Name: פקקת עכבר דגם על עורק ראשי וכלי לפדר מושרה כלוריד Ferric (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: למדו שיטה ליצירת פקקת בכלי דם בעכברים באמצעות פקקת כלוריד Ferric. השיטה כוללת מיקרוסקופיה תוך-חייתית ומדידת זרימת דם בדופלר לניטור תהליכי היווצרות הפקקת בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מבקשים להודות תמיכה טכנית מג&#39;וי יאו וד&quot;ר קארן Alt, כמו גם מימון מNHMRC וNHF.

כל הניסויים מעורבים בעלי חיים אושרו על ידי המחקר הרפואי אלפרד והוועדה חינוך של קריית בעלי החיים אתיקה (E / 1534/2015 / ב &#39;). כל המניפולציות כירורגית בוצעו בהרדמה מלאה והבעלים החיים לא חוו כאב בכל שלב. כל הניסויים המתוארים הנן ללא התאוששות. 1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך רצועות דקות של נייר סינון (1 מ&quot;מ x 2 מ&quot;מ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרי להכין 2 פתרונות של כלוריד Ferric של 4% (w / v) ו -6% (w / v) מדולל למים ללא יונים. הכן פתרון 6G rhodamine 0.3% ב- PBS, מסונן דרך 0.22 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכי חתיכה קטנה (5 מ&quot;מ x 1 סנטימטר) מהפלסטיק הלבן של עטיפת מזרק. </li></ol> 2. גיבוש לפדר עורקיק פקיק נצפה על ידי מיקרוסקופית Intravital <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל 10-12 שבועות גבר בן C57Bl / 6 עכבר סוג בר ולהרדים בהתאם בתערובת של קטמין (100 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (10 מ&quot;ג / קילוגרם) למרות שזריקת intraperitoneal. צג עומק ההרדמה על ידי תגובה לבוהן, זנב ו / או קמצוץ עור, תגובתיות מקמצוץ של קרנית וpalpebral, והיעדר תנועת שפם. במידת צורך, להזריק מנה שנייה של קטמין (50 מ&quot;ג / קילוגרם) כדי לשמור על הרדמה של בעלי החיים. החל משחה וטרינר בעיניים כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. מניחים את העכבר בצלחת פטרי קטנה מונחת על כרית חימום המותאמת עד 37 מעלות צלזיוס. הערה: למרות הזרקת IP עלולה לגרום לכאב לבעלי החיים, את משך הזמן של חוסר נוחות זה יהיה (פחות מ -3 שניות) מינימליות. כאב ואי נוחות כרוכה בזריקות יהיו ממוזערות באמצעות כוח אדם מנוסה ומוסמך וגודל מתאים מחט (25 G). בעקבות כל הנהלים, להרדים את כל בעלי החיים באמצעות מנת יתר של קטמין ו xylazine אחריו נקע בצוואר רחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע חתך קו האמצע בטן של כ 3 סנטימטר בעור ולחתוך את הצפק בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכבר בצד של חיית המחמדצלחת רי, בעדינות exteriorize המעיים שלה והתפשט בזהירות לפדר עם 2 ניצני כותנה להביא כלי מתאים לפני השטח של צלחת פטרי. ייבש היטב עם מגב עדין. הערה: כדי להגביל את תנועתם של כלי mesenteric, papaverine ניתן להשתמש כדי לעכב תנועה פריסטלטית מעיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים את הזנב של העכבר במים חמים כדי להרחיב את כלי להזריק 30 μl של Rhodamine 6G (0.3%) לוריד הזנב של העכבר עם מזרק 29 G לתייג לויקוציטים וטסיות דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את צלחת פטרי תחת מיקרוסקופ הפוכה ולהתמקד בעורקיק נבחר באמצעות ערוץ השדה הבהיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים להקה של נייר סינון עם 6% (w נ /) ברזל כלוריד (III) ולהחיל את נייר הסינון על עורקיק עם שני מלקחיים; הראשון להחזיק את נייר הסינון, השני אחת ללחץ אותו בעדינות על השטח של עניין. שים לב היווצרות קריש דם בראשון 10 שניות הבאות בתצהיר של נייר הסינון. הערה: זה די commעל לפגוע בנימי הדם זעירה המוקפת והדיוק של התצהיר של נייר הסינון והלחץ בעדינות לכן חשוב להגביל את הנושא הזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב היווצרות קרישי דם על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי (ערוץ TRITC: עירור שיא 557 ננומטר, ננומטר פליטת 576 שיא), דרך נייר הסינון. שימו לב לויקוציטים במחזור וטסיות דם שנלקחו 6G Rhodamine וצבירתם לפקיק לכן קל לזהות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את נייר סינון מלאחר 1 דקות של חשיפה לברזל כלוריד (III) ותמשיך לעקוב אחר ההיווצרות של קרישי הדם. לשטוף את הכלי עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתבונן ולהקליט את היצירה הדינמית של פקיק מודגש עם התיוג של טסיות דם וכדוריות דם לבנות עם 6G Rhodamine. ללכוד התמונות ולמדוד את הגודל של פקיק. תמונות במסמך שהוצג התקבלו עם מיקרוסקופ intravital הפוך, אם כי 4X אובייקטיבי, בערוץ הקרינה TRITC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Following את כל ההליכים, להרדימו באמצעות מנת יתר של קטמין ו xylazine אחריו נקע בצוואר רחם. </li></ol> היווצרות פקיק עורקי התרדמה 3. הוערכה על ידי מדידת מהירות זרימת דם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל 10-12 שבועות גבר בן C57Bl / 6 עכבר ולהרדים בהתאם בתערובת של קטמין (100 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (10 מ&quot;ג / קילוגרם) למרות שזריקת intraperitoneal. החל משחה וטרינר בעיניים כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את העכבר תחת מיקרוסקופ הפעלה באמצעות סרט דביק על רגליים, על כרית חימום המותאמת עד 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך כרית קטנה ממגב אחד והדבק אותה מתחת לראש של העכבר כדי לרומם את הראש מעט. השתמש לולאת חוט עם מלקחיים לניתץ החוטם (להשתמש שיניים העליונות). זה יחשוף את האזור של עורק התרדמה לגישה קלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע חתך עמוק 5 מ&quot;מ קטן של העור ישירות מתחת ללסת, עד לעצם החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את הפאScia ולבודד בר או עורק תרדמה משותפת שמאל או ימין מעל הסתעפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג בזהירות פינצטה ב- בין העורק והעצב להפריד ביניהם. נא לא להפריע העצב פועל קרוב לעורק והימנע מלגעת יותר מדי של עורק התרדמה או כך גורם נזק לכלי השיט. לבודד את החלק של 5 מ&quot;מ לפחות של העורק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבש את האזור של העורק כראוי עם מגבים כדי למנוע את זה בכל נוזל מפריע לFeCl 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את חתיכת הפלסטיק הלבנה הקטנה מתחת לחלק המבודד של הראש הנפוץ כל כך 3 FeCl לא לספוג ברקמות הסובבות. לשם כך, השתמש במלקחיים שני להביא פיסה לראשונה ואז לאט לאט להחליק את נייר הפלסטיק מתחת לעורק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים פיסת נייר סינון עם 4% (w / v) או 6% (w / v) כלוריד Ferric ולמקם אותו בכל רחבי העורק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 3 דקות חשיפה, תוריד את נייר הסינון, לשטוף עם PBS ולייבש את האזור wמגבי ה- i. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את זרימת דופלר הבדיקה סביב האונייה באזור הפגוע ולהתחיל להקליט את השינויים בזרימה. בתרדמה המשותפת הבריא של עכברים בוגרים, הזרימה היא בדרך כלל סביב 1 מיליליטר / דקה. זהירות! קשר של החללית עם כלוריד Ferric יפגע בדיקה לכן יש להימנע מכל מגע. הנתונים במסמך זה מוצג התקבלו עם מטר Transonic מערכת בע&quot;מ זרימה, מודול perivascular TS420 מצויד בזרימת בדיקה דופלר ננו 0.5 PBS. הערה: הריכוז של כלוריד Ferric יכול לשנות את קינטיקה של היווצרות קרישי דם וכתוצאה מכך פעמים חסימה שונות. לפיכך, חשיפה ל6% (w / v) כלוריד Ferric נותן חסימה מהר יותר מאשר חשיפה ל4% (w / v) כלוריד Ferric. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות כל הנהלים, להרדים את כל בעלי החיים באמצעות מנת יתר של קטמין ו xylazine אחריו נקע בצוואר רחם ולנקות את הבדיקה דופלר בזהירות. </li></ol>

<ol><li>Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+in+vivo+models+of+thrombosis+to+the+discovery+and+development+of+novel+antithrombotic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).</li>
<li>Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+animal+models+in+the+preclinical+study+of+interventions+to+prevent+human+coronary+artery+restenosis%3A+analysis+and+recommendations.+On+behalf+of+the+Subcommittee+on+Animal%2C+Cellular+and+Molecular+Models+of+Thrombosis+and+Haemostasis+of+the+Scientific+and+Standardization+Committee+of+the+International+Society+on+Thrombosis+and+Haemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis.</a> Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).</li>
<li>Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+thrombosis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Murine thrombosis models.</a> Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).</li>
<li>Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+thrombus+formation+in+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo thrombus formation in murine models.</a> Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).</li>
<li>Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of thrombus formation.</a> N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+thrombosis+in+a+mouse+model+by+IgG%2C+IgM+and+IgA+immunoglobulins+from+patients+with+the+antiphospholipid+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome.</a> Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).</li>
<li>Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+endothelial+injury+in+the+mouse+as+a+screening+model+for+inhibitors+of+vascular+intimal+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).</li>
<li>Rosen, E. D., Raymond, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+noninvasive+vascular+injury+models+in+mice+generate+platelet-+and+coagulation-dependent+thrombi%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi.</a> Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).</li>
<li>Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+arterial+thrombosis+induced+by+ferric+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride.</a> Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).</li>
<li>Eckly, A., Hechler, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+FeCl3-induced+arterial+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).</li>
<li>Darbousset, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+neutrophils+in+thrombus+formation+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol+Biol+%28Paris%29%22%5BJournal%5D)">Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice.</a> Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).</li>
<li>Denis, C., Methia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+severe+von+Willebrand+disease%3A+defects+in+hemostasis+and+thrombosis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis).</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).</li>
<li>Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+single-chain+antibody-targeted+microbubbles+for+molecular+ultrasound+imaging+of+thrombosis%3A+validation+of+a+unique+noninvasive+method+for+rapid+and+sensitive+detection+of+thrombi+and+monitoring+of+success+or+failure+of+thrombolysis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice.</a> Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).</li>
<li>Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+ferric+chloride-induced+vena+cava+thrombosis%3A+evidence+for+effect+of+potato+carboxypeptidase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor.</a> J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).</li>
<li>Karatas, H., Erdener, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombotic+distal+middle+cerebral+artery+occlusion+produced+by+topical+FeCl%283%29+application%3A+a+novel+model+suitable+for+intravital+microscopy+and+thrombolysis+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).</li>
<li>Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+blockade+or+mutation+of+the+fibrinogen+gamma-chain+C-terminus+is+more+effective+in+inhibiting+murine+arterial+thrombus+formation+than+complete+absence+of+fibrinogen%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen.</a> Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).</li>
<li>Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoprotein+VI-dependent+and+-independent+pathways+of+thrombus+formation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo.</a> Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).</li>
<li>Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+to+characterize+the+antithrombotic+effect+of+molecules+targeting+human+von+Willebrand+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor.</a> Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).</li>
<li>Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutation+and+ADAMTS13-dependent+modulation+of+disease+severity+in+a+mouse+model+for+von+Willebrand+disease+type+2B%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B.</a> Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).</li>
<li>Lamrani, L., Lacout, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemostatic+disorders+in+a+JAK2V617F-driven+mouse+model+of+myeloproliferative+neoplasm%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm.</a> Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., Ye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+platelet+activation+and+thrombosis+in+transgenic+mice+expressing+constitutively+active+P2Y12%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12.</a> J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).</li>
<li>Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+mechanisms+of+increased+luminal+stenosis+after+arterial+injury+in+mice+deficient+for+urokinase-+or+tissue-type+plasminogen+activator%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator.</a> Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).</li>
<li>Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+effective+and+safe+thrombolysis+and+thromboprophylaxis%3A+preclinical+testing+of+a+novel+antibody-targeted+recombinant+plasminogen+activator+directed+against+activated+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets.</a> Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).</li>
<li>Decrem, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ir-CPI%2C+a+coagulation+contact+phase+inhibitor+from+the+tick+Ixodes+ricinus%2C+inhibits+thrombus+formation+without+impairing+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis.</a> J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).</li>
<li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desmolaris%2C+a+novel+factor+XIa+anticoagulant+from+the+salivary+gland+of+the+vampire+bat+%28Desmodus+rotundus%29+inhibits+inflammation+and+thrombosis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo.</a> Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).</li>
<li>Lei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anfibatide%2C+a+novel+GPIb+complex+antagonist%2C+inhibits+platelet+adhesion+and+thrombus+formation+in+vitro+and+in+vivo+in+murine+models+of+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis.</a> Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).</li>
<li>Waisberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+infection+induces+expression+of+a+mosquito+salivary+protein+%28Agaphelin%29+that+targets+neutrophil+function+and+inhibits+thrombosis+without+impairing+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis.</a> PLoS Pathog. 10 (9), e1004338(2014).</li>
<li>Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+standardization+of+the+murine+ferric+chloride-induced+carotid+arterial+thrombosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model.</a> J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).</li>
<li>Wang, X., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+murine+model+of+ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+for+thrombosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research.</a> Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).</li>
<li>Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transendothelial+migration+of+ferric+ion+in+FeCl3+injured+murine+common+carotid+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery.</a> Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).</li>
<li>Bonnard, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+mimetic+polysaccharide+microparticles+tracked+in+vivo+on+activated+endothelium+and+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm.</a> Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).</li>
<li>Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+dorsal+skinfold+chamber+as+a+model+for+the+study+of+thrombolysis+by+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy.</a> Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).</li>
<li>Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasminogen+activator+inhibitor-1+and+its+cofactor+vitronectin+stabilize+arterial+thrombi+after+vascular+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice.</a> Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).</li>
<li>Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+murine+carotid+arterial+injury%3A+A+model+of+redox+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology.</a> Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

המודל פקקת כלוריד מושרה הברזל הוא כלי מחקר מעולה. כפי שניתן לראות במחקר זה, זה מאוד קל ליישום וכאשר משתמש בו בשילוב עם מיקרוסקופיה intravital או flowmeter דופלר, הוא מספק ניטור בזמן אמת טוב של היווצרות קריש דם. התאמת חשיפת הזמן והריכוז של FeCl 3, היא מציעה גם את האפשרות לייצר thrombi או שאינו אוטם או אוטם. עם זאת, שיטה זו יש גם כמה מגבלות. בעורק התרדמה, החסרון העיקרי הוא שלמרות יעילות ניתן לשנות את זמן...

המחקר של המנגנונים מעורבים בהתפתחות פקקת וההערכה האפקטיביות של תרופות אנטי-טרומבוטיים דורש מבוסס היטב מודלים של בעלי חיים ניסיוניים. המודלים של בעלי חיים גדולים היו הראשון שהשתמש בכפי שהם מספקים כלי גדול יותר דומה לבני אדם מאשר מכרסמים 1. עם זאת, עלות גבוהה, המתקנים הגדולים יותר הנדרשים והקושי בלתמרן אותם מבחינה גנטית חסרונות עיקריים לשימוש בם ובעלי חיים גדולים כיום מוגבלים למחקרים פרה-קליניים מאוחר פעם אחת בדיקות ראשוניות על מכרסמים נתנו תוצאות חד משמעיות 2. עם זמינות רחבה של זנים מהונדסים ונוקאאוט וגודלם הקטן שממזער את כמות התרופות נוגדות נדרשות לבדיקת in vivo, עכברים משמשים בעיקר למחקר פקקת. לכן, מספר דגמים של הפרעות טרומבוטיים פותחו בעכברים 3. מודלים פקקת הוקמו רבים לשבש את intimשכבה של קיר הכלי, ואחריו את החשיפה של מטריקס אנדותל המשנה לזרימת הדם וגורמת להיווצרות של קרישי דם 4. Thrombi יכול לנבוע מהחשיפה של קולגן אשר מפעילה הפעלת טסיות דם ו / או מהחשיפה של גורם רקמות אשר מפעילה את מפל הקרישה 5. כמה טכניקות אז מועסקות להשיג פגיעת הכלי הראשונית. פייראנג&#39;לי et al. פיתחה מודל הפרעה מכאני עם כלי מייקרו על וריד הירך 6. Kikushi et al. תאר מודל אשר מורכב בממשל של מתחם תגובתי תמונה (רוז בנגל) שמצטבר בbilayer השומנים של תאי האנדותל ואחרי העירור הספציפי של קיר הכלי של עניין עם אור הירוק (540 ננומטר) 7. הפגיעה יכולה גם להיגרם על ידי תאורת לייזר דופק קצרה בעוצמה גבוהה 8. טכניקה נוספת שהוקמה בראשית העורק הראשי של חולדותמורכב ביישום המקומי של כלוריד Ferric (FeCl 3) 9. במקרה זה, את תוצאות denudation כלי מפני רדיקלים חופשיים הנוצרים על ידי FeCl 3 שגורמת חמצון של שומנים והרס של תאי האנדותל 10. הפציעה גורמת ביטוי של מספר מולקולות הידבקות מפעילות הידבקות טסיות דם וצבירה, כמו גם גיוס לויקוציטים. הוכח כי כדוריות דם לבנות, במיוחד נויטרופילים, לשחק תפקיד מכריע בהפעלה של מפל קרישת דם המוביל אל פקקת 11. שיטה זו מתאימה גם לשחזר את מפל הקרישה; חוקרים חייבים לזכור כי, במודל עכבר זה, פקקת מושרה בדרך כלל בכלי בריאים ואילו פקקת בבני האדם מתרחש בעיקר בלמשל חולה. כלי טרשת עורקים. כמודל זה הוא פשוט מאוד ליישום, והוא גם יעיל בעכברים, שהוא עכשיו המצב פקקת משמש בעיקרl לבעלי חיים קטנים במחקרי vivo. בנוסף, טכניקה זו מציעה את האפשרות לגרום להיווצרות thrombi במגוון רחב של כלים. כלי יעד יכולים להיות עורקים או ורידים בקוטר גדול (תרדמה, וריד הירך, נבוב) או בקוטר קטן (לפדר, Cremaster) 12-14. לאחרונה, זה היה בשימוש גם בעורק המוח האמצעי הפרוקסימלי לפתח מודל של שבץ 15. ההיווצרות פקקת אפשר לראות ישירות על ידי מיקרוסקופ intravital לאחר תיוג הניאון של טסיות דם וכדוריות דם לבנות או פיקוח על ידי מדידת זרימת דם הירידה בבדיקת טמפרטורה או 12,16,17 בדיקה דופלר. מספר פרמטרים כגון זמן חסימה, זמן היווצרות קריש דם או גודל פקיק יכולים אז להיחקר. ההבדלים הפיסיולוגיים בין כלי חקרו תוצאה בוריאציות משמעותיות בthrombi הושג. לכן, חוקרים בדרך כלל לבחור את כלי היעד על פי הפרמטרים שהם רוצים measuמחדש ו / או המחלה הגדרה שהם רוצים לחקור. בדרך כלל, המודל על העורק הראשי הוא רלוונטי יותר עבור מחקר על atherothrombosis הקשורים לאוטם שריר לב או שבץ ואילו מחקרים על הווריד הנבוב רלוונטיים יותר עבור מחקר על פקקת ורידים עמוקים. הנגישות של כלי השונים גם קובעת את השיטה המשמשת למדידת צמיחת פקיק. לדוגמא, כלי mesenteric קלים לגשת עושה מודל זה גם מתאים לתצפית מיקרוסקופית intravital והמחקר של הדינמיקה של היווצרות קריש דם. עורק התרדמה הוא פחות נגיש אבל גדול יותר מדידות זרימת דם ומאפשרים ומספק מודל מצוין ללמוד פקקת אוטם. המודל פקקת מושרה כלוריד Ferric סיפק התקדמות אדירה בהבנת הפתולוגיה זה. זה כבר נעשה שימוש במחקרים רבים המתמקדים בתפקיד של גורם פון Willebrand בהיווצרות פקקת 18,19. בשילוב עם מודי גנטייםטכניקות שינוי מקום, זה אפשר זיהוי של גן ספציפי רב המעורב בהפרעות טרומבוטיים. Lamrani et al. למשל הראה כי נוק-בגן JAK2 V617F קשור היווצרות מואצת של קריש יציב 20. ג&#39;אנג et al. חקרו את המשמעות הפיזיולוגית של הקולטן טסיות דם P2Y12 והוכיח כי עכברים הטרנסגניים ביתר במיוחד קולטן זה בטסיות דם בלבד, מוצגים במערך פקיק יותר מהיר ויציב בעורק mesenteric נפצע עם FeCl 3 21. התפקיד המכריע של activator plasminogen רקמות מהסוג (tPA) וactivator האוריקינאז הסוג plasminogen (UPA) בתהליך פירוק הפיברין גם נחקר בשיטה זו 22. יתר על כן מודל זה גם מספק דרך פשוטה ומדויקת של בדיקת יכולות Fibrinolytic של תרופות רבות רומן in vivo. לדוגמא, וואנג ואח &#39;. השתמש במודל זה עבור האימות פרה דואר של activator plasminogen רקומביננטי רומן הממוקד נגד טסיות הופעלו 23. שיטה זו אפשרה גם את האימות של חלבונים טיפוליים מבודדים מהרוק של קרציות, עטלפי ערפד, ויתושים או מהארס של נחשים עם זיהוי ספציפי של היעד 24-27. דוגמאות אלה ממחישות את הרבגוניות של מודל כלוריד Ferric. במאמר זה, נתמקד בשתי שיטות וללמוד פקקת ברזל כלוריד מושרה בשני סוג כלי שונה; כלי mesenteric ועורק הראשי.

<table><tbody><tr><td>נייר כרומטוגרפיה</td><td>Whatman GE Healthcare</td><td>3030917</td><td></td></tr><tr><td>ברזל (III) כלוריד 40% (w/v)</td><td>VWR</td><td>24212.298</td><td></td></tr><tr><td>רודמין 6G</td><td>Sigma</td><td>R4127</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>IX81</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה דיגיטלית בשחור-לבן&nbsp;</td><td>אולימפוס</td><td>XM10</td><td></td></tr><tr><td>מד זרימה דופלר</td><td>טרנסוניק</td><td>TS420</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת זרימה ננו-דופלר</td><td>טרנסוניק</td><td>0.5 PBS</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>הוספירה&nbsp;</td><td>0409-2051-05</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין (רמפון)</td><td>באייר</td><td>75313&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי</td><td>Sarstedt</td><td>82.1472</td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין (29 גרם)</td>BD אפליקטורים <td>עדינים במיוחד</td><td>326103</td><td></td></tr><tr><td>כותנה</td><td>BSN רפואי</td><td>211827A</td><td></td></tr><tr><td>Dynek dysilk תפרים</td><td>Dynek Pty Ltd</td><td>CS30100</td><td></td></tr> מלח <tr><td>מאגר פוספט של Dulbecco (PBS)</td><td>Gibco life technologies</td><td>21600-069</td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>קירשנר</td><td>T60</td><td></td></tr></tbody></table>

פקקת עכבר דגם על עורק ראשי וכלי לפדר מושרה כלוריד ferric

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

פקקת חמורה והשלכותיה האיסכמיות כגון אוטם שריר הלב, תסחיף ריאתי ושבץ מוחי הן בעיות בריאות עולמיות גדולות. פגיעת כלוריד ברזל היא כיום טכניקה מבוססת היטב לגרימת היווצרות פקקת במהירות ובדייקנות בוורידים חשופים או בעורק בקוטר קטן וגדול. מודל זה מילא תפקיד מפתח בחקר הפתופיזיולוגיה של פקקת, בגילוי ותיקוף של תרופות אנטי-טרומבוטיות חדשות ובהבנת מנגנון הפעולה של חומרים חדשים אלה. כאן מוצג היישום של טכניקה זו על כלי מזנטרי ועורק צוואר בעכברים. השיטה מתארת כיצד לסמן לויקוציטים וטסיות דם במחזור בצבע פלואורסצנטי ולהתבונן, במיקרוסקופיה תוך-חיונית על המזנטריה החשופה, בהצטברותם בדופן כלי הדם הפגוע המובילה להיווצרות פקקת. בעורק הצוואר, החסימה הנגרמת מהיווצרות הקריש נמדדת על ידי ניטור זרימת הדם באמצעות בדיקת דופלר.

