Name: עירוי stereotaxic של Oligomeric עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: למד שיטת עירוי סטריאוטקטי של אוליגומרי עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר. פרוטוקול זה מאפשר חקר השפעות רעילות קצרות-טווח על נוירונים ומספק מודל חלופי לחקר מחלות ניווניות במוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ להעניק NS081333 (לCMT), NIRG-10-171,721 אלצהיימר מענק האיגוד והמכון הלאומי לבריאות נפש מענק MH096702 (לUH), ומכון לאומי להזדקנות במימון מחקר מחלת אלצהיימר מרכז בAG008702 מענק טייס אוניברסיטת קולומביה (לYYJ וJB).

הערה: כל הניסויים בבעלי החיים, מוסדי והנחיות הלאומיות לטיפול ושימוש בבעלי החיים במעבדה היו במעקב. 1. הכינו מכשירי ניתוח ופתרונות לניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי כל מכשירי ניתוח הנירוסטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן אתנול 70% על ידי דילול אתנול מוחלט 200 הוכחה עם deionized מים כיתה מולקולרית סטרילי מזוקק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את מחט G 29 למזרק המילטון. נקה את הפנים של מזרק המילטון ומחט על ידי ציור ומים ולהוציא שוב ושוב nanopure דקות 1. חזור על תהליך זה עם 70% אתנול. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הבוכנה ומחט ממזרק המילטון. אוויר יבש החלקים בO מכסה המנוע זרימה למינרית / N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשיר את המחט ומזרק עם אור אולטרה סגול למשך 30 דקות לפני השימוש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תמיסת מלח על ידי המסת NaCl במי כיתה מולקולריות למשקל סופי לריכוז נפח של 0.9%. SteriliZE את הפתרון על ידי סינונו דרך מסנן 0.2 מיקרומטר נקבובית. </li></ol> 2. הכן Oligomeric Aβ 1-42 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Monomerize וresuspend Aβ 1-42 האנושי רקומביננטי בDMSO ל5 מ&quot;מ בדיוק כפי שמתוארת בפרסום פא &#39;ואחרים 13. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל 5 מ&quot;מ Aβ 1-42 עם סטרילי (1x) PBS ביום 100 מיקרומטר לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את הפתרון היטב על ידי טחינה דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה פתרון Aβ 1-42 במשך 12 שעות ב4C. הערה: פתרונות בקרה כגון דילול DMSO ב PBS או מקושקשת / הפוכים Aβ 1-42 פפטיד צריך להיות מוכן באותו אופן כמו Aβ 1-42. </li></ol> 3. לקבוע את קואורדינטות הזרקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באטלס מוח עכבר המבוגר כדי לקבוע קדמי, אחורי המדויק (AP), המדיאלי-רוחב (ML), וגב-הגחון (DV) קואורדינטות לאזור במוח של עניין 14. לאטה: כדי להמחיש את הטכניקה שהרמנו gyrus המשונן של ההיפוקמפוס כיעד עם הקואורדינטות מגבחת הבאות: AP, -2.00 מ&quot;מ; ML, ± 1.3 מ&quot;מ; DV, -2.2 מ&quot;מ. הסימן השלילי שקדמו לערך AP מציין שזה 2.00 מ&quot;מ אחורי של גבחת. סימן ± שקדמו לערך ML מצביע על כיוון ימין ועל שמאל מהמרכז. לבסוף, הסימן השלילי שקדמו לDV מציין הוא נע ventrally מפני שטח של המוח. </li></ol> 4. הגדרת מסגרת stereotaxic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללבוש מסכה כירורגית פנים, מעבדה מעיל נקי, וכפפות מנתחים סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את מכשיר stereotaxic ומתאם עכבר עם 70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נשכב לעטוף כירורגית סטרילית על הדלפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את מכשיר stereotaxic עם מתאם עכבר על גבי וילון ניתוח סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את כרית חימום עכבר עם 70% אתנול. מקם את כרית החימום מעל מיטת מסגרת stereotaxic. השתמש labora מטרות הכלליקלטת תיוג הטורים לקלטת את כרית החימום מעל מיטת מתאם עכבר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את כרית החימום למשאבת recirculator מים החמה על פי הוראות יצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את משאבת recirculator מים החמה ולהגדיר את הטמפרטורה ל -37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן לחכות עד שזה מגיע לטמפרטורה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדביק את מזרק המילטון 50 μl עם מחט G 29 על מסגרת stereotaxic ידי הברגה אותו על מוט הזרקה האנכי הממונע על פי הוראות יצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל מעקר את החרוז ולחכות עד שהוא מגיע לטמפרטורה שנקבעה מראש של היצרן. הערה: זה משמש לחיטוי מכשירי נירוסטה בין בעלי החיים. זה לוקח 20 שניות מכשירים מגע עם חרוזים לעיקור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל צלחת חמה ולהגדיר אותו 42 מעלות צלזיוס ולמקם את כלוב ריק נקי על גבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד מזרק המילטון קבוע במסגרת stereotaxic להשתמש אני stereotaxic הממונעnjector לצייר את פתרון Aβ 1-42. הערה: צייר יותר מ 4 μl של הפתרון לתוך המזרק ולאחר מכן להשתמש במזרק stereotaxic להגדיר הזרקת הנפח. הפעל את המזרק לפי הוראות יצרן. </li></ol> 5. הכנת בעלי החיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את המשקל של העכבר באמצעות לשקול בקנה מידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר עם קוקטייל קטמין / xylazine על 100 מ&quot;ג / קילוגרם קטמין ו -10 מ&quot;ג / קילוגרם xylazine על ידי הזרקת intraperitoneally (IP). צג עומק ההרדמה על ידי האובדן של רפלקס קמצוץ הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר העכבר מסומם לקחת גוזז השיער ולגלח את ראשו כדי לחשוף את העור מעל הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על גבי כרית החימום על גבי מיטת stereotaxic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במרית כדי לפתוח את הפה ולמקם את השיניים החותכות בתוך שומר השיניים. Secure מזנקים על פניו של העכבר. הצמד אותו בעדינות ולא חזק מדי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> POSItion crossbars האוזן דו-צדדי לmeatus השמיעתי כדי לאבטח את הראש. העבר כל משקוף בעד שהוא פוגע בגולגולת, ולאחר מכן הפעל את הבורג כדי לנעול אותו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לוודא את הראש מאובטח להשתמש האצבע שלך לדחוף בעדינות על הראש. אם הראש הוא מאובטח כראוי זה לא ייתן את או להעביר בעת הקשה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ירידה של קרם עיניים או טיפי עיניים לעיניים כדי לשמור אותם לחים. ודא העיניים לחות לאורך כל ההליך כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את האתר כירורגית להשתמש צמר גפן סטרילי ליישם פתרון בבטאדין לעור על הגולגולת, ואחריו אתנול 70%. בצע את בטאדין משתנה ואתנול 70% ניקיון פי 2 יותר. </li></ol> 6. ניתוח ועירוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש אזמל לעשות חתך 2-3 מ&quot;מ בקו האמצע של הקרקפת, ולאחר מכן להשתמש במספריים עדינים ישר להאריך את קו החתך ל1.0-1.5 סנטימטר לחשוף את תפר sagittal, גבחת, ומבדה של הגולגולת, אתרים שקואורדינטות stereotaxic מבוססות על. השתמש מהדק מיקרו כדי לשמור על העור בנפרד. הערה: עמדות גבחת ומבדה מוסברות באטלס מוח העכבר &quot;מוח העכבר בStereotaxic קואורדינטות&quot; 14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח מקלון צמר גפן, לטבול אותו בתמיסת מלח סטרילית, ולהשתמש בו כדי לנקות את הגולגולת. לאחר מכן, השתמש ספוגית נקייה כותנה יבשה לייבש את הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בעט נקודת קנס סטרילי כדי לסמן נקודה על גבחת. השתמש micromanipulator stereotaxic כדי למקם את מזרק המילטון, כך שקצה המחט רק נוגע בנקודה על גבחת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את DV התיאום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבדוק אם ציר AP של הגולגולת הוא ברמה להזיז את מזרק המילטון בדיעבד, כך שקצה המחט נוגע בנקודה למבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את עמדת DV. ודא DV קואורדינטות עבור גבחת ומבדה נמצא 0.5 מ&quot;מ. הערה: המטרה היא למזער את ההבדל בין DV גבחת ולמבדה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במ &#39;icromanipulator להחזיר את קצה מחט מזרק המילטון חזר לנקודת גבחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את עמדת AP מתחילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את מיקום AP סיום על ידי הפחתת 2.00 מ&quot;מ מAP מתחיל לתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש micromanipulator כדי למקם את מחט מזרק המילטון לAP הסופי לתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את ML הנוכחי לתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את ימין ועל השמאל שהסתיים ML קואורדינטות על ידי הוספה או הפחתה של 1.3 מ&quot;מ ממתחיל ML לתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש micromanipulator להזיז את מחט מזרק המילטון לאו ML הסיום לתאם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגעת בקצה המחט אל פני השטח של הגולגולת על שני קואורדינטות ML הסתיימו ולהקליט את קואורדינטות DV ולוודא הערכים הם בתוך 0.5 מ&quot;מ. הערה: המטרה היא למזער את ההבדל בין DV שני מסתיימים ML קואורדינטות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד בסיום לתאם למשוך את המחט עד 0.5-1 סנטימטר מעל הגולגולת. קח עט משובח סטרילי כדי לסמן נקודה על המשטח דואר של הגולגולת. חזור על שלב זה לצד הנגדי של הגולגולת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Swing מזרק המילטון ברור מהדרך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף ראש מקדח 0.8 מ&quot;מ לתרגיל. קח את התרגיל בשתי הידיים, מרפקים להגדיר על פני השטח של השולחן ליציבות, ולמקם את ראש המקדח מעט מעל הנקודה לנוכל על השמאל או ימין ML לתאם. הפעל את התרגיל, להוריד את קצה המקדח על פני הגולגולת להציג חור בגולגולת. חזור על שלב זה לצד הנגדי. הערה: דימום מסוימים עשוי להתרחש מהחורים החדשים הציגו. אם יש דימום ולאחר מכן להשתמש ספוגית נקייה כותנה יבשה להספיג את הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את מזרק המילטון בחזרה להגנה על אחד מחורי ML החדשים הציגו. מנמיכים את מחט המילטון רק עבר הגולגולת. בשלב זה להיזהר לא לנקב את המוח. כדי לוודא שהמחט עברה את הגולגולת לקחת האצבע שלך ודחפה בעדינות את המחט נגד הגולגולת לעשות surדואר המחט לא לצאת מהחור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את DV מתחיל לתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את DV הסיום לתאם ידי הפחתה של 2.2 מ&quot;מ מDV מתחיל לתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את המחט עד לסיום DV לתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את משאבת הזרקת stereotaxic לשאוב 4 μl של Aβ 1-42 לgyrus המשונן בשיעור של 0.5 μl / דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר העירוי יושלם לתת את המחט להישאר במקום במשך דקות 1 נוספת כדי למזער backflow של פתרון מאתר ההזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזיז את המחט לצד השני של המוח האחר וחזור על השלבים 6.13-6.18. </li></ol> 7. הסרת בעלי חיים ולאחר ניתוח טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתיר את הברים אוזן ושומר פנים / האף. הסר את העכבר מן המנגנון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במלקחיים דפוס סטנדרטיים תלמיד למשוך לסגור את הקרקפת ולאחר מכן לאטום את הפצע עם תפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית לעכבר באמצעות IP ללחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעצירות JECT (0.1 מ&quot;ג / קילוגרם) תת עורי כדי להקל על כאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על העכבר בכלוב הריק הנקי להגדיר על גבי צלחת חמה 42 מעלות צלזיוס עד שמתעורר, ואז להחזיר אותו לכלוב הדיור שלה עם אוכל ומים בשפע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל עצירות באמצעות הזרקה תת עורית כל 12 שעות במשך 3 ימים להקלה על כאב. </li></ol> הסרת 8. תפר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר עם קוקטייל קטמין / xylazine על 100 מ&quot;ג / קילוגרם קטמין ו -10 מ&quot;ג / קילוגרם xlyazine ידי ה- IP. הערה: זה נעשה 7-10 ימים לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במלקחיים תלמיד סטנדרטיים דפוס ומספריים עדינים ישר להסיר את התפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית לעכבר באמצעות IP ללחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על העכבר בכלוב ריק נקי להגדיר על גבי צלחת חמה 42 מעלות צלזיוס עד שמתעורר, ולאחר מכן להחזיר אותו לכלוב הדיור שלה עם אוכל ומים בשפע. </li></ol> עיבוד קורבן ורקמות 9. בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר ועמ &#39;erfuse אותו עם 4% paraformaldehyde 15, להסיר את המוח, ולעבד אותו לcryosectioning 16. הערה: התזמון של הקרבת בעלי החיים תלוי בניסוי. עם זאת, ללימודים שלנו בחרנו 7 ו -14 ימים שלאחר ניתוח. </li></ol>

<ol><li>Baleriola, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonally+Synthesized+ATF4+Transmits+a+Neurodegenerative+Signal+across+Brain+Regions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions.</a> Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).</li>
<li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration%3A+lessons+from+the+Alzheimer%27s+amyloid+beta-peptide.+Nature+reviews%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews.</a> Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).</li>
<li>Knowles, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+p75+neurotrophin+receptor+promotes+amyloid-beta%281-42%29-induced+neuritic+dystrophy+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).</li>
<li>Troy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Amyloid-induced+neuronal+apoptosis+requires+c-Jun+N-terminal+kinase+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation.</a> Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).</li>
<li>Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APP+transgenic+modeling+of+Alzheimer%27s+disease%3A+mechanisms+of+neurodegeneration+and+aberrant+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+structure+%26+function%22%5BJournal%5D)">APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis.</a> Brain structure & function. 214 (2-3), 111-126 (2010).</li>
<li>Gotz, J., Ittner, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+Alzheimer%27s+disease+and+frontotemporal+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia.</a> Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).</li>
<li>Calhoun, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron+loss+in+APP+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neuron loss in APP transgenic mice.</a> Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).</li>
<li>Oakley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraneuronal+beta-amyloid+aggregates%2C+neurodegeneration%2C+and+neuron+loss+in+transgenic+mice+with+five+familial+Alzheimer%27s+disease+mutations%3A+potential+factors+in+amyloid+plaque+formation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).</li>
<li>Jean, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caspase-2+is+essential+for+c-Jun+transcriptional+activation+and+Bim+induction+in+neuron+death%5BTitle%5D)+AND+%22The+Biochemical+journal%22%5BJournal%5D)">Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death.</a> The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).</li>
<li>Sotthibundhu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-amyloid%281-42%29+induces+neuronal+death+through+the+p75+neurotrophin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).</li>
<li>Kar, S., Quirion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+beta+peptides+and+central+cholinergic+neurons%3A+functional+interrelationship+and+relevance+to+Alzheimer%27s+disease+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+brain+research%22%5BJournal%5D)">Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology.</a> Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).</li>
<li>Leranth, C., Frotscher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+septal+region+in+the+rat+brain%3A+cholinergic-GABAergic+interconnections+and+the+termination+of+hippocampo-septal+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+comparative+neurology%22%5BJournal%5D)">Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers.</a> The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).</li>
<li>Fa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+oligomeric+beta-amyloid+1-42+and+induction+of+synaptic+plasticity+impairment+on+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Second edn, Academic Press. (2001).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).</li>
<li>Currle, D. S., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+freezing+and+cryosectioning+E12.5+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).</li>
<li>Jin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+amyloid+beta-protein+dimers+isolated+from+Alzheimer+cortex+directly+induce+Tau+hyperphosphorylation+and+neuritic+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).</li>
<li>Lambert, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusible%2C+nonfibrillar+ligands+derived+from+Abeta1-42+are+potent+central+nervous+system+neurotoxins%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).</li>
<li>Masters, C. L., Selkoe, D. J. Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMasters%2C+CL+%22Cold+Spring+Harbor+perspectives+in+medicine%22">Cold Spring Harbor perspectives in medicine</a>. 2 (6), a006262(2012).</li>
<li>Chakrabarti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor+agonists+for+attenuation+of+neuroinflammation+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research+bulletin%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).</li>
<li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li>
<li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picomolar+amyloid-beta+positively+modulates+synaptic+plasticity+and+memory+in+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).</li>
<li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+amyloid-beta+is+necessary+for+hippocampal+synaptic+plasticity+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of%22%5BJournal%5D)">Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory.</a> Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).</li>
<li>Akpan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+caspase-9+inhibitor+reduces+caspase-6-dependent+axon%2Fneuron+loss+and+improves+neurological+function+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).</li>
<li>Fulmer, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte-derived+BDNF+supports+myelin+protein+synthesis+after+cuprizone-induced+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).</li>
<li>Thakker-Varia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropeptide+VGF+is+reduced+in+human+bipolar+postmortem+brain+and+contributes+to+some+of+the+behavioral+and+molecular+effects+of+lithium%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).</li>
<li>Greferath, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enlarged+cholinergic+forebrain+neurons+and+improved+spatial+learning+in+p75+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice.</a> The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).</li>
<li>Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+GABAergic+and+cholinergic+neurons+in+the+rat+diagonal+band%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band.</a> Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).</li>
<li>Clarke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+innervation+of+the+rat+dentate+gyrus%3A+an+immunocytochemical+and+electron+microscopical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study.</a> Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).</li>
<li>Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+beta+mediates+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+memory%22%5BJournal%5D)">Amyloid beta mediates memory formation.</a> Learning & memory. 16 (4), 267-272 (2009).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

כדי להשיג הזרקת Aβ 1-42 מוצלחת הנסיין או המנתח חייב: 1) להשתמש בטכניקה האספטי; 2) בצורה נכונה לזהות את האזור במוח של עניין עם קואורדינטות מדויקות; 3) להיות מסוגל לאבטח את העכבר כראוי במסגרת stereotaxic עם המוח המפולס בציר AP וML; 4) יש את היכולת להפעיל את micromanipulator עם דיוק; 5) להבטיח טיפול שלאחר ניתוח נכון. אם הם אחרי השלבים העיקריים אלה העכבר צריך לשרוד את הניתוח ללא זיהום הנצפה. בקנה אחד עם מח...

