Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Frozen Buffy Coats using Non-integrating Episomal Plasmids

Viviana Meraviglia; Alessandra Zanon; Alexandros A. Lavdas; Christine Schwienbacher; Rosamaria Silipigni; Marina Di Segni; Huei-Sheng Vincent Chen; Peter P. Pramstaller; Andrew A. Hicks; Alessandra Rossini

doi:10.3791/52885

דור של גזע תאים המושרה pluripotent מקפוא באפי מעילים באמצעות Episomal פלסמידים ללא שילוב

JoVE Journal
Developmental Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Developmental Biology

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Frozen Buffy Coats using Non-integrating Episomal Plasmids

דור של גזע תאים המושרה pluripotent מקפוא באפי מעילים באמצעות Episomal פלסמידים ללא שילוב

Full Text

13,581 Views

10:52 min

June 5, 2015

DOI: 10.3791/52885-v

Viviana Meraviglia*¹, Alessandra Zanon*¹, Alexandros A. Lavdas¹, Christine Schwienbacher¹, Rosamaria Silipigni², Marina Di Segni², Huei-Sheng Vincent Chen³, Peter P. Pramstaller¹, Andrew A. Hicks¹, Alessandra Rossini¹

¹Center for Biomedicine,European Academy Bozen/Bolzano (EURAC), ²Laboratory of Medical Genetics,Fondazione IRCCS Ca´ Granda, Ospedale Maggiore Policlinico, ³Del E. Webb Center for Neuroscience, Aging & Stem Cell Research,Sanford-Burnham Medical Research Institute

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

תאים מושרה pluripotent גזע (iPSCs) מהווים מקור של רקמות מטופל ספציפי ליישומים קליניים ומחקר בסיסי. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לתכנת מחדש תאים אנושיים היקפיים mononuclear הדם (PBMNCs) המתקבלים ממעיילי אפים קפואים לiPSCs הנגיפי ללא שימוש בפלסמידים episomal הלא שילוב.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לייצר תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים מתאים חד-גרעיניים בדם היקפי אנושי המתקבלים מפרוות באפי קפואות באמצעות פרוטוקול חסכוני ונטול וירוסים. זה מושג תחילה על ידי בידוד של PB MNCs ממעילי באפי לאחר צנטריפוגה בדם מלא ללא שיפוע צפיפות ואחריו התרחבות במדיום תרבית דם ספציפי. השלב השני הוא להעביר את ה-PB MNCs של מעיל באפי עם פלסמידים אפיזומליים על ידי אלקטרופורציה.

לאחר מכן, ה-PB MNCs שעברו טרנספטציה מצופים על תאי הזנה פיברובלסטים עובריים טריים של עכברים. השלב האחרון הוא איסוף ידני של תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים מהתרבית והעברתם לצלחות תאי הזנה חדשות להרחבה. בסופו של דבר, ניתן להראות את התכנות מחדש היעיל של PB MNCs לתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים עם מורפולוגיה אנושית טיפוסית על ידי אימונופלואורסצנציה ומדידת ביטוי גנים.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos