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+energy+balance+in+groups+of+Africanized+and+European+honey+bees%3A+ecological+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Comparative energy balance in groups of Africanized and European honey bees: ecological implications.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. 97 (1), 1-7 (1990).</li>
<li>Spivak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+success+of+Africanized+and+European+honey-bees+over+a+range+of+life-zones+in+Costa+Rica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Ecol%22%5BJournal%5D)">The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica.</a> J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).</li>
<li>Francoy, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+and+genetic+changes+in+a+population+of+Apis+mellifera+after+34+years+of+Africanization%5BTitle%5D)+AND+%22Genet.+Mol.+Res%22%5BJournal%5D)">Morphometric and genetic changes in a population of Apis mellifera after 34 years of Africanization.</a> Genet. Mol. Res. 8 (2), 709-717 (2009).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

שימוש בשיטות שתוארו לעיל, מצאנו כי beebread שנעשה על ידי AHB היה נצרך בכמויות גדולות יותר על ידי שני AHB וEHB. למרות EHB וAHB צרכו כמויות דומות של כל סוג של beebread, היה לי AHB titers חלבון hemolymph גבוה יותר. ממצאים מבוססים על השיטות שלנו היו דומים לדיווחים קודמים שבו רמות חלבון hemolymph בAHB היו גבוהות יותר מאשר בEHB אם כי שניהם האכילו אותו הדיאטות 26. על ידי מדידת הצריכה של גאות וABB שנצרכו בשיעורים שונים על ידי שני EHB וAHB, נקבע כי ריכוז חלבון hemolymph בכל תת-מין לא יכול להיות שהועלה על ידי הגדלת צריכת מזון. נראה שיש רמת ריכוז חלבון hemolymph בעובדים בגיל דבורת אחות וכי הנקודה להגדיר לרמה גבוהה יותר בAHB מ EHB. ישנם כמה תנאים חשובים להקמת מושבות לייצור beebread שיהיה לייעל את קצב אחסון אבקה. ראשית, שיתוףlonies צריך מסגרות עם להרהר פתוח. בלי להרהר פתוח להאכיל, עובדים לא יגבו הרבה אבקה. שנית, המושבה חייבת להיות ללא מלכה ולכן אין להרהר נוסף מיוצרת. גידול גוזל דורש כמויות גדולות של אבקה, והאבקה עודפת רק מאוחסנת. במושבות הקטנות שהוקמו בEFA, לא יהיה אבקה קטנה לאחסון כbeebread אם אזורי הקינון התרחבו כל כך מושבות צריכים להיות ללא מלכה. לבסוף, לbeebread להתבצע, אבקה יש לאסוף כמו המון corbicular ומאוחסן בתאי מסרק. אם האבקה נאסף במלכודות אבקה, זה חייב להיות בשטח לאבקה דקה לפני הצגתו לדבורים, כדי שתוכל לאסוף אותו כהמון corbicular. השיטות למדידת צריכת beebread נוצרה איכותית ולא הערכות מוחלטות. הצריכה היחידה שנספרה הייתה כאשר תאים התרוקנו לחלוטין לחם דבורים. הערכה מדויקת יותר מסך צריכת לחם דבורה עשויה להיות מושגת על ידי הסרת br הדבורהEAD מהתאים והופכים אותו לקציצה שיכול להישקל לפני ואחרי תקופת המחקר. עם זאת, אנחנו רוצים לשמור על לחם הדבורה בתאים, כך שהדבורים יכולים להאכיל אותו כפי שהם היו במושבה, ואולי ימשיכו לעבד אותו במהלך תקופת המחקר. ההבדל במשקל של חלקי מסרק לפני ואחרי המחקר לא היה בשימוש כאומדן לצריכה בגלל המשקל אולי עלה כי דבורי הדבש המדולל לשים האכיל אותם בחלק מהתאים. העובדים גם היו יכולים להוסיף כמה מהדבש המדולל ללחם הדבורים. מסיבות אלה, תאים המכילים כמויות שווה של לחם דבורה לפני ואחרי תקופת ההאכלה נספרו ונוצרו מדידה איכותית. ובכל זאת, יש הבדל בולט בין שני הסוגים של beebread במספר תאי ABB הריקים נספרו לעומת גאות לאחר 11 ימים. קביעה כאשר אבקה מאוחסנת הופכת beebread יכולה להיות דיfficult כי דבורים להוסיף הרף אבקה לתאים. המושבות המשמשות לייצור beebread הוקמו עם מסגרות של גוזלים פתוחים כל כך דבורים לאסוף אבקה. עם זאת, המושבות היו ללא מלכה כך היו זחלים להאכיל רק כ 9 ימים לאחר המושבה הוקמה. ליתרת תקופת 3 שבועות כאשר מושבות היו בEFA, האבקה שהדבורים שנאספו אוחסנו ומרה לbeebread. שמירה על האבקה מאוחסנת בתאי מסרק ל-11 ימים נוספים כאשר מאכילים אותו לדבורים בכלובים גם אפשר שהמשיכה את הטיפול באבקה לbeebread. המרה של אבקה ללחם דבורה לוקחת בערך 7 ימים 8. Beebread המוזן לEHB וAHB היה pH וריכוז חלבון מופחת בהשוואה לfed האבקה נמוכים יותר. ממצאים דומים של שינויים באבקה לאחר beebread ההמרה דווחו על ידי אחרים 7,10,27. התוצאות שלנו שונות מדיווחים קודמים עם זאת, בכך שהיו הבדלים בריכוזים oחומצות אמינו מסוימות f בין beebread ואבקת פרחים. השינויים בשני ריכוזי חומצת אמינו החלבון ויכולים להיות בגלל הפעילות של אנזימי מפרקי חלבונים, שמקורו יכול להיות הדבורים עצמם או קהילות החיידקים הוקמו בbeebread 7,8,28,29. השיטות המשמשות למדידת ריכוז חלבון היו דומות לאלה שתוארו קודם לכן כדי לקבוע את ההשפעות של חלבון בתזונה בAfricanized ודבורים אירופיים 26. כשלוחה של השיטות, שהיינו מסוגלים להעריך חלבון מסיס באבקה וbeebread. שיטות אלה שנוצרו על ממצאים דומים לדיווחים קודמים 7,10,27. הממצאים שלנו מספקים ראיות נוספות שAHB ביעילות רבה יותר להטמיע חלבון תזונתי מאשר EHB, ושזה יכול להיות גורם מפתח בדומיננטיות האקולוגיות של AHB ברוב האזורים שבם הוא עלה והפך הוקם 30-32.