פיקדונות עמילואיד פלאק, אשר מורכבים של עמילואיד-ביתא (Aβ 1-42), הם תכונה מרכזית של הפתולוגיה של מחלת אלצהיימר (AD). מחקרים רבים הראו כי רמות גבוהות או רעילות של Aβ oligomeric רקומביננטי 1-42 לעורר מוות עצבי, ניוון הסינפטי, אובדן וחוסר תפקוד; וכן את גירעונות למידה וזיכרון 1-4. אזורים במוח המושפעים כוללים את ההיפוקמפוס, קליפת המוח, ומבנים קורטיקליים כגון המוח הקדמי הבסיסי ו5,6 האמיגדלה. נכון להיום, יש מודלים עכבר מהונדסים מרובים המנסים לדמות את הפתולוגיה Aβ 1-42 של הספירה. בהתאם לזן בעלי חיים אלה להוכיח להיות שימושיים בבדיקה פתולוגית תכונות נבחרות של הספירה. למרבה הצער, למעט 2 קווים מהונדסים, APP23 ו5XFAD, עכברים אלה לא לשכפל באופן מלא איבוד עצבי, היבט מרכזי של הספירה. אפילו עם האובדן העצבי שנצפה בAPP23 ו5XFAD, obser המוות העצביved היה עדין, גיל תלוי, ומבודד לאזורים נבחרים כמה 7,8. העירוי הישיר של Aβ oligomeric 1-42 לתוך מוח עכבר wild-type מספק מצוין במודל vivo שמשכפל את היבט המוות העצבי של amyloidopathy 1,9,10. בניגוד למודלי העכבר המהונדס הנפוצה ניצלו את מודל עירוי oligomeric Aβ 1-42 הוא אידיאלי עבור חריפות הרמת Aβ 1-42 רמות באופן מרחב ובזמן. היתרון של שימוש בעכברי wild-type עבור דגם זה מבטל השפעות פיצוי או צד פוטנציאל מהמוטציות הציגו בקווי עכבר מהונדסים. מחקרים קודמים הראו כי רמות רעילות של יציקת Aβ 1-42 להיפוקמפוס מעוררת מות נוירון בקרבת אתר ההזרקה בתוך השבוע 1 1. יתר על כן, עולה בקנה אחד עם התצפית שAβ 1-42 הוא רעיל לתאי עצב כולינרגית 11 המוח הקדמי הבסיסיאוכלוסיית כולינרגית נוירון (BFCN) שמקרינה להיפוקמפוס היא ירד 20-50% בתוך 7-14 ימים הבאים עירוי בטא-עמילואיד בעכברי 1,10, ביעילות ומאפשרת לבחינות של מעגלים עצביים במוח מבודד. מאז פרויקט BFCN ipsilaterally לgyrus המשונן של 12 היפוקמפוס, לשליטה חלק / הרכב וAβ 1-42 פתרונות oligomeric ביותר ניתן להזריק בכל צד של המוח ומאפשר השוואות שנעשו בין האונות ימנית והשמאלי 1. בדוח זה אנו מספקים מתודולוגיה ניתוח והזרקה מפורטת לC57BL / 6J עכברים בוגרים wild-type. זן עכבר זה נבחר בשל השימוש הרחב שלה במחקר. מבחינה טכנית, כל אזור במוח יכול להיות ממוקד לעירוי, אולם כאן אנו משתמשים ברכס המשונן של ההיפוקמפוס כמטרה להמחיש את הטכניקה.

<table><tbody><tr><td>קטמין הידרוכלוריד (100 מ"ג/מ"ל)</td><td>Henry Schein Medical</td><td>1049007</td><td>100 מ"ג קטמין לכל 1 ק"ג בעל חיים</td></tr><tr><td>קסילזין (20 מ"ג/מ"ל)</td><td>Henry Schein Medical</td><td>לא זמין 10</td><td>מ"ג קסילזין לכל 1 ק"ג בעל חיים</td></tr><tr><td>בופרנקס (0.3 מ"ג/מ"ל)</td><td>Henry Schein Medical</td><td>1217793</td><td>0.1 מ"ג בופרנקס לכל 1 ק"ג בעל חיים</td></tr><tr><td>A&BETA; <תת>1-42</תת></td><td>דיוויד טפלו/UCLA</td><td>לא זמין</td><td>100 &mu; M; עמילואיד זה שימש במאמר</td></tr><tr><td>A&beta; 1-42</td><td>Bachem</td><td>H-1368</td><td>ניתן להשתמש במקום עמילואיד ממעבדת Teplow</td></tr><tr><td>A&beta; <תת>1-42</תת></td><td>אמריקאי פפטיד</td><td>62-0-80B</td><td>יכול לשמש במקום עמילואיד ממעבדת Teplow</td></tr><tr><td>Scrambled A&beta; 1-42</td><td>American Peptide</td><td>62-0-46B</td><td>יכול לשמש כפפטיד בקרה להשוואת A&beta; 1-42</td></tr><tr><td>נוגדן NU4 (נוגדן עמילואיד אוליגומרי)</td><td>מתנה מוויליאם קליין/נורת'ווסטרן ארה"ב.</td><td>לא זמין</td><td>1:2,000 דילול</td></tr><tr><td>נוגדן אנטי עמילואיד אוליגומרי &nbsp; (ארנב רב-שבטי)</td><td>EMD Millipore</td><td>AB9234</td><td>עשוי לשמש במקום Nu4; צריך&nbsp; להיבדק על ידי משתמש הקצה</td></tr><tr><td>נוגדן 6E10 (עכבר חד שבטי) (נוגדן עמילואיד)</td> <td>Biolegend</td><td>sig-39320</td><td>1:1,000 דילול</td></tr><tr><td>נוגדן ChAT (עז פוליקלונלית)</td><td>Millipore</td><td>AB144P</td><td>1:100 דילול</td></tr><tr><td>DeadEnd מערכת TUNEL פלואורומטרית</td><td>Promega</td><td>G3250</td><td>עקוב אחר הוראות היצרן עבור השתמש</td></tr><tr><td>ב-Prolong Gold Antifade Reagent עם DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>P36935</td><td>השתמש בעת החלקת כיסוי שקופיות</td></tr><tr><td>פלואורוגולד</td><td>פלואורוכרום, LLC</td><td>לא זמין</td><td>2% תמיסה</td></tr><tr><td>אתנול מוחלט (200 הוכחה)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>להכנת 70% אתנול לחיטוי וחיטוי</td></tr><tr><td>Novex 10-20% טריצ'ין ג'ל</td><td>Life Technologies</td><td>EC6625BOX</td><td>להפרדת A&BETA; 1-42</td></tr><tr><td>Novex Tricine SDS Running Buffer (10X)</td> <td>Life Technologies</td><td>LC1675</td><td>להפעלת 10-20% ג'ל טריצ'ין</td></tr><tr><td>Novex Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)</td> <td>Life Technologies</td><td>LC3675</td><td>להעברת 10-20% ג'ל טריצ'ין</td></tr><tr><td>SuperSignal Western Blot Enhancer</td><td>Thermo Scientific</td><td>46640</td><td>לשיפור A&beta; אות 1-42; עקוב אחר פרוטוקול היצרן</td></tr><tr><td>Protran BA79 קרום ספיגת ניטרוצלולוזה, 0.1 &mu; m</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>10402088</td><td>להעברת 10-20% ג'ל טריצ'ין</td></tr><tr><td>Xcell SureLock Mini-Cell</td><td>Life Technologies</td><td>EI0001</td><td>Electrophoresis aparatus להפעלת 10-20% ג'ל טריצ'ין</td></tr><tr><td>ג'ל עיניים GenTeal Lubricant Eye</td><td>Gel Novartis</td><td>אינו זמין</td><td>לשמירה על לחות עיני העכבר במהלך הניתוח; ניתן למצוא בחנויות בתי המרקחת המקומיות &#160; </td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>Refresh Optive Lubricant Eye Drops</td><td>Allergan</td><td>אינו זמין</td><td>לשמירה על לחות עיני העכבר במהלך הניתוח; ניתן למצוא בחנויות בתי מרקחת מקומיות; ניתן להשתמש במקום GenTeal</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Stoelting</td><td>50998</td><td>לחיטוי וחיטוי</td></tr><tr><td>מרית עגולה/מחודדת&nbsp;</td><td>VWR</td><td>82027-490</td><td>לפתיחת פה</td></tr><tr><td>של בעלי חיים בולדוג סרפינס מהדקים (עמום הלסת 9X1.6 מ"מ; אורך 28 מ"מ)</td> <td>כלי מדע עדינים</td><td>18050-28</td><td>אופציונלי; לשמירה על עור הקרקפת מרוחק במהלך ההזרקה</td></tr><tr><td>מספריים עדינים ישרים (קצה חיתוך 25 מ"מ; אורך 11.5 ס"מ)</td> <td>כלי מדע עדינים</td><td>14060-11</td><td>לחיתוך קרקפת</td></tr> <tr><td>#3 ידית אזמל</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>#11 להב כירורגי</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>10011-00</td><td>לביצוע חתך בקרקפת</td></tr><tr><td>מלקחיים דפוס סטנדרטי לסטודנטים (קצה עמעם. 2.5x1.5 מ"מ; אורך 11.5 ס"מ)</td> <td>Fine Science Tools</td><td>91100-12</td><td>להחזקת קרקפת סגורה במהלך תפירה</td></tr><tr><td>ערכת גוזם משולבת</td><td>Kent Scientific</td><td>CL9990-1201</td><td>לגילוח שיער</td></tr><tr><td>T/Pump מחזור מים חמים&nbsp;</td><td>קנט סיינטיפיק&nbsp;</td><td>TP-700</td><td>להתחממות בעלי חיים במהלך ניתוח</td></tr><tr><td>כרית מלחמה ניתנת להפעלה (5 אינץ' x 10 אינץ')</td><td>קנט סיינטיפיק&nbsp;</td><td>TPZ-0510FEA</td><td>להצמדתו למחזור המים החמים T/Pump כדי לחמם את החיה במהלך הניתוח</td></tr><tr><td>מקדחה מיקרו אלחוטית</td><td></td><td>58610</td><td>השתמש בקוצי פלדה 0.8 מ"מ כדי לקדוח חורים במעבדת הגולגולת</td></tr><tr><td>מכשיר סטריאוטקסי סטנדרטי עם עכבר & מתאם עכברוש יילודים</td><td></td><td>51615</td><td></td></tr><tr><td>רק עבור עכבר סטריאוטקסי</td><td>מכשיר סטולינג</td><td>51730</td><td>יכול להשתמש בזה במקום סטולינג חתול. #51615</td></tr><tr><td>מזרק סטריאוטקסי מובהק</td><td></td><td>53311</td><td></td></tr><tr><td>מעקר חרוזי זכוכית יבשה</td><td></td><td>50287</td><td>לעיקור מכשירי נירוסטה</td></tr><tr><td>וילון כירורגי סטרילי (18 אינץ' x 26 אינץ')</td> <td>Stoelting</td><td>50981</td><td></td></tr><tr><td>מזרק המילטון 50 מ"ל, דגם 705 RN SYR, NDL</td><td>Hamilton Company</td><td>7637-01</td><td>להזרקת מוח; השתמש במזרקים שונים לתמיסות שונות</td></tr><tr><td>29 G Needle, Small Hub RN NDL</td><td>Hamilton Company</td><td>7803-06</td><td>לחיבור למזרק המילטון להזרקת מוח</td></tr><tr><td>1 מ"ל BD מזרקי טוברקולין</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td>למתן הרדמה ומי מלח</td></tr><tr><td>30 גרם מחט (0.5 אינץ')</td> <td>VWR</td><td>BD305106</td><td>למתן הרדמה ומי מלח</td></tr><tr><td>סולם סדרת CS אלקטרוני נייד (Ohaus)</td> <td>VWR</td><td>65500-202</td><td>לשקילת בעלי חיים לקביעת מינון הרדמה</td></tr><tr><td>פלטה חמה (צלחת עליונה עמעמת 7.25x7.25 אינץ')</td> <td>VWR</td><td>47751-148</td><td>לחימום בעלי חיים לאחר ניתוח</td></tr><tr><td>חיתוך תפר משי Sofsilk C-1 3/8, 12 מ"מ</td><td>Covidien</td><td>S1173</td><td>לסגירת</td></tr><tr><td>פצע דבק רקמות Vetbond (3M)</td> <td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-361931</td><td>אופציונלי: לסיוע בסגירת פצעים; יש להשתמש עם תפרים.</td></tr><tr><td>אפליקטורים סטריליים עם פיר עץ כותנה</td><td>פישר מדעי</td><td>22-029-488</td><td>לניקוי וייבוש פצע כירורגי</td></tr><tr><td>פישרברנד סופרפרוסט פלוס מיקרוסקופ שקופיות</td><td>פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>12-550-15</td><td>לאיסוף חלקי מוח</td></tr><tr><td>VWR מיקרו כיסוי זכוכית 24 X 50 מ"מ</td><td>VWR</td><td>48393241</td><td>להרכבת שקופיות מיקרוסקופ</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nalgene מזרק מסנן 0.2 &mu; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>194-2520</td><td>לעיקור תמיסת מלח</td></tr><tr><td>סמני עור סטריליים עם קצה כפול של Viscot</td><td>Medical Medline</td><td>VIS1422SRL91</td><td>לסימון קואורדינטות על הגולגולת</td></tr></tbody></table>

