Name: דגימת דם מוריד הזנב לרוחב של העכברוש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: למדו שיטת דגימת דם מוריד הזנב לרוחב בעכברושים כדי למזער מתח וכאב. טכניקה זו מאפשרת דגימות חוזרות לניתוח ביומרקרים פיזיולוגיים במחקרי מדעי המוח ורווחת בעלי חיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים וירג&#39;יניה דוהרטי וJunmei יאו לקבלת סיוע טכני. מחקר זה מומן על ידי NIMH (R01 MH084966), ומשרד המחקר של צבא ארה&quot;ב והמתקדמת ביטחון מחקרי הסוכנות (להעניק W911NF-10-1-0059) לבחביונת.

כל הניסויים נעשו שימוש בחולדות הארוך אוונס זכר בוגר. כל הנהלים בהתאם למוסד האמריקאי הלאומי לבריאות (NIH) מדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה ואושרו על ידי הוועדה המוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש במכון טכנולוגי של מסצ&#39;וסטס והטיפול בבעלי החיים ולמשרד סקירת שימוש ב USAMRMC. 1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Heparinise קטטר ומזרק על ידי הצבת המחט מוגנות בהפרין המכיל 500 צינור μl (1,000 יחידות USP / מיליליטר) ולאחר מכן aspirating וגירוש פתרון הפרין דרך המחט. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף קטטר פרפר למזרק. שמור את המגן על המחט של קטטר כדי להגן על הקצה החד מנזק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגת נפח של הפרין שהוא מעט גדול יותר מנפח דם שייאסף. לנתק את המזרק ולמלא אותו באוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחדש לצרף את המזרק לקטטר ולהשתמש באוויר לגרש פתרון הפרין עודף; להבטיח רק כמויות זעירות להישאר בצינור, המחט, והמזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את צנתר סטרילי, עם המזרק עדיין מחובר, על משטח סטרילי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהירות לאבטח את העכברוש במטלית נקייה להבטיח כי קדמי וhindpaws נמצאים בעמדה נוחה והנשימה היא בלתי מוגבלת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Secure לעטוף עם וו ולולאה; להבטיח שאברי מין חיצוניים אינם מכווצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש עוזר בעדינות ובתקיפות לרסן את העכברוש (בטן ובסיס הזנב) על משטח עבודה יציב עם הזנב תלוי מקצה הנגדי. </li></ol></li></ol> דגימת דם 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את הזנב במי 42 מעלות צלזיוס במשך 40-50 שניות להרחבת כלי דם ולייבש את הזנב עם מגבת נייר. אתר את וריד הזנב לדמם (לסובב את כל הגוף עם הזנב למנוע מסובב את הזנב). הערה: התחממות מספיקה של הזנב היא קריטית עבור collectio המהירn של דגימת דם. אם כלי הדם הוא מכווץ, מיקום נכון של הצנתר הוא קשה, וזרימת דם מופחתת בהרבה. כרית חימום יכולה לשמש כתחליף לטבילה במים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את נקודת הדגימה. הערה: העורק נמצא לאורך היבט אמצע הגב-הזנב; אל תשתמשו בזה לדגימה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקד או ורידי זנב שמאלה וימינה ששוכבים לרוחב לעורק. פיגמנטציה של הזנב, שמשתנה לפי זן ועולה עם גיל, עלולה לטשטש חלק מכלי הדם. מקד את חלק של הווריד בחלק התחתון של הזנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את אזור היעד עם תמיסת חיטוי chlorhexidine 2%. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליצור לחץ שלילי במזרק וקטטר על ידי משיכת בוכנת מאפס עד כ -50 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את הזנב בעדינות ובתקיפות ליד הקצה כדי לשמור על הזנב ישר לאורך אוסף מדגם. ודא שזרימת דם לא האפילה על ידי אחיזה הדוקה מדי.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להכניס את הצנתר לווריד בזווית רדודה כ 5 סנטימטר מקצה הזנב. כאשר הווריד חדר, דם יזרום לקטטר. לאט לאט למשוך את הבוכנה של המזרק כדי לאסוף את הנפח הרצוי בקצב קבוע (~ 20 μl לשניות). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התייעץ עם צוות הוטרינרים לקבלת מידע על מרבי הדם שניתן לאסוף נפח. הסכום המרבי של דם שצריך להיות שנאסף תלוי במצב המשקל ובריאות של החולדה. אל תיסוג יותר מ -15% מכלל נפח דם בתקופה של 14 יום. הערה: הדם הוא הרבה יותר קשה לגבות מבעלי החיים שהדגישו בחריפות בדקות לפני לטעום אוסף בגלל הורמוני לחץ להצר כלי הדם. לדוגמא, העברת כלוב בבית של החולדה לחדר רומן, לוקח כמה דקות כדי לעטוף את החיה, או החדרה חוזרת ונשנית של הצנתר לוריד כל סיכוי לעורר תגובת לחץ אקוטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקל blooזרימת ד על ידי &#39;חליבה&#39; הווריד. הפעל את האצבע לאורכו של הווריד, מהבסיס לכיוון קצה הזנב, אבל להישאר יותר מ 2 סנטימטר מקצה המחט המוחדרת הצנתר או עשוי להיות שנעקר מהווריד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם דם לא יכול להיות שנאסף בהצלחה מהאתר הראשוני של חדירת צנתר, מחדש להכניס את המחט במעלה הווריד. אם הדם נאסף באתר הראשוני, מחדש חצים על המחט על ידי ניתוק וחיבור מחדש אז קטטר והמזרק לפני מחדש הכנסה בווריד. באופן כללי, למנוע חדירות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כחדירות מרובות יכולות לגרום לקריסת וריד זנב, שבו אספקת הדם לזנב מנותקת והרקמות הרכות הזנב הופכת necrotized, להרדים את העכברוש אם יש קריסת וריד זנב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר נאות נפח דגימה שנאסף, לשחרר לחץ במזרק על ידי ניתוק וחיבור מחדש את הקטטר. לשאוב מעט באמצעות בוכנת המזרק (~ 50 &amp; #181; יב), ולמשוך את המחט מהווריד. הערה: אם המחט נסוגה מבלי לשחרר את הלחץ הראשון במזרק, דם לטפטף מהמחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצרה להפעיל לחץ לאתר ההכנסה כדי לעצור את הדימום, ולנגב את האזור עם תמיסת חיטוי. להחזיר את החולדה לכלוב בבית שלה. </li></ol> 3. עיבוד דגימת הדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוויר לשאוב כדי להבטיח שאין דם נשאר בתוך מחט קטטר, ולהשתמש במספריים לחתוך את צינור הצנתר בדיוק מעל המחט. לגרש את הדם לתוך צינור microcentrifuge 1.5 מיליליטר סטרילי. הערה: אם הדם נדחף דרך המחט, כוח הגז עלול לגרום לתאי דם אדומים להתפקע שיכול להפריע לרבי מבחני במורד הזרם. הסר את המחט, כדי למנוע המוליזה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף פלזמה דם, צינורות שימוש המכילים EDTA כנוגד קרישה (כאן, להשתמש 10 μl של 0.1 מ &#39;EDTA ל200-400 μl דם; להבטיח הריכוז של EDTA המשמש לא מפריע wה- i assay במורד הזרם) ומניחים על קרח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין דגימות דם כל ב2,100 XG בצנטריפוגה בקירור (4 מעלות צלזיוס) במשך 10 דקות בתוך 10 דקות של אוסף. Elute הפלזמה, הימנעות מפריע שכבות תאי דם האדומות ולבנה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאסוף סרום דם, דגימות מקום (ללא נוגד קרישה) בטמפרטורת חדר למשך עד 30 דקות כדי לאפשר קרישה. ספין צינורות האיסוף בצנטריפוגה בקירור (4 מעלות צלזיוס) ב2,000 x גרם. הסרום עשוי אז להיות eluted. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות שימוש באופן מיידי, או בחנות ב -80 ° C עד שנה אחת. </li></ol>

<ol><li>Vausort, M., Wagner, D. R., Devaux, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+Noncoding+RNAs+in+Patients+with+Acute+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Long Noncoding RNAs in Patients with Acute Myocardial Infarction.</a> Circ Res. 115 (7), 668-677 (2014).</li>
<li>Shah, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+for+Early+Detection+of+Colorectal+Cancer+and+Polyps%3A+Systematic+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Biomarkers for Early Detection of Colorectal Cancer and Polyps: Systematic Review.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 23 (9), 1712-1728 (2014).</li>
<li>Chan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+blood-based+protein+biomarker+strategies+in+the+study+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Applications of blood-based protein biomarker strategies in the study of psychiatric disorders.</a> Prog Neurobiol. , (2014).</li>
<li>Cao, L., Li, L., Lin, D., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+induces+learning+impairment+that+is+mediated+by+interleukin+1beta+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isoflurane induces learning impairment that is mediated by interleukin 1beta in rodents.</a> PLoS One. 7 (12), e51431(2012).</li>
<li>Culley, D. J., Baxter, M. G., Yukhananov, R., Crosby, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+impairment+of+acquisition+of+a+spatial+memory+task+following+isoflurane-nitrous+oxide+anesthesia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Long-term impairment of acquisition of a spatial memory task following isoflurane-nitrous oxide anesthesia in rats.</a> Anesthesiology. 100 (2), 309-314 (2004).</li>
<li>Vahl, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+ACTH+and+corticosterone+sampling+methods+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of ACTH and corticosterone sampling methods in rats.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 289 (5), E823-E828 (2005).</li>
<li>Kalinichenko, L. S., Koplik, E. V., Pertsov, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+profile+of+peripheral+blood+in+rats+with+various+behavioral+characteristics+during+acute+emotional+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Exp+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Cytokine profile of peripheral blood in rats with various behavioral characteristics during acute emotional stress.</a> Bull Exp Biol Med. 156 (4), 441-444 (2014).</li>
<li>McEwen, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+effects+of+stress+hormones+in+health+and+disease%3A+Understanding+the+protective+and+damaging+effects+of+stress+and+stress+mediators%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Central effects of stress hormones in health and disease: Understanding the protective and damaging effects of stress and stress mediators.</a> Eur J Pharmacol. 583 (2-3), 174-185 (2008).</li>
<li>Sanchez, A., Toledo-Pinto, E. A., Menezes, M. L., Pereira, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+norepinephrine+and+epinephrine+concentrations+in+adrenal+gland+of+the+rats+submitted+to+acute+immobilization+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in norepinephrine and epinephrine concentrations in adrenal gland of the rats submitted to acute immobilization stress.</a> Pharmacol Res. 48 (6), 607-613 (2003).</li>
<li>Meyer, R. M., Burgos-Robles, A., Liu, E., Correia, S. S., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ghrelin-growth+hormone+axis+drives+stress-induced+vulnerability+to+enhanced+fear%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">A ghrelin-growth hormone axis drives stress-induced vulnerability to enhanced fear.</a> Mol Psychiatry. , (2013).</li>
<li>Knoll, A. T., Carlezon, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynorphin%2C+stress%2C+and+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Dynorphin, stress, and depression.</a> Brain Res. 1314 (56-73), (2010).</li>
<li>Harvey, B. H., Brand, L., Jeeva, Z., Stein, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical%2Fhippocampal+monoamines%2C+HPA-axis+changes+and+aversive+behavior+following+stress+and+restress+in+an+animal+model+of+post-traumatic+stress+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Cortical/hippocampal monoamines, HPA-axis changes and aversive behavior following stress and restress in an animal model of post-traumatic stress disorder.</a> Physiol Behav. 87 (5), 881-890 (2006).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

כאן אנו מתארים הליך מהיר ופשוט לקבלת דגימת דם מעכברוש המציע יתרונות משמעותיים על פני טכניקות נפוצות אחרות. ראשית, היא אינה דורשת הרדמה, בניגוד לדגימה מוריד הצוואר או בסינוסים retroorbital. כאשר דגימות דם נאספות סביב נהלי התנהגות, ממשל של הרדמה הוא לא רצוי, כי זה יכול להפריע ללמידה וזכרון 4,5. שנית, היא מציעה את היכולת לאסוף כמויות דם גדולות יותר מאשר טכניקות venipuncture אחרות, כגון גבייה מורידי דוושת saphenous או גב. באמצעות עד 1.5 מיליליטר של דם הטכניקה המתוארת כאן, ניתן לגבות מחולדה בנקודת זמן אחת, נפח שמאפשר בקלות מבחני מרובים כדי להפעיל במקביל. לבסוף, הליך זה מקטין את הפוטנציאל לנזק לרקמות בהשוואה לקטיעת קצה זנב או דימום retroorbital. השימוש בהליך זה מאפשר תאימות עם W בעלי החייםelfare חוק והמדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה, אשר דורש מזעור הכאב והמצוקה שנובע מהנהלים מעבדה שבוצעו על בעלי חיים. מומלץ כי חוקרים חדשים לשיטה זו לתרגל טכניקות איפוק ודימום זנב כדי למזער את הזמן שחיות ניסוי מרוסנות. דם שנאסף בפחות מ 3 דקות מפתיחת האיפוק מספק תוצאות אופטימליות. הפרוטוקול המתואר כאן עשוי לשמש לדגימת 1 עד 4 פעמים בשבוע, אך לא יותר מפעמיים ביום. בעוד אוספי דם חוזרים ונשנים עשויות להתבצע, יש להשתמש באתרי דגימה שונים נעו כלפי מעלה מבסיס הזנב, והוורידים זנב שמאלה וימינה צריכים להיות לסירוגין כאתרי דגימה. סך נפח הדם של מכרסמים הוא 6-7% ממשקל גופם, ולא יותר מ -15% מכלל נפח הדם צריכים להיות שנאספו בתקופה 2 בשבוע. סרוםאו פלזמה מהווה כ 40-60% מנפח הדגימה שנאסף. דגימת דם דרך ורידי זנב לרוחב עשויה גם להתבצע בעכבר כפי שמתוארת כאן עם כמה שינויים קלים. ראשית, ניתן להשתמש בצנתרים רק מד קטן (27 G). שנית, זה מומלץ להשתמש עוצר צינור, ולא לעטוף, כדי לשתק את העכברים. נפח דם שניתן לקבל מהעכבר באמצעות venipuncture של חבילת כלי דם submandibular (200-500 μl) הוא גדול יותר מאשר ניתן לאסוף בבטחה מוריד הזנב (200 מרבי μl). בגלל דגימת דם מכלי הדם הצרור submandibular דורשת איפוק מינימאלי ועשויה להניב יותר דם, זה המסלול המועדף לדגימה בעכבר. המהירות שבה הליך זה עשויה להתבצע, יחד עם הטבע פולשנית שלה, גם ממזערת את ההפרעה הפוטנציאלית של אמצעים המבוסס על דם על ידי תגובת הלחץ האקוטית 6.תגובת לחץ אקוטית יכולה לשנות את הרמות במחזור של מולקולות רבות, כוללים אינטרלויקינים וגורמי חיסון פעילים אחרים 7, הורמונים של ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-יותרת הכליה 8, הורמונים במערכת העצבים הסימפתטית 9, גרלין 10, אופיואידים אנדוגני 11, דופמין, ו סרוטונין 12. אם צעדי מנוחה במחזור של מולקולות או אחרים אלה מוסדרים על ידי מולקולות אלה רצויים, חשוב למזער את תגובת הלחץ, אשר מופעלת בתוך מעט ככל דקות של תחילת חשיפת לחץ. תגובות דחק לא רק לשנות את ההרכב של הדם, אלא גם מהוות מכשול טכני לדגימה בגלל ההתכווצות של כלי דם דם באמצעות כונן מוגבר ממערכת העצבים הסימפתטית. הוא הופך להיות קשה להשיג הגדלת זרימת דם יציבה מעכברוש שגובר תגובת לחץ אקוטית. לכן, המצוקה של בעלי החיים חייבת להיות מיניםized כדי להשיג במהירות דגימות המשקפות את המצב הפיזיולוגי של עניין.

סמנים ביולוגיים המתקבלים מהדם לספק שימושי אבחון, חיזוי, ויצרו רבדי אמצעים בהקשרים רבים קליניים, כולל מחלות לב וכלי דם 1, מדעי סרטן 2, ומחלה פסיכיאטרית 3. גם הם עשויים לשמש במדע בסיסי על מנת להעריך את &quot;המדינה&quot; של האורגניזם, כולל התואר של רעב, דלקת, או בהווה לחץ. יכולים להיות מושפעים בצעדים כאלה על ידי משתנים שעשויות או לא עשוי להיות קריטי לשאלה של עניין, כולל את השעה ביום שהמדגם מתקבל והמגדר של הנושאים. גם זה יכול להיות מושפע מהלחץ המושרה במהלך הליכי דגימת הדם עצמו. הורמוני לחץ ותפיסת כאב יכולים במהירות לשנות את ההרכב של הדם. מכרסמים הם חיות מעבדה הנפוצה ביותר, ומספר שיטות פותחו לאיסוף דם. השיטה האידיאלית של דגימת דם צריכה physiologica המינימליהשפעת l על בעלי החיים, לא דורשת הרדמה, מאפשרת דגימה מהירה וחזרה, ולספק מספיק נפח דם ליישומים במורד הזרם רבים. טכניקות העממיות לאיסוף דם כגון צנתור של קטיעת קצה וריד או זנב הצוואר אינו עומדים בקריטריונים אלה. המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר טכניקת דגימת דם לשימוש בחולדות שהן מינימאלי מלחיץ, אינו דורשת הרדמה, מאפשרת לאוספים דם מרובים בנושא אחד, ומספקת גדול יחסית מדגם כך שמבחנים מרובים ניתן לבצע נפח על מדגם יחיד. מטרתה של שיטה זו היא להשיג דגימות דם שמושפעות באופן מינימאלי על ידי תגובת לחץ האקוטית.

<table><tbody><tr><td>נתרן הפרין (1,000 יחידות USP / מ"ל)</td> <td>אספקה וטרינרית של Patternson 25021040010</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חומצה אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA)</td> <td>JT Taylor</td><td>JT2020-01</td><td></td></tr><tr><td>שטיפת דרמכלור-כלורהקסדין</td><td>באטלר שיין</td><td>6356</td><td>תמיסת חיטוי מקומית, 2% כלורהקסידין גלוקונאט</td></tr><tr><td>ערכות עירוי מכונפות SURFLO, טרומו, צנתרי פרפר</td><td>VWR Scientific</td><td></td><td></td>TESV25BLK</tr><tr><td>BD Tuberculin 1 סמ"ק מזרקים</td><td>VWR Scientific</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"ל</td><td>VWR Scientific</td><td>89202-682</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu; l צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>VWR Scientific</td><td>21150-330</td><td></td></tr><tr><td>מספריים, נירוסטה, 5 "</td><td>VWR Scientific</td><td>82027-586</td><td></td></tr><tr><td>500 מ"ל פלסטיק</td><td>VWR Scientific</td><td>414004-149</td><td></td></tr><tr><td>עטיפת בד נקייה</td><td>באטלר שיין</td><td>2993</td><td></td></tr><tr><td>סרט סקוטש, 0.75 ברוחב</td><td>מונופרייס</td><td>B004AF9II6</td><td>סרט</td></tr> <tr><td>וו ולולאהטיימר</td><td>VWR מדעי</td><td>62344-641</td><td></td></tr></tbody></table>

דגימת דם מוריד הזנב לרוחב של העכברוש

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

דגימות דם מתקבלות בדרך כלל בהקשרים ניסיוניים רבים כדי למדוד מטרות מעניינות, כולל הורמונים, גורמים חיסוניים, גורמי גדילה, חלבונים וגלוקוז, אך הרכב הדם מווסת באופן דינמי ומופרע בקלות. גורם אחד שיכול לשנות את הרכב הדם הוא תגובת הלחץ המופעלת על ידי הליך הדגימה, מה שיכול לתרום לשונות במדדים המעניינים. כאן אנו מתארים הליך לדגימת דם מווריד הזנב הצדדי בחולדה. הליך זה מציע יתרונות משמעותיים על פני טכניקות אחרות הנפוצות יותר. הוא מאפשר דגימה מהירה במינימום כאב או פולשנות, ללא הרדמה או שיכוך כאבים. בנוסף, ניתן להשתמש בו כדי להשיג דגימות בנפח גדול (מעל 1 מ"ל בחלק מהחולדות), וניתן להשתמש בו שוב ושוב לאורך ימי הניסוי. על ידי מזעור תגובת הלחץ והכאב הנובעים מדגימת דם, אמצעים יכולים לשקף בצורה מדויקת יותר את המצב הבסיסי האמיתי של החיה, עם השפעה מינימלית מהליך הדגימה עצמו.

