Name: שיטה לגרום סגור ראש הפגיעה מוחית טראומטית ב דרוזופילה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 22 s
Description: למדו שיטה לגרום סגור ראש הפגיעה מוחית טראומטית בדרוזופילה באמצעות מכשיר HIIT. שיטה זו מאפשרת חקירת מנגנונים תאיים ומולקולריים של פציעות מוח ומספקת כלי רב עוצמה למחקר נוירולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומי לבריאות מענק, R01 AG033620 (BG) ועל ידי רוברט דרייפר טכנולוגיה חדשנות מימון (דאו).

1. בנייה של מכשיר HIT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את האביב ללוח באמצעות שני מלחציים וארבעה ברגים (איור 1 א). מרכז את מהדק ביחס לרוחב הלוח ונוגח אותם אחד נגד השני עם סומק המהדק החיצוני עם הקצה של הלוח. לפני מצרף את מהדק, לכופף אותם באמצעות צבת שיתאים היטב על האביב. הערה: ראה טבלת 1 לתיאורים של החומרים הנדרשים לבניית מכשיר HIT. הסוף מהודק של האביב צריך להיות 1/8 אינץ &#39;(3.2 מ&quot;מ) מקצה הלוח, ואת הקצה החופשי צריך להרחיב על הלוח על ידי 3/4 אינץ&#39; (19 מ&quot;מ). התאם את האביב, כך שהוא נמצא במקביל לאורכו של הלוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עטוף את הקצה החופשי של הקפיץ פעם אחת סביב עם רצועת הדבק של לולאות סקוטש. הקצה החיצוני של סקוטש צריך להיות מיושר עם סוף האביב. סקוטש הוא חשוב משום שהוא משמש כדי לאבטח את הבקבוקון למעיין על ידי creating הולם דחיסה חזק. סקוטש גם מאפשר חיבור קל וההסרה של בקבוקונים, המאפשר בקבוקונים רבים להיות מעובד בתקופה קצרה של זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את כיסוי דלי הקרח הפוך, מרוכז, חזק נגד לוח העץ. כוון את האזור המורם של כיסוי דלי הקרח כך שהקצה הארוך מקביל לרוחב של הלוח. שים לב שהאזור שהועלה של דלי הקרח הוא 1/2 אינץ &#39;(13 מ&quot;מ) גבוה יותר מאשר לוח העץ, כך שכאשר בקבוקון מחובר לאביב האביב לא לשכב על הלוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק את כל המכשיר נגד אובייקט קבוע כגון קיר, כך שכיסוי דלי הקרח תקוע בין הלוח והאובייקט ולא זז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קלטת מד זווית נייר לתחתית קרטון לטוס מגש בקבוקון ולסבול את זה על קצה נגד האורך של הלוח כך שהסימן 90 ° מיושר עם האביב כאשר הוא נסוג למצב אנכי בצורה מושלמת. </li></ol> 2.מבצע של מכשיר HIT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום בין CO 1 ו -60 2 -anesthetized זבובים בבקבוקון ריק ופקק הבקבוקון באמצעות כדור צמר גפן הדוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגביל את הזבובים לאינץ &#39;התחתון 1 (2.5 סנטימטרים) של הבקבוקון על ידי לחיצה על כדור צמר גפן לתוך הבקבוקון עד שהוא 1 אינץ&#39; (2.5 סנטימטרים) מהתחתית. זה מועיל למתוח קו על הבקבוקון בסימן 1 אינץ &#39;(2.5 סנטימטרים). שים לב שמגביל זבובים לאזורים גדולים יותר או קטנים יותר של הבקבוקון יכול להשפיע על החומרה של פנוטיפים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 5 דקות לזבובים להתאושש ניידות מCO 2. שים לב שזה לא ידוע אם 5 דקות מספיקות כדי להסיר את ההשפעות של CO 2 לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הקצה של האביב לתוך הבקבוקון עד הקצה הפנימי של סקוטש הוא מיושר עם החלק העליון של הבקבוקון (איור 1). כאשר באביב הוא שוכב, 1 אינץ &#39;(2.5 סנטימטרים) של הבקבוקון צריך לחפוף את האזור המורם של כיסוי דלי קרח. ניתן לעשות שימוש חוזר בקבוקי מ &#39;כל זמנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעת שישב, להחזיק את הבקבוקון באזור סקוטש באמצעות האגודל והאצבע של יד שמאל. החזק את הלוח הדוק לbenchtop ביד הימין שלך. לחלופין, להשתמש C-מהדק להחזיק את הלוח ההדוק לbenchtop. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את האביב בצורה מושלמת ישר בחזרה לזווית הרצויה. שחרר את האביב. לאפשר האביב להגיע לעצירה מוחלטת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הבקבוקון מהמעיין ולאפשר הזבובים להתאושש במשך ≥5 דקות. להכפיף את הזבובים לשביתה נוספת או להעביר את הזבובים לבקבוקון עם אוכל לטוס. הערה: מגוון רחב של מבחני יכול לשמש כדי להעריך את ההשפעות פנוטיפי של שביתות ממכשיר HIT. לדוגמא, השפעות על תוחלת חיים יכולות להיקבע על ידי ניתוח אחוזים מזבובים שלשרוד בזמנים לאחר פציעה, השפעות על מורפולוגיה המוח יכולות להיקבע על ידי ניתוח היסטולוגית של הראש, והשפעות על ביטוי גנים יכולות להיקבע על ידי ניתוח כמותי של רמות ה- mRNA 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Determinהשפעות אלקטרוניים של ההליך שאינן בשל שביתות על ידי זהה טיפול זבובי שליטה שאינם נתון לשביתות. ללבוש שמיעת הגנה מפני ההשפעה של הבקבוקון נגד כיסוי דלי הקרח מייצרת רעש חזק. </li></ol>

