Name: הערכה של תת-יקוציט חדירת גידול בדגם גידול תת עורי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: חקור הערכת תת-יקוציטים חודרי גידול במודל עכברי של מלנומת B16 תת-עורית באמצעות ציטומטריית זרימה. שיטה זו מאפשרת ניתוח מפורט של אוכלוסיות תאי החיסון במיקרו-סביבת הגידול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי R01-CA169354 &#160; וR01-047822 &#160; מהמכון הלאומי לבריאות ופרס הצטיינות מהמחלקה לענייני יוצאי צבא (ECB). RKP נתמכה על ידי NIH T32 CA009287-30A1, פרס חוקר צעיר ASCO, שד קליפורניה לחקר סרטן פרויקט מלגה, ואגודה אמריקנית לסרטן המודרך מחקר Scholar גרנט; BAZ נתמכה על ידי AI079320 מענק NIH. JM נתמכה על ידי מלגות ממענק אימון T-32 NIH 25 T32-AI07290-, T32-AI07290-24 ואגודה האמריקנית לסרטן מלגת פוסט-דוקטורט PF-12-052-01-CSM.

הערה: כל הניסויים בבעלי החיים נערכו בהתאם לסטנפורד אושר, Palo Alto VA HCS, ומכונים לאומי לבריאות הנחיות המוסדית AnimalCare ועדת השימוש. 1. הכנה לאוסף דוגמאות ועיבוד (זמן הנדרש: ~ דקות 10-15) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן תאים מלנומה B16F0 עכבריים (0.5-1 x 10 6) תת עורי ליד או קו האמצע של הבטן בC57BL / 6 נקבות עכברים כפי שתואר לעיל 6. לחלופין, לחסן תאים סרטניים באתרים אנטומיים נוספים (למשל אגף, כרית שומן החלב, וכו &#39;). הערה: כל מספר של גידולים (מושתל או ספונטני) יכול לשמש והוערכו באמצעות פרוטוקול זה. לדוגמא, אחרים נפוץ גידולי syngeneic בC57BL / 6 כוללים את קו המעי הגס MC38, לואיס ריאות Carcinoma (LLC), וקו-נווד C2 ערמונית. אמנם גם ניתן להעריך xenografts אדם מחוסן לעכברי immunodeficient בדרך זו, יש לציין כי profiles של לויקוציטים הסתננות-הגידול בהכרח לשינוי בהתאם למצב immunodeficient של עכבר המארח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתמש במדיה מלאים (לדוגמא RPMI המכיל 10% FBS ותוספים) או אחר חיץ המכיל חלבון מתאים (למשל HBSS או FBS + 1% PBS או BCS 1%). צ&#39;יל תקשורת או חיץ עד 4 מעלות צלזיוס לפני euthanization. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת צינורות איסוף ומסננים לגידולים שעברו כריתה; במקום אלה על קרח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בצינור חרוטי מיליליטר אחד 50 לגידול לכריתה. הכנס מסנן השעיה תא 40-70 מיקרומטר בכל אחד. לחלופין, להשתמש בצינורות חרוטי 15 מיליליטר עם מסנן רשת מתכת. השתמש בוכנת מזרק 5 מיליליטר או עט עבה כדי ליצור מסנן בצורת כוס בחלק העליון של צינור 15 מיליליטר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מכשירים לעיבוד כריתה וגידול; להשתמש במלקחיים כירורגיים ומספריים עדינים ללכרות וגידולי תהליך. השתמש 70% אתנול לניקוי מכשירים בין דגימות כריתות / גידול. לo מספר גדולה יותרדגימות f (למשל&gt; 10), אנו ממליצים עיבוד בו זמני של דגימות על ידי חוקרים רבים כדי להימנע מהבדלים משמעותיים בזמן עיבוד בין דגימות גידולים. </li></ol> 2. כריתת גידול (זמן הנדרש: ~ 5 דקות / גידול) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברי נושאי גידול B16 בנפרד באמצעות פחמן דו חמצני או שיטה אחרת שתאושר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאבטח את העכבר על במה כירורגי. לרסס את אזור הגידול עם 70% אתנול ולנגב את העודפים; זה מסייע במניעת הפצה של כל נוכחים שיער. לעכברים שאינם עירום, לגלח את העור סביב אזור הגידול לפני הכריתה לפי צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים ומספריים, לכרות את הגידול תת עורי כמקשה אחת, ובכלל זה שמעליה ומקיף את העור. הסכום של עור &quot;שוליים&quot; שצולם יכול להיות מגוון, אך בדרך כלל לכרות 2-3 מ&quot;מ של עור סביב הגידול. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל גידולים שעברו כריתה (+/- עור שמסביב) בשלב זה. הנח את סעיף עור / גידול שעבר כריתה במסנן מובטח בתוך plצינור חרוטי astic. </li></ol></li></ol> 3. הכנת השעיה גידול תא בודד (זמן הנדרש: ~ 5-7 דק &#39;/ גידול) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלקחיים שימוש ומספריים כדי לרכך גידול ושמעליה / עור שמסביב. ברר במדגם באמצעות מספריים עד שכל החלקים הגדולים של רקמה מעובדים למקטעים מ&quot;מ 1-2. הערה: בדרך כלל, כל גידולים מעובדים; לחלופין, במקרים של גידולים גדולים יותר, חלקי נציג של גידולים יכולים להיות טחונים ומעובד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות בוכנה של מזרק 5 או 10 מיליליטר חד פעמי, מכאני disaggregate רקמת גידול הטחון נגד המסנן המאובטח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש pipettor, לשטוף את רקמת גידול מעובד עם 5-10 MLS של תקשורת או חיץ קר. זה לשטוף את התאים בודדים דרך המסנן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שני שלבים מעל מספר פעמים, על מנת להבטיח כי המספר והכרכים של כביסות בסך הכל הם בערך אותו דבר עבור גידולים בגודל דומה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שטיפת רקמת גידול מעובד, להתבונןשברים קטנים של עור ו / או רקמת חיבור אחרת צריכים להישאר מאחור במסנן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, לגידולים שבי disaggregation המכני לבד לא יכול להיות מספיק, עיכול עם collagenase ו / או אנזימים אחרים יכול להתבצע לפני ההליך המצועצע. זה יאפשר להשעית תא בודדת יסודית יותר. עם זאת, יש לציין כי פרוטוקולי עיכול כזה יכול להשפיע על ביטוי אנטיגן שטח 20, כך זהירות יש לנקוט בפרשנות תוצאות אלה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף וגלולת התאים על ידי הוספת תקשורת / חיץ וצנטריפוגה ב 4 ° C XG 500 במשך 5 דקות. </li></ol> מכתים 4. FACS של תרחיף תא בודד (זמן הנדרש: ~ 30-60 דקות) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי Resuspend במאגר FACS הקר כקרח (PBS + 1% FBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאי קיימא באמצעות trypan הכחול וhemacytometer, או נגד תא אוטומטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע תשואת תא קיימא הכוללת לכל נפח. נתונים אלה יכולים לשמש כדי להסיקמספרים מוחלטים של לויקוציטים גידול שחדר בשילוב עם נתונים FACS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את מספר התאים להיות מוכתם ונותח על ידי FACS. זה יהיה מושפע ממספר גורמים (סוג היסטולוגיה למשל גידול, גיל גידול וגודל, אחוז הממוצע של לויקוציטים הסתננות, וכו &#39;). הערה: מלנומה B16, שמצאנו אחוז נמוך של כדוריות דם לבנות גידול הסתננות (TIL; בדרך כלל &lt;5%) בהשוואה לתאים סרטניים. כך, תאים (לויקוציטים חדירת גידול +) לפחות 1 x 10 6 גידול כולל נאספו בדרך כלל באמצעות FACS לניתוח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השימוש בנתונים של הספירה מוכתמת trypan, נפח מחושב של תאים להיות מוכתם עבור FACS. לדוגמא, אם TIL בדרך כלל מהווה 5% מכלל תאי גידול (רב של התאים הסרטניים יהיה מת על כתם trypan), גורם זה למספר הכולל של השעיה תא בודד גידול להיות מוכתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתת ויקוציטים פחות נפוצים כגון CCR9 + PDC) להשתמש במספר גדול יותר של תאי גידול כולל (למשל 2-3 x 10 6) מכתים FACS, בהתחשב בתדירות הנמוכה היחסית של תאים אלה בהשעית התא בודדת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכתים את ההשעיה תא בודד גידול לFACS. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפליה חיות / מת, להשתמש כתם ניתן לתקן או כתם שאינה ניתן לקביעה (למשל propidium יודיד) ניתן להשתמש. אם תא מוכתמים ללא אפליה חיות / מת, יש להיזהר יעץ בהתחשב בפוטנציאל לכריכה הלא ספציפית של נוגדנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכתים את ההשעיה התא לתת ויקוציטים ספציפיים באמצעות פרוטוקול מכתים FACS סטנדרטי. תאי בלוק כדי להפחית נוגדן שאינו ספציפי מחייב עם PBS / FBS המכיל 1% בסרום חולדה ובלוק Fc (אנטי-CD16 / 32) במשך 10 דקות לפני צביעה עם נוגדני אנטיגן ספציפי. כולל נוגדנים לשלוט אלוטיפ הנכונים כדי להבטיח מכתים הוא ספציפי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, לאחר צביעת FACS הושלמה, לתקן דגימות עם פורמלין 4% או סוכן מקבע דומה אחר. דגימות חנות ב 4 מעלות צלזיוס בdaRK (כדי למנוע מרווה של fluorophores) עד הזמן של איסוף וניתוח. הערה: אחסון דגימות קבועות לפרקי זמן ארוכים עלולה לגרום לשינוי באות ועוצמת fluorophores 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את הדגימות על cytometer זרימה. זרימה אופטימלית cytometer הגדרות תשתנה בהתאם לסוג המכשיר והתקנת לייזר / גלאי. הערה: בנוסף, לא יכולה להיות שונות בין הניסויים גם אם משתמש באותו מחשב. לפיכך, לבצע התקנת מכונה מתאימה (למשל באמצעות חרוזים כיול) כדי להבטיח הגדרת פיצוי מתאימה לפני אוסף FACS וניתוח של כל ניסוי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח של תת leukoctye <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בתוכנת ניתוח נתונים FACS, כדי לנתח את הנתונים. לכתם חי / מת, להתחיל על ידי gating את תאים מתים. השתמש נוגדנים נגד סמן ספציפי לויקוציטים (למשל אנטי CD45) לזהות leukocytes בתוך תאי חיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי זה, השתמש בgati השוניםתוכניות ng לזהות תת ספציפיים, בהתאם לפרוטוקול מכתים. לדוגמא, כדי לזהות תאי CD4 + T, בחר אזור SSC lo מאוכלוסיית CD45 + ובחר את התאים + CD19-CD3; מתאי CD4 + T זה יכול להיות מזוהה 22. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את הנתונים ולהציג אותו במספר הדרכים שונות על מנת להבטיח עקביות ולזהות דפוסים או מגמות (כלומר להשתמש כולל מספרים, אחוזים, או יחסים לכמת תת). הערה: לדוגמא, הסתכלנו CD45 החי הכולל + תאים כאחוז מתאי גידול כולל שנאספו (איור 1). בנוסף, אנו חשבנו את האחוז של כל תת-קבוצה ויקוציטים (למשל תאי CD4 + T) בתוך הגידול והשוואה אלה כיחסים בין השליטה וקבוצות בדיקה (איור 3). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Mantovani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+in+the+recruitment+and+shaping+of+the+leukocyte+infiltrate+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemokines in the recruitment and shaping of the leukocyte infiltrate of tumors.</a> Semin Cancer Biol. 14 (3), 155-160 (2004).</li>
<li>Zitvogel, L., Tesniere, A., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+despite+immunosurveillance%3A+immunoselection+and+immunosubversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cancer despite immunosurveillance: immunoselection and immunosubversion.</a> Nat Rev Immunol. 6 (10), 715-727 (2006).</li>
<li>Gajewski, T. F., Schreiber, H., Fu, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immune+cells+in+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immune cells in the tumor microenvironment.</a> Nat Immunol. 14 (10), 1014-1022 (2013).</li>
<li>Fridman, W. H., Pages, F., Sautes-Fridman, C., Galon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+contexture+in+human+tumours%3A+impact+on+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The immune contexture in human tumours: impact on clinical outcome.</a> Nat Rev Cancer. 12 (4), 298-306 (2012).</li>
<li>Curiel, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+recruitment+of+regulatory+T+cells+in+ovarian+carcinoma+fosters+immune+privilege+and+predicts+reduced+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival.</a> Nat Med. 10 (9), 942-949 (2004).</li>
<li>Pachynski, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemoattractant+chemerin+suppresses+melanoma+by+recruiting+natural+killer+cell+antitumor+defenses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">The chemoattractant chemerin suppresses melanoma by recruiting natural killer cell antitumor defenses.</a> J Exp Med. 209 (8), 1427-1435 (2012).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+nude+mice+ubiquitously+expressing+fluorescent+proteins+for+color-coded+imaging+of+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgenic nude mice ubiquitously expressing fluorescent proteins for color-coded imaging of the tumor microenvironment.</a> Methods Mol Biol. 1194, 353-365 (2014).</li>
<li>Mansfield, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+in+cancer+immunology%3Aphenotyping+immune+cell+subsets+in+situ+in+FFPE+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22MLO+Med+Lab+Obs%22%5BJournal%5D)">Imaging in cancer immunology:phenotyping immune cell subsets in situ in FFPE tissue sections.</a> MLO Med Lab Obs. 46 (6), 12-13 (2014).</li>
<li>Serres, S., O'Brien, E. R., Sibson, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+angiogenesis%2C+inflammation%2C+and+metastasis+in+the+tumor+microenvironment+with+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Imaging angiogenesis, inflammation, and metastasis in the tumor microenvironment with magnetic resonance imaging.</a> Adv Exp Med Biol. 772, 263-283 (2014).</li>
<li>Schietinger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+confocal+microscopy+imaging+of+solid+tumor+destruction+following+adoptive+T+cell+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal confocal microscopy imaging of solid tumor destruction following adoptive T cell transfer.</a> Oncoimmunology. 2 (11), e26677(2013).</li>
<li>Singh, A. S., Radu, C. G., Ribas, A. P. E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((imaging+of+the+immune+system%3A+immune+monitoring+at+the+whole+body+level%5BTitle%5D)+AND+%22Q+J+Nucl+Med+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">imaging of the immune system: immune monitoring at the whole body level.</a> Q J Nucl Med Mol Imaging. 54 (3), 281-290 (2010).</li>
<li>Kilarski, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+immunofluorescence+for+visualizing+the+microcirculatory+and+immune+microenvironments+in+the+mouse+ear+dermis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intravital immunofluorescence for visualizing the microcirculatory and immune microenvironments in the mouse ear dermis.</a> PLoS One. 8 (2), e57135(2013).</li>
<li>Habibollahi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+nanoparticle+imaging+allows+noninvasive+evaluation+of+immune+cell+modulation+in+esophageal+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Fluorescent nanoparticle imaging allows noninvasive evaluation of immune cell modulation in esophageal dysplasia.</a> Mol Imaging. 13 (3), 1-11 (2014).</li>
<li>Balducci, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+probe+for+the+non-invasive+detection+of+tumor-associated+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">A novel probe for the non-invasive detection of tumor-associated inflammation.</a> Oncoimmunology. 2 (2), e23034(2013).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmacytoid+dendritic+cells+induce+NK+cell-dependent%2C+tumor+antigen-specific+T+cell+cross-priming+and+tumor+regression+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Plasmacytoid dendritic cells induce NK cell-dependent, tumor antigen-specific T cell cross-priming and tumor regression in mice.</a> J Clin Invest. 118 (3), 1165-1175 (2008).</li>
<li>Hadeiba, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCR9+expression+defines+tolerogenic+plasmacytoid+dendritic+cells+able+to+suppress+acute+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">CCR9 expression defines tolerogenic plasmacytoid dendritic cells able to suppress acute graft-versus-host disease.</a> Nat Immunol. 9 (11), 1253-1260 (2008).</li>
<li>McLean, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+BALB%2Fc+murine+lung+alveolar+carcinoma+used+to+establish+a+surgical+spontaneous+metastasis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">A BALB/c murine lung alveolar carcinoma used to establish a surgical spontaneous metastasis model.</a> Clin Exp Metastasis. 21 (4), 363-369 (2004).</li>
<li>Watkins, S. K., Zhu, Z., Watkins, K. E., Hurwitz, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+immune+cells+from+primary+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of immune cells from primary tumors.</a> J Vis Exp. (64), e3952(2012).</li>
<li>Shafer-Weaver, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+Edge%3A+Tumor-specific+CD8%2B+T+cells+infiltrating+prostatic+tumors+are+induced+to+become+suppressor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting Edge: Tumor-specific CD8+ T cells infiltrating prostatic tumors are induced to become suppressor cells.</a> J Immunol. 183 (8), 4848-4852 (2009).</li>
<li>Goodyear, A. W., Kumar, A., Dow, S., Ryan, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+murine+small+intestine+leukocyte+isolation+for+global+immune+phenotype+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of murine small intestine leukocyte isolation for global immune phenotype analysis.</a> J Immunol Methods. 405, 97-108 (2014).</li>
<li>Stewart, J. C., Villasmil, M. L., Frampton, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+fluorescence+intensity+of+selected+leukocyte+surface+markers+following+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Changes in fluorescence intensity of selected leukocyte surface markers following fixation.</a> Cytometry A. 71 (6), 379-385 (2007).</li>
<li>Hackstein, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+respiratory+dendritic+cell+subsets+and+lymphocyte+populations+in+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Res%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of respiratory dendritic cell subsets and lymphocyte populations in inbred mouse strains.</a> Respir Res. 13, 94(2012).</li>
<li>Ostrand-Rosenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid-derived+suppressor+cells%3A+more+mechanisms+for+inhibiting+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Myeloid-derived suppressor cells: more mechanisms for inhibiting antitumor immunity.</a> Cancer Immunol Immunother. 59 (10), 1593-1600 (2010).</li>
<li>Curran, M. A., Montalvo, W., Yagita, H., Allison, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-1+and+CTLA-4+combination+blockade+expands+infiltrating+T+cells+and+reduces+regulatory+T+and+myeloid+cells+within+B16+melanoma+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">PD-1 and CTLA-4 combination blockade expands infiltrating T cells and reduces regulatory T and myeloid cells within B16 melanoma tumors.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (9), 4275-4280 (2010).</li>
<li>Schreiber, R. D., Old, L. J., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+immunoediting%3A+integrating+immunity%27s+roles+in+cancer+suppression+and+promotion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer immunoediting: integrating immunity's roles in cancer suppression and promotion.</a> Science. 331 (6024), 1565-1570 (2011).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

ביצוע ניתוח מפורט של מייקרו-הסביבה של הגידול הוא קריטי בקביעת המנגנונים ואת ההשפעות של תפקוד מערכת חיסון. עם הנוכחות הגוברת של immunotherapeutics בתחום הקליני בבני האדם, הבנת ההשפעה של גורמים אלה על leukocytes גידול חדירה הופך הנדרשת בהגדרת מנגנון הפעולה שלהם. בבני אדם, יש לעתים קרובות קיימים קשיים קליניים ו / או לוגיסטיים בקבלת וניתוח רקמת גידול לניתוח משנה לויקוציטים, ובכך ניתוח של התגובה החיסונית ההיקפית מבוצע לעתים קרובות. ביצוע ניסויים פרה-קליניים במודלים של בעלי חיים מאפשר ל...

האיזון בין צמיחת גידול וקידום ונסיגה הוא, בחלקו, תלוי באיזון של לויקוציטים הנוכחי במייקרו-הסביבה 1,2 פרו ואנטי-סרטני שחדר. כדי ללמוד מייקרו-הסביבה של הגידול (TME) ובמיוחד לזהות את תת-אוכלוסיות לויקוציטים להסתנן לתוכם, פיתחנו שיטה להערכה של גידולים תת עורית במודל עכברי גידול. החשיבות של לימוד מייקרו-הסביבה של הגידול ידועה ונתמך בספרות. מחקרים רבים הראו כי המאזן של תאי מערכת חיסון פרו ואנטי-סרטניים שחדר יכול להשפיע על התוצאות של גידול, לא רק בעכבר, אלא גם מחקרים בבני אדם (שנסקרו ב3,4). לדוגמא, קוריאל et al. הראה שהחמיר תוצאות קליניות בחולי סרטן השחלות היו מתואמות עם הנוכחות של הגדלת האחוזים של תאים שחדר-גידול רגולציה CD4 + T (Tregs) 5. העבודה שלנו הראתה גם ההשפעה לאchemoattractant ויקוציטים vel על היחס של תת ויקוציטים במודל מלנומה עכבר 6, שגם בקורלציה עם הירידה בצמיחת גידול. לפיכך, הניתוחים מפורטים של תת ויקוציטים בתוך גידול עכשיו הכירו באופן רחב יותר וחשובים יותר ויותר. ישנן דרכים רבות להעריך את מייקרו-הסביבה של הגידול לחדירה לויקוציטים; למשל קבוצות מהונדסות עכברים הטרנסגניים לבטא חלבוני ניאון שונים על מנת תמונה 7 TME, אימונוהיסטוכימיה וimmunofluorescence סעיפים השתמרו 8, כוללים שיטות הדמיה שונות, כגון MRI, PET, מיקרוסקופיה confocal 9-11 הקלסית - חלקם עם היכולת לפקח intravitally 10,12. אלה יכולים לשמש עם סוכנים שונים מולקולריים הדמיה, כגון חלקיקים 13 או סוכנים בניגוד רומן 14 שתווית תאים חיסוניים. השיטה שלנו היא גישה מבוססת cytometry זרימה ויש לו כמה יתרונות.ראשית, כל מייקרו-הסביבה של הגידול ניתן לדגום; בעת הניתוח, הגידול תת עורי כל והפריפריה שמסביב שעברו כריתה כירורגית לעיבוד. זו מבטלת כל הטיה פוטנציאלית דגימה בתוך גידול יחיד ונותנת ניתוח יותר &quot;גלובלי&quot; של הגידול בכללותו. שנית, באמצעות זרימת ססגוניות cytometry לנתח את תת ויקוציטים מאפשר לנו לאמוד את הפנוטיפ של לויקוציטים מסתנן באופן יותר ספציפי. בהתאם למספר של צבעים המשמשים, ניתן לזהות תת מאוד ספציפיים. זה חשוב כמו שיש כמה תת ויקוציטים בסוג תא מסוים - או אפילו בסיווג תת סוג כללי - שיש פונקציות שונות, כי הם עלולים להיות משמעותיים בקביעת גורלו של הגידול. לדוגמא, תאים דנדריטים plasmacytoid (PDC) היו מעורבים בחסינות אנטי גידול 15. עם זאת, קבוצת משנה CCR9 + של pDCs הוכח להיות 16 tolerogenic, והסטת baרומח של משנה כאמור יכול להיות השפעה על צמיחת גידול. השיטה שלנו היא מתאימה לתת עורית או גידולים אחרים שניתן שעברו כריתה כמקשה אחת. בידיים שלנו, שעברו כריתת גידולים אחידות בזמן של המתת חסד. עם זאת, מתקבלים על הדעת, כפי שנעשה בחלק מהמחקרים, כי גידול תת עורי יכול להיות שעבר כריתה מלאה עם סגירת העור שמסביב בניתוח הישרדות 17, ובכך מאפשרת הערכה נוספת של בעלי החיים. הניתוח מבוצע לאחר מכן על גידול resected. לפיכך, התוצאות מייצגות נקודת זמן בהתפתחותו של הגידול. אמנם זה מאפשר מבט מפורט למייקרו-הסביבה, היא גם תמונה סטטית של מה הוא ללא ספק תהליך דינמי. עם זאת, לויקוציטים המבודדים (למשל באמצעות מגנטי הפרדה או שיפוע צפיפות) אז יכול להיות מנותח בנפרד מepithelia הגידול וסטרומה, או בשימוש במבחנים אחרים, פונקציונליים להגדיר הפנוטיפ שלהם עוד יותר, כפי שהיה previלכן תיארו 18. שיטה זו, אם כן, תהיה שימושית עבור כל חוקרים מעוניינים להבין את ההרכב של כדוריות הדם לבנות במייקרו-הסביבה של הגידול בנקודת זמן נתונה, אם בהגדרה של מהלך המחלה הטבעי, או לאחר ההפרעות טיפוליות ספציפיות. למרות שלא נעשה על ידי אותנו, וריאציות של הליך זה יכול גם פוטנציאל לשמש כדי לנתח חלקים מסוימים של גידול בבידוד. לדוגמא, בהתחשב בגודלו של הגידול, אזור הפריפריה (ים) יכול להיות גזור מהליבה המרכזית, אולי נימקי של הגידול לתת החוקר יותר מרחבית נפרדת נוכח מייקרו-הסביבה של הגידול. בתחום המתפתח של אימונולוגיה גידול, שם יהיה ללא ספק מספר גדל באופן אקספוננציאלי של מחקרי הערכת סוכני המערכת החיסונית רומן במודלים עכבריים גידול. מספר דוחות הדגישו את ההבדלים בתפקוד ויקוציטים ספציפיים בתוך הגידול לעומת פריפרית environment. לדוגמא, שפר-יבר et al. הראה במודל של עכברים שמפעיל T אנטיגן ספציפי לתאי CD8 +, בעוד פעיל בפריפריה, הפכו לתאים המדכאים CD8 + T ברגע שהם הוברחו לתוך מייקרו-הסביבה של גידול 19. זה היה בין שאר בשל TGFβ, אבל גורמים אחרים קרוב לוודאי מעורבים גם כן. לפיכך, הערכה תת ויקוציטים - מספרים ויחסים, כמו גם מצב תפקודי - בתוך הגידול עצמו תיתן ייצוג מדויק יותר של ההשפעה של תפקוד מערכת חיסון בפרט על גורל גידול. הטכניקה שלנו מאפשרת ניתוח מפורט של הגידול ומספקת החוקר הזדמנות לזהות באופן הדוק יותר לשינויים באוכלוסיות לויקוציטים מגישות קודמות.

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Cellgro</td><td>10-040</td><td>http://cellgro.com; שמור על קרח</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Cellgro</td><td>35-011-CV</td><td>http://cellgro.com</td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים 50 מ"ל</td><td>Falcon</td><td>14-432-22</td><td>fischersci.com</td></tr><tr><td>40 &#956; m filter</td><td>Falcon</td><td>08-771-1</td><td>fischersci.com</td></tr><tr><td>5 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>14-823-35</td><td></td></tr><tr><td>fischersci.com מספריים/מלקחיים כירורגיים</td><td>Roboz</td><td>RS-5910</td><td></td></tr><tr><td>roboz.com PBS</td><td>Cellgro</td><td>MT-21-030-CM</td><td>http://cellgro.com; שמור על קרח</td></tr><tr><td>כחול</td><td>Cellgro</td><td>MT-25-900-CI</td><td></td></tr><tr><td>fischersci.com המציטומטר</td><td>האוסר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>02-671-54&nbsp;</td><td>fischersci.com</td></tr><tr><td>Live/Dead</td><td>stain Life Technologies</td><td>L34957</td><td>lieftechnologies.com</td></tr><tr><td>תוכנת FlowJo</td><td>TreeStar, Inc</td><td></td><td>flowjo.com</td></tr></tbody></table>

הערכה של תת-יקוציט חדירת גידול בדגם גידול תת עורי

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

תאים חיסוניים מיוחדים הלחדור מייקרו-הסביבה של הגידול להסדיר את הצמיחה והישרדות של neoplasia. תאים ממאירים חייבים להתחמק או לחתור תחת תגובות חיסוני אנטי-סרטנית על מנת לשרוד ולשגשג. גידולים לנצל מספר המנגנונים השונים של חיסון &quot;בריחה&quot;, ובכלל זה הגיוס של DC tolerogenic, תאי T רגולטורים לדיכוי המערכת החיסונית (Tregs), ותאי שמקורם מיאלואידית המדכאים (MDSC) המעכבים תגובות אנטי-סרטניים רעילות לתאים. לעומת זאת, תאים חיסוניים מפעיל אנטי-סרטני יכולים להאט את הצמיחה והתרחבות של גידולים ממאירים: תאים דנדריטים immunostimulatory, תאי רוצח טבעיים שנמל חסינות אנטי גידול מולדת, ותאי T ציטוטוקסי כל יכולים להשתתף בדיכוי גידולים. האיזון בין כדוריות דם לבנות בעד ונגד גידול סופו של דבר קובע את התנהגותו וגורלו של תאים הפכו; מספר רב של מחקרים קליניים בבני אדם נשא את זה. לפיכך, ניתוח מפורט של תת ויקוציטים במייקרו-הסביבה של הגידול הפכה להיות חשובה יותר ויותר. כאן אנו מתארים שיטה לניתוח תת ויקוציטים להסתנן לתוכם נוכחי במייקרו-הסביבה של הגידול במודל גידול עכבר. תאי גידול מלנומה B16 העכבר היו מחוסן תת עורי בעכברי C57BL / 6. בזמן מסוים, גידולים ועור שמסביב היו כריתה כמקשה אחת ומעובדים להשעיות תא בודדות, אשר לאחר מכן היו מוכתמת עבור צבע רב cytometry זרימה. תוך שימוש במגוון של סמני משנה לויקוציטים, היינו יכול להשוות את האחוזים היחסי של חדירה תת ויקוציטים בין שליטה וגידולים להביע chemerin. חוקרים ישתמשו בכלי כזה כדי ללמוד את נוכחות החיסון במייקרו-הסביבה של הגידול ובשילוב עם מדידות גודל קליפר מסורתיות של צמיחת גידול, יהיה פוטנציאל לאפשר להם לברר את ההשפעה של שינויים בהרכב חיסון על צמיחת גידול. כגון טכניקה יכולה להיות מיושמת על כל מודל גידול שבו הגידול וג מייקרו-הסביבה שלהלהיות כריתה ועיבוד.

התוצאות שלנו הראו שאילצו את יתר הביטוי של chemerin בגידולי B16 העכבריים augmented אחוז של לויקוציטים גידול הסתננות (המח&quot;טים). בנוסף, שינויים במשקל היחסי של תת ויקוציטים ייצוג בתוך מייקרו-הסביבה של גידול הקשורים לביטוי chemerin זוהו. להדפיס מחדש באישור et al Pachynski. 6. איור 1 מראה כי חלה עלייה משמעותית בCD45 + תאים כולל (המח&quot;טים) בתוך בגידולים אשר בטאה chemerin השווא...

פרוטוקול זה מתאר שיטה להערכה מפורטת של תת-קבוצות לויקוציטים בתוך המיקרו-סביבה של הגידול במודל גידול עכבר. תאי מלנומה B16 המבטאים כימרין הושתלו תת עורית בעכברים סינגניים. לאחר מכן נצבעו תאים ממיקרו-סביבת הגידול ונותחו על ידי ציטומטריית זרימה, מה שמאפשר ניתוחים מפורטים של תת-קבוצות לויקוציטים.

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לבצע ניתוח מפורט של הלוקוציטים המסתננים במודל של גידול תת-עורי בעכברים. דבר זה מושג תחילה על ידי הזרקת תאי מלנומה B 16 F zero של עכברים מעכברי C 57 BL six נקבות, כדי להקים את הגידול הגדל in vivo. לאחר מכן, עכברים הנושאים גידול B 16 מורדמים (euthanized), והגידול התת-עורי נכרת כגוש, כולל העור העוטף והסובב אותו.לאחר מכן מבודד תרחיף של תאים בודדים הכולל הן תאי גידול והן לוקוציטים חודרי גידול, אשר ניתן לניתוח באמצעות ציטומטריה של זרימה. לבסוף, נקבעת תנובת התאים החיים ליחידת נפח ומחושב מספר התאים לצביעה ולניתוח. בסופו של דבר, נעשה שימוש בציטומטריה של זרימה כדי להראות את השכיחות ואת סוגי תתי-האוכלוסיות של הלוקוציטים בתוך הסביבה המיקרוסקופית של הגידול.להשלכות של טכניקה זו יש משמעות עבור הטיפול או האבחון של סרטן, מכיוון שניתן להעריך את השפעות הטיפול על הלוקוציטים בתוך המיקרו-סביבה של הגידול. איזון זה בין תאי אפקטור לתאי דיכוי הוא שעוזר לקבוע אם הגידול יגדל או יסוג. כדי להשרות צמיחת גידול, יש להחדיר תת-עורית תאי מלנומה murine B 16 F zero בבופר פיזיולוגי כגון phosphate buffered saline, בקו האמצע של הבטן או בסמוך לו, בעכברים נקבות מסוג C 57 BL six בהתאם לפרוטוקול הכתוב. שבעה עד 14 ימים מאוחר יותר, רגע לפני כריתת הגידולים, יש להכין מבחנה קונית אחת של 50 milliliter לכל גידול ולהניח אותה על קרח.הכנסו מסנן לתליה של תאים בגודל 40 עד 70 מיקרון לכל מבחנה. הכינו פינצטה כירורגית ומספריים לכריתה ו-70% ethanol לניקוי המכשירים בין דגימות הגידול. לאחר הדמימה של עכבר הנושא גידול B 16, ובהתאם לפרוטוקול הכתוב, קבעו את העכבר על משטח ניתוח, השתמשו ב-70% ethanol כדי לרסס את אזור הגידול ונגבו את אזור הגישה כדי למנוע התפשטות של שיער. ודאו שהאתנול המקומי נגב לחלוטין והתאדה לפני כריתת הגידול באמצעות פינצטה ומספריים; כרתו את הגידול התת-עורי כגוש אחד, כולל העור שמעליו וכשני עד שלושה מילימטרים של העור שסביבו.שקלו את הגידולים שנכרתו עם ובלי העור שמסביב, והניחו כל חלק במסנן בתוך מבחנה קונית. כדי להכין תרחיף של תאי גידול בודדים, השתמשו בפינצטה ובמספריים כדי לקצוץ את הגידול ואת העור העליון וההיקפי עד שכל חלקי הרקמה הגדולים יעובדו למקטעים של 1 עד 2 מילימטר. לאחר מכן, בעזרת בוכנה של מזרק חד-פעמי של 5 או 10 מיליליטר, פרקו מכנית את רקמת הגידול הקצוצה כנגד המסנן המקובע.לאחר מכן, בעזרת פיפט, הוסיפו 5 עד 10 מיליליטר של מדיום או בופר קר כדי לשטוף את רקמת הגידול המעובדת. פעולה זו תשטוף את התאים הבודדים דרך המסנן.חזור על שלבי הפירוק והשטיפה מספר פעמים, תוך הבטחה שמספר השטיפות הכולל ונפחן יהיו דומים עבור גידולים בגודל דומה. לאחר שטיפת הרקמה, ודא ששרידים קטנים של עור ו/או רקמת חיבור אחרת נותרו במסנן. כדי לשטוף ולרכז את התאים, הוסף מדיום וסבב בצנטריפוגה ב-500 Gs ובטמפרטורה של 4 °C למשך חמש דקות. לצורך ביצוע אנליזת FACS, השתמש בבופר FACS קר מאוד כדי לתלות מחדש את התאים.לאחר מכן, באמצעות צביעה ב-trypan blue וספירה בהמוציטומטר, קובעים את מספר התאים החיוניים כדי לחשב את סך התאים החיוניים לנפח, נתון שישמש להשגחה של המספרים המוחלטים של לוקוציטים חודרי גידול (TIL) או לשילוב עם בדיקות FACS. על סמך נתוני הספירה מהצביעה ב-trypan blue, מחשבים את נפח התאים שיש לצבוע עבור FACS. לדוגמה, אם TIL מהווים בדרך כלל 5% מסך תאי הגידול, יש להביא זאת בחשבון בחישוב סך תאי הגידול בתגסוס שיש לצבוע.לצביעת התאים לצורך הבחנה בין תאים חיים למתים, השתמשו בצבע הניתן לקיבוע או שאינו ניתן לקיבוע, כגון propidium iodide. לאחר מכן, השתמשו ב-FBS ב-PBS עם 1% סרום של חולדה ו-FC block כדי לחסום את התאים למשך 10 דקות, לפני שימוש בפרוטוקול צביעת FACS סטנדרטי לצביעת תרחיף התאים עבור תתי-אוכלוסיות ספציפיות של לויקוציטים.לאחר הצביעה, השתמש ב-4%paraform aldehyde כדי לקבע את הדגימות ואחסן אותן בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס בחשיכה עד למועד האיסוף והניתוח. השתמש בציטומטר זרימה (flow cytometer) כדי לאסוף את הדגימות עם העובדות. בניתוח הנתונים בתוכנה, התחל בביצוע gating להוצאת תאים מתים, ולאחר מכן, באמצעות נוגדן נגד סמן ספציפי ללויקוציטים כגון anti CD 45, זהה את הלויקוציטים בתוך התאים החיים.בשלב הבא, השתמשו בסכימות gating שונות כדי לזהות תת-אוכלוסיות ספציפיות בהתאם לפרוטוקול הכתוב. נתחו את הנתונים והציגו אותם במספר דרכים כדי להבטיח עקביות ולזהות דפוסים או מגמות כפי שמוצג כאן. ביטוי יתר מאולץ של kein בגידולי B 16 עכבריים שנכרתו ביום 17 הביא לעלייה משמעותית במספר התאים החיוביים ל-CD 45 בהשוואה לקבוצות הביקורת באיור זה, תוך שימוש באימונופלואורסצנציה בחתכי קריו של גידולי B 16.אושר wzrost במספר התאים החודרים החיוביים ל-CD 45 מהגידולים. ניתוח נוסף של נתוני ה-fax מראה עלייה יחסית ממוצעת בתאי NK, תאי T, ובתאים דנדריטיים קונבנציונליים החיוביים ל-CD 11 C. בגידולים שבהם בוצע ביטוי יתר של kein בהשוואה לגידולים ששימשו כביקורת, נרשמה גם ירידה יחסית באחוז הלוקוציטים מדכאי חיסון, כולל תאי MDSC (myeloid derived suppressor cells) ותאים דנדריטיים פלסמציטואידיים.מחקרים הראו כי היחס בין תתי-אוכלוסיות של לויקוציטים בתוך הגידול עשוי להוות גורם חשוב מבחינת צמיחת הגידול ותוצאות קליניות, ותמיכה בכך נמצאה בכך שמספר תאי T חיוביים ל-CD3 ותאי NK לגידול היה גבוה יותר בגידולים המבטאים kein בהשוואה לקבוצות הביקורת. איור זה מראה כי בהשוואה ישירה בין אוכלוסיות של תאי אפקטור (effector) ותאי דיכוי (suppressor) בתוך הסביבה המיקרו-גידולית, ניכרות עליות משמעותיות ביחסים שבין אוכלוסיות תאי האפקטור לתאי הדיכוי בגידולים המבטאים kein בהשוואה לקבוצות הביקורת. בצעו את ההליך הבא.ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון מיון תאים או בידוד תאים, כדי לענות על שאלות נוספות הנוגעות לתפקודם של לוקוציטים חודרי גידול.

evaluation-tumor-infiltrating-leukocyte-subsets-subcutaneous-tumor

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בדו"ח זה, אנו מתארים פרוטוקול בידוד אוכלוסיות מטוהרים מאוד של leukocytes כי החודרים גידולים. פרוטוקול זה הוא עיבוד ביוטק Miltenyi בפרוטוקול כדי לשפר את התשואה וטוהר לבידוד תאים של רקמת הגידול מורכב.

בידוד של תאים חיסוניים של גידולים ראשוניים

פרוטוקול זה מתאר דיסוציאציה לא אנזימטית מהירה של שברי רקמות אנושיות טריות לצורך הערכה איכותית וכמותית של תאי CD45+ (לימפוציטים/לויקוציטים) הקיימים ברקמות אנושיות נורמליות וממאירות שונות. בנוסף, ניתן לאסוף ולאחסן את הסופרנטנט המתקבל מהרקמה הראשונית הומוגנטית לצורך ניתוח או ניסויים נוספים.

פרוטוקול פשוט ומהיר לללא אנזימי רקמות אנושיות טריות לנתק לניתוח להחדרה לימפוציטים

כאן אנו מתארים שיטה כדי להפריד ולהעשיר את מרכיבי microenvironment המערכת החיסונית והחיסון של הגידול גידולים הוקמה תת עורית. טכניקה זו מאפשרת ניתוח נפרד של הגידול לחדור המערכת החיסונית ושברים -החיסון הגידול אשר יכולים להרשות אפיון מקיף של microenvironment מערכת החיסון הגידול.

העשרה ואפיון של Microenvironments המערכת החיסונית והחיסון של הגידול הוקמה גידולים מאתר תת עורית

. הנה, נדגים את שיטות ויוו כימות של ליקוציט יציאה מן תמימה, מודלק, והעור מאתר ממאיר. אנו לבצע השוואת עפות בשני דגמים: transdermal FITC יישום, בחיי עיר photoconversion. יתר על כן, נדגים את התועלת של photoconversion עבור מעקב אחר ליקוציט היציאה של גידולים עורית.

לכימות ליקוציט היציאה דרך כלי הלימפה מ מאתר עור וגידולים

כאן אנו מציגים שיטה ישימה לפיתוח מודל מאתר orthotopic של הראש והצוואר קרצינומה של תאים קשקשיים. גידולים מדגימים הרלוונטית קלינית תכונות histopathological של המחלה, לרבות נמק, בידול המסכן, גרורות קטרי הסתננות המערכת החיסונית. עכברים נושאות לפתח תסמינים הרלוונטית קלינית כולל בבליעה, הלסת הזחה של ירידה במשקל.

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

כאן אנו מציגים פרוטוקול השתלת גידול לאפיון לימפוציטים חודרים לגידולים שמקורם בגידול ובפריפריה במודל גידול בעכבר. מעקב ספציפי אחר זרם תאי מערכת החיסון שמקורם במקבל עם ציטומטריה של זרימה חושף את הדינמיקה של השינויים הפנוטיפיים והתפקודיים של תאים אלה במהלך תגובות חיסוניות אנטי-סרטניות.

השתלת גידול להערכת הדינמיקה של תאי T המסתננים לגידולים CD8+ בעכברים

פרוטוקול סטנדרטי מתואר כדי לחקור את הפעילות האנטי-סרטנית ואת הרעילות הנלווית של IL-1α במודל עכבר סינגני של HNSCC.

הערכת הפעילות האנטי-סרטנית In vivo של ננו-חלקיקים פוליאנהידריד IL-1α

הפרוטוקול מציג מודל אימונותרפיה לסרטן באמצעות חיסון מבוסס תאים עם מלנומה B16-F10 המבטאת Flt3L. פרוטוקול זה מדגים את ההליכים, כולל הכנת תאי גידול בתרבית, השתלת גידול, הקרנת תאים, מדידת צמיחת הגידול, בידוד תאי חיסון תוך-גופיים וניתוח ציטומטריה של זרימה.

מודל אימונותרפיה ניסיוני למלנומה באמצעות חיסון לגידול עם ציטוקין המטופויאטי

מחקר זה מתמקד באינדוקציה תת עורית in vivo של תאי סרטן המעי הגס הזוהרים במודל עכברי ובמדידת הזוהר שלאחר מכן באמצעות מערכת הדמיה. ההליך נועד לבסס מודל גידול הניתן לשחזור לניטור והערכה טיפולית בזמן אמת.

הזרקה תת עורית של תאי סרטן המעי הגס האנושיים בעכברים עירומים אתימיים להערכת יעילות אנטי-גידולית

עם העניין הגובר באימונותרפיה תוך-גידולית, בחירת מודלים נגישים ומעשיים היא חיונית. גידולים תת-עוריים קלים לזיהוי אך קשה לדמיין ולמניפולציה. בפרוטוקול זה אנו מתארים שיטות ליצירת גידולים תוך-עוריים המספקות נראות ונגישות משופרת.

השתלת גידול תוך-עורי כמודל חזק למחקרי אימונותרפיה תוך-גידולית בסרטן עכברים

חקור הערכת תת-יקוציטים חודרי גידול במודל עכברי של מלנומת B16 תת-עורית באמצעות ציטומטריית זרימה. שיטה זו מאפשרת ניתוח מפורט של אוכלוסיות תאי החיסון במיקרו-סביבת הגידול.

הערכה של תת-יקוציט חדירת גידול בדגם גידול תת עורי

גלה סרטונים נוספים