תזונה משחקת תפקיד מהותי בבריאות והמרץ של מושבות דבורי דבש ובהקמתם כאוכלוסיות. חומרים מזינים ממזון מספקים אנרגיה והרכיבים ביוכימיים הנדרשים לגידול גוזל, ויסות חום, ליקוט ותגובה חיסונית. למושבות דבורי דבש, החומרים המזינים דרושים כדי לגדול אוכלוסיות מושבה ולשמור על בריאותם מגיעה מצוף ואבקה. צוף מספק פחמימות ואבקה מספקת את הדרישות תזונתיות שנותרו כגון חלבון, שומנים, ויטמינים ומינרלים 1. תת-מין של דבורי דבש יכול להיות שונה בפרמטרי רמה-מושבה מבוססת מבחינה תזונתית כגון תוחלת חיים עובד, גידול גוזל, ומנגנוני חסינות חברתית 2-6. הבדלים אלה עשויים להיות קשורים לדרך בי מזון, במיוחד האבקה מעובד על ידי המושבה ומתעכלת ביחידים. אבקה מאוחסנת בתאי מסרק ובאמצעות תסיסה חומצת חלב microbially תיווך משתנה כימי <sup&gt; 7-10. האבקה מותססת נקראת beebread. יתכנה הבדלים בין תת-מין genotypic ביכולתם לרכוש חומרים מזינים מהאבקה שהם אוספים וחנות וזה יכול להשפיע על צמיחת מושבה והישרדות. השפעות Genotypic על עיבוד מזון ורכישת חומרים מזינים תועדו באורגניזמים אחרים הגורמים לאנשים מסוימים כדי להשיג יותר חומרים מזינים וקלוריות מאשר לאחרים תוך צריכת את אותם המאכלים 11-14. כאן אנו מתארים שיטות משמשות להשוואת ההרכב והצריכה של beebread שנעשה על ידי תת-מין שונה של דבורי דבש. שיטות למדידת titers כתוצאה hemolymph החלבון בדבורים פועל גם מתוארות. מחקרים קודמים על הרכב התזונתי של beebread נעשו עם דבורי דבש אירופיים (EHB) 10,15,16. עם זאת, ייתכנו הבדלים בbeebread שנעשה על ידי דבורים של תת-מין שונה גם כאשר הם מאכילים באותו האבקה. EHB וAHB הושוו כי צוללות אלהיש לי pecies בדלים התנהגותיים ופיסיולוגיים שונים שעשויים להיות קשור לעיבוד מזון ומזין רכישה 17. חלק מההבדלים הבולטים ביותר הוא שAHB לאסוף ולצרוך יותר מאשר אבקת EHB ונראה להמיר אותו בקלות רבה יותר לגוזלים 18. יש מושבות AHB שיעורים גבוהים יותר מאשר רץ EHB ולהתחמק כאשר משאבי מזון הפכו מוגבל 19-23. Absconding הוא נדיר בEHB. AHB יש גם קצב חילוף חומרים גבוה יותר מ -24 EHB. הבסיס התזונתי להבדלים ברמה בין המושבה EHB וAHB עשוי להיות קשור לשיעור גביית אבקה וגם לתוכן התזונתי שלה (למשל, חומצות אמינו וחלבונים) אחרי שהוא מומר לbeebread. צריכת Beebread ורכישת חלבון וכתוצאה מכך גם עשויות לשחק תפקיד בהבדלים ברמה בין המושבה EHB וAHB. על פי השיטה, EHB וAHB עשו beebread מאותו מקור האבקה. Beebread לאחר מכן האכיל בחזרה לדבורים של EACתת-מין h ויכול לקבוע אם דבורים לרכוש חלבון מbeebread באופן ייחודי לתת-המין שלהם או למקור של beebread.

