שיטות להשוואה בין חומרים מזינים בBeebread נוצרו על ידי דבורים דבש Africanized ואירופאי והשפעות על titers חלבון Hemolymph

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לכמת חומרים מזינים באבקה ובלחם דבורים, המיוצרים על ידי שני תת-מינים של דבורי דבש ולמדוד את צריכת טיטר החלבון. זה מושג על ידי הצגת אותו מקור אבקה לדבורים אירופאיות ואפריקאיות באזור מוגבל ומתן אפשרות לדבורים לאחסן את האבקה במושבות שלהן כלחם דבורים. לאחר מכן, לחם הדבורים מוזן לדבורים אירופאיות ואפריקאיות שזה עתה הופיעו בכלובים.

לאחר מכן דגימת הדבורים בכלובים לאחר ארבעה, שבעה ו-11 ימי האכלה, וכמות לחם הדבורים שנותרה בכל כלוב נמדדת כדי להעריך את הצריכה. לבסוף, ריכוז החומרים המזינים, כולל חלבון וחומצות אמינו באבקה ובלחם הדבורים המיוצרים על ידי דבורים אירופאיות ואפריקאיות נמדד ומושווה בין גזעי הדבורים. התוצאות מראות כי לחם דבורים שונה מאבקה בחלבון ובריכוזי חומצות אמינו מסוימים, כמו גם טיטרים של חלבון המולימפ.

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח במחקרים על תזונת דבורי דבש, כגון תפקיד מקור האבקה על חומרי המזון בלחם דבורים וכיצד חומרים מזינים אלה נרכשים על ידי דבורים מתת-מינים שונים של פלטה וגנוטיפים. מי שמדגימה את הטכניקות היא אמילי ווטקינס דה יאנג, שהיא טכנאית סטודנטית במעבדה שלי כדי להתחיל לאחר הנחת מלכודות אבקה על מושבות דבורי דבש, לאסוף את האבקה, להשתמש במטחנת קפה כדי לטחון את האבקה לאבקה דקה, להקים חמש מושבות, כל אחת של דבורי דבש אפריקאיות או HB ודבורי דבש אירופאיות, או EHB באזור טיסה סגור או EFA, כך שדבורים מחפשות מזון רק על האבקה המסופקת כדי למנוע מעובדים להיסחף בין מושבות EHB ו-A HB. חלקו את ה-EFA לחלקים נפרדים כך שדבורים לא יוכלו לעבור ביניהן לכל חלק של ה-EFA הנח מושבות EHB בודדות או HB עם 3,500 עד 4,000 דבורים פועלות מסרק שעווה עם דבש צוף, דגים לא בוגרים ומסרק ריק מאבקים טחונים למושבות על ידי הנחת מגש בכל חלק של ה-EFA ופיזור כ-60 גרם אבקה על המגשים.

בדרך זו, דבורים מזויפות יכולות לאסוף את האבקה כעומסים לימודיים ולאחסן אותה במושבות שלהן כלחם דבורים כדי להאכיל דבורים בכלובים. הנח מסגרות של דגי הפועלים האטומים ממושבות HB ו-EHB בכלובי הופעה נפרדים בחדר סביבתי המוגדר ב-32 עד 24 מעלות צלזיוס ו-40% לחות יחסית. כאשר העובדים מגיחים בגיל 24 שעות בערך, היא הקימה 12 כלובי בדיקה ביולוגית פרספקס ומוסיפה 100 דבורים עובדות EHB או HB לכל כלוב, מניחה קטע מסרק עם מספר ידוע של תאי BBR או EBB אירופאי או אפריקאי B או A B, B בכל כלוב כדי ליצור את תנאי הטיפול הבאים.

HB שניזון A-B-B-E-H-B ניזון AB, BAHB FED EBB ו-EHB Fed. EBB מוסיפים בקבוקוני מים ותמיסת סוכרוז של 30% שנוסחה לפי נפח לכל כלוב. החלף את סירופ הסוכר ובקבוקוני המים מדי יום למשך תקופת הלימוד של 11 יום.

מדגם 10, עובדי EHB ו-A HB שזה עתה הופיעו לפני הכנסתם לכלובים. התייחסו אליהם כאל יום אפס Bs ובקשו מהם לשמש כבסיס לריכוזי חלבון המולימפ. הוציאו 10 דבורים מכל כלוב לאחר שהן ניזונו מ-EBB או מ-B, B במשך ארבעה, שבעה ו-11 ימים.

