Name: ההקמה ואפיון של UTI וCAUTI במודל עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: למדו כיצד להקים מודל עכברים לאינפקציות דרכי השתן ו-CAUTI. השיטה כוללת הכנת חיידקים, קטטריזציה ומדידת עומס חיידקי בנוזלי השתן וברקמות. המודל מאפשר חקר מנגנוני פתוגנזה ופיתוח טיפולים חדשים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מימון עבור עבודה זו סופק על ידי DK064540 P50 ORWH SCOR, RO1 DK 051,406, RO1 AI 108,749-01, F32 DK 101,171, וF32 DK 104,516-01.

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

הקהילה מסובכת רכשה UTI הוא זיהום שכיח ויקר והיוו כמה מיליוני ביקורי טיפול ראשוני בכל שנה 46. בנוסף, Cautis הוא זיהום שנרכש בריאות משותפת שהפך יקר מאוד לספקי שירותי בריאות כמרכזים רפואיים Medicaid Services כבר לא משיב לספקי העלות הנוספת של טיפול וכתוצאה מבית החולים רכשו CAUTI 45. המודלים של העכברים של דלקת בדרכי שתן, דלקת שלפוחית ​​השתן הן מסובך וCAUTI, שתוארו בפרוטוקולים אלה מספקים כלים רבות ערך להבנת הבסיס המולקולרי של אינטראקציות המארח והפתוגן הכרחיות לייזו...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/52892/establishment-and-characterization-of-uti-and-cauti-in-a-mouse-model">Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model</a>. The Protocol section has been updated.
The ethics statement has been updated from:
Ethics statement: The Washington University Animal Studies Committee approved all mouse infections and procedures as part of protocol number 20120216, which was approved 01/11/2013 and expires 01/11/2016. Overall care of the animals was consistent with The guide for the Care and Use of Laboratory Animals from the National Research Council and the USDA Animal Care Resource Guide. Euthanasia procedures are consistent with the &#8220;AVMA guidelines for the Euthanasia of Animals 2013 edition.&#8221;
to:
Ethics statement: The Washington University Animal Studies Committee approved all mouse infections and procedures as part of protocol number 20150226, which expires 12/10/2018. Overall care of the animals was consistent with The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals from the National Research Council and the USDA Animal Care Resource Guide. Euthanasia procedures are consistent with the &#8220;AVMA guidelines for the Euthanasia of Animals 2013 edition.&#8221;
Step 3 has been updated from:
3. Bacterial Inoculation
<ol>
	<li>Clean the workstation with 70% ethanol and cover area with absorbent paper (or use sterile flow hood).</li>
	<li>Draw up to 0.9 ml of the prepared bacterial inoculum into a 1 ml (TB) syringe (remove air bubbles). Attach a prepared sterile inoculation needle with PE10 tubing, onto the syringe containing the inoculum, then sterilely trim the polyethylene tubing. 
	NOTE: Leave 1 mm of tubing above the tip of the needle to avoid puncturing the bladder.</li>
	<li>Cut a 1 inch square piece of parafilm and put a dab of surgical lubricant (approximately the size of a dime) on top.</li>
	<li>Anesthetize female C3H/HeN mice by putting them in a 32 ounce glass jar containing a tea-infuser ball with cotton balls soaked with 3 ml of isoflurane or vaporizer chamber (following manufactures protocol) until unconscious but still breathing normally (1 breath/sec). 
	NOTE: Some IACUC committees do not approve the use of a jar or vaporizer. Please follow the indication of the IACUC committee of your institution. 
	NOTE: If glass jar with tea-ball and/or nose cone with isoflurane-soakd cotton balls are used, the animal must be carefully observed to avoid anesthetic overdose and death. The advantage of using a vaporizer and anesthesia chamber is that it provides controlled isoflurane administration that avoids accidental overdoses. CAUTION: Isoflurane is an inhalation anesthetic. Use in a well-ventilated area and minimize inhalation.</li>
	<li>Remove the mouse from the jar/vaporizer and place it on its back on a paper towel and spread the legs.</li>
	<li>Cover the nose of the mouse with a nose cone (a tube connected to the vaporizer that provides a controlled isoflurance dose that comes equipped on some vaporizer units) or 50 ml conical tube with a cotton ball containing a small amount (approximately 1-2 ml) of isoflurane.</li>
	<li>Gently palpitate the bladder to induce urination and ensure a voided bladder. Wipe the periurethral area with 100% ethanol wipe. Dab the inoculation needle/syringe, point first, into the surgical lubricant.</li>
	<li>Inoculate each mouse with 50 &#181;l of the bacteria solution by inserting the inoculation needle transurethrally, approximately 12 mm, and pressing down on the syringe plunger gently to dispense the inoculum into the bladder gently (10 &#181;l/sec). Remove the inoculation needle from the mouse. 
	NOTE: Immediate return of inoculum at the urethral opening when beginning to inoculate indicates improper or incomplete insertion of the needle.</li>
	<li>Remove the mouse from nose cone and return it to its cage. Repeat steps 3.3-3.8 for each mouse. When/if switching inoculum conditions/strains, dispose of the syringe and inoculation needle in an approved sharps container and start again step 3.2.&#160;&#160; 
	NOTE: Inoculation with uropathogenic organisms generally does not cause severe pain symptoms. However, in rare instances, administering large doses of pathogens may cause fever, reduction in food and water intake and abnormal behavior. Animal health should be monitored throughout the experiment. If overt pain symptoms are notice, an analgesic, such as Buprenorphine (0.05&#8722;0.1 mg/kg given subcutaneously), can be applied. Procedures should be in accordance with each institution&#8217;s IACUC.</li>
</ol>
to:
3. Bacterial Inoculation
<ol>
	<li>Clean the workstation with 70% ethanol and cover area with absorbent paper (or use sterile flow hood).</li>
	<li>Draw up to 0.9 ml of the prepared bacterial inoculum into a 1 ml (TB) syringe (remove air bubbles). Attach a prepared sterile inoculation needle with PE10 tubing, onto the syringe containing the inoculum, then sterilely trim the polyethylene tubing. 
	NOTE: Leave 1 mm of tubing above the tip of the needle to avoid puncturing the bladder.</li>
	<li>Cut a 1 inch square piece of parafilm and put a dab of surgical lubricant (approximately the size of a dime) on top.</li>
	<li>Anesthetize female C3H/HeN mice by putting them in a vaporizer chamber (following manufactures protocol) until unconscious but still breathing normally (1 breath/sec). 
	NOTE: Some IACUC committees do not approve the use of a vaporizer. Please follow the indication of the IACUC committee of your institution. 
	CAUTION: Isoflurane is an inhalation anesthetic. Use in a well-ventilated area and minimize inhalation.</li>
	<li>Remove the mouse from the vaporizer and place it on its back on a paper towel and spread the legs.</li>
	<li>Cover the nose of the mouse with a nose cone (a tube connected to the vaporizer that provides a controlled isoflurance dose that comes equipped on some vaporizer units) to maintain anesthetization.</li>
	<li>Gently palpitate the bladder to induce urination and ensure a voided bladder. Wipe the periurethral area with 100% ethanol wipe. Dab the inoculation needle/syringe, point first, into the surgical lubricant.</li>
	<li>Inoculate each mouse with 50 &#181;l of the bacteria solution by inserting the inoculation needle transurethrally, approximately 12 mm, and pressing down on the syringe plunger gently to dispense the inoculum into the bladder gently (10 &#181;l/sec). Remove the inoculation needle from the mouse. 
	NOTE: Immediate return of inoculum at the urethral opening when beginning to inoculate indicates improper or incomplete insertion of the needle.</li>
	<li>Remove the mouse from nose cone and return it to its cage. Repeat steps 3.3-3.8 for each mouse. When/if switching inoculum conditions/strains, dispose of the syringe and inoculation needle in an approved sharps container and start again step 3.2.&#160;&#160; 
	NOTE: Inoculation with uropathogenic organisms generally does not cause severe pain symptoms. However, in rare instances, administering large doses of pathogens may cause fever, reduction in food and water intake and abnormal behavior. Animal health should be monitored throughout the experiment. If overt pain symptoms are notice, an analgesic, such as Buprenorphine (0.05&#8722;0.1 mg/kg given subcutaneously), can be applied. Procedures should be in accordance with each institution&#8217;s IACUC.</li>
</ol>

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/52892/establishment-and-characterization-of-uti-and-cauti-in-a-mouse-model">Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model</a>. The Protocol section has been updated.

Erratum: Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

זיהומים בדרכי שתן (זיהומים בדרכי שתן) הם אחד הזיהומים חיידקיים הנפוצים ביותר וניתן לחלק לשתי קטגוריות המבוססות על המנגנון של רכישה, קהילה וnosocomial רכש UTI. זיהומים בדרכי השתן מתרחשים לעתים קרובות בנשים ומחקרים בריאים נרכשה בקהילה הראה כי כ -50% מהנשים יהיו לפחות אחד UTI בחייהם 1. בנוסף, הישנות היא בעיה עיקרית. יש אישה שיש הדבקה ראשונית סיכוי 25-40% שיש לו זיהום שני בתוך שישה חודשים למרות טיפול אנטיביוטי מתאים, ונשים רבות ממשיכים להיות הישנויות תכופות 2. החיידקים הגורמים לזיהומים אלה גם הופכים יותר ויותר עמידים לאנטיביוטיקה פרוטוקולים נוספים של בלבול טיפול 3-6. דלקת בדרכי השתן משפיעים על מיליוני אנשים בכל שנה עולים כ -2.5 מליארד דולרים בהוצאות הקשורות בריאות בארה&quot;ב, מה שמדגיש את ההשפעה והשכיחות של המחלה1,7 .Nosocomial רכש זיהומים בדרכי שתן קשורים בעיקר עם הנוכחות של גופים זרים כגון צנתרים שכינה. הזיהומים בדרכי השתן הקשורים צנתר (CAUTI) יישאר nosocomial הנפוץ ביותר רכש UTI, והיוו ~ 70-80% מזיהומים כגון 8. יתר על כן, CAUTI קשור עם תחלואה ותמותה מוגברות וזה הגורם הנפוץ ביותר לזיהומים בדם משניים 9. הקהילה קשורה UPEC רכשה זיהומים בדרכי השתן הם חשבו להיגרם על ידי ההקדמה של חיידקים לשלפוחית ​​השתן ממאגרים במערכת העיכול באמצעות מניפולציה מכאנית במהלך קיום יחסי מין, היגיינה הלקויה או דינמיקת אוכלוסיית חיידקים אחרת בין מארח שונה נישות 10. ברגע שנכנס לשלפוחית ​​השתן, UPEC להעסיק גורמים ארסי רבים, כולל כמוסה, מערכות רכישת ברזל, רעלים, פלסמיד ארסיות, tRNAs, איי פתוגניות וגורמי התישבות שהוכחו לשחק תפקיד בפתוגנזה &lt;sup&gt; 11-14. קריטי להקמתה של התישבות UPEC, UPEC גם לקודד סוגים שונים של פילי מלווה דבק סדרן מסלול (CUP) שמכירים קולטנים עם סגוליות stereochemical 15. פילים מסוג 1, הטו עם adhesin FimH, באים לידי הביטוי על ידי UPEC ולאגד mannosylated uroplakins 16 וα-1, β-3 integrins 17, אשר באים לידי ביטוי על פני השטח luminal של שני שלפוחיות האדם ועכבר 18. אינטראקציות בתיווך FimH אלה להקל קולוניזציה ופלישה של תאי האפיתל השטחיים 19,20 חיידקים. פעם בתוך התא, UPEC יכול לברוח לתוך הציטופלסמה שבי חיידק בודד במהירות יכול לחלק ליצירת קהילה תאית חיידקים (IBC), אשר על התבגרות, יכול להכיל ~ 10 4 חיידקים 21. היווצרות IBC הודגמה בלפחות שישה זנים שונים עכבר, C3H / חן, C3H / HeJ, C57Bl / 6, CBA, FVB / ניו ג&#39;רזי וBALB / ג, ועם מגוון רחב של UPE שונהזני C וEnterobacteriaceae 22-24 אחר. עם זאת הבדלי זמן ומרחב של היווצרות IBC יכולים להשתנות בהתאם לרקע העכבר ומתח UPEC הדבקה. בC3H / עכברי חן נגועים בUPEC הטיפוסי זני UTI89 או היווצרות CFT073, IBC ניתן דמיינו כbiomasses הקטן של חיידקים מוקדם ככל 3 HPI (לאחר זיהום שעות). קהילה זו ממשיכה להתרחב ומגיעה &quot;נקודת אמצע&quot; של הפיתוח כ -6 HPI כאשר חיידקי המוט בצורה לכבוש אחוז גדול של מרחב cytoplasmic של תאי מטרייה שטחיים סופני הבדיל צורת IBCs המוקדם אלה באופן יחסי סינכרוני עם הרוב בו מוצגות ממדים דומים ומורפולוגיות. ~ 8 HPI החיידקים בשינוי IBC מחיידקים לCocci מורפולוגיה. IBCs הם בעלת האופי ארעי. לפיכך, התבגרות IBC 12-18 תוצאות HPI בהמשך ההתרחבות של אוכלוסיית החיידקים, ואחריו filamentation ופיזורם מחוץ לתא with התפשטות לאחר תאים שכנים 23. כך, הנישה IBC מאפשרת התפתחות חיידקים מהירה בסביבה המוגנת מפני תגובה חיסונית מארח ואנטיביוטיקה 25. השלבים שונים של זיהום UPEC כי הם ראו בעכברים גם הם נצפו בבני אדם, כגון IBCs וfilamentation, התומכים במודל העכבר של UTI ככלי מועיל שיכול לשמש מודל UTI בבני האדם 22,26-28. בעוד שרוב הנשים חווים UTI בחייהם, התוצאה של זיהומים אלה יכול לנוע בין זיהום הגבלה עצמית חריף ללא הישנות, לדלקת שלפוחית ​​השתן חוזרת ונשנית בתדירות גבוהה. יתר על כן, מחקרים הראו התרחשות משפחתית חזקה של דלקת בדרכי שתן, המצביע על מרכיב גנטי תורם לרגישות UTI 29. מצאנו כי תוצאות UTI השונות ראו במרפאות יכולות להיות שיקוף על ידי התוצאות השונות של זיהום UPEC הניסיוני בין זנים טהורים עכבר 30. לדוגמא, C3H / חן, CBA, עכברי DBA, וC3H / HeOuJ רגישים, באופן תלוי מינון זיהומיות, לדלקת שלפוחית ​​השתן לטווח ארוך, כרונית המאופיין על ידי חיידקים מתמשכים, גבוהים כייל (&gt; 10 4 יחידות מושבה להרכיב (CFU) / מיליליטר), חיידקים גבוה כייל נטל שלפוחית ​​השתן בהקרבה&gt; 4 שבועות לאחר זיהום (WPI), דלקת כרונית, ונמק urothelial. עכברים אלה גם להציג רמות גבוהות בסרום של IL-6, G-CSF, KC, וIL-5 בתוך 24 HPI הראשון המשמשות כסמנים ביולוגיים להתפתחות דלקת שלפוחית ​​השתן כרונית. זה עשוי לייצג במדויק את המהלך הטבעי של דלקת בדרכי שתן בנשים מסוימות, כמו מחקרי פלצבו הראו כי אחוז גדול של נשים חווים UTI ישמור על רמות גבוהות של חיידקים בשתן שלהם במשך כמה שבועות לאחר התסמינים הראשונים של דלקת שלפוחית ​​השתן אם לא ניתן טיפול אנטיביוטי 31 , 32. יתר על כן, שימוש בעכברי C3H / חן, מצאנו כי היסטוריה של דלקת שלפוחית ​​השתן כרונית מהווה גורם סיכון משמעותי לזיהומים חוזרים ונשנים חמורים שלאחר מכן. חוזר ונשנה בדרכי השתן הוא הכי siביטוי קליני gnificant של UTI ועכבר C3H / חן הוא כיום המודל למד רק שמשחזר נטייה מוגברת לאחר החשיפה קודמת. תוצאת UTI שנייה סכמה בC57Bl / 6 עכברים שבו זיהום UPEC החריף הוא הגבלה עצמית, עם רזולוציה של דלקת שלפוחית ​​השתן ובקטרוריה בתוך כשבוע. מעניין לציין, במודל זה, UPEC ליצור בקלות מאגרים תאיים שקטים בתוך רקמת שלפוחית ​​השתן ממנו UPEC מסוגל מתעורר ממצב רדום כדי לחדש את UTI פעיל, שעלול להסביר מנגנון אחד לדלקת בדרכי שתן חוזר אותו זן בבני אדם 33, 34. בנוסף להשפעות גנטיות על רגישות UTI, הקדמה של קטטר לשלפוחית ​​השתן מגדילה מאוד את הסיכוי שיש זיהום, כמו גם להגדיל את הטווח של חיידקים מסוגלים לגרום לזיהום. הוכח כי צנתור שתן אנושי גורם היסטולוגית ושינויים חיסוניים בשלפוחית ​​עקב לחץ מכאני שגורם לתגובה דלקתית חזקה, קילוף, בצקת של propria lamina וsubmucusa, הדליל urothelial, ונגע ברירית של urothelium וכליות 35,36. בנוסף, קטטר מספק משטח לקובץ מצורף חיידקים ובכך ליצור סביבה מנוצלת על ידי כמה מינים לגרום CAUTI. בעוד UPEC עדיין תורם רב, אנטרוקוקוס faecalis מהווה 15% מCAUTI אלה 37. א faecalis הופך עמיד יותר ויותר לאנטיביוטיקה עם vancomycin הופעת התנגדות, שהתחזה לדאגה בריאותית רצינית 38. א faecalis להחזיק גורמים ארסי רבים, כולל רעלים וadhesins הכרחי לקובץ מצורף לשני קטטר ואפיתל 38. במהלך צנתור שתן, המארח הוא פגיע להידבקות של חיידקים, כפל והפצה ב39,40 בדרכי השתן. א faecaליס יוצר biofilm על קטטר כחלק ממנגנון להתמיד בשלפוחית ​​השתן ולהפיץ לכליות, אשר הוא לשחזר במודל עכבר CAUTI 41. לאחרונה, זה הוכח במהלך צנתור שתן, פיברינוגן (FG) הוא שוחרר לתוך שלפוחית ​​השתן כחלק מהתגובה הדלקתית. FG מצטבר בשלפוחית ​​השתן, מעילי קטטר וחיוני לE. faecalis היווצרות biofilm, מתפקד כפיגום מצורף. במודל C57BL / 6 עכבר של CAUTI, גילה שE. היווצרות faecalis biofilm על קטטר, ובכך ההתמדה בשלפוחית ​​השתן, הייתה תלוי בpilus EBP, במיוחד EbpA adhesin קצהו. מצאנו כי תחום N- המסוף של EbpA נקשר במיוחד לFG ציפוי קטטר. בנוסף, נמצא כי א faecalis מנצל FG כמקור המטבוליט במהלך זיהום, וכך לשפר את היווצרות biofilm 42. מודלים של העכברים הוכיחו קריטיים לאחורייםtanding כמו גם חיזוי הקליני של דלקת בדרכי השתן וCAUTI 41. במאמר זה אנו מדגימים הכנת הבידוד של דלקת שלפוחית ​​השתן UPEC לבודד UTI89 וחיסון של עכברים דרך השופכה C3H / חן. בנוסף, אנחנו מדגימים פרוטוקול להכנסה קטטר בעכברי C57BL / 6 וחיסון של א &#39; זן faecalis OG1RF. שתי טכניקות אלו להוביל לדלקת בדרכי שתן עקבית ואמינים או CAUTI בעכברים. אנחנו גם להציג טכניקות המשמשות להתבונן היווצרות IBC בדלקת שלפוחית ​​השתן חריפה ואיסוף שתן לניתוח דלקת שלפוחית ​​השתן כרוני או חוזר ונשנה. עכברי C3H / חן שימשו ללמוד היבטים של הפתוגנזה UPEC כולל פלישה ראשונית חיידקים, היווצרות IBC, filamentation והפיתוח של דלקת שלפוחית ​​השתן כרוני 23,33,43. פרמטרים אלה גם ארסיות נחקרו במגוון רחב של רקעי עכבר אחרים 22,33. לCAUTI, C57BL / 6 המודל מאפשר להשתלת גוף זרה לתוך שלפוחית ​​השתן עם עמיתי חיידקים הבאיםlonization, שיכול להישמר במשך 7 ימים לאחר הזיהום 41. מודלים אלה היו שימושיים להערכת מנגנוני אלימות של חיידקים, תגובות מארחות לדלקת בדרכי השתן ומנגנונים לערער תגובות מארחות, הרבה מהם כבר סכמו או שנצפו באוכלוסיות אנושיות קליניות לאחר מכן.

<table><tbody><tr><td>חומר להכנת קטטר ומחט:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>30 גרם מחטים</td><td>BD Precision Glide</td><td>305106</td><td>30 G x &frac12; (0.3 מ"מ x 13 מ"מ)</td></tr><tr><td>צינורות פוליאתילן PE10</td><td>BD</td><td>427400</td><td>קוטר פנימי -0.011 אינץ' (0.28 מ"מ); קוטר חיצוני &ndash; 0.024 אינץ' (0.61 מ"מ)</td></tr><tr><td>RenaSIL 025 צינורות סיליקון מרפאים פלטינה</td><td>Braintree Scientific, Inc</td><td>SIL 025</td><td>קוטר פנימי-0.012 x קוטר חיצוני 0.025, סליל</td></tr><tr> 25 רגל<td colspan="4">חומר לזיהומים:</td></tr> <tr><td>איזופלורן &ndash; Isothesia</td><td>Butler Schein</td><td>29405</td><td>250 מ"ל</td></tr><tr><td>צנצנת זכוכית שקופה ישר צד</td><td>קימבל צ'ייס</td><td>5413289V 21</td><td></td></tr><tr><td>אינפוזר תה מנירוסטה</td><td>Schefs-Amazon</td><td></td><td>Premium Loose Leaf Tea Infuser מאת Schefs - נירוסטה - קיבולת גדולה -</td></tr> <tr><td>כדורי כותנה לא סטריליים</td><td>Fisherbrand</td><td>22-456-880</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות פלקון</td><td>VWR</td><td>89039-660</td><td></td></tr><tr><td>Isotec 3 -וופורייזר</td><td>Ohmeda</td><td>1224478</td><td></td></tr><tr><td>אגרוף אוזניים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-812-201</td> <td>(במידת הצורך)</td></tr> <tr><td>תמיסת בטדין</td><td>תמיסת</td><td></td> בטדין <td>10% פובידי-יוד תמיסה מקומית</td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22-037-924</td><td>6 אינץ'</td></tr><tr><td>חיתולים לספסל</td><td>פישרברנד</td><td>14206 63</td><td>רפידות תחתונות סופגות (20 אינץ' X36 אינץ' מחצלות)</td></tr> <tr><td>חומר סיכה כירורגי</td><td>Surgilube</td><td>0281-0205-36</td><td></td></tr><tr><td>ניתוח מספריים</td><td>כלי מדע עדין, INC</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>כלי מיקרו-אדסון מלקחיים</td><td>Fine Science, INC</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>BD</td><td>309659</td><td>קצה החלקה של טוברקולין</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td>4 אינץ' x 125 FT</td></tr><tr><td>מתלה אפנדורף</td><td>פישרברנד</td><td>05-541-1</td><td></td></tr><tr><td>צינורות אפנדורף</td><td>MIDSCI</td><td>AVX-T-17-C</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">קציר צנתרים, שלפוחית השתן והכליות:</td></tr> <tr><td>הומוגנייזר</td><td>PRO Scientific INC</td><td>Bio-Gen Pro 200</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל פוליפרופילן צינור תחתון עגול</td><td>BD</td><td>352063</td><td>להומוגניזציה של איברים</td></tr><tr><td>מגבת נייר</td><td>ג'ורג'יה-פסיפיק</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>11100020S</td><td>200 הוכחה</td></tr><tr><td>Costar&trade; צלחות פוליסטירן שקופות 96 בארות</td><td>קורנינג</td><td>3788</td><td></td></tr><tr><td>1x פוספט נתרן מלח</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>מנקה אולטרסאונד ברנסוניק 1210</td><td>ברנסון אולטרסאונד תאגיד</td><td>1210</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">IBC חומרים:</td></tr> <tr><td>צלחת בדיקת תרבית רקמות 6 בארות</td><td>טכנו מוצרי פלסטיק</td><td>92006</td><td></td></tr><tr><td>סיכות</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>Dow Corning</td><td>3097358-1004</td><td>ערכת אלסטומר סיליקון</td></tr><tr><td>X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-b-D-galactoside)</td> <td>Invitrogen</td><td>15520-034</td><td>Ultrapure</td></tr><tr><td>N, N-Dimethylformamide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4551</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 (מגנזיום כלוריד)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>נתרן דאוקסיכולאט</td><td>סיגמא אולדריץ</td><td>' D6750</td><td></td></tr><tr><td>Nonidet-P40</td><td>Roche</td><td>11754599001</td><td>אוקטילפנולפולי (אתילן גליקולטר)</td></tr><tr><td>n אשלגן הקסציאנופרט(II) טריהידרט (K-ferrOcyanide)</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P3289</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן הקסציאנופרט(III) (K-ferrIcyanide)</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>60299</td><td></td></tr></tbody></table>

ההקמה ואפיון של uti וcauti במודל עכבר

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

זיהומים בדרכי שתן (UTI) הם נפוצים ביותר, גורם משמעותי לתחלואה והם עמידים יותר ויותר לטיפול באנטיביוטיקה. נקבות נגועות באופן לא פרופורציונאלי על ידי דלקת בדרכי שתן: 50% מכלל הנשים יהיו UTI בחייהם. בנוסף, 20-40% מהנשים האלה שיש להם דלקת בדרכי שתן ראשוני יסבלו הישנות עם כמה הישנויות תכופות הסובלות מהידרדרות חמורה באיכות חיים, כאב ואי נוחות, שיבוש של פעילויות יומיומיות, גדלו עלויות בריאות, וכמה אפשרויות טיפול אחרים מטיפול מונע באנטיביוטיקה לטווח ארוך. coli Uropathogenic Escherichia (UPEC) הוא הסוכן סיבתי העיקרי של קהילה רכש UTI. הדלקת בדרכי השתן הקשורים צנתר (CAUTI) הוא הזיהום השכיח ביותר בבית החולים רכשו היווה מיליון התרחשויות בארה&quot;ב מדי שנה, ועלויות בריאות דרמטיות. בעוד UPEC הוא גם הגורם העיקרי לCAUTI, סוכני סיבה אחרים הם בעלי חשיבות מוגברת כוללים אנטרוקוקוסfaecalis. כאן אנו מנצלים שני מודלים עכבר מבוססים היטב כי לשחזר רב של המאפיינים הקליניים של מחלות בבני אדם אלה. לדלקת בדרכי שתן, מודל C3H / חן משחזר רב מהתכונות של אלימות UPEC נצפו בבני אדם ובכלל זה תגובות מארחות, היווצרות מבני תעשייה וfilamentation. לCAUTI, מודל באמצעות C57BL / 6 עכברים, אשר שומרים על שתלי שלפוחית ​​השתן קטטר, הוכח להיות רגיש לE. faecalis דלקת בשלפוחית ​​השתן. מודלים נציג אלה נמצאים בשימוש כדי להשיג תובנות חדשות בולטות לפתוגנזה של מחלה בדרכי שתן, שמובילה לפיתוח תרופות חדשניות ואסטרטגיות ניהול או מניעה.

המודלים השלפוחית ​​של UTI קשור מסובך וקטטר לספק פלטפורמות גמישות להבהרת המנגנונים המולקולריים של פתוגנזה של חיידקים, ההשפעה של מחלות אלה ברקמת מארח, והפיתוח ובדיקות של גישות חדשות לניהול הזיהומים הנפוצים ויקרים הללו. בהתאם לזן העכבר והפתוגן, חיסון שלפוחית ​​יכול לשמש כדי לחקור אינטראקציות מארח הפתוגן להבהיר גורמים הכרחיים לייזום או ויסות חריפה (איור 1 ו 3) (2 איור) דלקת שלפוחית ​​השתן, כרוני או חוזר ונשנה. הנתונים מוצגים באיור 1 ה...

היכולת למדל דלקות בדרכי השתן (UTI) היא חיונית על מנת להיות מסוגל להבין פתוגנזה חיידקית ולהוליד פיתוח של טיפולים חדשים. מטרת עבודה זו היא להדגים מודלים עכבריים של UTI ניסיוני ודלקת בדרכי השתן הקשורה לצנתר המסכמים ומנבאים ממצאים שנראו בבני אדם.

ההקמה ואפיון של UTI וCAUTI במודל עכבר

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להציג שיטה מהימנה להקמה של זיהומים בדרכי השתן (UTIs) וזיהומים בדרכי השתן הקשורים לקתטר (caUTI) במודל עכבר, ולהעריך את הזיהומים. הדבר מושג תחילה על ידי הכנה נכונה של האינוקולומים הבקטריאליים, הקתטר והמחט. לאחר מכן, דרכי השתן של העכבר עוברות אינוקולציה תוך-שלפוחיתית והנחת קתטר.לאחר מכן, נאספים רקמות ממערכת השתן וקטטרים כדי להעריך את הזיהום. לבסוף, הזיהום נמדד על ידי קביעת העומס הבקטריאלי ברקמות, בשתן ובקטטר, ו/או על ידי בדיקת קהילה בקטריאלית תוך-תאית או היווצרות IBC. בסופו של דבר, ספירת CFU וצביעת latex משמשות להצגת הביסוס, ההתמדה והחומרה של הקולוניזציה במערכת השתן בתוך מודל עכבר.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא פיתוח מודל מהימן לחיקוי זיהומים בדרכי השתן (UTIs) בבני אדם, במטרה לחשוף שלבים קריטיים בפתוגנזה של TI. מודל זה סייע בפיתוח טיפולים ותרופות חדשניים ל-UTIs. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן תהליכי ההזרקה, ה-ization וההערכה של קהילות חיידקים תוך-תאיים הם קשים ללמידה, מכיוון שהמניפולציה של השופכה ושל רקמת השלפוחית אינה אינטואיטיבית.כדי להתחיל, השחילו כאינץ' אחד של צינור PE 10 על ג้าน של מחט בקוטר 30 gauge. בצעו סטריליזציה ב-UV למשך לילה והכינו תמיסת אינוקולום חיידקי. בהתאם לפרוטוקול הכתוב, ועל ידית עבודה סטרילית, שאבו עד 0.9 milliliters של תמיס

establishment-and-characterization-of-uti-and-cauti-in-a-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה ידגים שיטות להשראת זיהומים בדרכי השתן של עכברים בדרך התסתתית (transurethrally) ולכימות היקף הזיהומים שנוצרו.

אינדוקציה Transurethral של דלקת בדרכי השתן עכבר

מקור: Luyts, N., ואחרים. מעקב אורך של זיהומים בדרכי השתן וטיפול בהם בעכברים באמצעות הדמיית ביולומינצנציה. J. Vis. Exp. (2021).הסרטון הזה מדגים את ההשראה והמעקב אחר זיהום בדרכי השתן במודל עכבר באמצעות E. coli ביולומינסנציוני שהוזרק לשלפוחית השתן, שם מתרחשים הידבקות, פלישה ושכפול תוך-תאי של חיידקים. האור הנפלט מהאופרון הביולומינצנטי משמש כסמן בזמן אמת לעומס חיידקים במהלך התקדמות הזיהום.

המחשה של זיהום בדרכי השתן במודל עכבר באמצעות ביולומינסצנציה

מקור: קונובר, מ. ס. ואחרים, ג'. הקמה ואפיון של דלקות בדרכי השתן ו-CAUTI במודל עכבר. J. Vis. Exp. (2015)סרטון זה מדגים את ההליך להרכבה והשתלת קטטר טרנס-שופכה בעכבר, ולאחר מכן חיסון חיידקי כדי לקבוע זיהום בדרכי השתן הקשור לקטטר ולחקור אינטראקציות בין מארח לפתוגן המתווכת על ידי ביופילם.

זיהום בדרכי השתן הקשור לקטטר במודל עכבר

סרטון זה מתאר את ההליך ליצירת מודל ניסיוני של קסנוגרפט מורין, אשר יכול לשמש לחקר התקדמות קרצינומה של תאי השתן.

Patient-derived Tumor Xenografting: טכניקה ליצירת מודל עכבר ניסיוני להערכת קרצינומה של תאי השתן

בסרטון זה, אנו מתארים את הטכניקה לניהול תוך שלפוחית של חיידקים אורופתוגניים כדי ליצור מודל זיהום בדרכי השתן בעכברים. מודל זה יכול לשמש להבנת התפשטות זיהום חיידקי אורופתוגני בתוך מערכת השתן ואת המנגנונים הקובעים רגישות לזיהומים בדרכי השתן.

מודל יצירת דלקת בדרכי השתן: טכניקה למתן חיידקים אורופתוגניים בעכבר לפיתוח מודל דלקת בדרכי השתן

סרטון זה מדגים את ביסוס זיהום Escherichia coli אורופתוגני בשלפוחית השתן של עכבר נקבה באמצעות החדרת קטטר טרנס-שופכתי. החיידקים המוזרקים מצליחים לבסס זיהום בדרכי השתן בתוך שלפוחית השתן, ומספקים פלטפורמה רבת ערך לחקר מחלות הקשורות לבריאות הקשורות לדרכי השתן.

צנתור דרך השופכה וחיסון חיידקי ליצירת מודל דלקת בדרכי השתן בעכברים זכרים

הקמת מודל של דלקת בדרכי השתן בעכברות

דלקת של הערמונית עלולה להיות גורם תורם בתיווך כאב באגן בערמונית כרונית. אנו מתארים את הליך ההכנה של בידוד חיידקים טופל, החדרה של חיידקים לתוך השופכה של עכברי זכרים ומתודולוגיה למדידת allodynia מישוש בעכברים לאורך זמן.

מדידה של Allodynia משושים בדגם Murine של ערמונית קטריאלי

הדגם הוקמה של צנתור-transurethral של עכברים מאפשרת לימוד פתולוגיות בשלפוחית השתן, כולל זיהום בדרכי השתן, אך ניתן לבצע רק אצל נקבות. מודל חדש של זכר החדרה-transurethral, המובאים כאן, יאפשר מחקר באזור המסומן חזקה קליניים ואפידמיולוגיים ההבדלים בין המינים.

זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-Transurethral של זכר ונקבה עכברים

מודל עכברי של חיסון אורופתוגני E. coli (UPEC) טרנס-urethral כדי ליצור מאגרי שלפוחית שתן תוך-תאיים סמויים וחשיפה שלפוחית השתן לאחר מכן ל - G. vaginalis כדי לגרום ל- UPEC UTI חוזר ונשנה מודגם. כמו כן הודגמו ספירה של חיידקים, ציטולוגיה של שתן, וקיבוע ועיבוד שלפוחית השתן באתרם לסריקת מיקרוסקופיית אלקטרונים.

זיהום חוזר בדרכי השתן של Escherichia coli שנגרם על ידי גרדנרלה וגינליס חשיפה לשלפוחית השתן בעכברים

כתב יד זה מתאר את הניהול התוך-עבזי של חיידקים אורופתיוגניים עם לוקס אופרון כדי לגרום לדלקת בדרכי השתן בעכברים ואת אורך האורך שלאחר מכן בניתוח vivo של העומס החיידקי באמצעות הדמיית ביו-לומינציה.

מעקב אורך של דלקות בדרכי השתן והטיפול שלהם בעכברים באמצעות הדמיית ביו-לומינציה

למדו כיצד להקים מודל עכברים לאינפקציות דרכי השתן ו-CAUTI. השיטה כוללת הכנת חיידקים, קטטריזציה ומדידת עומס חיידקי בנוזלי השתן וברקמות. המודל מאפשר חקר מנגנוני פתוגנזה ופיתוח טיפולים חדשים.

ההקמה ואפיון של UTI וCAUTI במודל עכבר

גלה סרטונים נוספים