<table><tbody><tr><td>צומת כפול עמיד למים pH spear&nbsp;</td>מטחנת קפה <td>תרמו פישר</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>מר קפה&nbsp;</td><td>דגם 1DS77</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת חיץ פוספט של Dulbecco</td><td>Emd-millipore</td><td>BSS-1005-B</td><td></td></tr><tr><td>EIA/RIA לוח פוליסטירן</td><td>סיגמא-אולדריץ'-קורנינג</td><td>CLS3590-100EA</td><td></td></tr><tr><td>צנרת מיקרו-נימית</td><td>Kimble Glass Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ערכת בדיקת חלבון ברדפורד להתחלה מהירה 2&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>#500-0202</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר</td><td>Biotek Synergy HT&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>גלאי סלקטיבי מסה&nbsp;</td>כרומטוגרף גז <td>מחסנית</td><td></td> Agilent 5973N <td></td></tr><tr><td>HLB</td>&nbsp;<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>אג'ילנט</td><td>6930</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; טור כרומטוגרפיה של גז&nbsp;</td><td>א J& W מדעי&nbsp;</td><td>DB-1701</td><td></td></tr><tr><td>d4-alanine&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>488917</td><td></td></tr><tr><td>d23-lauric acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>451401</td><td></td></tr><tr><td>13C6-glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>389374</td><td></td></tr><tr><td>Pyridine&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>270970</td><td></td></tr><tr><td>N,O-Bis (טרימתילסיליל)טריפלואורואצטמיד +&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>טרימתילכלורוסילן (BSTFA + TMCS)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>33148</td><td></td></tr><tr><td>פרפלואורוטריבוטילאמין (PFTBA)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>442747-U</td><td></td></tr><tr><td>d39-חומצה ארכידיאק</td><td>איזוטופ קיימברידג'&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

שיטות להשוואה בין חומרים מזינים בbeebread נוצרו על ידי דבורים דבש africanized ואירופאי והשפעות על titers חלבון hemolymph

