Name: ניתוח הפונקציות של תאי פיטום ב Vivo באמצעות תא התורן לדפוק ב עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: חקור את פונקציות תאי הפיטום בגוף החי באמצעות שתלת תאי פיטום מגזע עצם בעכברים חסרי תאי פיטום. שיטה זו מאפשרת הערכה ישירה של תפקודי תאי הפיטום והתפוצה האנטומית שלהם באמצעות ציטומטריית זרימה וניתוח היסטוכימי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

N.G. הוא מקבל מלגות מן הצרפתית "פונדציה לשפוך la Recherche Médicale FRM" וקרן פיליפ; R.S. נתמך על ידי קרן לוסיל פקארד לבריאות הילדים ופרס סטנפורד NIH / NCRR CTSA מספר UL1 RR025744; נ.ב. נתמך על ידי מלגת מקס קייד של קרן מקס קייד והאקדמיה האוסטרית למדעים ומלגת שרודינגר של קרן המדע האוסטרית (FWF): J3399-B21; S.J.G. מכיר בתמיכה של המכונים הלאומיים לבריאות מעניק U19 AI104209, NS 080062 ומהתוכנית לחקר מחלות הקשורות לטבק באוניברסיטת קליפורניה; L.L.R. מכיר בתמיכה של קרן המחקר הלאומית דלקת פרקים (ANRF) ומכוני הבריאות הלאומיים מענק K99AI110645.

למחברים אין מה לחשוף.

כמעט 30 שנה לאחר תיאורו הראשוני38, הגישה 'תא התורן לדפוק ב' ממשיכה לספק מידע רב ערך על מה MCs יכול לעשות או לא יכול לעשות vivo. הפונקציות של MCs נחשבו זמן רב להיות מוגבל לתפקידם באלרגיה. נתונים שנוצרו באמצעות גישת 'תא התורן knock-in' שינו השקפה זו, על ידי מתן ראיות כי MCs יכול, בין היתר, לשחק תפקידים קריטיים בהגנה המארח נגד פתוגנים מסוימים4,39 אוורנים 28,31, או אפילו יכול לדכא תגובות חיסוניות מסוימות29,34,40.
בתיאור הפרוטוק...

תאי פיטום (MCs) הם תאים hematopoietic הנובעים אבות מח עצם פלוריפוטנטי1-3. בעקבות יציאה מח עצם, MCs אבות נודדים לתוך רקמות שונות שבו הם מתפתחים לתוך MCs בוגרת תחת השפעת גורמי גדילה מקומיים1-3. MCs תושבי רקמות ממוקמים אסטרטגית בממשקי סביבה מארחת, כגון העור, דרכי הנשימה ומערכת העיכול, שם הם מתנהגים כקו הגנה ראשון מפני עלבונות חיצוניים3-6. MCs מסווגים לעתים קרובות על סמך המאפיינים הפנוטיפיים "הבסיסיים" שלהם והמיקומים האנטומיים שלהם. בעכברים תוארו שני סוגים של MCs: MCs מסוג "רקמת חיבור" (CTMCs) ומחשבי MCs הרירית (MMCs)1-3,7,8. CTMCs ממוקמים לעתים קרובות סביב venules ליד סיבי עצב, ומתגוררים בחללים serosal, בעוד MMCs לכבוש מיקומים תוך-אפיתל במעיים רירית הנשימה1-3.
מתודולוגיות רבות יושמו כדי ללמוד פונקציות ביולוגיות של MCs9-13. קבוצות רבות התמקדו בגישות במבחנה באמצעות קווי תאים (כגון הקווים האנושיים MC HMC114 או LAD215,16), IN VITRO נגזר MCs (כגון MCs נגזר דם היקפי אנושי17, או עצם העכבר נגזר תרבית MCs [BMCMCs]18, MCs בתרבית עור עוברי [FSCMCs]19 ומחשבים גרפיים [PCMCs]20) או MCs מבודדים ex vivo מאתרים אנטומיים שונים. כל המודלים האלה נמצאים בשימוש נרחב כדי ללמוד פרטים מולקולריים של ביולוגיה MC, כגון איתות מסלולים המעורבים בהפעלת MC. עם זאת, היבט חשוב של הביולוגיה MCs הוא כי המאפיינים הפנוטיפיים והפונקציונליים שלהם (למשל,תוכן פרוטאז גרנול ציטופלסמי או תגובה לגירויים שונים) ניתן לווסת על ידי מיקום אנטומי microenvironment2,7. מאז התערובת המדויקת של גורמים כאלה כי הם נתקלים vivo עשוי להיות קשה לשחזר במבחנה, אנו מעדיפים להשתמש בגישות vivo כדי לקבל תובנות פונקציות MCs9.
קיימים מספר זנים של עכברים עם מחסור גנטי ב- MC, כגון עכברי WBB6F1-קיט W/W-v או C57BL/6-קיט W-sh/W-sh. עכברים אלה חסרים ביטוי ו/או פעילות של KIT (CD117), הקולטן של גורם הגדילה העיקרי של MC גורם תאי גזע (SCF)21,22. כתוצאה מכך, לעכברים אלה יש מחסור עמוק ב- MC אך יש להם גם חריגות פנוטיפיות נוספות הקשורות למוטציותערכת c שלהם (ב- WBB6F1-קיט W / W-v עכברים) או להשפעות של היפוך כרומוזומלי גדול שתוצאתוביטוי ערכת c מופחתת (ב C57BL / 6 -קיט W-sh / W-sh עכברים)9,10,12,23. לאחרונה, מספר זנים של עכברים עם c-קיט- מחסור עצמאי MC מכונן דווחו24-26. כל העכברים האלה וכמה סוגים חדשים נוספים של עכברים חסרי השכלה MC נבדקו לאחרונה בפירוט9,10,13.
כאן, אנו מתארים שיטות ליצירת MCs מתורבתים שמקורם בעצם העכבר (BMCMCs), העברתם המאמצת לעכברים חסרי MC וניתוח המספרים וההתפלגות של MCs שהועברו באופן מאמץ באתרים אנטומיים שונים. שיטה זו שנקראת 'תא התורן לדפוק ב' ניתן להשתמש כדי להעריך את הפונקציות של MCs ומוצרים שמקורם MC ב vivo. אנו דנים ביתרונות ובמגבלות של שיטה זו, לאור גישות חלופיות שפותחו בשנים האחרונות.

<table><tbody><tr><td>תמיסה אנטיביוטית-אנטי-פטרייתית 1%</td><td>Corning cellgro</td><td>30-004-Cl</td><td></td></tr><tr><td>3 מ"ל מזרק</td><td>פלקון</td><td>309656</td><td></td></tr><tr><td>35 מ"מ x 10 מ"מ צלחת</td><td>Corning cellgro</td><td>430588</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל פוליסטירן צינור תחתון עגול</td><td>פלקון</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית Glacial</td><td>Fisher Scientific</td><td>A35-500</td><td></td></tr><tr><td>Alcian Blue 8GX</td><td>Rowley Biochemical Danver</td><td>33864-99-2</td><td></td></tr><tr><td>Allegra 6R צנטריפוגה</td><td>בקמן</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD16/32 (שיבוט 93) eBioscience מטוהר</td><td></td><td>14-0161-81</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M7522</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 מ"ל TB מזרק</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>BD 22 גרם x 1 (0.7 מ"מ x 25 מ"מ) מחטים</td><td>BD מחט גלישה מדויקת</td><td>205155</td><td></td></tr><tr><td>BD 25 גרם 5/8 מחטים</td><td>מזרק BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>30 גרם x 1/2 מחטים</td><td>BD גלישה מדויקת</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>כחול מקס ג'וניור, 15 מ"ל צינור חרוטי פוליפרופילן</td><td>פלקון</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>כלורופורם</td><td>פישר מדעי</td><td>C298-500</td><td></td></tr><tr><td>ציטוסיל 60 הרכבה בינונית</td><td>ריצ'רד-אלן סיינטיפיק</td><td>8310-4</td><td></td></tr><tr><td>Cytospin3</td><td>Shandon</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>DakoCytomation עט</td><td>Dako</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco שונה נשר בינוני (DMEM) 1x</td><td>Corning cellgro</td><td>15-013-CM</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>E 7023-500 מ"ל</td> סרום בקר עוברי מושבת בחום סיגמא אולדריץ' F4135-500 מ"ל <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FITC מצומד IgG2b K Rat איזוטיפ בקרת</td><td>eBioscience</td><td>14-4031-82</td><td></td></tr><tr><td>פלואורסצאין איזוטיוציאנט (FITC) ערכה מצומדת נגד עכבר (CD117; שיבוט 2B8)</td> <td>eBioscience</td><td>11-1171-82</td><td></td></tr><tr><td>פורמלדהיד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>F79-500</td><td></td></tr><tr><td>Giemsa Stain שונה</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>GS-1L</td><td></td></tr><tr><td>איזותזיה</td><td>הנרי שיין בריאות</td> <td>בעלי חיים29405</td><td></td></tr><tr><td>מאי-גרונוולד כתם</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>MG-1L</td><td></td></tr><tr><td>מולטיוול 6 בארות צלחות</td><td>פלקון</td><td>35 3046</td><td></td></tr><tr><td>אולימפוס BX60 מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast פלוס הטמעת רקמות</td> בינוני <td>פישר מותג</td><td>23-021-400</td><td></td></tr><tr><td>PE מצומד IgG אוגר ארמני איזוטיפ בקרת</td><td>eBioscience</td><td>12-4888-81</td><td></td></tr><tr><td>פוספט-חוצץ-מלח (PBS) 1x</td><td>Corning cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Phycoerythrin (PE) מצומד נגד עכבר FceRIa (שיבוט MAR-1)</td><td>eBioscience</td><td>12-5898-82</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת צביעת פרופידיום יודיד</td><td>eBioscience</td><td>00-6990-50</td><td></td></tr><tr><td>עכבר רקומביננטי IL-3</td><td>Peprotech</td><td>213-13</td><td></td></tr><tr><td>Safranin-o מוסמך</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S8884</td><td></td></tr><tr><td>צלוחיות תרבית רקמות T25 25 ס"מ2</td><td>Beckton Dickinson</td><td>353109</td><td></td></tr><tr><td>צלוחיות תרבית רקמות T75 75 ס"מ2בקטון</td> <td>דיקינסון</td><td>353110</td><td></td></tr><tr><td>כחול טולואידין 1% מימי</td><td>LabChem-Inc</td><td>LC26165-2</td><td></td></tr><tr><td>עכבר רקומביננטי SCF</td><td>Peprotech</td><td>250-03</td><td></td></tr></tbody></table>

ניתוח הפונקציות של תאי פיטום ב vivo באמצעות 'תא התורן לדפוק ב' עכברים

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

תאי פיטום (MCs) הם תאים hematopoietic אשר שוכנים ברקמות שונות, והם שופעים במיוחד באתרים חשופים לסביבה החיצונית, כגון עור, דרכי הנשימה ומערכת העיכול. ידוע בעיקר בשל תפקידם המזיק בתגובות אלרגיות תלויות IgE, MCs הופיעו גם כשחקנים חשובים בהגנה המארחת מפני ארס ופלש חיידקים ולטפילים. פנוטיפ MC ותפקוד יכול להיות מושפע גורמים microenvironmental שעשויים להיות שונים בהתאם למיקום האנטומי ו / או מבוסס על סוג או שלב ההתפתחות של תגובות חיסוניות. מסיבה זו, אנחנו ואחרים העדפנו בגישות vivo על פני שיטות במבחנה כדי לקבל תובנה פונקציות MC. כאן, אנו מתארים שיטות ליצירת MCs מתורבתים של מח עצם העכבר (BMCMCs), העברתם המאמצת לעכברים לקויי MC גנטית, וניתוח המספרים וההתפלגות של MCs שהועברו באופן מאמץ באתרים אנטומיים שונים. שיטה זו, בשם'תא התורן knock-in' גישה, נעשה שימוש נרחב במהלך 30 השנים האחרונות כדי להעריך את הפונקציות של MCs ומוצרים שמקורם MC ב vivo. אנו דנים ביתרונות ובמגבלות של שיטה זו, לאור גישות חלופיות שפותחו בשנים האחרונות.

סקירה כללית של גישת 'חיקוי תא התורן' מוצגת באיור 1, וכוללת את הדור של BMCMCs, את מספר התאים שיש לחרוט i.p., i.d. או i.v. לעכברים חסרי MC (המספר יכול להיות מגוון אם צוין בהתבסס על העיצוב הניסיוני) ואת המרווח בין חריטה לניסוי בהתאם לאתר ההזרקה (מרווח זה גם יכול להשתנות, אם צוין; למשל, התוכן של מתווכים מאוחסנים בגרגרים ציטופלסמיים MC עולה בהתמדה עם הזמן38). איור 2 מציג ניתוחי ציטומטריה של זרימה מייצגת וכתמים כחולים טולואידין של BMCMCs לאחר 1, 15 ו-45 ימי תרבות ב...

אנו מתארים שיטה ליצירת תאי פיטום שמקורם במבחנה, חריטה שלהם לעכברים חסרי תאים תורניים, וניתוח של פנוטיפ, מספרים והפצה של תאי פיטום חרוטים באתרים אנטומיים שונים. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי להעריך את הפונקציות של תאי פיטום ב vivo.

ניתוח הפונקציות של תאי פיטום ב Vivo באמצעות 'תא התורן לדפוק ב' עכברים

Mast cells (MCs) are hematopoietic cells which reside in various tissues, and are especially abundant at sites exposed to the external environment, such ...