עירוי stereotaxic של oligomeric עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

מחלת אלצהיימר היא מחלה ניוונית של מערכת עצבים המשפיעה על הזדקנות האוכלוסייה. תכונת נוירו מפתח של המחלה היא ייצור היתר של עמילואיד-ביתא והתצהיר של לוחות עמילואיד-ביתא באזורים במוח של האנשים הנגועים. לאורך שנות מדענים יצרו מודלים עכבר מחלת אלצהיימר רבים המנסים לשכפל את הפתולוגיה עמילואיד-ביתא. למרבה הצער, המודלים העכבר רק באופן סלקטיבי לחקות את תכונות המחלה. מוות עצבי, השפעה בולטת במוחם של החולים במחלת האלצהיימר, חסר ניכר בעכברים אלו. לפיכך, אנו ואחרים מועסקים שיטה של ​​יציקת ישירות מינים מסיסים oligomeric של עמילואיד-ביתא - צורות של עמילואיד-ביתא שהוכחו כרעילים ביותר לתאי עצב - stereotaxically לתוך המוח. בדוח זה אנו מנצלים זכר C57BL / 6J לתעד טכניקה ניתוחית זו של הגדלת רמות עמילואיד-ביתא באזור במוח בחר.יעד עירוי הוא gyrus המשונן של ההיפוקמפוס בגלל מבנה המוח הזה, יחד עם המוח הקדמי הבסיסי שמחובר על ידי מעגל כולינרגית, מייצג את אחד מהאזורים של ניוון במחלה. התוצאות של הרמת עמילואיד-ביתא ברכס המשונן באמצעות עירוי stereotaxic לחשוף עלייה באובדן תא עצב ברכס המשונן בתוך השבוע 1, בעוד שיש עלייה במקביל במוות של תאים ואובדן תא עצב כולינרגית באיבר האנכי של הלהקה האלכסונית של ברוקה של המוח הקדמי הבסיסי. תופעות אלה נצפו עד 2 שבועות. הנתונים שלנו מצביעים על כך שמודל עירוי עמילואיד-ביתא הנוכחי מספק מודל עכבר חלופי לטיפול במות נוירון ספציפי אזור בבסיס לטווח קצר. היתרון של מודל זה הוא שעמילואיד-ביתא יכול להיות מורם באופן מרחב ובזמן.

השיטה הנוכחית של הכנת Aβ 1-42 oligomeric רקומביננטי האנושי מניבה מיני oligomeric מסיסים בהיקף של מונומרים, הדימרים, trimers, וtetramers (איור 1 א). מינים אלה נמוכים משקל מולקולרי Aβ 1-42, אבל לא את הסיבים ושלטים, הוכחו בהגדרות רבות להיות רעיל ביותר לתאי עצב 1,4,9,17-19. כדי לקבוע אם או לא oligomeric Aβ 1-42 גורם למוות תאי עצב במוח העכבר Aβ 1-42 (4 μl של 100 מיקרומטר פתרון מניות) היה החדיר לתוך DG של ההיפוקמפוס...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לעירוי מוח סטריאוטקסי ישיר של עמילואיד-בטא. מתודולוגיה זו מספקת מודל עכבר in vivo חלופי לטיפול בהשפעות קצרות הטווח של עמילואיד-בטא על נוירונים במוח.

עירוי stereotaxic של Oligomeric עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להזריק סטריאוטקסית של Liga meric a beta 1 42, לתוך הבליטה המשוננת של ההיפוקמפוס. זה מושג על ידי הכנת ליגה מריק תחילה, תמיסת בטא 1 42. השלב השני הוא קביעת קואורדינטות ההזרקה.לאחר מכן, בניתוח, חשפו את גולגולת החיה והכניסו בה שני חורים להחדרת מחט. השלב האחרון הוא להזיז את מחט המזרק למקומה הסופי ולהחדיר בטא 1 42. בסופו של דבר, שיטת ההזרקה Stereotaxic Abeta 1 42 משמשת לבחינת ההשפעות הרעילות של Abeta 1 42 בבעל חיים חי.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני דגמי עכברים טרנסגניים קיימים Abeta 42 הוא שניתן להעלות ALA 42 אוליגומרי בצורה מיוחדת וזמנית ולשחזר באופן אמין את פתולוגיית מוות התאים שחסרה במודלים של עכברים טרנסגניים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האלצהיימר, כגון כיצד תהליכים פתולוגיים מתפשטים במחלת אלצהיימר. כדי להתחיל בהליך זה, גלח את ראשו של עכבר מורדם כדי לחשוף את העור.לאחר מכן, הנח את העכבר על כרית חימום במסגרת סטריאוטקסית. לאחר מכן אבטח את החותכות שלו במגן השיניים וחתיכת אף על פני העכבר. לאחר מכן, מקם את מוטות האוזניים לתוך מוס השמיעה על מנת לאבטח את הראש לבדיקה.אם הראש מאובטח, לחץ עליו בעדינות וודא שהוא לא זז. לאחר מכן מרחו משחה על שתי העיניים כדי לשמור על הלחות. לאחר מכן, יש לחטא את אתר הניתוח על ידי מריחת בטדין על העור מעל הגולגולת, ואחריו 70% אתנול עם צמר גפן סטרילי.בצע את ניקוי הבטדין והאתנול לסירוגין פעמיים נוספות. כעת בצע חתך של שניים עד שלושה מילימטרים בקו האמצע של הקרקפת בעזרת אזמל. השתמש במספריים עדינים ישרים כדי להאריך את קו החתך לכ -1.0 סנטימטרים כדי לחשוף את התפר הסגיטלי bgma והלמבדה של הגולגולת.לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי לפרק את העור. נקו את הגולגולת בעזרת צמר גפן סטרילי, ספוג במי מלח סטריליים. לאחר מכן השתמש בצמר גפן נקי ויבש כדי לייבש את הגולגולת.לאחר מכן, סמן נקודה. ב-Bre ma מקם את מזרק המילטון באמצעות המניפולטור המיקרו כך שקצה המחט פשוט נוגע בנקודה על ה-bgma. לאחר מכן רשום את קואורדינטות ה-DV סמן נקודה בנקודת הלמבדה, וודא שציר ה-AP של הגולגולת מפולס על ידי הזזת המזרק לאחור לנקודת הלמבדה.קצה המחט צריך לגעת בנקודת הלמבדה כפי שנגע בנקודת הבגמה. לאחר מכן, רשום את מיקום ה- DV. קואורדינטות ה-DV עבור Bre, MA ו-Lambda צריכות להיות בטווח של 0.5 מילימטרים.כעת החזר את קצה המחט לנקודת ה-BMA. רשום את מיקום ה-AP ההתחלתי. לאחר מכן חשב את מיקום ה-AP הסופי על ידי הפחתת שני מילימטרים מה-AP ההתחלתי.תאם ומקם מחדש את מחט המזרק לקואורדינטת ה-AP הסופית. לאחר מכן, רשום את קואורדינטת ה-ML הנוכחית. חשב את קואורדינטות ה-ml הסופיות השמאלית והימנית על ידי הוספה או חיסור של 1.3 מילימטרים מה-ml ההתחלתי.תאם והעבר את מחט המזרק לקואורדינטות ה-ML הסופיות. גע בקצה המחט על פני הגולגולת בשתי קואורדינטות ה-ML הסופיות, וודא שקואורדינטות ה-DV נמצאות בטווח של 0.5 מילימטרים. בעוד שבסוף קואורדינטת המ"ל, משוך את המחט כלפי מעלה, 0.5 עד 1 סנטימטר מעל הגולגולת.סמן נקודה על הגולגולת עם טוש נקודתי דק במיוחד בצבע כהה. חזור על שלב זה עבור הצד הנגדי של הגולגולת. לאחר מכן הרחק את המזרק.קדחו חור במ"ל השמאלי או הימני. תיאמו על הגולגולת באמצעות מקדח 0.8 מילימטר. חזור על שלב זה עבור הצד הנגדי.לאחר מכן, העבר את המזרק לאחד החורים החדשים שהוצגו. הורידו את המחט ממש מעבר לגולגולת, והיזהרו לא לנקב את המוח כדי לוודא שהמחט עברה את הגולגולת. דחף בעדינות את המחט אל הגולגולת כדי לוודא שהמחט לא יוצאת מהחור.לאחר מכן, רשום את קואורדינטת ה-DV ההתחלתית. חשב את ה-dv המסיים. תיאום על ידי הפחתת 2.2 מילימטרים מה-DV ההתחלתי.קואורדינטות והורד את המחט ל-db הסופי.לאחר מכן הגדר את משאבת המזרק הסטריאוטקסית להחדיר ארבעה מיקרוליטרים של בטא 1 42 לתוך הבליטה המשוננת בקצב של 0.5 מיקרוליטר לדקה. לאחר העירוי, הניחו למחט להישאר במקומה למשך דקה נוספת כדי למזער את הזרימה החוזרת של התמיסה מאתר ההזרקה. לאחר מכן, הזיזו את המחט לצד השני של המוח וחזרו על ההליך.כעת, פתח את מוטות האוזניים. השתמש במלקחיים סטנדרטיים של תלמידים כדי לסגור את הקרקפת ולאטום את הפצע עם התפר. הסר את מגן האף והסר את העכבר.הזריק מיליליטר אחד של מי מלח סטריליים לעכבר באופן ראשוני להתייבשות והזריק בופרנורפין ב-0.1 מיליגרם לק"ג תת עורי לשיכוך כאבים. לאחר מכן, העבירו את העכבר לכלוב ריק ונקי הממוקם על גבי פלטה חמה של 42 מעלות צלזיוס עד שהוא מתעורר. לאחר מכן החזירו את העכבר לכלוב הדיור שלו עם שפע של מזון ומים.איור זה מראה עירוי של בטא 1 42 ורכב בפיתול המשוננים השמאלי והימני של עכבר בן תשעה חודשים. קווים שבורים מתארים את ההזרקה והחצים מראים את הבליטה המשוננת שהתמוטטה. תוך שבוע מהזרקת Abeta 1 42, הבליטה המשוננת הראתה רמות גבוהות של Abeta 1 42 בשכבה המולקולרית ובשכבת התאים הפולימורפית הקרובה לאתר ההזרקה לאחר שבעה ו-14 ימים.Abeta 1 42 עורר עלייה בצביעה חיובית במנהרה וירידה בעובי הבליטה המשוננת, מה שאישר את ההשפעות הניווניות של Abeta 1 42. כאן, עוקב אחר זהב פלואורו הוזרק יחד עם Abeta 1 42 לתוך הבליטה המשוננת. שבעה ימים לאחר ההזרקה, זוהה פלואורגולד במוח הקדמי הבסיסי, מה שמרמז על הובלה לאחור של התווית באמצעות נוירונים כולינרגיים.נוירונים חיוביים של פלואורגולד במוח הקדמי הבסיסי נבחרו לכימות. שבעה ימים לאחר ההזרקה, Abeta 1 42 עורר עליות במנהרה וירידה בצ'אט. נוירונים חיוביים במוח ארבעת הבסיסים לאחר שליטה בטכניקה זו ניתן לבצע תוך כ -30 דקות אם מבוצעת כראוי.בעקבות הליך זה, ניתן להשתמש בשיטות אחרות כדי לענות על שאלות נוספות כגון מחקרים על מנגנון מולקולרי כדי לטפל בהשפעה המכאניסטית של עירוי עמילואיד על המוח. אני רוצה להודות לך על הצפייה בסרטון שלנו ואני מקווה שהשיטה תהיה שימושית בניסויים שלך.

stereotaxic-infusion-oligomeric-amyloid-beta-into-mouse

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

תכונה אחת של מחלת אלצהיימר היא העלאת...