פלזמה דם שנאסף מוריד הזנב לרוחב כפי שתוארו בפרוטוקול נותנת מדגם פלזמה שהיה שקוף וצהוב חיוור בהופעה. כפי שניתן לראות באיור 1, המוליזה במדגם מקנה גוון אדום לפלזמה. תגובת הלחץ האקוטית יכולה במהירות לשנות את ההרכב של דם. לדוגמא, ריכוז corticosterone במחזור יכול להגדיל במידה ניכרת תוך 10 דקות של חשיפת לחץ, כפי שמוצג באיור 2. הרמות בסיסיות הנמוכה של corticosterone מתקבלות בשיטה זו לפני לחץ חשיפה עולות כי הליך הדגימה עצמו אינו מקור משמעותי של מתח. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig1.jpg" /> איור 1:. מדגם מראה לדוגמא () hemolyzed מוצג. לאחר צנטריפוגה, פלזמה או שכבת סרום (המשטח שצוין על ידי ar השחורשורה) מופיעה עם גוון ורוד או אדום. גוונים כהים יותר מצביעים על רמות גבוהות יותר של המוליזה. (ב) לאחר צנטריפוגה, מדגם שנאסף כראוי יהיה מראה ברור, צהבהב לרצועה העליונה (המשטח המסומן בחץ השחור), אשר תואמת את הפלזמה או בסרום-hemolyzed שאינו. בעת הסרת שכבה זו, חשוב לא להפריע את כל הדם הבסיסי, או על ידי לחיצה על קצה פיפטה לכל שכבת הדם או על ידי aspirating חלק מכל הדם לתוך הקצה. כל פלזמה או בסרום מזוהם עם כל דם צריכה להיות מושלכת. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig2.jpg" /> איור 2: corticosterone פלזמה הוא גבוה במהירות הבאה חוויה מלחיצה הדם התקבל מוריד הזנב לרוחב של חולדות ארוך אוונס נקבה בוגרות לפני 10 דקות ולאחר חשיפה ל4 גוונים (10 שניות, 2 kHz, 85 dB) שיתוף מסתיים. עם footshocks (1 שניות, 350 מיקרו-אמפר). corticosterone הפלזמה דם בתחילת המחקר (290.4 ± 138.8 pg / ml) היה פחות משמעותי מהרמות שנצפו 10 דקות לאחר הצגה של מתח footshock (2,204.8 ± 454.5 pg / ml, p = 0.02, n = 4), כפי שנקבע על ידי לא לזווג -test. * P &lt;0.05

דגימות דם שימושיות להערכת סמנים ביולוגיים של מצבים פיזיולוגיים או מחלה in vivo. כאן אנו מתארים את המתודולוגיה לדגימת דם מווריד הזנב הצדדי בחולדה. שיטה זו מספקת דגימות מהירות עם מינימום כאב ופולשניות.

