Name: באמצעות קאקו-2 תאים לחקר ליפידים תחבורה במעי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: חקור תחבורת ליפידים במעי באמצעות תאי Caco-2 כמודל מעבדתי. השיטה כוללת בידוד ליפופרוטאינים באולטרה-צנטריפוגה וניתוח גודל חלקיקים. המחקר מספק תובנות למנגנוני ספיגת שומנים וזמינות ביולוגית של תרופות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי פרס מענק הזרע מהמכללה לרוקחות של אוניברסיטת קליפורניה נורת'סטייט (ל-AMN). המחברים רוצים להודות למכללת הרוקחות של אוניברסיטת קליפורניה נורת'סטייט על כיסוי עלות הפרסום של מאמר זה, ולג'ורג' טלבוט על עזרתו בעריכת כתב היד הזה.

1. תחזוקה של קאקו-2 תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בכלים בתרבית רקמה רגילים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפשיר את קאקו-2 תאים מבקבוקון קפוא על ידי הצבת את הבקבוקון באמבט מים 37 מעלות צלזיוס, ומייד להוסיף אותם לצלחת תרבית רקמת 10 סנטימטרים המכילה 10 מיליליטר של תקשורת צמיחה (15% בסרום שור עוברי מחומם מראש (FBS ) בנשר בינוני השתנה Dulbecco (DMEM)). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר קאקו-2 התאים הגיעו 50-70 מפגש%, לפצל אותם 1: 6 על ידי דוגרים התאים עם 3 מיליליטר של 0.05% חומצת ethylenediaminetetraacetic / 0.53 מ&quot;מ טריפסין (EDTA) על 37 מעלות צלזיוס עד שהם מנותקים (15 דקות) . כדי למנוע clumping תא, לערבב את התאים מספר פעמים על ידי pipetting העדין. הוסף 0.5 מיליליטר של תאי trypsinized לצלחת תרבית רקמת 10 סנטימטרים המכילה 10 מיליליטר של תקשורת צמיחה מחוממת מראש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נער בעדינות את המנות כמה פעמים בכיוון קדימה ואחורה ואחריו כיוון שמאלה וימינה. הימנע מתערבל המנותכפי שהוא עשוי לגרום לפיזור של תאים שאינו שווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הכלים על משטח שטוח בחממה 37 ° C מסופקת עם 5% CO 2. משטחים משופעים עשויים גם לגרום לפיזור של תאים שאינו שווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות את תקשורת צמיחת יום לאחר תחילת הדגירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג התאים ולהקליט את היום שהם מגיעים למפגש. זה ייקח כ 1 שבוע לתאים מגיעים למפגש מהיום שהם נפרדו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות את תקשורת הצמיחה פעמיים בשבוע לפני התאים להגיע למפגש. ברגע שהתאים הגיעו מפגש, לשנות את תקשורת צמיחה בכל יום אחר. אחרי התאים 7 ימים לאחר מחוברות, לשנות את תקשורת הצמיחה יומית. הערה: התאים מוכנים לניסויים כאשר הם 13 ימים שלאחר מחוברות (איור 1). מאז תאי סופו של הדבר להיות פחות יעילים בייצור יפופרוטאינים, להשתמש בתאים שבין 13 עד 17 ימים לאחר מחוברות 8. עבור לשלב 3 על איך לבצע את הניסוי.</li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במערכת הקרום החדיר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרעי קאקו-2 תאים בכנס הקרום החדיר כמתואר בשלב 1.1.1.1. לעיל. הימנע משימוש בתאים מבקבוקון קפוא כי צמיחת התאים שלהם היא בדרך כלל איטית יותר (תקופת החלמה). בקצרה, להוסיף 0.5 מיליליטר של תאי trypsinized לתא הפסגה (תא עליון) המכיל 10 מיליליטר של תקשורת צמיחה מחוממת מראש. כמו כן, להוסיף 10 מיליליטר של תקשורת צמיחה המחוממת מראש לתא basolateral (בתא תחתון). הערה: התרגול הטוב ביותר, להוסיף את תקשורת הצמיחה לתא הפסגה הראשונה ולאחר מכן לתא basolateral. כאשר מוציא את המדיה הישנה, ​​להסיר את המדיה basolateral לפני תקשורת הפסגה. הימנע תוקע את קרום פוליקרבונט כפי שהוא עשוי להיקרע הקרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשל הראות לקויה תא דרך קרום פוליקרבונט, זרע קאקו-2 התאים בצלחת תרבית רקמה רגילה עם צפיפות דומה, ולהשתמש במנה זו לשפוט את מפגש התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקוב יםteps 1.1.2-1.1.6 לעיל. </li></ol></li></ol> 2. ג&#39;ין ביטוי יתר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בגישת transfection הרגילה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרעי קאקו-2 תאים בצלחת תרבית רקמה, כמתואר ב1.1.1.1.-1.1.4 לעיל. הערה: כאשר התאים כ 40-50% ומחוברות, הם מוכנים להיות transfected. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 67 μl של מגיב transfection לμl 472 של התקשורת בסרום המופחתת בצינור microcentrifuge. יש להימנע ממגע של מגיב transfection חי עם קיר הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 23 מיקרוגרם של pLL3.7 משופרים חלבון ירוק ניאון (eGFP) 9 למגיב transfection / תערובת תקשורת סרום מופחתת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה את התערובת במשך 20 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף תקשורת צמיחת קאקו-2 תאים עם 8 מיליליטר של 10% FBS בDMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף את תערובת DNA / מגיב transfection / מדיה סרום מופחתת ירידה מבחינת לצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נער בעדינות את המנות כמה פעמים בקדימה ותואר ראשוןכיוון ckward אחרי כיוון שמאלה וימינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצלחת בחממת 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את המדיה בצלחת עם 10 מיליליטר של תקשורת צמיחת יום לאחר תחילת הדגירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על ביטוי גנים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג ביטוי גנים ללא 6-diamidino-2-phenylindole צביעת 4 &#39;, (DAPI). באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, לקבוע את האחוזים של תאים שהם ירוקים. אחוז מייצג את יעילות transfection. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג ביטוי גנים עם מכתים DAPI. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם מי מלח פוספט (PBS) שלוש פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את התאים על ידי הוספת 10 מיליליטר של פורמלדהיד 4% ב- ​​PBS (דגירה 10 דקות ב RT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם PBS פעמים שלוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים בחושך במשך 15 דקות ב RT עם 8 מיליליטר של PBS המכיל 1: 500 DAPI, BSA 1%, digitonin 0.01%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם PBS פעמים שלוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Uלשיר מיקרוסקופ פלואורסצנטי, לקבוע את מספר התאים שהם בצבע ירוק / כחול ביחס לאלה ש( פנל עליון איור 2) כחול. בחישוב אחוז מייצג את יעילות transfection. </li></ol></li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במערכת ביטוי יתר lentivirus 10 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי זרע אנושיים כליה עוברית (HEK) 293T בצלחת תרבית רקמת 15 סנטימטר (10% FBS בDMEM כתקשורת הצמיחה שלהם). הערה: כאשר התאים כ 60-70% ומחוברות, הם מוכנים להיות transfected. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 162 μl של מגיב transfection ל1,133 μl של התקשורת בסרום המופחתת בצינור microcentrifuge 11. יש להימנע ממגע של מגיב transfection חי עם קיר הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 24 מיקרוגרם של pLL3.7 eGFP (או מבנה אחר), 15.6 מיקרוגרם של אלמנט תגובת Rev (RRE), 6.0 מיקרוגרם של REV, ו -8.4 מיקרוגרם של גליקופרוטאין וירוס stomatitis שלפוחי (VSVG) למגיב transfection / Rתערובת תקשורת הסרום צמח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה את התערובת במשך 20 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את המדיה הצמיחה עם 16 מיליליטר של 10% FBS בDMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף את תערובת DNA / מגיב transfection / מדיה סרום מופחתת ירידה מבחינת לצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נער בעדינות את המנות כמה פעמים בכיוון קדימה ואחורה ואחריו כיוון שמאלה וימינה. זה נורמלי לראות כמה תאי HEK293T מנותקים בשלב זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצלחת בחממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 24 שעות של דגירה, להחליף את התקשורת בצלחת עם 25 מיליליטר של תקשורת צמיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום הבא, לאסוף תקשורת הצמיחה המכילה lentivirus (האוסף הראשון). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 2.2.10 לאסוף יותר lentivirus (האוסף השני). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בריכת האוסף הראשון והשני, ולהסיר פסולת תא על ידי צנטריפוגה (2500 XG במשך 5 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן את האוסף עם מסנן בקבוק העליון חד פעמי (0.45 מיקרומטר נקבובית), ולרכז את הנגיף על ידי צנטריפוגה האוסף ב31,400 XG לשעה 2 ב RT (JA-20 הרוטור). סמן את החלק התחתון של צינור צנטריפוגות בי גלולה נמצא. למזוג supernatant, ולהשאיר את הצינור ההפוך ב RT במשך 15 דקות על. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה המכיל וירוס עם של 1X PBS 100 μl. למנוע בועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את הווירוס מרוכז ב -80 ° C. הימנע מחזורים להקפיא להפשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את הכמות האופטימלית של וירוס צריך transduce קאקו-2 תאים על ידי טיטרציה. כדי לחסוך בעלויות, השתמש בצלחת 24 גם (0.3 מיליליטר של תקשורת צמיחה / טוב) במקום צלחת תרבית רקמת 10 סנטימטרים לטיטרציה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף כמויות גדלות והולכות של הנגיף המרוכז (0, 1, 2, 5, 10, 25, ו -50 μl / טוב) בתוספת polybrene (ריכוז = 5 מיקרוגרם / מיליליטר סופי) ולמחוברות 40-70% קאקו-2 תאים. לנער את צלחת 24 גם בעדינות כפי שמתואר ב1.1.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג ביטוי גנים שלהם (שלב 2.1.10.) (תחתון 2 איור4 פנלים). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאז הביטוי של transgene בדרך כלל נגרם, לשמור על תאי transduced לניסויים עתידיים ולפקח באופן רציף ביטוי גנים שלהם (שלב 2.1.10.). </li></ol></li></ol> 3. גירוי ההפרשה ליפופרוטאין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בצלחת תרבית הרקמה הרגילה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תערובת שומנים 100X על ידי ערבוב 50 מ&quot;ג של חומצה אולאית, 40 מ&quot;ג של לציטין, ו -48 מ&quot;ג של נתרן taurocholate. תביא את הנפח עד 900 μl עם PBS (מספיק עבור 8 מנות). מערבולת תערובת השומנים במרץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 900 ​​μl של תערובת השומנים 100X ל89.1 מיליליטר של תקשורת צמיחה. לערבב, ולסנן את התקשורת המכיל שומנים. הריכוזים הסופיים (1X) של חומצה אולאית, לציטין, וtaurocholate נתרן הם 2.0 מ&quot;מ, 1.36 מ&quot;מ, ו1.0 מ&quot;מ, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 10 מיליליטר של התקשורת המכיל שומנים לתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם התקשורת המכיל שומנים במשך 4 שעות ב37° C חממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם PBS פעמים שלוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 10 מיליליטר של תקשורת הצמיחה לתאים כדי לאסוף את הפרשת השומנים בדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה עבור שעה 2 באינקובטור 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את המדיה המכיל שומנים בדם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במערכת הקרום החדיר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הפעולות 3.1.1-3.1.2 להכין את תערובת השומנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 10 מיליליטר של התקשורת המכיל שומנים לתא הפסגה ו -10 מיליליטר של תקשורת הצמיחה לתא basolateral. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה של 4 שעות בחממה 37 ° C. לאסוף את המדיה המכיל ליפופרוטאין בתא basolateral. </li></ol></li></ol> 4. בידוד ליפופרוטאין (איור 3) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את פסולת התא מהתקשורת המכיל ליפופרוטאין על ידי צנטריפוגה (2,000 XG במשך 5 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למזוג את התקשורת לתוך שפופרת 50 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 5.95 גרם של נתרן כלורי לתקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם sample ינותח על ידי TEM, להוסיף לוח מעכבי פרוטאז קוקטייל 1 כדי לשמור על השלמות של ליפופרוטאין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תביא את הנפח עד 23 מיליליטר עם מים (1.2 גרם מיליליטר NaCl פתרון צפיפות /). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את המומסים לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למזוג כל הפתרון לתוך צינור ultracentrifuge פוליקרבונט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות כיסוי פתרון צפיפות 1.2 גר &#39;/ מיליליטר עם 0.5 מיליליטר מים (1.0 / מיליליטר צפיפות ז). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזן את הצינור לפי משקל ולא לפי נפח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לטעון צינורות בהרוטור T865. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין הדגימות בultracentrifuge ב429460 XG במשך 24 שעות על 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לבודד את הפתרון 0.5 מיליליטר העליון על ידי pipetting העדין. שמור את הצינור כעדיין אפשרית כ. </li></ol> ניתוח 5. TEM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 5 מיליליטר של 2% חומצת phosphotungstic (w / v) ולהתאים את ה- pH 6.0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן 2% חומצת phosphotungstic עם מסנן מזרק (גודל נקבובית: 0.2 מיקרומטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ירידה של 20 μl של מדגם ליפופרוטאין בצלחת סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ירידה של 20 μl של 2% חומצת phosphotungstic המסונן ליד המדגם על אותה הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות שחרר רשת EM עם הצד המשעמם נח על המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על RT דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטפוח בעדינות את הצד של רשת EM על נייר סינון כדי להסיר את המדגם מהרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות שחרר את רשת EM עם הצד המשעמם נח על 2% חומצת phosphotungstic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על RT דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטפוח בעדינות את הצד של רשת EM על נייר סינון כדי להסיר את חומצת phosphotungstic מהרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות TEM, ללכוד את התמונות של ליפופרוטאין (איור 4). </li></ol>

<ol><li>Drover, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD36+deficiency+impairs+intestinal+lipid+secretion+and+clearance+of+chylomicrons+from+the+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">CD36 deficiency impairs intestinal lipid secretion and clearance of chylomicrons from the blood.</a> J Clin Invest. 115 (5), 1290-1297 (2005).</li>
<li>Nauli, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD36+is+important+for+chylomicron+formation+and+secretion+and+may+mediate+cholesterol+uptake+in+the+proximal+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">CD36 is important for chylomicron formation and secretion and may mediate cholesterol uptake in the proximal intestine.</a> Gastroenterology. 131 (4), 1197-1207 (2006).</li>
<li>Nauli, A. M., Zheng, S., Yang, Q., Li, R., Jandacek, R., Tso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+alkaline+phosphatase+release+is+not+associated+with+chylomicron+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Intestinal alkaline phosphatase release is not associated with chylomicron formation.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 284 (4), G583-G587 (2003).</li>