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

דבורי דבש להשיג חומרים מזינים מאבקה שהם אוספים וחנות בכוורת כbeebread. פיתחנו שיטות לשליטה במקור האבקה שדבורים אוספות ולהמיר לbeebread על ידי הצבת מושבות שבנבנה במיוחד אזור טיסה סגורה. שיטות שפותחו כדי לנתח את הרכב חומצות אמינו של חלבון והאבקה וbeebread. אנו גם מתארים כיצד צריכת beebread נמדדה ושיטות המשמשות לקביעת titers חלבון hemolymph הדבורה עובד מבוגר לאחר ההאכלה על beebread ל4, 7 ו -11 ימים לאחר הופעתה. שיטות יושמו כדי לקבוע אם גנוטיפ משפיע על ההמרה של אבקה לbeebread והשיעור שדבורים לצרוך ולרכוש חלבון ממנה. שני תת-מינים (דבורי דבש אירופיים וAfricanized; EHB וAHB בהתאמה) סופקו עם אותו מקור האבקה. בהתבסס על השיטות שפותחו, beebread שנעשה על ידי שני תת-המין היה ריכוזים נמוכים יותר חלבון וערכי pH מהאבקה. באופן כללי, אמין con החומצההריכוזים בbeebread שנעשו על ידי שני EHB או AHB היו דומים והתרחשו ברמות גבוהות יותר בbeebread מאשר באבקה. שני AHB וEHB צרכו יותר באופן משמעותי של beebread שנעשה על ידי AHB מאשר על ידי EHB. למרות EHB וAHB צרכו כמויות דומות של כל סוג של beebread, ריכוזי חלבון hemolymph בAHB היו גבוהים יותר מאשר בEHB. הבדלים ברכישת חלבון בין AHB וEHB עשויים לשקף עיבודים סביבתיים הקשורים לאזור הגיאוגרפי שבו כל תת-מין התפתח. הבדלים אלה יכולים לתרום להקמה המוצלחת של אוכלוסיות AHB בעולם החדש בגלל ההשפעות על גידול גוזל וצמיחת מושבה.

<html> Beebread אוחסן ב-80 מעלות צלזיוס למשך פחות מחודש לפני שנתח לריכוז pH וחלבון, ובמשך כ 4 חודשים לפני ניתוח חומצת אמינו. Beebread שונה מהאבקה בpH וריכוז חלבון (איור 1). PH של beebread היה נמוך מהאבקה כפי שהיה ריכוז החלבון. EHB וAHB שני צרכו יותר מ ABB גאות (איור 2). רמות של חלבון מסיס בhemolymph של AHB היו גבוהות יותר באופן משמעותי מEHB ללא תלות בסוג של beebread הם צרכו (איור 3). הבדלים אלה ברמות חלבון hemolymph התרחשו למרות EHB וAHB צרכו כמויות דומות של כל סוג של beebread. גיל הדבורים בזמן הדגימה מושפע באופן משמעותי ריכוזי חלבון מסיסים בhemolymph. ריכוזי חלבון היו נמוכים באופן משמעותי ביום-4 דבורים בהשוואה ליום-7 או 11 שלא היה שונה. <html> _content &quot;&gt; של 10 חומצות אמינו חיוניים לדבורי דבש, אבל כל היסטידין אותרו באבקה. ברוב המקרים, ריכוזי חומצת אמינו שנמדדו בbeebread היו גבוהים יותר מאשר באבקה (איור 4). לדוגמא, ריכוזים של לאוצין ותראונין היו כ -60% גבוהים יותר בהשוואה לbeebread אבקה, והריכוזים ולין היו כ -25% גבוהים יותר. אלנין, רמות חומצה, גלוטמין, ומתיונין אספרטית גם היו גבוהות יותר בbeebread מאשר באבקה. ריכוזי חומצות אמינו לא היו שונים באופן משמעותי בין ABB והגאות למעט פנילאלנין וציסטאין. רמות פנילאלנין היו על גבוהים פי שתיים בהשוואה לABB או גאות או אבקה. ריכוזי ציסטאין היו נמוכים יותר בגאות בהשוואה ל ABB או אבקה. טריפטופן היה נוכח חומצת אמינו רק בריכוזים גבוהים יותר ב אבקה מאשר בגאות או ABB. ריכוזים של פרולין באבקה וABB היתה גבוהה יותר מאשר בשפל. &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig1highres.jpg" width="600" /> איור 1: השוואות של pH () וריכוזים מסיסים חלבון (B) באבקה וbeebread שנעשה על ידי אירופאי (EHB) או דבורי דבש Africanized (AHB). PH של אבקה היה גבוה יותר באופן משמעותי מbeebread כפי שנקבע על ידי ניתוח שונות (F = 2,12 3725, p &lt;0.0001) ואחריו מבחן השוואה מרובה Tukeys W-. ריכוז החלבון בפולן היה גבוה באופן משמעותי מאשר בbeebread שנעשה על ידי EHB (גאות) או AHB (ABB) (F = 2,27 16.49; p &lt;0.0001). אמצעים המיושמת על ידי אותו המכתב אינם שונים באופן משמעותי ברמה 0.05. <img alt="איור 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig2highres.jpg" width="600" /> איור 2: האחוז הממוצע של cells מכיל beebread שנצרכו לחלוטין על מרווח של 11 יום על ידי דבורים בכלוב. beebread נעשה על ידי שני דבורים אירופיים (EHB) או Africanized (AHB) באמצעות אותו מקור האבקה. אמצעי נאמד מחמישה כלובים של כל טיפול; אלה עם אותו המכתב אינם שונים באופן משמעותי ברמה 0.05, כפי שנקבעו על ידי ניתוח דרך אחת שונות (F = 3,16 7.3, p = 0.003) ומבחן W של Tukey. איור זה שונה מ -25. <img alt="איור 3" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig3highres.jpg" width="600" /> beebread הריכוז הממוצע של חלבון בhemolymph מאירופה (EHB) או Africanized דבורים (AHB) דבש האכיל שנעשה על ידי אירופאי (גאות) או Africanized דבורים (ABB) עבור 4, 7, ו -11 ימי ניתוח מדידות חוזרים של: איור 3. שונות מצביעות על הבדלים משמעותיים בין הגיד 4קבוצות tment (F = 3,20 19.7, p &lt;0.001). רמות של חלבון מסיס בAHB fed ABB היו גבוהות יותר באופן משמעותי מEHB fed ABB (p = 0.008) או הגאות (p = 0.018). גיל הדבורים בזמן הדגימה מושפע באופן משמעותי ריכוזי חלבון מסיסים בhemolymph. רמות היו נמוכות באופן משמעותי ביום-4 דבורים בהשוואה ליום-7 (p &lt;0.0001) או 11 (p = 0.001). דבורי יום 7 וday11 לא היו שונים (p = 0.149). נתון זה שונה מ-25. <img alt="איור 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig4highres.jpg" width="600" /> איור 4:. ריכוזים של חומצות אמינו (מיקרוגרם לגרם של אבקה או beebread) באבקה או beebread עשה ממנו הגאות הוא beebread שנעשה על ידי דבורים אירופיים וABB נעשה על ידי דבורי Africanized. טריפטופן, ציסטאין, פנילאלנין ופרולין היו זממו בנפרד לצורך ההבהרה מראשsenting הכמויות שלהם. נתון זה שונה מ-25.

