Simple Bulk Readout of Digital Nucleic Acid Quantification Assays

Leanna S. Morinishi; Paul Blainey

doi:10.3791/52925

Readout גורף פשוט של דיגיטלי מבחני כימות חומצות גרעין

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Simple Bulk Readout of Digital Nucleic Acid Quantification Assays

Readout גורף פשוט של דיגיטלי מבחני כימות חומצות גרעין

Full Text

8,725 Views

06:55 min

September 24, 2015

DOI: 10.3791/52925-v

Leanna S. Morinishi¹, Paul Blainey²

¹Broad Institute, ²Department of Biological Engineering,Massachusetts Institute of Technology

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

אנו מתארים בדיקה דיגיטלית של נקודת קצה לכימות חומצות גרעין עם קריאה פשוטה (אנלוגית). אנו מודדים פלואורסצנטיות בתפזורת של בדיקות דיגיטליות מבוססות טיפות באמצעות מכונת qPCR סטנדרטית במקום מכשור מיוחד ומאשרים את התוצאות שלנו במיקרוסקופיה.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לפשט את הקריאה של בדיקות טיפות דיגיטליות באמצעות מכשיר PCR קונבנציונאלי בזמן אמת למדידת פלואורסצנטיות בתפזורת של הבדיקה. זה מושג על ידי הכנת תגובות הגברה של הדגימות המעניינות, שני תקנים ויצירת טיפות לחלוקה לאלפי כורים בגודל ננו-ליטר. השלב השני הוא לדגור את הטיפות כדי להגביר את חומצות הגרעין בתוך כל טיפה.

לאחר מכן, הקרינה בתפזורת של כל דגימה או תקן נמדדת באמצעות QPC סטנדרטי או תרמו-סייקלר השלב האחרון הוא לחזות את חלק הטיפות הפלואורסצנטיות בדגימות המעניינות באמצעות עקומה סטנדרטית שנוצרה מהדגימות הסטנדרטיות. כדי לאמת את הביצועים של שיטה זו, ניתן להשתמש במיקרוסקופיה פלואורסצנטית כדי להעריך באופן עצמאי את ביצועי הכימות של בדיקת הקרינה בתפזורת.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos