Name: בידוד של תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: למדו לבודד תאים מונונוקלאריים ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE באמצעות פרפוזיה קרדיאלית וגרדיאנט Percoll. שיטה זו מאפשרת ניתוח תאי חיסון בזרימתיות ובתרביות תאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עמוק להרדים חולדות. תרסיס עם אתנול 70% ולעשות זלוף לב עם PBS עבור 10 דקות להסיר תאים כלי הדם (לחתוך את הפרוזדורים perfuse ימין דרך החדר השמאלי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המוח ואת חוט השדרה מקום בתוך שפופרת המכילה 50 מ&quot;ל קר כקרח PBS. חותכים את המוח ואת חוט השדרה במסננת תא 70 מ&quot;מ להציב צלחת פטרי 10 ס&quot;מ המכיל 10 מ&quot;ל של קר כקרח PBS. לחץ על כל פיסת איבר דרך מסננת התא באמצעות האחורי של הבוכנה סטרילי 1 מ&quot;ל במזרק. אסוף את ההשעיה תא בודד לתוך שפופרת 50 מ&quot;ל על הקרח. לשטוף את התא מסננת עם PBS ולהוסיף הצינור עד הפתרון הוא ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה 8-10 דקות ב 390 גרם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend התאים Percoll PBS 20 מ&quot;ל + 30% ו כיסוי על 10 מ&quot;ל של Percoll PBS + 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב 390 גרם במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את השומן על גבי הצינור. איסוף התאים מממשק ולשטוף פעמיים עם PBS. הרוזן. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

הליך זה, כמו כל ההליכים הקשורים בבעלי חיים, חייב להיות מאושר על ידי שימוש בבעלי חיים המוסד שלך וועדת אכפת. אנו ממליצים כי וטרינר או טכנאי וטרינרי להיות נוכח בעת ביצוע perfusions הלב הראשון, כדי להבטיח רמה מספקת של ההרדמה ניתנת לבעל החיים לפני ובמהלך ההליך, וכי בעלי החיים אינם עוברים כאב מיותר או מצוקה.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, סטרילי</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>מסנן תאים, 70 um</td><td>כלי</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד של תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם eae

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

אם לומד מחלה אוטואימונית מכוונת למערכת העצבים המרכזית (CNS), כגון Encephalomyelitis אוטואימונית ניסויית (EAE, 1), או את התגובה החיסונית לזיהום של מערכת העצבים המרכזית, כגון שיתוק ילדים, ליים neuroborreliosis, או הנאורוסיפיליס, היא לעתים קרובות יש צורך לבודד את CNS-הסתננות תאים חיסוניים. בפרוטוקול-video זה אנו מדגימים כיצד לבודד תאים mononuclear (MNCs) של מערכת העצבים המרכזית של עכבר עם EAE. השלב הראשון של הליך זה דורש זלוף הלב של מכרסם עם מלוחים פתרון על מנת להבטיח כי לא נשאר דם בכלי הדם להשקיית העצבים המרכזית. כל זיהום דם מלאכותי יהיה להגדיל את מספר ניכר CNS-הסתננות MNCs ועשויים לשנות את הרכב לכאורה של החיסון לחדור. לאחר מכן, אנו מדגימים כיצד להסיר את המוח ואת חוט השדרה של חולדה על dilaceration הבאים להכין ההשעיה תא בודד. השעיה זו מופרדים על שיפוע Percoll שתי שכבות על מנת לבודד את MNCs. לאחר כביסה, תאים אלה אז מוכן לעבור כל הליך הנדרש. Mononuclear תאים מבודדים באמצעות הליך זה הם קיימא יכול לשמש electrophysiology, cytometry זרימה (FACS), או ביוכימיה. אם הטכניקה מבוצעת בתנאים סטריליים (בעזרת מכשירים סטריליים במנדף בתרבית רקמה) תאים יכול גם להיות מבוגר בינוני בתרבית רקמה. האוכלוסייה תא נתון יכול להיות מטוהרים נוסף או באמצעות הליכים הפרדה מגנטית או FACS.