להלן שיטות לכימות חומרים מזינים באבקה לפני ואחרי הפיכתה ללחם דבורים על ידי שני תת-מינים של דבורי דבש. אנו מתארים טכניקות למדידת צריכת לחם דבורים וכתוצאה מכך טיטר חלבון בשני תת-המינים.

שיטות להשוואה בין חומרים מזינים בBeebread נוצרו על ידי דבורים דבש Africanized ואירופאי והשפעות על titers חלבון Hemolymph

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא לכמת רכיבים תזונתיים באבקה ובלחם דבורים, המיוצרים על ידי שני תתי-מינים של דבורי דבש, ולמדוד את צריכת רמות החלבון. מטרה זו מושגת על ידי הצגת אותו מקור אבקה לדבורים אירופאיות ואפריקאיות באזור סגור, ומתן אפשרות לדבורים לאחסן את האבקה במושבותיהן כלחם דבורים. לאחר מכן, לחם הדבורים ניתן להאכלה של דבורים אירופאיות ואפריקאיות שזה עתה בקעו, בתוך כלובים.לאחר מכן נדגמו הדבורים שבכלובים לאחר ארבעה, שבעה ו-11 ימי האכלה, וכמות לחם הדבורים שנותרה בכל כלוב נמדדה כדי להעריך את הצריכה. לבסוף, נמדדו והושוו בין גזעי הדבורים ריכוזי רכיבי תזונה, כולל חלבון וחומצות אמינו, באבקה ובבלחם הדבורים שהוכן על ידי דבורים אירופאיות ודבורים מאפריקאיות (Africanized). התוצאות מראות כי לחם הדבורים שונה מאבקה בריכוזי החלבון ובריכוזים של חלק מחומצות האמינו, וכן בתיתורי החלבון של ההמולימפה.שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח במחקרי תזונת דבורי דבש, כגון תפקידה של מקור הצומח של האבקה על רכיבי התזונה בלחם דבורים, וכיצד רכיבי תזונה אלה נספגים על ידי דבורים מתתי-מינים וגנוטיפים שונים. את הטכניקות מדגימה אמילי ווטקינס דה יאנג (Emily Watkins de Young), טכנאית-סטודנטית במעבדתי. כדי להתחיל, לאחר הצבת מלכודות אבקה במושבות דבורי דבש, אספו את האבקה והשתמשו במטחנת קפה כדי לטחון אותה לאבקה דקה. הקימו חמש מושבות, כל אחת של דבורי דבש אפריקאיות (AHB) או דבורי דבש אירופאיות (EHB), באזור טיסה סגור (EFA), כך שהדבורים ילקטו אך ורק מהאבקה המסופקת להן כדי למנוע מדבורים פועלות לנדוד בין מושבות EHB ו-AHB. חלקו את ה-EFA למקטעים נפרדים כך שהדבורים לא יוכלו לעבור ביניהם. לכל מקטע ב-EFA הניחו מושבות בודדות של EHB או AHB עם 3,500 עד 4,000 דבורים פועלות, חלת שעווה עם צוף, דבש, גלם לא בשול וחלת שעווה ריקה. האכילו את המושבות באבקה טחונה על ידי הנחת מגש בכל מקטע ב-EFA ופיזור של כ-60 גרם אבקה על המגשים.בדרך זו, דבורים אוספות יכולות לאסוף את האבקת הפרחים כעומסים על הרגליים ולאחסן אותה במושבות שלהן כלחם דבורים להזנת דבורים בכלובים. הניחו מסגרות של פסולה סגורה של פועלות ממושבות HB ו-EHB בכלובי בקיעה נפרדים בחדר סביבתי המכוון ל-32 עד 24 מעלות צלזיוס ו-40% לחות יחסית. כאשר הפועלות בוקעות וגילן כ-24 שעות, הקימו 12 כלובי ביו-אסיי מפלקסיגלס והוסיפו לכל כלוב 100 דבורי פועלות שזה עתה בקעו מ-EHB או מ-HB; הניחו בכל כלוב מקטע של חלת דבש עם מספר ידוע של תאי לחם דבורים של European bbr או EBB או Africanized B bread או A B, B כדי ליצור את תנאי הטיפול הבאים.קבוצת HB הוזנה ב-A-B-B-E-H-B, קבוצה A הוזנה ב-B, קבוצת BAHB הוזנה ב-EBB וקבוצת EHB הוזנה ב-EBB. הוסיפו לכל כלוב מבחנות של מים ותמיסת סוכרוז 30% שהוכנה לפי נפח. החליפו את מבחנות סירופ הסוכר והמים מדי יום במהלך תקופת המחקר בת 11 הימים.דגמו 10 פועלות EHB שזה עתה בקעו ופועלות A HB לפני השמתן בכלובים. הגדירו אותן כ-day zero Bs והשתמשו בהן כקו בסיס לריכוזי החלבון בהמולימפה. הוציאו 10 דבורים מכל כלוב לאחר שהוזנו ב-EBB או ב-B, B למשך ארבעה, שבעה ו-11 ימים.העבירו את הדבורים החיות למבחנות פלקון אינדיבידואליות והניחו אותן על קרחומים. בחרו תת-מדגם של ארבע דבורים לניתוח ריכוז החלבון בהמולימפה לאחר דגימת הדבורים ביום 11, וספרו את מספר תאי החלתה שעדיין מכילים לחם דבורים. הסירו את שאריות לחם הדבורים מהתאים בכל כלוב ואחסנו אותן במבחנות מיקרו-צנטריפוגה נפרדות עבור כל כלוב.שמרו את דגימות ה-BBR בטמפרטורה של 80- מעלות צלזיוס עד לניתוח ריכוז החלבון המסיס ב-pH ותכולת חומצות האמינו. לביצוע ניתוח החלבונים, קחו שש דגימות של האבקה ודגימה של EBB ו-A BB מכל כלוב. ערבבו 20 מיליגרם של אבקה או bbr עם מיליליטר אחד של PBS בריכוז 0.1 מולרי, ערבבו את התערובת בוורטקס למשך 10 שניות וסבבו בצנטריפוגה ב-571.2 G למשך דקה אחת.הסר דגימה של 25 µL מהעליון (supernatant) של ה-S והעבר אותה לבאר בלוח פוליסטירן מסוג E-I-A-R-I-A בעל 96 בארות עם תחתית שטוחה. בצע שלושה חזרות לכל דגימה. חמם את קצהו של צינור קפילרי בנפח 20 µL ומשוך את החלק המחומם עד ליצירת חוד דמוי מחט.לאחר מכן, שלפו המולימף מדבורים שנאספו מכל כלוב על ידי החדרת צינור קפילרי לחלק הצדי הימני של החזה, סמוך לנקודת חיבור הכנף. במידת הצורך, אספו לימפה נוספת על ידי החדרת אותו צינור אל הממברנה שבין מקטעי הבטן. הוסיפו 1 µL של המולימף ל-9 µL של PBS בריכוז 0.1 M.השתמשו בערכה לבדיקת חלבון בשיטת בראדפורד (Bradford) ופעלו לפי הוראות היצרן כדי לקבוע את סך החלבון המסיס. ריכוזים ביצעו אנליזת חומצות אמינו בהתאם לפרוטוקול הטקסט כפי שמוצג בגרפים אלו, הן ערך ה-pH והן ריכוז החלבון היו נמוכים יותר ב-bbr מאשר באבקה. הן ה-EHB והן ה-A HB צרכו יותר A BB מאשר EBB, כפי שמוצג כאן.רמות החלבון המסיס בהמולימפה של A HB היו גבוהות משמעותית מאלו של EHB, ללא קשר לסוג ה-bbr שהם צרכו. הבדלים אלו ברמות החלבון בהמולימפה התרחשו למרות ש-EHB ו-A HB צרכו כמויות דומות מכל סוג של bbr. מתוך 10 חומצות האמינו שהיו חיוניות לדבורי דבש, כולן מלבד היסטמין זוהו בפולן.ברוב המקרים, ריכוזי החומצות האמינו שנמדדו בלחם דבורים היו גבוהים יותר מאשר באבקה. לדוגמה, ריכוזי ה-leucine וה-thionine היו גבוהים בכ-60% ב-bbr בהשוואה לאבקה, וריכוזי ה-valine היו גבוהים בכ-25%. גם רמות ה-alanine, ה-aspartic acid וה-glutamine היו גבוהות יותר ב-bbr מאשר באבקה.ריכוזי החומצות האמינו לא נבדלו משמעותית בין A B, B ו-EBB, למעט פנילאלנין וציסטין. רמות הפנילאלנין היו גבוהות בערך פי שניים ב-A BB בהשוואה ל-EBB או לאבקה. ריכוזי הציסטין היו נמוכים יותר ב-EBB בהשוואה ל-A, B, B או לאבקה.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה באופן הערכת ריכוזי חלבון בלחם דבורים, באבקת פרחים ובהמולימפה של דבורי דבש. באמצעות טכניקות אלו, תוכלו לקבוע אם אחסון וצריכת מזון וריכוזי חלבון בהמולימפה מושפעים מגורמים גנטיים או סביבתיים.

methods-for-comparing-nutrients-beebread-made-africanized-european

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בפרוטוקול זה, אנו מתארים שתי אסטרטגיות שבו זמנית לדכא שני גנים (מציאה גן כפולה) בדבורי דבש. לאחר מכן אנו מציגים כיצד להשתמש בסיומת תגובת חוטם (PER) assay כדי לחקור את ההשפעה של מציאה גן כפולה על תפיסה התעוררה אצל דבורת דבש.

מציאה RNAi בתיווך זוגית ג&#39;ין ומדידה בחוש טעם בדבורי דבש (<em&gt; אפיס mellifera</em&gt;)

מבחן התנהגותי חדש מתואר לחקירת תגובות הטעם לטווח קצר של חלקי הפה של דבורי בומבוס הנעות בחופשיות (Bombus terrestris) כלפי חומרים מזינים ורעלים בתמיסה.

Assay רומן ההתנהגות לחקור תגובות Gustatory של הפרט, חופשי-נע דבורים Bumble (<em&gt; בומבוס האדמה</em&gt;)

כאן אנו מתארים הפרוטוקול המפורט שלנו לעריכת מושבות דבורים חד עוקבה - כלי שימושי לניתוח הפיסיולוגיה עובדת הקשורים התפקיד. כמו כן, אנו מתארים פרוטוקולים מפורטים לטיפול עובדים עם הורמון נעורי ecdysone להעריך את המעורבות של הורמונים אלה בויסות התנהגות עובד ו / או פיזיולוגיה.