המטרה הכללית של השיטה הבאה היא לנתח את תפקודי התאי המסטים in vivo באמצעות עכברים עם נוק-אין (knockin) של תאי מסטים. דבר זה מושג תחילה על ידי יצירת תאי מסטים מתורגליים המופקים ממוח עצם, או BMC MCs, או על ידי השתלה בעכברים עם חסר בתאי מסטים. בשלב השני, ה-BMC MCs מועברים באופן אדופטיבי לאתרים אנטומיים שונים בעכברים עם החסר בתאי המסטים כדי ליצור עכברים עם נוק-אין של תאי מסטים.בסופו של דבר, מספרם וההפצה האנטומית של תאי המסט שהועברו באופן אדופטיבי מוערכים באמצעות ציטומטריה של זרימה ואנליזה אימונוהיסטוכימית, כדי לבחון באיזו מידה האוכלוסיות שהשתבצו דומות לאלו הנמצאות בעכברי סוג פרא (wild type). היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת הערכה ישירה של תפקודי אוכלוסיות תאי המסט מסוג פרא או תאים שעברו שינוי גנטי שהשתבצעו in vivo. לפיכך, שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום הביולוגיה של תאי המסט, כגון באיזו מידה תאי המסט או תוצריהם יכולים לתרום למאפיינים של מודלים של עכברים בתהליכים פיזיולוגיים, אימונולוגיים או פתולוגיים, כולל מודלים של מחלות אנוש.בדרך כלל, אנשים הלומדים שיטה זו עשויים להיתקל בקשיים מכיוון שמידת השבת התאים (engraftment) והמחסור בתאי מאסט יכולים להשתנות בהתאם לשיטה המשמשת ליצירת BM CMCs, לאתר ההזרקה, למספר ה-BMC MCs שהוזרקו ולמספר השבועות שממתינים לאחר השבת התאים לפני ביצוע ניסויי in vivo. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, כיוון שהיבטים של הליך השבת התאים קשים ללמידה אלא אם כן רואים בדיוק כיצד הם מבוצעים. כדי להוציא תחילה את מחולל הגג (bone marrow), השתמשו בכלי ניתוח סטריליים כדי להוציא את ה-femur, ה-tibia וה-fibula מעכברים מסוג wild type, מבלי לפגוע באפפיזות של העצמות.במהלך נתיחתו של כל עצם, אחזו בה בעזרת פינצטה וגרדו את כל הרקמות העודפות. לאחר מכן, הניחו את העצם ב-PBS על קרח. כאשר כל העצמות נאספו, העבירו אותן למנדף סטרילי לתרביות רקמה, ולאחר מכן, אחת אחת, אחזו בכל עצם בעזרת פינצטה וחתכו את שני האפיפיזות (epiphyses) כדי לחשוף את חללי המוח (medullary cavities). בשלב הבא, באמצעות מזרקים של 3 mL, המצוידים במחטים בכיול 30 gauge ובשטיפה של מצע קר, שטפו את כל המוח האדום מכל עצם אל תוך צלחת פטרי חדשה. לאחר שכל העצמות שטופו, השתמשו באותו מזרק כדי להפריד את מקבצי תאי מח העצם באמצעות שאיבה ופליטה עדינה חוזרת.לאחר מכן, העבירו את תרחיף התאים למבחנה לצנטריפוגה בנפח 15 מיליליטר. מלאו את המבחנה בתהליל שטיפה קר וצנטריפוגו את התאים. השעיו את משקע התאים ב-10 מיליליטר של תווך תרבית.לאחר מכן, העבירו את תאי מחולקת הגב (bone marrow) לבקבוק תרבית רקמה בגודל מתאים. לאחר יום עד יומיים של תרבית, העבירו את התאים שאינם נצמדים לבקבוק חדש יחד עם 10 milliliters של מצע תרבית טרי לכל עכבר במהלך השבועות הבאים. האכילו את התאים כל שלושה עד ארבעה ימים כפי שהודגם.העבר את התאים שאינם נצמדים לבקבוק חדש פעם בשבוע, עד שלא יישארו תאים נצמדים, לצורך השתלה תוך-עורית בתוך ה-ear pinner Resus. השהה את ה-BMC MCs בריכוז של ארבעה כפול 10 ל raised 7 תאים ל-milliliter ב-DMEM קר. לאחר מכן, שאב את התאים למזרק של 1 milliliter המצויד במחט gauge 30 והנח את המזרק על קרח.בשלב הבא, ודאו את עומק ההרדמה המתאים באמצעות צביטה בחלק העליון של עכבר מקבל בן ארבעה עד שישה שבועות עם חסר בתאי מאסט, ומרחו משחה לעיניים לפני הזרקת התאים. השתמשו באצבע המורה כדי לחשוף ולמתוח את הפאה הוונטרלית של סחוס האוזן, תוך הפעלת לחץ אנכי על הפאה הדורסלית של האוזן. לאחר מכן, בצעו הזרקה תוך-עורית של 25 µL המכילה 1×10⁶ BMC MCs למרכז האוזן, והזרקה שנייה של 25 µL מאותו תמיסה לכיוון קצה הסחוס.עבור השתלה תוך-פריטונית, השביו את ה-BMC MCs בריכוז של 1*10⁷ תאים למיליליטר ב-DMEM קר. לאחר מכן, השתמשו במזרק של 1 מיליליטר המצויד במחט Gauge 25 כדי להזריק 2*10⁶ BM CMCs ב-200 µL של מצע אל תוך החלל הפריטוני של מקבלי התאים הנחסרים בתאי מאסט. להשתלה תוך-ורידית, השביו את ה-BM CMCs בריכוז של 2.5*10⁷ תאים למיליליטר ב-DMEM קר, ולאחר מכן הזריקו 5*10⁶ BMC MCs ב-200 µL של מצע דרך וריד הזנב.ארבע עד שש שבועות לאחר השתלה תוך-peritoneum, השתמש במזרק של 5 mL המצויד במחט gauge 25 כדי להזריק 5 mL של PBS קר לחלל ה-peritoneum של החיה המקבלת. עסה את הבטן במשך 20 שניות כדי לאסוף את תאי ה-peritoneum. לאחר מכן, השתמש במזרק של 5 mL המצויד במחט gauge 22 כדי לשאוב באיטיות את נוזל השטיפה מה-peritoneum.ניתן להעריך את אחוז התאי המסטים ואת מספר התאים הכולל בנוזל השטיפה הפריטוניאלית באמצעות ציטומטריה של זרימה או היסטוכימיה. כדי להעריך את התאי המסטים בחלונות מסנטריים, חתכו את הקרומי הפריטוניאלי כדי לחשוף את מערכת העיכול. סדרו ארבעה עד חמישה חלונות מסנטריים לכל עכבר על גבי סלייד, ולאחר מכן בצעו קיבוע למשך שעה אחת בתמיסת car noise.החזירו לטמפרטורת החדר בסוף הדגירה, ייבשו את השקופיות באוויר והסִירו את המעי. חלונות הגריד המקובעים יישארו צמודים לשקופיות. לבסוף, צבעו את התכשירים במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר עם תמיסת צביעה chaba המייצגת ניתוח ציטומטרי זרימתי, וצביעת odine blue של BM CMCs לאחר 1, 15 ו-45 ימי תרבית ב-DMEM, בתוספת IL three מוצגים. BM CMCs שגודלו למשך 45 ימים הם בטוהר של 95% ומכילים מספר רב של גרנולות ציטופלזמיות.לפיכך, תאים מתרבויות אלו מתאימים לניסויי השתלה, בעוד שתאים שגודלו במשך 15 ימים אינם כאלה בתמונות אלו. כפי שצפוי, מוצגת השתלה מוצלחת באוזן ארבעה שבועות לאחר השתלה תוך-עורית, בחלונות מסנטריים, בחלל הפריטונאום שישה שבועות לאחר השתלה תוך-פריטונאלית ובריאה 12 שבועות לאחר השתלה תוך-ורידית. תאי מאסט נמצאים בדגימות הרקמה שבודדו מעכברי wild type, בעוד ששום תא מאסט לא זוהה בבעלי החיים החסרים תאי מאסט ובעכברי המאסט knockin.עם זאת, תאי ה-MC מה-BMC שהועברו באימוץ מופיעים במיקומים דומים לאלו שנצפו בבעלי החיים מסוג הבר (wild type). בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור כי ההפסק בין השתלת התאים לבחינת הניסוי תשתנה בהתאם לאתר הזרקת התאים התורניים. חשוב מאוד להקפיד על מרווחי זמן אלו כדי לאפשר זמן מספיק לתאים המשתלים להבשיל ולהגיע למיקומם הסופי in vivo.גישה זו סיפקה וממשיכה לספק מידע חשוב לגבי מה שתאי מסה והתוצרים שלהם יכולים או אינם יכולים לעשות in vivo. אנא זכרו תמיד שעבודה עם בעלי חיים חיים דורשת הכשרה ספציפית, סקירה ואישור מתאימים של פרוטוקולי הניסויים והקפדה קפדנית על הסטנדרטים הגבוהים ביותר של טיפול בבעלי חיים, כולל נקיטת אמצעים להפחתת הכאב והסטרס של בעל החיים בעת ביצוע הליכים אלו.