<ol><li>Harrison-Felix, C. L., Whiteneck, G. G., Jha, A., DeVivo, M. J., Hammond, F. M., Hart, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+over+four+decades+after+traumatic+brain+injury+rehabilitation%3A+A+retrospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Phys+Med+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Mortality over four decades after traumatic brain injury rehabilitation: A retrospective cohort study.</a> Arch Phys Med Rehabil. 90, 1506-1513 (2009).</li>
<li>Coronado, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveillance+for+traumatic+brain+injury-related+deaths+%E2%80%93+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Surveill+Summ%22%5BJournal%5D)">Surveillance for traumatic brain injury-related deaths – United States.</a> MMWR Surveill Summ. 60, 1-32 (1997).</li>
<li>Masel, B., DeWitt, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injury%3A+A+disease+process%2C+not+an+event%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injury: A disease process, not an event.</a> J. Neurotrauma. 27, 1529-1540 (2010).</li>
<li>Blennow, K., Hardy, J., Zetterberg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropathology+and+neurobiology+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The neuropathology and neurobiology of traumatic brain injury.</a> Neuron. 76, 886-899 (2012).</li>
<li>Prins, M., Greco, T., Alexander, D., Giza, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+traumatic+brain+injury+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+Mech%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of traumatic brain injury at a glance.</a> Disease Models Mech. 6, 1307-1315 (2013).</li>
<li>Menon, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+challenges+in+clinical+trails+in+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Unique challenges in clinical trails in traumatic brain injury.</a> Crit Care Med. 37, S129-S135 (2009).</li>
<li>Xiong, Y., Mahmood, A., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Animal models of traumatic brain injury.</a> Nature Rev Neurosci. 14, 128-142 (2013).</li>
<li>Balsiger, Z., Leudkte, J., Mawer, S., Willey, M. HIT device high speed analysis. , Available from:
	
 <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=hkmCXwPacBQ">https://www.youtube.com/watch?v=hkmCXwPacBQ</a> (2014).</li>
<li>Davceva, N., Janevska, V., Illevski, B., Petrushevska, G., Popeska, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+occurrence+of+acute+subdural+haematoma+and+diffuse+axonal+injury+as+two+typical+acceleration+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22J+Forensic+Leg+Med%22%5BJournal%5D)">The occurrence of acute subdural haematoma and diffuse axonal injury as two typical acceleration injuries.</a> J Forensic Leg Med. 19, 480-484 (2012).</li>
<li>Katzenberger, R. J., Loewen, C. A., Wassarman, D. R., Petersen, A. J., Ganetzky, B., Wassarman , D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila.+model+of+closed+head+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">A Drosophila. model of closed head traumatic brain injury.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 110, E4152-E4159 (2013).</li>
<li>Fang, Y., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axon+degeneration+and+regeneration%3A+insights+from+Drosophila+.models+of+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Axon degeneration and regeneration: insights from Drosophila .models of nerve injury.</a> Annu Rev Cell Biol. 28, 575-597 (2012).</li>
<li>Babcock, D. T., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+accurate+and+rapid+measurement+of+flight+performance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An improved method for accurate and rapid measurement of flight performance in Drosophila.</a> J Vis Exp. (84), e51223(2014).</li>
<li>Tully, T., Preat, T., Boynton, S. C., Vecchio, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+consolidated+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of consolidated memory in Drosophila.</a> Cell. 79, 35-47 (1994).</li>
<li>Andretic, R., Shaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essentials+of+sleep+recordings+in+Drosophila.%3A+moving+beyond+sleep+time%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Essentials of sleep recordings in Drosophila.: moving beyond sleep time.</a> Methods Enzymol. 393, 759-772 (2005).</li>
</ol>

אין לנו ניגוד עניינים לחשוף.

שיטת מכשיר HIT נבדל משיטות אחרות שתגרומנה לפגיעה טראומטית בזבובים על ידי כך שהיא גורמת לראש סגור ולא חודר 11 TBI. יתר על כן, שיטת מכשיר HIT לוקחת פחות זמן, מאמץ, מיומנות ולגרום TBI בזבובים רבים, ולכן השיטה היא נוחה יותר מאשר בשיטות אחרות למסכים גנטיים בקנה מידה גדולה. לבסוף, העובדה שהפציעות עיקריות שנגרמו על ידי מכשיר HIT אינן מוגבלות למוח הוא גם מגבלה ויתרון. זה הגבלה כי מחקרים נוספים נדרשים להעריך האם פנוטיפים הם עקב פציעה טראומטית למוח או לחלקים אחרים בגוף. מצד השני,...

An author's name was corrected in the publication of <a href="http://www.jove.com/video/52905">A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila</a>. The second to last author's was spelled incorrectly. It has been updated from:
Barry Ganetky
to:
Barry Ganetzky

An author's name was corrected in the publication of <a href="http://www.jove.com/video/52905">A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila</a>.

