דגם Murine של חסימת Ureteric חד-צדדית בלתי הפיכה והפיכה

סרטון זה מציג מודל עכבר של נוירופתיה חסימתית המושרה על ידי חסימה חד-צדדית של השופכן, אשר יכולה להיות בלתי הפיכה או הפיכה; מוצגים נתונים היסטולוגיים המדגישים את הפגיעה המבנית הנובעת מכך ואת ההחלמה שלה בעקבות ביטול החסימה. איור סכמתי זה ממחיש את השלבים העיקריים של מודל זה. כאן אנו רואים את הכליה השמאלית, השופכן ושלפוחית השתן.

חסימה חד-צדדית סטנדרטית של השופכן מושגית על ידי קשירה (ליגציה) של השופכן. השופכן הופך לדיססטנדד (מורחב) והכליה הופכת להידרונפרוטית עם הזמן. כדי לבצע חסימה חד-צדדית הפיכה של השופכן, השופכן נקשר קרוב לשלפוחית והשופכן מוקף בצינור פלסטיק בעל דופן רכה, המוצג באפור, בנקודת החסימה.

על מנת להגביל התרחבות מופרזת של השופכן, הכליה הופכת להידרונפרוטית עם הזמן, ולאחר מכן מופסק החסימה בנקודת זמן המתאימה למחקר. ביום השביעי בניסוי זה, מוסר צינור הדופן הרכה והשופכן נחתך מעט מעל גובה הקישורה. השופכן שאינו חסום עובר אנסטומוזה אל השלפוחית כדי לאפשר זרימת שתן, והכליה תdecompressed בדרך כלל לאורך מספר ימים.

ניתן להשתמש במודל של חסימה חד-צדדית של השופכנית, המכונה UUO, כדי לחקור את התפתחות הפגיעה הרקמית והפיברוזיס בעקבות נרפופתיה חסימתית. ניתן להשתמש במודל של חסימה הפיכה של השופכנית, המכונה RUUO, כדי להשיג תובנה לגבי השבב הרקמי שעשוי לבוא בעקבות פגיעה. להלן הצגה של ניסוי טיפוסי המשלב את הנהלי ה-UUL וה-UUL שלנו.

עכברים עוברים UUL ביום אפס ושבעה ימים לאחר מכן. העכברים מוכרסים על מנת להעריך את רמת הפגיעה, או שחסימת השופכאות מוסרת כדי לבצע RUUR. לאחר מכן, הכליות נשארות במצב של דה-קומפרסיה למשך שבעה ימים לפני קצירת הרקמה.

ניתן להעריך את הרקמה לצורך בדיקת נזק מבני, חדירת מקרופגים, הצטברות מיופיברובלסטים ופיברוזיס. להלן מערך כירורגי טיפוסי. הפרוצדורה מבוצעת באמצעות מכשירים ומוצרים מתכלים שעברו סטריליזציה באוטוקלאב וממוקמים בתוך שדה כירורגי סטרילי.

אם מנתחים מספר בעלי חיים, יש לעקר את המכשירים בין הפרוצדורות באמצעות מכשיר עיקור בחרוזות (bead sterilizer), או להשתמש בסט מכשירים חדש עבור כל פרוצדורה. המנתחים לובשים חלוק סטרילי, מסכה, כובע וכפפות. עכבר זכר מסוג C 57 black six בן שמונה שבועות הorדם באמצעות זריקה תוך-peritoneal של ketamine, hydrochloride ו-xylazine.

עומק ההרדמה אושש על ידי היעדר תגובה ללחיצה על בהוז. אזור הניתוח גולח וחומא באמצעות תמיסת כלורהקסידין מדוללת. סיכוך לעיניים הוחל כדי למנוע התייבשות של הקרנייה.

המשכך בופרנורפין הידרוכלוריד (buprenorphine hydrochloride) ה diberikan באמצעות הזרקה תת-עורית. הפה הונח על פד כירורגי מחומם וסטרילי, והגפיים קובעו באמצעות מספרי הפרדת רקמות; בוצעו לפרוטומיה בקו האמצע וחיתוך לאורך המרפק הליניארי חסר כלי דם. פרק זה יפרט כיצד לבצע UUOA בלתי הפיך; רטרקטור קליבר (calibra retractor) הוכנס לחיתוך והעכבר כוסה בסדירים סטריליים.

מעתיקים את המעיים ומכסים אותם בגזה סטרילית לחה כדי לחשוף את השופכן השמאלי. חושפים ומבודדים את השופכן באמצעות פינצטה זוויתית כדי להשריות חסימה. קושרים את השופכן פעמיים באמצעות תפר משי שחור קלוע במידה 6-0.

ניתן לחסום את השופכן בכל נקודה בין שלפוחית השתן לאגן הכlye. לאחר מכן, השופכן מחולק בין התפרים. הפרק הבא יפ detail כיצד לבצע חסימת שופכן שניתן להפיק ממנה.

זהו השלב הראשון של RUUL. השופכן נחשף ומבודד באמצעות פינצטה זוויתית כדי להשרות חסימה. השופכן נקשר פעמיים באמצעות תפר משי שחור קלוע במידה 6.0.

יש לחסום את השופכן קרוב לשלפוחית השתן כדי לשמר אורך שופכן מתאים עבור האנסטומוזה לשלפוחית. במהלך פרוצדורת ההיפוך, התפרים נגזרים, אך תפר אחד נשאר ארוך לשימוש מאוחר יותר, ונקצית של צינור פלסטיק רך באורך של כ-5 מילימטר נחתכת. לאחר מכן מבוצע חריץ לאורכו כך שניתן יהיה להרחיב אותו כדי לאפשר את הצמדתו סביב השופכן.

על פתיל הפלסטיק בעל הדופן הרכה להיות בעל קוטר פנימי של 1 מילימטר וקוטר חיצוני של 2 מילימטרים. פתיל הפלסטיק בעל הדופן הרכה מונח לאחר מכן בזהירות סביב השופכן, תוך הבטחה שעם סגירתו, התפר הארוך יבלוט ממרכז החריץ. לאחר מכן, עובר תפר משי שזור שחור במידה 6-0 סביב הפתיל ונקשר.

לאחר מכן, התפר הארוך הבולט ממרכז הפיתול משולב בקשירה הבאה. פעולה זו מבוצעת כדי לעגן את השופכן ואת הפיתול למקומם באופן מאובטח. הפיתול סביב השופכן ימנע התרחבות מופרזת של השופכן בסיום תהליכי ה-UUO וה-RUUO.

מחזירים את המעיים למקומם, תופרים את הפריטונאום וסוגרים את העור באמצעות מהדקי מתכת. כמו כן, מריקים יוד על אזור הניתוח. ההרדמה מבוטלת באופן חלקי באמצעות הזרקה תת-עורית של aamaz.

הידרוכלוריד ונוזלים מוחדרים על ידי זריקה תת-עורית של 1 mL של תמיסת מלח מחוממת. העכברים נמצאים במעקב עד להסכמתם, ולאחר מכן הם מועברים להתאוששות בתיבת חימום השמורה ב-29 °C למשך 24 שעות. הכליות הופכות להידרונפרוטיות בימים העוקבים לחסימת השופכן.

ניתן להקריב את העכברים בנקודות זמן שונות במהלך שלב הפגיעה או לאחר ביטול החסימה. פרק זה יפרט כיצד לבצע את ביטול החסימה, המהווה את השלב השני של הליך ה-RUUO. העכבר הרדום מוכן כפי שתואר בעבר.

מסירים את סביבכי העור המתכתיים ומבצעים לפרוטומיה. מסירים את תפרי הפריטונאום, ואת הפריטונאום ניתן לפתוח בעדינות באמצעות פינצטה עם שיניים לעכברים. לאחר מכן מכינים את העכבר וחושפים את השופכן השמאלי כפי שתואר קודם לכן באמצעות פינצטה זוויתית.

השופכה ופיתול הפלסטיק בעל הדפנות הרכות מבודלים מהרקמות הסובבות. התפרים המחזיקים את פיתול הדופן הרכה במקומו נגזרים באמצעות הסכין הכירורגית ואז מוסרים. פיתול הפלסטיק בעל הדפנות הרכות מוסר בזהירות, ולאחר מכן נראית שופכה מורחבת.

השופכן שברירי בנקודת החסימה ועשוי להישבר מעל החסימה, כפי שקרה בסרטון זה. עם זאת, התפרים שהוצבו קודם לכן בקרבה לשלפוחית במהלך השלב הראשון של ה-UUO יישארו שלמים, ובכך יובטח ששתן לא ידלוף מהשלפוחית אל החלל הפריטוניאלי. פיסת גזה סטרילית מוצבת מתחת לשופכן כדי לאסוף כל משקע שתן שינקז מהשופכן שהיה חסום קודם לכן.

יש לאפשר לחלק הנותר של השופכן שפונה מחסימה להתנקז עד להפרשת שתן צלול, כדי להבטיח שחלל השופכן נקי משאריות. לאחר ניקוז השופכן ואגן הכליה, יש להניח תפר משי שזור שחור במידה 6-0 בקצה השופכן. תפר זה ישמש לסיוע באנסטומוזיס (חיבור) העתידי בין השופכן לשלפוחית השתן.

לאחר מכן מסובבים את השופכן כך שיהיה קדמי למיקומו המקורי וישכב מעל הכליה. תפר בודד מסוג nano polyamide monofilament TAing מוצב בקצה השופכן. יש להקפיד שהתפר יישאר בשכבה השרירית ולא יחדור אל תוך הלומן של השופכן.

התפר השמש משמש לעיגון השופכית בשלפוחית השתן; מאוחר יותר, כדי להכין את שלפוחית השתן לאנסטומוזה, יוצרים תעלה דרך שלפוחית השתן על ידי העברת מחט gauge 21 באופן אלכסוני דרך השלפוחית. לאחר מכן משתמשים במחט ה-gauge 21 כדי להנחות מחט עם עין דרך שלפוחית השתן. תפר ה-Nino שהוצב קודם לכן בשופכית מועבר דרך החתך הראשון בשלפוחית השתן והחוצה דרך דופן השלפוחית בסמיכות לנקודת הכניסה, כדי להעביר את השופכית דרך שלפוחית השתן.

תפר ה-6-0 הארוך שהוצב בקצה השופכן מועבר דרך עין המחט. לאחר מכן, עין המחט נמשכת באיטיות דרך השלפוחית, תוך הבטחה שהשופכן נמשך גם הוא אל תוך השלפוחית. ברגע שהשופכן ממוקם בתוך השלפוחית, התפרים הננויים שהוצבו בשופכן ובדופן השלפוחית נקשרים כדי לעגן את השופכן במקומו ולהבטיח את קיבועו.

תפר otax שני מונח. תפר זה עובר שוב דרך השופכן, תוך הבטחה שיישאר בתוך המעטפת השרירית, לאחר מכן דרך החתך בשלפוחית השתן ומחוץ לדופן השלפוחית. לאחר מכן הוא נקשר באופן דומה.

תפר nano tax שלישי ממוקם גם בחלק האחורי של השלפוחית. לאחר מכן, משתמשים בגבם של מספריים פתוחים כדי לדחוף מעט את דופן השלפוחית לאחור כדי לחשוף את אורך השופכן. לאחר מכן, השופכן מחולק מעל תפר הריאה.

לאחר מכן, השתול השתן הצבוע יסוג לתוך השלפוחית בזווית. נעשה שימוש בארבעה קצוות כדי להבטיח שהשתול השתן נסוג במלואו אל תוך השלפוחית. לבסוף, פצע היציאה בשלפוחית נסגר באמצעות תפר פוליאמיד מונופילמנט במידה 9-0; לפני הסגירה, יש לוודא שהשתול השתן מעוגן באופן חזק בתוך השלפוחית.

סגור את הפריטונאום והעור כפי שתואר בעבר, והענק טיפול לאחר הניתוח כפי שתואר בעבר. במחקר זה, כל העכברים עם UUO נותרו להתאושש במשך שבעה ימים כדי לאפשר לכליה ששוחררה מחסימה לעבור דה-קומפרסיה, אם כי ניתן לבחון נקודות זמן מוקדמות או מאוחרות יותר. להלן נתונים הממחישים את המראה של כליות חסומות וכליות ששוחררו מחסימה, ואת הפגיעה הנובעת מכך.

איור זה ממחיש את המראה של כליות, אגן כליות ושופכנים במצב של U-U-L-U-U-O בהשוואה לכליה טבעית. הכליה במצב UUO, שהייתה חסומה במשך שבעה ימים, נראית כסובלת מהידרונפרוזיס ובעלת צבע חיוור. לאחר שבעה ימים של ביטול החסימה, הכליה במצב RUO הפכה לבלתי לחוצה, כאשר אגן הכליות והשופכן חזרו לגודל ולצבע הדומים לאלו של הכליה הטבעית.

שימו לב כי השופכן ב-IUO קצר יותר מהשופכנים ב-UUO ובכליות טבעיות, וזאת בשל טכניקת הפירוק והאנסטומוזה לשלפוחית השתן. איור זה מציג תמונות מייצגות של חתכי כליה שנצבעו ב-H and E מכליות טבעיות, UUO ו-RUUO. האינטרסטיציום הבריא של הכליה התקינה מורכב מחתכי רוחב של תעלות בריאות ודחוסות.

מספר צינוריות, המסומנות בחצים השחורים, מראות התרחבות דרמטית ביום השביעי. בעקבות QUL בצינור הביקורת, ההתרחבות פחתה באופן ניכר שבעה ימים לאחר ביטול ה-UUL. המודל העכברי של נפתופתיה חסימתית המוצג כאן משרה על ידי חסימה חד-צדדית של השופכן, שיכולה להיות בלתי הפיכה או הפיכה.

המודל ההפיך המפורט כאן מאפשר את הסרת החסימה בשופכן ואת ביצוע אנסטומוזיס של השופכן לשלפוחית השתן כדי להחזיר באופן מלא את זרימת השתן. דה-קומפרסיה של הכליה הנובעת מכך מאפשרת לחקור עיצוב מחדש של הרקמה (tissue remodeling) בניסויי פוסט-פגיעה. שילוב של מודלים של נפרופתיה חסימתית בלתי הפיכה והפיכה מספק לחוקרים תובנה רבת עוצמה לגבי תהליכי מחלה וכיצד התערבויות טיפוליות משפיעות הן על התפתחות הפגיעה והן על עיצוב הרקמה העוקב.