הכנת Oligomeric β עמילואיד 1-42 ו אינדוקציה של ירידת ערך הפלסטיות הסינפטית על Slices בהיפוקמפוס

סרטון זה מדגים טכניקה לעירוי מתמשך של נוגדנים ספציפיים לפפטיד עמילואיד-בטא (Aβ) לתוך ההיפוקמפוס של חולדה. המחקר משתמש בהשתלת מערכת צינורית דו-צדדית לעירוי מבוקר של נוגדנים ספציפיים לפפטיד Aβ יחד עם עירוי של אוליגומרים מסיסים מסוג Aβ (Aβo) לתוך היפוקמפוס החולדה כדי לחקור את יחסי הגומלין בין האוליגומרים לבין הנוגדנים.

עירוי מבוקר של נוגדנים ספציפיים לפפטידים Aβ ואוליגומרים Aβ לתוך היפוקמפוס החולדה

סרטון זה מדגים את העירוי הסטריאוטקסי המדויק של עמילואיד-בטא לתוך הפיתול המשונן כדי לבסס מודל עכברי של מחלת אלצהיימר. קביעת קואורדינטות מדויקת והעברה מבוקרת של חלבוני עמילואיד-בטא גורמים לפירוק עצבי, משבשים את עיבוד הזיכרון ותורמים להתפתחות מחלת אלצהיימר.

עירוי מוחי סטריאוטקסי ישיר של חלבוני עמילואיד-בטא עבור מודל מחלת אלצהיימר

מקור: Arango-Lievano, M. et. al., הדמיה אורכית in vivo של כלי הדם במוח: רלוונטיות למחלות מערכת העצבים המרכזית. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הדמיה דו-פוטונית in vivo כדי להמחיש פלאק עמילואיד וכלי דם מוחיים עם תווית פלואורסצנטית. פלואורסצנציה כחולה מסמנת פלאק, בעוד פלואורסצנציה ירוקה מדגישה את כלי הדם במוח. מפה תלת מימדית של אזור העניין והדמיית פסיפס ברזולוציה גבוהה חושפות אינטראקציות מפורטות של פלאק עמילואיד עם כלי מוח.

הדמיה in vivo של כלי מוח ופלאק עמילואיד במודל עכבר של מחלת אלצהיימר

מקור: Slezia, A. et al. אספקה אלקטרופורטית של חומצה γ-אמינו-בוטירית (GABA) למוקד אפילפטי מונעת התקפים בעכברים. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את האספקה האלקטרופורטית של חומצה גמא-אמינו-בוטירית (GABA) כדי לעכב את פעילות ההתקפים בעכבר מורדם. הוא מתאר את השלבים הכרוכים בהשתלת בדיקה, רישום פעילות עצבית, השראת התקפים והעברת GABA מבוקרת באמצעות משאבת יונים מיקרופלואידית כדי להעריך את יעילותה הטיפולית.

אספקה אלקטרופורטית של GABA למוקד אפילפטי של עכבר מורדם

יש מיקרו RNA תפקידים משמעותיים במבנה המוח ותפקודו. כאן אנו מתארים שיטה לאכיפת מירנה היפוקמפוס יתר ביטוי באמצעות הזרקת stereotactic של lentivirus מירנה מביע מהונדס. גישה זו יכולה לשמש כדרך מהירה יחסית על מנת להעריך...

Lentiviruses הזרקת Stereotactic של microRNA-לבטא באזור CA1 היפוקמפוס העכבר והערכה של תוצאות ההתנהגות

העמילואיד-β (Aβ) -injected במודל חיה מאפשרת לממשל של כמות לבין מינים מוגדרים של שברי Aβ ומפחית הבדלים אינדיבידואליים בתוך כל קבוצת לימוד. פרוטוקול זה מתאר את intracerebroventricular (ICV) הזרקה של Aβ ללא מכשירים stereotactic, המאפשרת הפקה של ליקויים התנהגותיים אלצהיימר דמויי בעכברים נורמליים.

הזרקת intracerebroventricular של פפטידים עמילואיד-β בעכברים נורמליים כדי לגרום בחריפות גירעונות אלצהיימר דמוי קוגניטיבית

מאמר זה ממחיש כיצד ניתן לכמת את הביטוי של קולטני נוירוטרנסמיטורים ולנתח את הדפוס בסינפסות עם אלמנטים קדם-סינפטיים ופוסט-סינפטיים מזוהים באמצעות שילוב של התמרה ויראלית של כלים אופטוגנטיים וטכניקת תיוג חיסוני העתק הקפאה-שבר.

בשילוב optogenetic ולהקפיא-שבר Replica immunolabeling לבחינת הסדר ספציפי קלט של גלוטמט הקולטנים עכבר האמיגדלה

כדי לחקור את ההשפעות של Aβo in vivo, פיתחנו מודל המבוסס על עירויים חוזרים ונשנים של Aβo מסיס בהיפוקמפוס יחד עם עירוי רציף של נוגדן Aβo (6E10) בהיפוקמפוס באמצעות משאבות אוסמוטיות כדי לנטרל את ההשפעה הנוירוטוקסית של Aβo.

מוחיים במודל חיה של עמילואיד-ביתא כרונית oligomer העירוי נוטרלה על ידי נוגדן טיפול חדורי משאבות אוסמוטי

בניתוח הישרדות ברחם אצל עכברים מאפשר מניפולציה המולקולרי של ביטוי גנים במהלך ההתפתחות. כאן אנו מתארים את השימוש בתדר גבוה הדמיה אולטרסאונד כדי להנחות את הזריקה של וקטורים retroviral לתוך המוח העכבר ביום עובריים (E) 9.5.

אולטרסאונד מונחה Microinjection לתוך forebrain העכבר בתוך הרחם ב E9.5

למד שיטת עירוי סטריאוטקטי של אוליגומרי עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר. פרוטוקול זה מאפשר חקר השפעות רעילות קצרות-טווח על נוירונים ומספק מודל חלופי לחקר מחלות ניווניות במוח.

עירוי stereotaxic של Oligomeric עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר

גלה סרטונים נוספים