Erratum: A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

פגיעה מוחית טראומטית (TBI) מוגדרת כפגיעה במוח מכוח מכאני חיצוני. הנפוץ ביותר, תוצאות TBI מכוחות הראש סגורים כגון כוחות בוטים והאצת אינרציה וכוחות ההאטה שגורמים למוח להכות את החלק הפנימי של הגולגולת. בארצות הברית, ההערכה היא כי 50,000 אנשים מתים בכל שנה מTBI ו2.5-6,500,000 אנשים חיים עם ההשלכות של TBI, כוללים מתישים פיזי, קוגניטיבית, ובעיות התנהגות 1,2. ההשלכות של TBI הן לא רק עקב פציעות מכאניות עיקריות למוח, אלא גם לפציעות המשניות תאיות ומולקולריות למוח, כמו גם רקמות אחרות המתרחשות לאורך זמן 3-5. הפיתוח של גישות לאבחון וטיפול TBI הוכיח להיות קשה כי TBI הוא תהליך מחלה מורכב. הטבע המשתנה של פציעות עיקריות, פיזיולוגיה אנושית, וגורמים סביבתיים גורם לi המשנית הטרוגניתnjuries ופתולוגיות. גורמים משתנים בסיסי כוללים את חומרת הפגיעה הראשונית, זמן בין פציעות עיקריות החוזרות ונשנות, וגיל וגנוטיפ של הפרט. הבנה כיצד כל גורם משתנה תורם להשלכות של TBI עשויה לסייע בפיתוח של גישות לאבחון וטיפול TBI 6,7. כאן אנו מתארים שיטה לגרימת TBI הראש הסגור בmelanogaster דרוזופילה (זבובי פירות), שניתן להשתמש כדי לשרטט את תרומתם של גורמים משתנים להשלכות של TBI. השיטה מבוססת על תצפית ראשונית שמאוד להכות את הצד של בקבוקון תרבות זבוב על כף יד שנגרמה פרא-סוג טס להופכים באופן זמני נכה, תוצאה סבירה של TBI. לפיכך, אנו נבנו מכשיר הטראומה (HIT), השפעה הגבוה לשחזר כוחות התאוצה וההאטה מהפעולה ביד להכות. סרט במהירות גבוהה מראה כי שביתה אחת מHIT מכשיר גורם זבובים ליצור קשר עם קיר הבקבוקון מספר פעמים עם הראש וגופם 8. במידה מסוימת, את כל אנשי הקשר עלולים לגרום למוח הזבוב ליתיר ולעוות נגד הקפסולה הראש, דומה למה שקורה לבני אדם בנפילות ותאונות דרכים 9. בהתאם לכך, זבובים שטופל בפנוטיפים תצוגת מכשיר HIT בקנה אחד עם פגיעה מוחית, כולל נבצרות זמניות ואחריו אטקסיה, התאוששות הדרגתית של ניידות, שינויי ביטוי גנים בראש, וניוון של מערכת עצבים מתקדמות במוח 10. לפיכך, מכשיר HIT מאפשר ללמוד TBI באמצעות הארסנל העצום של כלים וטכניקות שפותחו לזבובים ניסיוניים.

<table><tbody><tr><td>קפיץ דחיסה מצופה אבץ</td><td>הילמן&nbsp; קבוצה</td><td></td><td>540189 9 7/8 אינץ' (אורך, 2.2 ס"מ), 15/16 אינץ' (קוטר חיצוני, 2.4 ס"מ), 0.12 אינץ' (גודל חוט, 0.3 ס"מ)</td></tr><tr><td>לוח</td><td></td><td></td> עץ <td>9 אינץ' (אורך, 22.9 ס"מ), 6.5 אינץ' (רוחב, 16.5 ס"מ), 0.75 אינץ' (גובה, 1.9 ס"מ)</td></tr><tr><td>מהדקים</td><td>סיגמא ייצור חשמל 49822</td><td></td><td>3.10 אינץ' (אורך, 7.9 ס"מ), 0.68 אינץ' (רוחב, 1.7 ס"מ), 1.11 אינץ' (גובה, 2.8 ס"מ), רצועות EMT דו-חוריות, לחץ על הסוג עבור צינור EMT מפלדה בגודל 1 אינץ' (2.5 ס"מ)</td></tr><tr><td>לולאה חצי סקוטש</td><td></td><td></td> דביק <td>3 אינץ' (אורך, 7.6 ס"מ), (רוחב 3/4 אינץ', 1.9 ס"מ)</td></tr><tr><td>כיסוי דלי קרח פוליאוריטן</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-591-45</td><td>9 1/8 אינץ' (אורך, 23.2 ס"מ), 9 1/8 אינץ' (רוחב, 23.2 ס"מ), 1 1/4 אינץ' (גובה, 3.2 ס"מ)</td></tr><tr><td>בקבוקוני זבוב מפלסטיק</td><td>Applied Scientific</td><td>AS-510</td><td>3 11/16 אינץ' (גובה, 9.4 ס"מ), 1 1/16 אינץ' (קוטר פנימי, 2.7 ס"מ), 1 1/8 אינץ' (קוטר חיצוני, 2.9 ס"מ)</td></tr><tr><td>כדורי צמר גפן גדולים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22-456-883</td><td></td></tr><tr><td>מד זווית</td><td></td><td></td> נייר <td>10 אינץ' (קוטר, 25.4 ס"מ)</td></tr></tbody></table>

שיטה לגרום סגור ראש הפגיעה מוחית טראומטית ב<em&gt; דרוזופילה</em

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

פגיעה מוחית טראומטית (TBI) משפיעה על מיליוני אנשים בכל שנה, גורמת לירידת ערך של פיזי, קוגניטיבית, ופונקציות התנהגותיות ומוות. מחקרים באמצעות תסיסנית תרמו פריצות דרך חשובות בהבנת תהליכי נוירולוגיות. לפיכך, במטרה להבין את הבסיס התאי ומולקולרי של מחלות TBI בבני אדם, שפיתחנו מכשיר הגבוה השפעת הטראומה (HIT) להסב את הראש סגור TBI בזבובים. זבובים נתון לפנוטיפים תצוגת מכשיר HIT בקנה אחד עם TBI אדם כגון נבצרות זמניות וניוון מוחיה מתקדם. מכשיר HIT משתמש במנגנון המבוסס על קפיץ כדי להניע את הזבובים על הקיר של בקבוקון, וגרם לנזק מכאני למוח הזבוב. המכשיר הוא זול וקל לבנייה, הפעלתו היא פשוטה ומהירה, והיא מייצרת תוצאות לשחזור. כתוצאה מכך, מכשיר HIT יכול להיות משולב עם כלים ניסיוניים קיימים וטכניקות לזבובים כדי לטפל בבסיסייםשאלות על TBI שיכול להוביל לפיתוח של כלי אבחון וטיפולים לTBI. בפרט, מכשיר HIT ניתן להשתמש כדי לבצע מסכי גנטיים בקנה מידה גדולה כדי להבין את הבסיס הגנטי של מחלות TBI.

אנחנו מעוניינים להבין מדוע זבובים מתים זמן קצר לאחר פגיעה ראשונית. כדי לכמת מוות, קבענו מדד התמותה ב 24 שעות (MI 24), המהווה את האחוז של זבובים שמת בתוך 24 שעות של הפגיעה העיקרית. זבובים נתון לשביתות ממכשיר HIT הודגרו של 25 מעלות צלזיוס בבקבוקון עם אוכל לטוס, ומספר הזבובים המתים נספר לאחר 24 שעות. אנחנו השתמשנו בגישה זו כדי לזהות גורמים המשפיעים על 24 MI ומצאנו כי 24 MI אינו מושפע ממספר הזבובים בבקבוקון (10 עד 60 זבובים נבדקו), את הזמן בין שביתות ח...

כאן אנו מתארים שיטה לגרום פגיעת ראש סגור מוח הטראומתי (TBI) בדרוזופילה. שיטה זו מספקת שער לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים העומדים בבסיס פתולוגיות TBI באמצעות המגוון הרחב של כלים וטכניקות ניסיוניים זמינים לזבובים.

