נקודת רקמות נכונות בכל זמן בלוקים רב-רקמה

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבנות כלי שיסייע בזיהוי רקמות בגושי פרפין מרובי רקמות. זה מושג תחילה על ידי שילוב של HistoGel עם צבע לסימון רקמות ליצירת פקק ג'ל בצבע בהיר. השלב השני הוא לעבד ולהטמיע את פקקי ההיסטוג'ל הצבעוניים בהתאם לטכניקות עיבוד והטמעה סטנדרטיות של רקמות.

לאחר מכן, משתמשים באגרוף ביופסיה להסרת הגלילים הקטנים. אלה הם תגי כיוון דגימה או נקודה. השלב האחרון הוא להטמיע את הנקודה בבלוק רב רקמות עם מיקום הנקודה וכל דגימה מתועדת בקפידה לעיון קל.

בסופו של דבר, הנקודה מספקת רמז חזותי ברור להתמצאות הדגימה וזיהויה במיקרו-מערכי רקמות ובבלוקים מרובי רקמות. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו תפרים או ליבות אסימטריות, הוא שהנקודה אינה משנה את הרקמה ומאפשרת גמישות בסידור הדגימות לניתוח אופטימלי. הרעיון לשיטה זו עלה לראשונה כאשר קיבלנו בקשות מחוקרים לשלב דגימות רקמה ממספר בעלי חיים לגוש פרפין יחיד כדי לחסוך כסף ולפשט את הניתוח כדי להכין את הכתמים התחל בהוספת 50 מיליגרם של BSA בדרגה ביוכימית למיליליטר אחד של צבע סימון רקמות בצינור חרוטי של 15 מיליליטר.

מערבלים את התערובת למשך דקה אחת לפחות עד להמסה מלאה. לאחר מכן טען תשעה מיליליטר של ג'ל עיבוד הידרוקסיאתיל ארוס לתוך צינור חרוטי של 15 מיליליטר וחמם אותו במיקרוגל בעוצמה של 30%. דופק את האש במרווחים של עשר שניות עד שהג'ל נמס לחלוטין.

כעת שלבו את ג'ל העיבוד המומס ותמיסת ה-BSA בצינור חרוטי יחיד של 15 מיליליטר וערבבו אותו היטב עם פיפטה. לאחר מכן מערבלים את התמיסה ומעבירים אותה למקרר למספר שעות להתמצקות. לאחר ההתקשות, הסר את הרחבה המוצקה בג'ל על ידי שחרורו בעדינות בעזרת מרית צרה.

פורסים את התקע לחלקים בעובי חמישה מילימטרים. אל תשתמש בקצוות המעוגלים. העבירו שלושה עד שישה חלקים לקסטה היסטולוגית וטבלו אותם באתנול 70%, החליפו את תמיסת האתנול של 70% כל שעתיים עד ארבע שעות, ולפחות שלוש פעמים במשך 24 שעות עד שהפקקים מתייבשים לחלוטין.

הם ידלפו חלק מצבע הסימון לתמיסת האתנול. שימוש בשינויים של אתנול טרי עוזר בתחילה לשטוף חלק מעודפי הצבע וכתוצאה מכך פקק נקי יותר שפחות נוטה לדלוף צבע. לאחר מכן, העבירו את הקסטות ל-80% אתנול ולאחר מכן ל-95% אתנול למשך שעה בכל אמבטיה.

הצבע עלול לדלוף מפקק הג'ל, מה שעלול להשפיע על רקמות אחרות ועל הריאגנטים הנוזליים במעבד רקמות אוטומטי. ככזה, התייבשות ידנית מומלצת מאוד. עם זאת, עיבוד אוטומטי יעיל באותה מידה.

השלימו את ההתייבשות בשלוש שטיפות ב-100% אתנול למשך שעה כל אחת. נקה את הדגימות על ידי טבילה בפחמימנים אטיים או קסילנים שלוש פעמים למשך שעה בכל אמבטיה. עכשיו הסתננו לחלקים עם שלוש אמבטיות של שעה.

בפרפין מותך. הטמע את החלקים המעובדים כרגיל, וכאשר הבלוק בטמפרטורת החדר, השתמש במחט אגרוף עורית כדי ליצור ליבות נקודתיות. בלוק אחד יכול לייצר ליבות של 22 מילימטר או אפילו יותר ליבות של 1.5 מילימטר.

התחל ביצירת תרשים כדי לציין את המיקומים והזהויות הרצויים של כל חלקי הרקמה הבודדים שיוטמעו יחד ואת מיקום המקום. הכן עותק לשמירה בהישג יד. שימוש מוצלח בתגי אוריינטציה של דגימה דורש מפת ביו-דגימה ברורה וקלה למעקב המפרטת במדויק את כל הדגימה הביולוגית, מיקומה ומיקומם ביחס לנקודה.

לאחר עיבוד חלקי הרקמה, סדרו אותם בתחנת ההטמעה. על פי דיאגרמת כיוון הרקמות, כיוון נכון הוא קריטי לחלוטין. כמו כן, חיוני שליבת הנקודה תהיה גבוהה יותר מכל חלקי הרקמה שיוטמעו בבלוק.

לאחר השלמת סידור הרקמות, הטמיעו את הכתמים. החזק כל נקודה זקופה בעזרת מלקחיים עד שהפרפין יתמצק כדי שלא יתמוטט. דקה או שתיים אמורות להספיק.

לערכת TMA ידנית, מלאו את תבנית ה-TMA בפרפין מומס. כשהתבנית מתקררת, חבר את הכתמים בצורה דומה בשולי המערך. כעת חתכו והכתים את החלקים בנקודה.

בגישה סטנדרטית, מיוצרים כאן חמישה חתכים מיקרוניים. כדי להניח את החלקים על מגלשות, צף אותם באמבט מים של 40 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן העביר אותם למגלשות זכוכית טעונות חיובית. לאחר החיבור לשקופיות, יבש אותן בחום של 60 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות לפחות.

כעת ניתן לצבוע את השקופיות באופן ידני או במערכת צביעה אוטומטית. עבור צביעת h ו-d שגרתית, כתמים מיוחדים או כתמים כימיים אימונוהיסטו הופיעו כעגול בצבע בהיר. בגוש הפרפין ובכל חלקי הפרפין.

כתמים אפשרו התמצאות קלה וזיהוי רקמות בבלוקים מרובי רקמות המכילים רקמות דומות מאנשים וקבוצות טיפול שונות. כאשר משתמשים ברקמה, כתמי מיקרו-מערך אפשרו להשתמש בכל ליבה לדגימות רקמה יקרות ערך וניתן היה לבחור בקלות כתמים בסמוך לליבת מיקרו-מערך רקמות. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור שתיעוד מדויק וברור של הדגימה הביולוגית והנקודה בבלוק הוא קריטי לשימוש מוצלח בו.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליצור ולהשתמש בקלות בתג כיוון הדגימה ככלי עזר לזיהוי רקמות בגושי פרפין מרובי רקמות.