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא למזער את הסטרס הכרוך באיסוף דם מחולדות באמצעות דגימה מווריד הזנב הצדי (lateral tail vein). מטרה זו מושגת תחילה על ידי קיבוע החולדה וחימום הזנב. בשלב השני, מוחדר קטטר פרפר לאחד מוורידי הזנב הצדיים המורחבים, ובשלב האחרון נשאב הדם.הקטטר מוסר וזרימת הדם מאתר הדקירה נעצרת. בסופו של דבר, דגימת דם מווריד הזנב הצדי גורמת לסטרס מינימלי לחולדה במהלך איסוף הדם, ובכך מפחיתה את השפעת תגובת הסטרס האקוטית על הרכב הדם. היתרונות העיקריים של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון קטיעת קצה הזנב, הם שדגימה מווריד הזנב הצדי גורמת למצוקה רבה פחות לבעל החיים ומאפשרת דגימות חוזרות מאותו נבדק.ההליך יודגם על ידי שני חברים במעבדה שלי, גרהם לי, פוסט-דוקטורנט, ואליה הרמץ, טכנאי. לתחילת העבודה, חברו קטטר פרפר למזרק, כאשר מגן המזרק מכסה את המחט כדי להגן על הקצה שלה. לאחר מכן, שאבו נפח של heparin הגדול במעט מנפח הדם שייאסף. נתקו את המזרק ומלאו אותו באוויר.חבר מחדש את המזרק לקטטר ורוקן את תמיסת ההפרין מהצינורית, מהמחט ומהמזרק, למעט כמויות מזעריות. לאחר מכן, הנח את הקטטר ואת המזרק על משטח סטרילי. כעת, קבע במהירות את החולדה בתוך בד נקי, תוך הקפדה שהכפותים הקדמיות והאחוריות נמצאות במנח נוח ושהנשימה אינה מוגבלת.אבטחו את העטיפה באמצעות סרט הצמדה (hook and loop tape). לאחר מכן, על משטח עבודה יציב, בקשו מעוזר להחזיק את החולדה בעדינות אך בחוזקה באזור הבטן ובבסיס הזנב, כאשר הזנב תלוי מקצה המשטח, כדי לדגום את הדם. לאחר מכן, הרחיבו את כלי הדם בזנב במים בטמפרטורה של 42 degrees Celsius למשך 40 עד 50 שניות.לאחר מכן, ייבשו את הזנב בעזרת נייר סופג וסובבו את הגוף כולו יחד עם הזנב כדי לאתר את וריד הזנב הימני או השמאלי, באופן לטרלי לעורק לצורך דימום. בחרו מקטע של הווריד בחלק התחתון של הזנב ונגבו את האזור עם תמיסת חיטוי של 2% chlorhexidine. בשלב הבא, משכו את בוכנת המזרק מנקודת האפס לכ-50 microliters כדי ליצור לחץ שלילי במזרק, ואחזו בזנב בעדינות אך בחוזקה סמוך לקצה כדי לשמור על הזנב ישר במהלך איסוף הדגימה.כעת, הכניסו לאט את הקטטר לווריד בזווית רדודה, כחמישה סנטימטרים מקצה הזנב. כאשר הווריד ייח проגב, דם יזרום אל תוך הקטטר; משכו לאט את בוכנת המזרק כדי לאסוף את הנפח הרצוי בקצב קבוע של כ-20 microliters לשנייה. כדי להקל על זרימת הדם, העבירו אצבע לאורך הווריד מהבסיס לכיוון קצה הזנב, תוך שמירה על מרחק של יותר משני סנטימטרים מקצה המחט המוחדרת, כדי "לחלוב" את הדם.אם לא ניתן לאסוף דם בהצלחה מאתר החדירה הראשוני של הקטטר, יש להחדיר את המחט עמוק יותר במעלה הווריד. כאשר נאסף נפח דגימה מספיק, יש לנתק ולחבר מחדש את הקטטר כדי לשחרר את הלחץ במזרק. לאחר מכן, יש לשלוף את המחט מהווריד ולהפעיל לחץ קצר על אתר החדירה כדי להפסיק את הדימום, עד להפסקתו.נגבו את האזור בתמיסת חיטוי והחזירו את בעל החיים לכלוב המגורים שלו. כדי לעבד את דגימת הדם, שאבו את האוויר כדי לוודא שלא נשאר דם בתוך מחט הקטטר, והשתמשו במספריים כדי לחתוך את צינור הקטטר ממש מעל המחט. הסירו את המחט, לאחר מכן אספו את פלזמת הדם והעבירו את הדם למבחנות מיקרו-צנטריפוגה המכילות EDTA.כנוגד קרישה. נקש בעדינות על המבחנה כדי לערבב את נוגד הקרישה בדם ולאחר מכן הנח את הדגימות על קרח. תוך 10 דקות ממועד האיסוף, סובב את הדם השלם בצנטריפוגה והפר את הפלזמה, תוך הקפדה לא להפריע לשכבות תאי הדם האדומים והלבנים כדי לאסוף את סרום הדם.העבירו את הדם למבחנות מיקרו-צנטריפוגה ללא נוגדי קרישה בטמפרטורת החדר למשך עד 30 דקות. לאחר שהדם קריש, סובבו את מבחנות האיסוף בצנטריפוגה מקוררת והוציאו את הסרום. ניתן להשתמש בשני סוגי הדגימות באופן מיידי או לאחסנן במינוס 80 מעלות צלזיוס למשך עד שנה אחת.פלזמה של דם שנאספה מווריד הזנב הצדי כפי שהודגם, נותנת דגימת פלזמה שמרקמה שקוף ומראה הצבע שלה צהוב חיוור. אם התרחשה המוליזה, הפלזמה תקבל גוון אדום. תגובת סטרס חריפה עלולה לשנות במהירות את הרכב דגימת הדם.לדוגמה, ריכוז הקורטיקוסטרון במחזור הדם עולה באופן ניכר בתוך 10 דקות מחשיפה לגורם לחץ, כפי שמוצג בניסוי מייצג זה. עם זאת, חשוב לציין כי הרמה הבסיסית הנמוכה של קורטיקוסטרון שהושגה בשיטה זו לפני החשיפה לגורם הלחץ מעידה על כך שפעולת הדגימה עצמה אינה מהווה מקור משמעותי ללחץ. אנו ממליצים לתרגל הליך זה על בעלי חיים תחת הרדמה עד לשליטה מלאה בהחדרת המחט ובאיסוף הדם.לאחר השליטה בטכניקה, ניתן להשלימה תוך חמש דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לצמצם מקורות פוטנציאליים ללחץ, כגון רעשי רקע, ולהשלים את הפרוצדורה במהירות המרבית האפשרית.

sampling-blood-from-the-lateral-tail-vein-of-the-rat

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

שואב דם יש צורך במספר רב של מחקרים, למשל ללמוד את פרופיל פרמקוקינטיקה של תרכובת. כאן, אנו מדגימים כיצד להקיז דם מן החולדות באמצעות שתי טכניקות: להקיז דם מהעורק saphenous או לנקב לב.