<li>Lo, C. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+does+the+gut+choose+apolipoprotein+B48+but+not+B100+for+chylomicron+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Why does the gut choose apolipoprotein B48 but not B100 for chylomicron formation.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 294 (1), G344-G352 (2008).</li>
<li>Jandacek, R. J., Heubi, J. E., Tso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel%2C+noninvasive+method+for+the+measurement+of+intestinal+fat+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A novel, noninvasive method for the measurement of intestinal fat absorption.</a> Gastroenterology. 127 (1), 139-144 (2004).</li>
<li>Nauli, A. M., Nauli, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+transport+as+a+potential+determinant+of+drug+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Clin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Intestinal transport as a potential determinant of drug bioavailability.</a> Curr Clin Pharmacol. 8 (3), 247-255 (2013).</li>
<li>Tso, P., Nauli, A., Lo, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enterocyte+fatty+acid+uptake+and+intestinal+fatty+acid-binding+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Enterocyte fatty acid uptake and intestinal fatty acid-binding protein.</a> Biochem Soc Trans. 32 (Pt 1), 75-78 (2004).</li>
<li>Nauli, A. M., Sun, Y., Whittimore, J. D., Atyia, S., Krishnaswamy, G., Nauli, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chylomicrons+produced+by+Caco-2+cells+contained+ApoB-48+with+diameter+of+80-200+nm%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rep%22%5BJournal%5D)">Chylomicrons produced by Caco-2 cells contained ApoB-48 with diameter of 80-200 nm.</a> Physiol Rep. 2 (6), (2014).</li>
<li>Rubinson, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lentivirus-based+system+to+functionally+silence+genes+in+primary+mammalian+cells%2C+stem+cells+and+transgenic+mice+by+RNA+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">A lentivirus-based system to functionally silence genes in primary mammalian cells, stem cells and transgenic mice by RNA interference.</a> Nat Genet. 33 (3), 401-406 (2003).</li>
<li>Li, M., Husic, N., Lin, Y., Snider, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+lentiviral+vectors+for+transducing+cells+from+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of lentiviral vectors for transducing cells from the central nervous system.</a> J Vis Exp. (63), e4031(2012).</li>
<li>Pottekat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+biosynthetic+interaction+network+component%2C+TMEM24%2C+facilitates+insulin+reserve+pool+release%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Insulin biosynthetic interaction network component, TMEM24, facilitates insulin reserve pool release.</a> Cell Rep. 4 (5), 921-930 (2013).</li>
<li>Van Greevenbroek, M. M., van Meer, G., Erkelens, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+saturated%2C+mono-%2C+and+polyunsaturated+fatty+acids+on+the+secretion+of+apo+B+containing+lipoproteins+by+Caco-2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Effects of saturated, mono-, and polyunsaturated fatty acids on the secretion of apo B containing lipoproteins by Caco-2 cells.</a> Atherosclerosis. 21 (1), 139-150 (1996).</li>
<li>Levy, E., Yotov, W., Seidman, E. G., Garofalo, C., Delvin, E., Ménard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caco-2+cells+and+human+fetal+colon%3A+a+comparative+analysis+of+their+lipid+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Caco-2 cells and human fetal colon: a comparative analysis of their lipid transport.</a> Biochim Biophys Acta. 1439 (3), 353-362 (1999).</li>
<li>Luchoomun, J., Hussain, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+and+secretion+of+chylomicrons+by+differentiated+Caco-2+cells.+Nascent+triglycerides+and+preformed+phospholipids+are+preferentially+used+for+lipoprotein+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Assembly and secretion of chylomicrons by differentiated Caco-2 cells. Nascent triglycerides and preformed phospholipids are preferentially used for lipoprotein assembly.</a> J Biol Chem. 274 (28), 19565-19572 (1999).</li>
</ol>

למחבר אין מה לחשוף.

במאמר זה, שתי מערכות שיכולים לשמש כדי לשמור קאקו-2 תאים מתוארים, כלומר, צלחת תרבית רקמה הרגילה וקרום החדיר. היתרונות של שימוש במערכת הקרום החדיר כוללים הפרדה של הפסגה ותאי basolateral, ואת יכולת דגירה תערובת השומנים ולאסוף את ההפרשה ליפופרוטאין בו זמנית. עם זאת, מוסיף קרום החדיר הם יקרים, וקרום פוליקרבונט אינו מאפשר את חשיפת תא טובה. אחד היתרונות של מודל זה במבחנה הוא שמחקרי מניפולציה גנטיים יהיו חסכוניים יותר ופחות זמן רב. ליעילות טובה יותר, יש להשתמש במערכת ביטוי lentiv...

מחקרים של ספיגה במעיים של שומן, ותרופות מסיסים בשומנים וויטמינים יכולים להתנהל in vivo על ידי שימוש במודל פיסטולה הלימפה 1 - 4. עם זאת, הטכניקות הניתוחיות המעורבים הן לא רק אתגר, אבל גם יקרות. למרות in vivo גישות המבוסס על ניתוח צואה עשויה להיות מנוצלת, הם משמשים בעיקר כדי לקבוע את ספיגת אחוזים על ידי מערכת עיכול 2,5. המודל במבחנה המתואר במאמר זה הוא יותר חסכוני, והטכניקות מעורבות הן ללא ספק פחות מאתגרות. מחקרי הנדסה גנטיים הם גם חסכוניים יותר ופחות כאשר הם נערכו באמצעות מודל במבחנה זה זמן רב. מאז חומרי שומנים מסיסים הנלקחים על ידי enterocytes ארוזים ליפופרוטאינים 6,7, את האפקטיביות של מודל זה במבחנה כדי לייצר ליפופרוטאינים היא קריטיות. Intestina שתי העיקריליפופרוטאינים l הם chylomicrons ומאוד ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה (VLDL). Chylomicrons, מוגדר כיפופרוטאינים עם 80 ננומטר או יותר בקוטר, מיוצר אך ורק על ידי המעי הדק כאשר שומנים הם בשפע נוכחי בלומן במערכת העיכול. מאז הם יפופרוטאינים הגדולים, chylomicrons הם להעלות על הדעת מובילי שומנים יעילים ביותר. מודל זה במבחנה, שהוא מסוגל לייצר chylomicrons 8, יכול לשמש כדי לחקור קליטה תזונתית שומן, ספיגת ויטמין מסיס בשומנים על ידי המעיים, וזמינות ביולוגית תרופה אוראלית lipophilic. הנוכחות של מולקולות שומנים מסיסים, ויטמינים, או סמים בשבריר ליפופרוטאין היא אינדיקטור של קליטתם על ידי המעי הדק. כפי שנאמר קודם לכן, מודל זה יכול לשמש כדי לשפר את הזמינות הביולוגית תרופה אוראלית lipophilic 6. מאמר זה מתאר כיצד יש לשמור על קאקו-2 תאים בקרום חדיר או מנות בתרבית רקמה רגילות, איך מיל השומניםxture לגירוי ייצור ליפופרוטאין צריך להיות מוכן, איך מערכת ביטוי lentivirus יכולה להיות מועסקות על מנת להשיג ביטוי יתר יעיל, וכיצד יש לנתח יפופרוטאינים המבודדים.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>VWR</td><td>16750-112</td><td>יש לחמם מראש את מצע הגידול בצלחת תרבית רקמה בודדת לפני הוספת תאים</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Fisher</td><td>3600511</td><td>אנו לא מחממים את הסרום שלנו</td></tr><tr>ניתן לשטוף תאים<td>Trypsin</td><td>VWR</td><td>45000-660</td><td>עם PBS לפני טיפול בטריפסין&nbsp;</td></tr><tr><td>מערכת ממברנה חדירה</td><td>פישר</td><td>7200173</td><td>צלחת 10 ס"מ, גודל נקבוביות 3 מ"מ, קרום פוליקרבונט</td></tr><tr><td>צלחת 10 ס"מ</td><td>פישר</td><td>08-772-E</td><td>צלחת תרבית רקמות</td></tr><tr><td>צלחת 15 ס"מ</td><td>פישר</td><td>08-772-24</td><td>צלחת תרבית רקמות</td></tr><tr><td>24 צלחת באר</td><td>פישר</td><td>12565163</td><td>צלחת תרבית רקמות</td></tr><tr><td>מגיב טרנספקציה על בסיס ליפידים</td><td>פישר</td><td>PRE2691</td><td>ניתן להחליף עם מגיב טרנספקציה אחר</td></tr><tr><td>מדיה מופחתת בסרום</td><td>Invitrogen</td><td>11058021</td><td>לטרנספקציה</td></tr><tr><td>pLL3.7 eGFP</td><td>Addgene</td><td>11795</td><td><a href="https://www.addgene.org/11795/">https://www.addgene.org/11795/</a></td></tr><tr><td>Bottle-top filter</td><td>פישר</td><td>9761120</td><td>0.45 מ"מ נקבוביות</td></tr><tr><td>פוליברנה</td><td>פישר</td><td>NC9840454</td><td>10 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>חומצה אולאית</td><td>סיגמא</td><td>01383-5G</td><td>למנוע מחזור הקפאה-הפשרה</td></tr><tr><td>לציטין&nbsp;</td><td>פישר</td><td>IC10214625</td><td>לציטין ביצים&nbsp;</td></tr><tr><td>נתרן טאורוכולט</td><td>פישר</td><td>NC9620276</td><td>המוצר הופסק; מספר קטלוגי חלופי: 50-121-7956</td></tr><tr><td>טבלית קוקטייל מעכב פרוטאז (ללא EDTA)</td><td>פישר</td><td>5892791001</td><td>משמש בעיקר לדגימות הזקוקות לניתוח TEM</td></tr><tr><td>צינור אולטרה-צנטריפוגה פוליקרבונט</td><td>פישר</td><td>NC9696153</td><td>שימוש חוזר בו מספר פעמים ימוטט את מכסה הצינור</td></tr><tr><td>לצינור אולטרה-צנטריפוגה</td><td>פישר</td><td>NC9796914</td><td>נדרש כלי להסרת הצינור/מכסה ממזרק הרוטור</td></tr><tr><td></td><td>פישר</td><td>50-949-261</td><td></td></tr><tr><td>מסנן מזרק</td> חד פעמי <td>פישר</td><td>09-719C</td><td>גודל נקבוביות = 0.2 מ"מ; ניילון</td></tr><tr><td>חומצה פוספוטונגסטית</td><td>פישר</td><td>AC208310250</td><td>להכנת 2% חומצה פוספוטונגסטית, pH 6.0</td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>פישר</td><td>50-238-62</td><td>עדין במיוחד ו טיפים חזקים</td></tr><tr><td>Formvar / רשת פחמן</td><td>פישר</td><td>50-260-34</td><td>Formvar / רשת מרובעת של סרט פחמן 400 נחושת</td></tr></tbody></table>

באמצעות קאקו-2 תאים לחקר ליפידים תחבורה במעי

Using Caco-2 Cells to Study Lipid Transport by the Intestine

מחקרים על ספיגת שומן בתזונה נערכים בדרך כלל על ידי שימוש במודל של בעלי חיים המצוידים בצינורית לימפה. למרות שמודל בעלי חיים זה מקובל כמודל in vivo לספיגת שומן תזונתי, הטכניקות הכירורגיות המעורבות מאתגרות ויקרות. מניפולציה גנטית של המודל החייתי היא גם יקרה וגוזלת זמן. ניתן לטעון שמודל האלטרנטיבה במבחנה הוא זול יותר, חוסך זמן ופחות מאתגר. חשוב לציין, מודל המבחנה מאפשר לחוקרים לבחון את האנטרוציטים כמערכת מבודדת, ולהפחית את המורכבות הטבועה במודל האורגניזם השלם. מאמר זה מתאר כיצד תאי קרצינומה של המעי הגס האנושי (Caco-2) יכולים לשמש כמודל מבחנה לחקר הובלת אנטרוציטים של שומנים, ותרופות וויטמינים מסיסים בשומנים. הוא מסביר את התחזוקה הנאותה של תאי Caco-2 ואת הכנת תערובת השומנים שלהם; והוא דן עוד באפשרות החשובה של שימוש במערכת הממברנה החדירה. מכיוון שתאי Caco-2 מובחנים מקוטבים, היתרון העיקרי בשימוש במערכת הממברנה החדירה הוא בכך שהיא מפרידה בין האפיקל לתא הבסיסי. כתוצאה מכך, ניתן להוסיף את תערובת השומנים לתא האפיקלי ואילו את הליפופרוטאינים ניתן לאסוף מהתא הבסיסי. בנוסף, נדונה היעילות של מערכת הביטוי של נגיף הלנטי בוויסות ביטוי גנים בתאי Caco-2. לבסוף, מאמר זה מתאר כיצד לאשר את הבידוד המוצלח של ליפופרוטאינים במעי על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה (TEM).

איור קאקו-2 תאים נורמלים 1 מציג 13 ימים לאחר מחוברות. המראה של מבנים בצורת כיפה וטיפי שומנים תאיות אופייני של קאקו-2 תאים מובחנים. כאשר קאקו-2 התאים אינם מפוזרים באופן שווה במהלך זריעה, הם גוש ולגדול באזורים מסוימים של המנה; ויהיו כמה אזורים בצלחת ללא כל תאים. מתערבל והצבת הצלחת על משטח משופע יש להימנע. כמו כן, חשוב לשים לב שהודעת מחוברות-קאקו-2 תאים רגישים יותר לניתוק כאשר תקשורת צמיחה חדשה תתווסף לתאים בערך מדי. לכן, יש להוסיף מדיה החדשה בעדינות...

תאי Caco-2 יכולים לשמש כמודל במבחנה לחקר הובלת האנטרוציטים של שומנים, ותרופות/ויטמינים מסיסים בשומנים. מערכת הממברנה החדירה מפרידה בין התא האפיקלי לתא הבסיסי, בעוד שמערכת ביטוי ה-lentivirus מציעה שיטת ביטוי יתר יעילה של גנים. בידוד הליפופרוטאינים מאושר על ידי TEM.