בסרטון הזה אנחנו מדגימים כיצד לבודד תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם Encephalomyelitis אוטואימונית ניסיונית.

בידוד של תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE

בין אם חוקרים מחלה אוטואימונית המכוונת למערכת העצבים המרכזית (CNS), כגון אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסויית (EAE, 1), או את ה...

שלום, אני כריסטין ביטון. אני עוזרת מחקר במעבדתו של ג'ורג' צ'ן במחלקה לפיזיולוגיה וביופיזיקה של אוניברסיטת קליפורניה ארווין. והיום אני אראה לכם כיצד לבודד תאי מונונוקלאריים ממערכת העצבים המרכזית של חולדות.פרוצדורה זו כוללת הרדמה עמוקה של חולדה לביצוע פרפוזיה לבבית, כדי למנוע זיהום של דם במערכת העצבים המרכזית. לאחר מכן, נוציא את המוח ואת חוט השדרה ונכין תמיסת תאים בודדים (single cell suspension) באמצעות מסננת תאים, ולאחר מכן נבודד את התאים חד-גרעיניים (mononuclear cells) באמצעות גרדיאנט כפול של Percoll. אז בואו נתחיל.אני מוכן כעת לבצע את הפרפוזיה הלבבית, לכן אציג את כל החומרים הדרושים לכך. הדבר הראשון שנצטרך הוא צנצנת ואקום (Bell jar), ובחלק התחתון הנחנו נייר סופג ספוג בחומר הרדמה נדיף. ניתן להשתמש ב-halothane או ב-isoflurane.הדבר הבא שנזדקק לו הוא אביזר להחזקת החולדה ואביזר לאיסוף הדם. לכן, יש לנו התקנה מאולתרת זו לביצוע פרפוזיה לחולדות. אתם תשתמשו במחט בכילוי 21 gauge, ונבצע פרפוזיה של תמיסת סלין המוגשת בכוח הכבידה דרך מערכת פרפוזיה תוורידית (IV).אם אין לכם גישה לאחת מהמערכות הללו, תוכלו גם למלא מספר מזרקים בתמיסת סלין ולבצע פרפוזיה ידנית. אך הדרך הזו קלה הרבה יותר. כמו כן, נזדקק לגוף של מזרק בנפח 10 mil שבו הנחנו ניגוני Kim wipes.אני אשים פנימה מעט מהחומר ההרדמתי, כדי למרוח אותו ע

isolation-mononuclear-cells-from-central-nervous-system-rats-with

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

המאמר הנוכחי מתאר פרוטוקול מהיר יעיל לבודד תאים mononuclear מרקמות המוח ואת חוט השדרה אשר יכול להיות מנוצל ביעילות עבור ניתוחים תזרים cytometric.

בידוד של המוח ותאי חוט השדרה mononuclear שימוש Percoll Gradients

בסרטון זה אנו מבצעים בידוד של תאים חד-גרעיניים ממוחו של עכבר באמצעות צנטריפוגה הדרגתית של צפיפות. תרחיף התא החד-גרעיני המבודד יכול לשמש לניתוח נוסף במורד הזרם.

בידוד תאים חד-גרעיניים ממוח עכבר: טכניקת צנטריפוגה של שיפוע צפיפות לבידוד תאים חד-גרעיניים שוכני מוח

סרטון זה מדגים את תהליך בידוד כלי הדם במוח מחולדות שעברו המתת חסד. הוא כולל דיסקציה של המוח, ניקוי הרקמה, ועיכול מכני, ואחריו צנטריפוגה חוזרת ונשנית כדי לבודד את החלק הטהור של microvessels.

שיטה לבידוד יחידות נוירו-וסקולריות ממוח חולדה

כתב יד זה מתאר את השיטות לאינדוקציה וניקוד של מודל דלקת המוח האוטואימונית הניסויי (EAE), יחד עם הערכת התפלגות תאי החיסון ורמות ציטוקינים mRNA בבלוטות הלימפה, הטחול, הדם וחוט השדרה באמצעות ציטומטריית זרימה ו-PCR כמותי, בהתאמה, בשלבי מחלה שונים.

אינדוקציה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis עכברים וההערכה של הפצת מחלות התלויה של תאים חיסוניים ברקמות שונות

יש כבר נכשל בשל מאמצים כדי להבין microglial פונקציה בפירוט חוסר בדגמי תרבות microglial לסכם את מאפייני מיקרוגלייה בוגרת ויוו . פרוטוקול זה מתאר גישה בידוד ותרבות שנועדו לשמור על ההישרדות חזקים של עכברים בוגרים מאוד כחוד מיקרוגלייה בתנאים מוגדרים-בינוני.

בידוד והתרבות של מכרסמים מיקרוגלייה לקדם דינאמי כחוד מורפולוגיה במדיום נטול סרום

המטרה של פרוטוקול זה היא לבודד את כלי המיקרו מאזורים מרובים של מערכת העצבים המרכזית של בעלי חוליות lissencephalic וגירנאריים.

בידוד אמין של מערכת העצבים המרכזית מיקרואוניות על פני חמש קבוצות בעלי חוליות

אנו מספקים פרוטוקול עבור בידוד של מיקרוגלייה מאזורים בגזור שונים של המוח העכבר באמצע המחצית, ואחריו הכנה חצי אוטומטי הספריה לרצף העמוק של RNA תא בודד של טרנססקריפט באורך מלא. שיטה זו תסייע להבהיר טרוגניות תפקודית של מיקרוגלייה בריאות ומחלות.

בידוד של אזור-מיקרוגליה ספציפי מתוך חצי הכדור השני של המוח העכבר עבור רצפי RNA של תא יחיד בודד

כתב יד זה מציג פרוטוקול כדי לגרום אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית פעילה (EAE) בעכברים. שיטה לבידוד ואפיון של לימפוציטים הסתננו במערכת העצבים המרכזית (CNS) מוצגת גם כדי להראות כיצד לימפוציטים מעורבים בהתפתחות של מחלת החיסון האוטואימונית CNS.

זרימה ניתוח ציטומטרי של חדירה לימפוציטים במערכת העצבים המרכזית במהלך אנצפלומיאלטיס אוטואימונית ניסיונית

שיטה לבידוד תאי גזע עצביים ותאי אב אוליגודנדרוציטים ממוחות של חולדות חיות מוצגת כאן בפירוט ניסיוני. הוא מאפשר אוספים מרובים של תאים אלה מאותם בעלי חיים מבלי לסכן את רווחתם.

שיטת "חליבת המוח" לבידוד תאי גזע עצביים ותאי אב אוליגודנדרוציטים מחולדות חיות

מחקר זה מתאר שתי טכניקות לבידוד מלכודות נויטרופילים חוץ-תאיות (NETs) בשפע ממח עצם של חולדה. שיטה אחת משלבת ערכת בידוד נויטרופילים מסחרית עם צנטריפוגת שיפוע צפיפות, ואילו השנייה משתמשת רק בצנטריפוגה שיפוע צפיפות. שתי הגישות מניבות NETs פונקציונליים העולים על אלה של נויטרופילים היקפיים בדם.

גישה ייחודית לבידוד נויטרופילים ממח עצם של חולדה עם קיבולת דומה

נכון להיום, פרוטוקולים לבידוד סימולטני של כל סוגי התאים העיקריים השוכנים במערכת העצבים המרכזית מאותו עכבר הם דרישה שלא נענתה. הפרוטוקול מראה הליך ישים בעכברים אוטואימוניים נאיביים וניסיוניים של אנצפלומיאליטיס לחקור רשתות סלולריות מורכבות במהלך דלקת עצבית ובו זמנית להפחית את מספר העכברים הנדרש.

בידוד סימולטני של סוגי תאים עיקריים תושבי מערכת העצבים המרכזית מעכברים אוטואימוניים בוגרים

למדו לבודד תאים מונונוקלאריים ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE באמצעות פרפוזיה קרדיאלית וגרדיאנט Percoll. שיטה זו מאפשרת ניתוח תאי חיסון בזרימתיות ובתרביות תאים.

בידוד של תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE

גלה סרטונים נוספים