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לגרום לפגיעה מוחית טראומטית סגורה בראשים של זבובים. זאת מושגים תחילה על ידי הנחת הזבובים במבחנה, במרחק של אינץ' אחד מהתחתית.השלב השני הוא חיבור המבחנה למכשיר ה-HIIT. לאחר מכן, הקפיץ מוסט לזווית מסוימת, המבחנה משוחררת ומושארת עד למנוחה מלאה. לבסוף, ניתן להשתמש במגוון בדיקות התנהגותיות, מורפולוגיות ומולקולריות כדי לאפיין את ההשלכות של פגיעת הראש הטראומטית שהתהוותה.היתרון המרכזי של שיטה זו על פני שיטות קיימות, כגון שיטת נפילת המשקל במכרסמים, הוא שניתן לבחון מספר רב של בעלי חיים בפרק זמן קצר. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום של פגיעות מוחית טראומטית, כגון הסיבה להבדלים בתוצאות של פגיעה מוחית טראומטית בין פרטים שונים. ראשית, יש להכין את חומרי הגלם המפורטים בטבלה 1 של פרוטוקול הטקסט המצורף.כופפו את התפסים באמצעות פלייר כך שיתאימו באופן הדוק לקפיץ. לאחר מכן, מרכזו את התפסים ביחס לרוחב הלוח והצמידו אותם זה לזה, כאשר התפס החיצוני מיושר עם קצה הלוח. כוונו את הקפיץ כך שיהיה מקביל לאורך הלוח, ולאחר מכן חברו את התפסים מעל הקפיץ ואל הלוח באמצעות ארבעה ברגים.שלב הבא, עטפו רצועה של סרט הדבקה מסוג וולקרו. לאחר סיבוב אחד סביב הקצה החופשי של הקפיץ, הקצה החיצוני של הוולקרו צריך להיות בקו אחד עם קצה הקפיץ. הניחו את כיסוי דלי הקרחה הפוך, במרכז ובצורה הדוקה

a-method-to-inflict-closed-head-traumatic-brain-injury-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מתאר כיצד לנתח ולבודד את מוח הדרוזופילה הבוגר – הליך הכרחי לדמיון האיבר, שאחרת מוסתר על ידי הקוטיקולה, העין ורקמת קנה הנשימה. הפרוטוקול לדוגמה מראה הדגמה מפורטת המניבה תכשירים באיכות גבוהה שניתן להשתמש בהם לשיטות אימונוסטיין והדמיה בנוירוביולוגיה של דרוזופילה.

דרוזופילה דיסקציה מוחית של מבוגרים: שיטה בנוירוביולוגיה של זבובים

סרטון זה מדגים הליך לגרימת פציעה טראומטית בראש סגור בזבובי דרוזופילה מורדמים באמצעות מכשיר תקיפה עם מפגע מונע גז. הפגיעה פוגעת בתפקוד העצבי ופוגעת ביכולת ההליכה.

טכניקה לגרימת פגיעה מוחית טראומטית בראש סגור בזבובי דרוזופילה

סרטון זה מדגים שיטה לגרימת פגיעה עצבית ממוקדת בזחלי Drosophila באמצעות לייזר בעל עוצמה גבוהה. לאחר מיקום הזחל מתחת למיקרוסקופ, לייזר בעל הספק נמוך סורק אחר נוירונים פלואורסצנטיים, ואז עוצמת הלייזר מוגברת כדי לגרום לנזק מקומי. הפציעה מאושרת על ידי פלואורסצנטיות מוגברת ומכתש באתר הפציעה.

גרימת פגיעה עצבית ממוקדת באמצעות לייזר בעל עוצמה גבוהה בזחל דרוזופילה

הסרטון מדגים את השימוש במכשיר טראומה בעל השפעה גבוהה (HIT) כדי לגרום לפגיעה מוחית טראומטית בראש סגור (TBI) ב-Drosophila. TBI גורמת לטראומה מוחית מכנית שמשפיעה על תפקוד תאי העצב, מה שמוביל לאורך זמן לניוון עצבי ולתמותה.

שיטה לגרימת פגיעה מוחית טראומטית בראש סגור בדרוזופילה

סרטון זה מדגים את השראת פגיעה מוחית טראומטית חודרת במוח הדרוזופילה. זבובים שזה עתה הופיעו נבחרים, מורדמים וממוקמים תחת מיקרוסקופ סטריאו המצויד בפלואורסצנטיות. גוף הפטרייה המבטא GFP מזוהה, וסיכת Minutien מוחדרת כדי לגרום לפציעה. הזבובים מורשים להתאושש למחקרים נוספים.

גרימת פגיעה מוחית טראומטית חודרת בזבובי דרוזופילה בוגרים

מקור: Logsdon, A. F., et al. מודל גלי פיצוץ בעוצמה נמוכה להערכה פרה-קלינית של פגיעה מוחית טראומטית קלה בראש סגור במכרסמים. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים את השראת פגיעה מוחית טראומטית קלה בראש סגור במודל עכבר באמצעות מערך צינור הלם גז בלחץ. גל הלחץ שנוצר קורע את קרום הפוליאסטר, ומעביר גל הלם לראש העכבר שגורם לתנועה מוחית מהירה בתוך הגולגולת, וגורם לפגיעה מוחית טראומטית קלה.

יצירת פגיעה מוחית טראומטית קלה בראש סגור במודל עכברים

כאן, אנו מתארים גישה חדשה לסבול ראש בראש טראומטי פגיעה מוחית תסיסנית melanogaster . השיטה שלנו יש את היתרון של אספקת ישירות חוזרות עם חוזק מתכווננת לראש לבד. חקירה נוספת של מערכת חסרי החוליות תסייע להאיר את הפתוגנזה של אנצפלופתיה טראומטית כרונית.

שיטה חדשנית מודל אנצפלופתיה כרונית טראומטית ב<em&gt; תסיסנית</em

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול שימוש דרוזופילה נוירון חישה - דנדריטים arborization (da) נוירון פציעה דגם, אשר משלב ויוו לחיות הדמיה, שני הפוטונים לייזר axotomy/dendriotomy ואת הכלים גנטי לטוס עוצמה, פלטפורמה לסינון היזמים הפוטנציאליים, מעכבי של neuroregeneration.

מודל פציעה דרוזופילה In Vivo ללמוד Neuroregeneration ב ההיקפית ואת מערכת העצבים המרכזית

מאמר זה מספק פרוטוקולים מפורטים לגרימת פגיעה מוחית טראומטית חודרת (PTBI) לדרוסופילים למבוגרים ובחינת הנוירוגנזה המתקבלת.

גירוי וניתוח נוירוגנזה למבוגרים במוח המרכזי של דרוזופילה

פרוטוקול זה מציג מודל עכברי שונה של פגיעה מוחית טראומטית קלה חוזרת ונשנית (rmTBI) הנגרמת באמצעות שיטת פגיעת ראש סגור (CHI). הגישה כוללת חלון גולגולת דליל וכלי הקשה נוזליים כדי להפחית את הדלקת הנגרמת בדרך כלל על ידי חשיפה לקרומי המוח, יחד עם שיפור יכולת השחזור והדיוק במידול rmTBI במכרסמים.

מודל עכבר שונה של פגיעה מוחית טראומטית קלה חוזרת ונשנית המשלבת חלון גולגולת דליל וכלי הקשה נוזליים

מחקר זה מציג פרוטוקול פשוט לעיבוד רקמות הכולל עריפת ראש, קיבוע, קריוסקציה, צביעה פלואורסצנטית, צביעה חיסונית והדמיה, שניתן להרחיב להדמיה קונפוקלית ורב-פוטונית. השיטה שומרת על יעילות דומה לדיסקציות מורכבות, ועוקפת את הצורך במיומנויות מוטוריות מתקדמות. ניתוח תמונה כמותי מספק פוטנציאל חקירה נרחב.

הקפאה ישירה של ראשי דרוזופילה לצביעה פלואורסצנטית משופרת של המוח וצביעה חיסונית

למדו שיטה לגרום סגור ראש הפגיעה מוחית טראומטית בדרוזופילה באמצעות מכשיר HIIT. שיטה זו מאפשרת חקירת מנגנונים תאיים ומולקולריים של פציעות מוח ומספקת כלי רב עוצמה למחקר נוירולוגי.

שיטה לגרום סגור ראש הפגיעה מוחית טראומטית ב

גלה סרטונים נוספים