הכנת מושבות אחת-עוקבה טיפול הורמונלי של דבורי הדבש Worker לנתח Associated פיזיולוגיה עם תפקיד ו / או המערכת האנדוקרינית

קונסורציומים חיידקים בתוך bumble דבורים כוורות להעשיר ולשמר אבקה של דבורה הזחלים. באמצעות רצף הדור הבא, יחד עם המעבדה, המבוסס על שדה ניסויים, כתב יד זה מתאר פרוטוקולים המשמשים כדי לבדוק את ההשערה כי שאריות פטריות לשנות את microbiome אבקה, ודמוגרפיה המושבה, המוביל בסופו של דבר אל המושבה הפסד.

אמפירית, Metagenomic, שיטות חישוביות להאיר את מנגנוני הבריאות דבורה איזה פשרה קוטלי פטריות

בזאת אנו מציגים   שיטה להאכיל מזון מזוהם דברה כדי הן דבורת דבש פרט מושבת כוורת. ההליך מעריך את השפעת הדברה על דבורים ודבש פרט על ידי in vivo האכלה של דיאטת זחל בסיסית גם על המצב הטבעי של מושבת כוורת.

הערכת ההשפעה של כימיקלים סביבתיים על התפתחות דבורת דבש מן הפרט אל רמת קולוני

מינונים לא קטלני של חומרי הדברה עלולה להשפיע על מושבות בדרכים שאינן קשה לזהות באמצעות שיטות תקופתיים או ויזואלי בלבד. שיטות למדידת מסה הכולל דבורה למבוגרים, דגירה, מקורות מזון על ידי שקילה כוורות וחלקים הכוורת, צילום מסגרות התקנת חיישנים, הינם מסופקים. ניתוח נתונים מופנית גם.

ניטור המושבה ברמת ההשפעה של ההדברה לא קטלני על דבש דבורים

כדי לבחון את ההשפעה המעכבת של סוכנים תרופתי על phospholipase C (PLC) באזורים שונים של המוח הונאיבי, נציג של assay ביוכימי כדי למדוד PLC פעילות באזורים אלה. Assay זה יכול להיות שימושי לצורך השוואת פעילות PLC בין רקמות, כמו גם בין דבורים מפגין התנהגויות שונות.

זיהוי של Phospholipase C פעילות Homogenate המוח של דבורת הדבש

Hypopharyngeal בלוטת acinus גודל הוא מדד חזקים של אחות דבש דבורים תזונה. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לנתח, מכתים, הדמיה של מדידת האחות דבורה hypopharyngeal בלוטת acini.

מדידת Hypopharyngeal בלוטת Acinus בגודל דבורת הדבש (בומבוס) עובדים

מטרת פרוטוקול זה היא לספק ארוחות דם שמקורן בבעלי חיים ומלאכותיות ליתושים Aedes aegypti באמצעות מאכיל קרום מלאכותי ולכמת במדויק את נפח הארוחה שנבלעה.

האכלה וכימות של דם שמקורו בבעלי חיים וארוחות מלאכותיות יתושים Aedes aegypti

פרוטוקול זה פותח כדי לשפר את ההבנה כיצד אגרוכימיקלים משפיעים על דבורת הדבש (Apis mellifera) רבייה על ידי יצירת שיטות לחשוף מלכות דבורי דבש ומטפלים העובדים שלהם אגרוכימיקלים בפיקוח, הגדרה מעבדה וניטור קפדני של התגובות הרלוונטיות שלהם.

הערכת הסיכון האגרוכימי למלכות דבורת הדבש המויזות

אנו מתארים שיטה לאיסוף המולימפה הניתנת לכימות ביעילות מפרוקי רגליים קטנים לצורך ניתוח לאחר מכן.

שיטה מדויקת וניתנת לכימות לאיסוף המולימפה מפרוקי רגליים קטנים

חקור השוואת ריכוזי חלבון וחומצות אמינו בדבשת ובאבקה בין תת-מיני דבורים אירופאיים ואפריקניים. השיטה מודדת צריכת מזון ורמות חלבון בדם-המוהל לניתוח תזונתי.

שיטות להשוואה בין חומרים מזינים בBeebread נוצרו על ידי דבורים דבש Africanized ואירופאי והשפעות על titers חלבון Hemolymph

גלה סרטונים נוספים