הניחו את הדבורים החיות על צינורות בז בודדים והניחו על שקיות קרח. בחר את תת-הדגימה של ארבע דבורים לניתוח ריכוז חלבון המולימפה לאחר דגימת דבורים ביום 11, ספור את מספר תאי המסרק שעדיין מכילים לחם דבורים. מוציאים את לחם הדבורים הנותר מהתאים בכל כלוב ומאחסנים בצינורות מיקרו צנטריפוגות נפרדים ליד כלוב.

שמור את דגימות ה-BBR בטמפרטורה שלילית של 80 מעלות צלזיוס עד לניתוח ריכוז חלבון מסיס pH ותכולת חומצות אמינו. כדי לבצע ניתוח חלבון, קח שש דגימות של האבקה ודגימה של EBB ו-A BB מכל כלוב. מערבבים 20 מיליגרם של אבקה או bbr עם מיליליטר אחד של מערבולת PBS 0.1 מולרית לתערובת למשך 10 שניות וצנטריפוגה ב -571.2 גרם למשך דקה אחת.

הסר דגימה של 25 מיקרוליטר של הסופרנטנט S והנח אותה בבאר של צלחת פוליסטירן E-I-A-R-I-A עם תחתית שטוחה של 96 בארות. שכפל כל דגימה בשלוש בארות. מחממים את קצהו של צינור נימי של 20 מיקרוליטר ומושכים את החלק המחומם עד שנוצרת נקודה דמוית מחט.

לאחר מכן צייר המולימפה מדבורים שנאספו מכל כלוב על ידי החדרת צינור הנימים לחלק הצדדי הימני של בית החזה ליד נקודת חיבור הכנף. אסוף לימפה נוספת במידת הצורך על ידי החדרת אותו צינור לתוך הממברנה בין מכווני הבטן. הוסף מיקרוליטר אחד של המולימפה לתשעה מיקרוליטרים של 0.1 PBS מולארי.

השתמש בערכת בדיקת חלבון ברדפורד ופעל לפי הוראות היצרן כדי לקבוע את החלבון המסיס הכולל. ריכוזים מבצעים ניתוח חומצות אמינו על פי פרוטוקול הטקסט כפי שמוצג בגרפים אלה, גם ערך ה-pH וגם ריכוז החלבון היו נמוכים יותר ב-bbr מאשר באבקה. גם ה-EHB וגם ה-A HB צרכו יותר A BB מאשר EBB כפי שמודגם כאן.

רמות החלבון המסיס בהמולימפה של A HB היו גבוהות משמעותית מ-EHB ללא קשר לסוג ה-bbr שהם צרכו. הבדלים אלה ברמות חלבון המולימפה התרחשו למרות ש-EHB ו-A HB צרכו כמויות דומות של כל סוג של bbr. מתוך 10 חומצות האמינו שהיו חיוניות לדבורי הדבש, כולן מלבד היסטמין התגלו באבקה.

ברוב המקרים, ריכוזי חומצות האמינו שנמדדו בלחם דבורים היו גבוהים יותר מאשר באבקה. לדוגמה, ריכוזי לאוצין ותיונין היו גבוהים בכ-60% ב-bbr בהשוואה לאבקה וריכוזי הוולין היו גבוהים בכ-25%. גם רמות גלוטמין של חומצה אספרטית אלנין היו גבוהות יותר ב-bbr מאשר באבקה.

ריכוזי חומצות האמינו לא דחו מאוד בין A, B, B ו-EBB למעט פנילאלנין וציסטין. רמות פנילאלנין היו גבוהות בערך פי שניים ב-A BB בהשוואה ל-EBB או אבקה. ריכוזי ציסטין היו נמוכים יותר ב-EBB בהשוואה ל-A, B, B או אבקה.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להעריך את ריכוזי החלבון בלחם דבורים, אבקה והמולימפה של דבורת דבש. בעזרת טכניקות אלה, אתה יכול לקבוע אם אחסון וצריכה של מזון וריכוזי חלבון המולימפה מושפעים מגורמים גנטיים או סביבתיים.