analyzing-functions-mast-cells-vivo-using-mast-cell-knock

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מתואר כאן היא טכניקה שבה lipopolysaccharide מוזרקת לתוך בלוטת החלב המניק באמצעות עכבר הפטמה כדי לדמות דלקת בשד, מצב שנגרם בדרך כלל על ידי זיהום חיידקים. תוצאות הזרקה בLipopolysaccharide מוגברת גרעינית גורם kappa B (NF-κB) איתות, מדמיינים באמצעות הדמית bioluminescent של עכבר כתב לוציפראז NF-κB.

הזרקת Intraductal של LPS כמודל עכבר של דלקת בשד: איתות מדמיינת דרך NF-κB כתב מהונדס

סרטון זה מדגים בדיקה קולורימטרית כדי לקבוע את פעילות הגרגיר של תאי פיטום. האנזים המשוחרר על ידי תאי הפיטום מבצע הידרוליזה של המצע ומייצר תוצר צבעוני. פעילות הפירוק של תאי הפיטום נמדדה כאחוז השחרור של אנזימים מחוץ לתא מנורמל עם תכולת האנזימים הכוללת בתא.

בדיקת פירוק תאי פיטום כדי לחקור את ההשפעה של כימיקל מטרה

סרטון זה מדגים שיטת שטיפת הצפק לבידוד תאי פיטום בוגרים מסוג רקמת חיבור מחלל הצפק של עכברים בוגרים. עם בידוד תערובת של תאי חיסון ראשוניים מחלל הצפק, מתבצעת התרבות סלקטיבית של תאי פיטום בתנאי תרבית מתאימים.