ציור דם מן החולדות דרך וריד Saphenous ועל ידי נקר לב

כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה הזנב וריד דם הדגימה בחולדות שאינם מרדימים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום. שיטה זו מפחיתה את הסיכון בחשיפה ישירה דם ומפשטת לקיחת דגימות מרובים venipuncture יחיד.

חזר על איסוף דם של וריד הזנב של חולדות שאינם מרדימים עם מערכת איסוף דם ואקום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאסוף דגימות דם מן הווריד בריחי של חולדה.

בריחי וריד לנקב כאמצעי חלופי של איסוף דגימת דם בחולדות

מחקר זה דוחות דיגום הדם של וריד הזנב בעכברים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום עם זכוכית מגדלת מוכספת. השיטה שלנו קל לתרגל, ניתן להשתמש עבור לקיחת דמים חוזרים בעכברים.

איסוף ששונה דם מן הוורידים הזנב של עכברים שאינם מרדימים עם מערכת איסוף הדם ואקום, זכוכית מגדלת מוכספת

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה פשוטה ויעילה לאיסוף דם מהווריד הסובקלאבי בחולדות. הוא מאפשר דגימה מהירה, מהירה וקלה לזיהוי ללא הרדמה ומשיג דם איכותי באמצעות איסוף דגימות חוזר.

דגימת דם חוזרת מהווריד הסובקלבי של חולדה מודעת

כאן, אנו מציגים פרוטוקול המציע חלופות איסוף דם מהירות, קלות ואמינות עבור מודל החולדות. אנו מתארים שלוש שיטות שונות לדגימת דם בהתאם להקשר: ניקוב וריד הזנב בהרדמה או בעל חיים בהכרה, וניקור ורידים בפין הגבי בהרדמה.

וריד זנב שונה וניקוב ורידים פין לדגימת דם במודל החולדה

הפרוטוקול מראה איסוף חוזר של נוזל המוח השדרה ודם מחולדות אפילפטיות, המבוצע במקביל לניטור וידאו-אלקטרואנצפלוגרם רציף (EEG). אלה חיוניים לחקר קשרים אפשריים בין שינויים במולקולות שונות של נוזל הגוף לבין פעילות התקפים.

דגימת נוזל מוחי ודם מווריד זנב לטרלי בחולדות במהלך רישומי EEG

כאן אנו מציגים שילוב של הגבלת חולדות יעילה ושיטות ניקור ורידים תת-קרקעיות המאפשרות איסוף דם מהיר, בטוח וחוזר בחולדות ללא הרדמה.

דגימת דם של ורידים תת-קלאביים בחולדות מודעות

תאים הרוצח טבעי הם אוכלוסייה קטנה של לימפוציטים. כאן אנו מראים כיצד לבודד תאים אלה מהדם האנושי על ידי סלקציה שלילית, באמצעות ערכת מן StemCell טכנולוגיות. התאים המתקבלים הם קיימא ללא פגע על ידי נוגדנים, ולכן מוכן לשמש במשך מספר הליכים.

והעשרה של תאים NK מ דם אדם עם קיט RosetteSep מ StemCell טכנולוגיות

סרטן פרסה האמריקאי, Limulus פוליפמוס, הוא לטעון את המקור הנוח ביותר עבור כמויות גדולות של דם של חסרי חוליות כלשהו. דם היא פשוטה בהרכב, כאשר רק סוג תא אחד במחזור כללי, amebocyte פרטנית, ורק שלושה חלבונים בשפע בפלסמה, hemocyanin, C-reactive חלבונים, α2-macroglobulin. הדם נאסף מן הלב ותאי דם פלזמה מופרדים על ידי צנטריפוגה.

דם אוסף של סרטן הפרסה האמריקאי, Limulus פוליפמוס

למדו שיטת דגימת דם מוריד הזנב לרוחב בעכברושים כדי למזער מתח וכאב. טכניקה זו מאפשרת דגימות חוזרות לניתוח ביומרקרים פיזיולוגיים במחקרי מדעי המוח ורווחת בעלי חיים.

דגימת דם מוריד הזנב לרוחב של העכברוש

גלה סרטונים נוספים