תצפית הניאון המיקרוסקופית Intravital של לפדר תגלה ההצטברות של Rhodamine 6G כותרת טסיות דם וכדוריות דם לבנות לאורך קיר הכלי נפגע FeCl 3. ההיווצרות ההדרגתית של פקיק חלקי מנוטרת בכלי 200 מיקרומטר לפדר (איור 1). פקיק מופיע לאט וברור לזיהוי אחרי דקות הראשונות של חשיפה לFeCl 3 (איור 1, t = 60 שניות). 40 שניות לאחר הסרת נייר הסינון ספוג עם FeCl 3, פקקת במהירות התקדמות וסוף סוף נוכחי על הקיר של כל סעיף הכלי נצפה (א...

מודל הפקקת המושרה FeCl3 בעכברים מתואר כאן. מוצגת שיטה לניטור צמיחת פקקת על ידי תצפית מיקרוסקופיה תוך-חיונית על כלי מזנטרי ועל ידי מדידת זרימת דם בעורק הצוואר.

פקקת עכבר דגם על עורק ראשי וכלי לפדר מושרה כלוריד Ferric

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לנטר היווצרות של תרומבוזה מושרית בכלי דם חשוף של עכבר. הדבר מבוצע תחילה על ידי חשיפת כלי הדם הרלוונטי. לאחר מכן, מניחים על כלי הדם פיסה קטנה של נייר סינון ספוג ב-ferric chloride כדי להשרות את התסביב (thrombus) בכלי הדם המזנטרי.הצטברות התאים היוצקים את הקריש מנוטרת באמצעות מיקרוסקופיה בתוך המבחנה על העורק הגרוני. השינויים בזרימת הדם המושרים על ידי הקריש נמדדים באמצעות מד זרימה דופלר. השימוש בכלוריד להשראת תרומבוזה בעורק ה-CED של חולדות נקבע לראשונה בשנת 1990 על ידי פרופסור Coz ועמיתיו.מאז הותאם המודל לעכברים והוא שימש למחקר של כלי דם רבים ושונים. שיטה זו היא כיום מודל התרומבוזה הנפוץ ביותר בתחום המחקר שלנו, והיא סייעה במתן תשובות לשאלות מפתח, כגון הגורמים הפגיעים של דופן כלי הדם ותפקידו של קולטן ה-P2Y12 בטבקיות בהיווצרות תרומבוס. לפני תחילת הפרוצדורה, גזרו רצועות נייר סינון בגודל 1x2 מילימטר וחתיכה קטנה של פלסטיק לבן בגודל 3x5 מילימטר מעטפת של מזרק.בשלב הבא, לאחר אישור היעדר תגובה לצביטה, מרחו פומדת וטרינרית בעיניו של כל אחד מהבעלי החיים. לאחר מכן, כדי להשרות קריש בעורק המזנטרי, הניחו את העכבר בתוך צלחת פטרי קטנה על משטח חימום בטמפרטורה של 37 °C ופתחו את הבטן באמצעות חתך של 3 cm, ולאחריו חיתוך זהיר של הפריטונאום. מקמו את העכבר בצד של צלחת הפטרי והוציא

ferric-chloride-induced-thrombosis-mouse-model-on-carotid-artery

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מדווחים הליך מעודן של כלוריד Ferric (FeCl 3) מודלים פקקת -induced על העורק הראשי ואת mesenteric וכן וריד, מאופיין באמצעות מיקרוסקופ intravital ביעילות לפקח הזמן Occlusive היווצרות thrombi.

מי כלוריד-induced Ferric מודלים פקקת Murine

כאן, אנו מציגים את השינויים הנחוצים למודל מאופיין היטב ונמצאים בשימוש נפוץ קטנים בעלי חיים הברזל ותחמוצת כלוריד-induced (FeCl3) העורק פציעה לשימוש במודל גדול פגיעה בכלי הדם בבעלי חיים. המודל המתקבל יכול להיות מנוצל עבור ניסויים פרה-קליניים משפט הערכה של התערבויות תרופתי ועל מכניים מניעתי והן thrombolytic.

פקקת הברזל ותחמוצת כלוריד-induced הכלבי העורק הראשי: דגם בעל חיים גדול של פגיעה בכלי הדם

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתמש בפציעה בתיווך FeCl3 כדי לגרום לפקקת עורקים, וכיצד לאסוף ולהכין דגימות פגיעה עורקית בשלבים שונים של פקקת לצורך ניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים.

פקקת עורקים המושרה על ידי ברזל כלוריד ואיסוף דגימות לניתוח מיקרוסקופ אלקטרונים תלת ממדי

זה מתאר ניתוח חלקי קשירת הראש, מה שגורם תנאי הזרימה מופרע והתפתחות טרשת עורקים הבאות (בעוד שבועיים) עם כלי דם, ניאו intraplaque (ארבעה שבועות) בעורק התרדמה המשותף העכבר. כמו כן, אנו מתארים שיטה חדשה של בידוד RNA מן התרדמה אינטימה, מתן RNA הטוהר גבוהה האנדותל.

המודל של טרשת עורקים Flow-induced מופרע על העורק הראשי עכבר ידי קשירת חלקי שיטה פשוטה של ​​בידוד RNA מן התרדמה האנדותל

המודל להשלים עכבר קיפאון של פקקת נחות הווריד הנבוב התשואות כמויות מדידים של רקמת עורק בקיר פקיק. זה הוכיח שימושי להערכת אינטראקציות בין הקיר וריד ואת פקיק occlusive והן להערכת התקדמות של דלקת כרונית חריפה.

עכבר דגם השלם הקיפאון של פקקת נחותים הווריד הנבוב

אנו מדגימים את הוידאו שיטה לייצור באמצע חסימה בעורק המוח בעכברים בוגרים באמצעות monofilament intraluminal. כמו כן, אנו מראים כיצד להעריך את מידת אוטם מוחי על ידי מכתים 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד (TTC).

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

מודל של השתלת תומכן בעורק התרדמה עכבר מתואר. בהשוואה לשיטות אחרות דומות, הליך זה הוא מהיר מאוד, פשוט ונגיש, ומציע את האפשרות ללמוד בדרך נוחה תגובת קיר כלי דם לסטנטים משחררי תרופות שונים והמנגנונים המולקולריים של restenosis.

דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

אנו מתארים שיטה ליצירת מודל אמין של יתר לחץ דם ורידים במוח בעכבר הבוגר. מודל זה תואר בהרחבה ונבדק בחולדה. עמית החדש בעכברים פותח את האפשרות של שימוש בבעלי חיים מהונדסים גנטיים ובכך מרחיב את היישומים של המודל.

למבוגרים עכבר ורידי יתר לחץ דם דגם: עורק תרדמה משותף לחיצוני הצוואר וריד השקה.

שיטה זו פותחה במטרה לספק פתרון תרופתי קבוע באמצעות העורק הראשי, כדי להעריך את הפרמקוקינטיקה של תרופות חדשניות במודלים של עכברים.

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

פרוטוקול זה משתמש קטטר בלון כדי לגרום לפציעה intraluminal על העורק הראשי חולדה ולהלן לעורר hyperplasia neointimal. זהו מודל מבוסס היטב לחקר המנגנונים של שיפוץ של כלי דם בתגובה לפציעה. כמו כן הוא משמש באופן נרחב כדי לקבוע את תוקפו של גישות טיפוליות פוטנציאליות.

כלי דם בלון פגיעה וIntraluminal מנהל בעורקי תרדמת העכברוש

למדו שיטה ליצירת פקקת בכלי דם בעכברים באמצעות פקקת כלוריד Ferric. השיטה כוללת מיקרוסקופיה תוך-חייתית ומדידת זרימת דם בדופלר לניטור תהליכי היווצרות הפקקת בזמן אמת.

פקקת עכבר דגם על עורק ראשי וכלי לפדר מושרה כלוריד Ferric

גלה סרטונים נוספים