טכניקה לבידוד תאי פיטום ראשוניים מחלל הצפק המורין

תגובות אלרגיות, המתאפיינות בהפעלת תאי מאסט ובזופילים, מונעות על ידי הקישור הצולב של IgE והשחרור של מתווכים מעודדי דלקת. הערכה כמותית של תגובות אלרגיות יכולה להיות מושגת על ידי שימוש בצבע כחול אוונס לעקוב אחר שינויים בחדירות כלי דם לאחר אתגר אלרגן.

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

המטרה של הפרוטוקול הנוכחי הייתה לפתח שיטה שתאפשר ניתוח הגנומי תפקודי של הפרשת תא פיטום. הפרוטוקול מבוסס על הערכה כמותית של שחרורו של גן כתב ניאון cotrasfected עם הגן של עניין וזמן אמת ניתוחים של המורפולוגיה של גרגר ההפרשה.

חוקר תא פיטום הפרשת הגרגרים; מיוסינתזה לExocytosis

בעוד מחלחלים מקרופאגים הם גויסו ללא הרף רקמות מבוגר מ מבשר במחזור, מקרופאגים תושב זרע הרקמה שלהם במהלך הפיתוח, שם הם מתוחזקים ללא קלט נוסף של אבות. אבות של מקרופאגים תושב זוהו לאחרונה. כאן, אנו מציגים שיטות למיפוי גורל גנטי של אבות מקרופאגים תושב.

זיהוי של אבות אריתרומיאלואידים צאצאיהם בעובר עכבר על ידי זרימת cytometry

פרוטוקולים ללמוד העורקים מאתר של הלידה באמצעות ויוו ניתוח המשובטים, מיפוי הגורל, אבי העורקים explants שריר חלק מבודד התאים מפורטים כאן. גישות מגוונות אלה לקדם את חקירת מורפוגנזה של אבי העורקים של הלידה בהתפתחות נורמלית, בפתוגנזה של המחלה.

באמצעות In Vivo , רקמות, תאים Explant גישות ללמוד מורפוגנזה ו פתוגנזה של הלידה של אבי העורקים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבודד ולטפח מאתר תאי פיטום הצפק. אנו גם מתארים שני פרוטוקולים עבור שלהם אפיון פונקציונלי: הדמיה פלורסנט תאיים חינם Ca2 + ריכוז ואת וזמינותו degranulation בהתבסס על ערכי צבע מוחלטים כימות β-ההקסוזאמינידאז שוחרר.

בידוד של תאי פיטום, נגזר צפק ואיפיונן פונקציונלי עם Ca2 +-הדמיה, מבחני Degranulation

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול מצפני ויוו תמים CD4 T התא (תא T) הפעלה, התפשטות, בידול Th1 המושרה על ידי מח העצם GM-CSF (מוניטור)-נגזר תאים דנדריטים (Dc). בנוסף, פרוטוקול זה מתאר בידוד מוניטור ו- T-cell דור DC, DC ו- T-cell העברה המאמצת.

מודל העכבר In Vivo הפעלת תא T CD4 תמים מידה, התפשטות של בידול Th1 הנגרם על ידי תאים דנדריטים הנגזרות מח עצם

מאמר זה מתאר את התהליך להכנת גרסה מתויגת-fluorescently של bacteriophage מבדה, זיהום...

בעקבות Cell-גורל ב<em&gt; א coli</em&gt; לאחר זיהום על ידי phage מבדה

חקור את פונקציות תאי הפיטום בגוף החי באמצעות שתלת תאי פיטום מגזע עצם בעכברים חסרי תאי פיטום. שיטה זו מאפשרת הערכה ישירה של תפקודי תאי הפיטום והתפוצה האנטומית שלהם באמצעות ציטומטריית זרימה וניתוח היסטוכימי.

ניתוח הפונקציות של תאי פיטום ב Vivo באמצעות 'תא התורן לדפוק ב' עכברים

גלה סרטונים נוספים