Studies of dietary fat absorption are generally conducted by using an animal model equipped with a lymph cannula. Although this animal model is widely ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לחקור את ההובלה של מולקולות ממיסות שומן על ידי המעי. דבר זה מושג תחילה על ידי הצבת תאי caco two מובחנים בתוך תבנית עם ממברנה חדירה. לאחר מכן, תאי ה-Caco two מדגריים עם תערובת ליפידים, והפרשת ליפופרוטאינים מעוררת.לאחר מכן מבודדים את הליפופרוטאינים באמצעות אולטרסנטריפוגציה במדרג צפיפות של נתרן כלוריד. לבסוף, צובעים את הליפופרוטאינים המבודדים בצביעה שלילית עם חומצה פוספוטואית. בסופו של דבר, משתמשים בניתוח גודל חלקיקים כדי להראות את השכיחות היחסית של כילומיקרונים ביחס לליפופרוטאינים בעלות צפיפות נמוכה מאוד.למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי הובלת ליפידים תזונתיים על ידי המעי, ניתן ליישמה גם במערכות אחרות, כגון קביעת הזמינות הביולוגית של תרופות ליפידיות הניתנות דרך הפה. לאחר ביצוע ביטוי יתר של גנים וניטור לפי הפרוטוקול הכתוב, שמרו את תאי ה-KCO שניים התומכים בביטוי היתר של הגן. כאשר התאים מגיעים ל-50 עד 70% confluence, פצלו את התאים ביחס של אחת לשש על ידי הוספה של 3 mL של 0.05% trypsin ו-0.53 mM EDTA, והדגירו ב-37 °C עד שהתאים ניתקו; לאחר מכן, שאיפו את התאים בעדינות מספר פעמים כדי למנוע התגבשות.לאחר מכן, לאחר העברת 0.5 milliliters של התאים לתא העליון (apical) של ממברנה חדירה, הכיל 10 milliliters של מצע גידול שחומם מראש. הוסף 10 milliliters של מצע גידול חמים לתא התחתון. נער בעדינות את הצלחות מספר פעמים בתנועה קדימה ואחורה.הימנעו מסחרור של הצלחות, שכן הדבר עלול להוביל לפיזור לא אחיד של התאים. הניחו את הצלחות על משטח שטוח בתוך אינקובטור בטמפרטורה של 37 °C ו-5% carbon dioxide. לאחר יום אחד, החליפו את מצע הגידול והמשיכו להחליף את המצע בהתאם לפרוטוקול הכתוב.הכינו תערובת ליפידים בריכוז 100 x על ידי הוספת 900 microliters של PBS ל-50 milligrams של oleic acid. ערבבו את התערובת בעוצמה באמצעות vortex. העבירו את כל תערובת ה-oleic acid למבחנה המכילה 40 milligrams של Han ו-48 milligrams של sodium tarot. המיסו את תערובת הליפידים על ידי vortexing חזק.הוסיפו 900 µL של תערובת ליפידים ל-89.1 mL של מצע גידול וסננו את התמיסה כדי להגיע לריכוזים הסופיים במצע המוצגים כאן. השתמשו בתאי Caco-2 שגודלו על תבתי ממברנה חדירה במשך 13 ימים לאחר הגעה לקונפלואנציה. הוסיפו 10 mL של המצע המכיל ליפידים לתא האפיקלי, ו-10 mL של מצע גידול לתא הבזאלי-לטרלי.דגרו למשך ארבע שעות ב-37 °C לפני איסוף המצע המכיל ליפופרוטאינים מהתא הבסולטרלי. כדי לבודד את הליפופרוטאינים, הסירו את שיירי התאים מהמצע המכיל ליפופרוטאינים על ידי סרז'יגציה ב-2000 ×g למשך חמש דקות. העבירו את המצע לשפכירה למבחנה של 50 ml, לאחר מכן הוסיפו 5.95 g של sodium chloride, ואם הניתוח מבוצע באמצעות מיקרוסקופ אלקטרוני חודר או TEM, הוסיפו טבלייה אחת של מעכב פרוטאז.השתמש במים כדי להביא את הנפח ל-23 milliliters והמס את המומסים לחלוטין. לאחר מכן, העבר את התמיסה לשפכירה למבחנה של ultracentrifuge העשויה פוליקרבונט. השתמש ב-0.5 milliliters של מים כדי ליצור שכבה עליונה עדינה מעל התמיסה בעלת הצפיפות של 1.2 gram per milliliter.לאחר מכן, איזנו את המבחנות לפי משקל. טענו את המבחנות לרוטור T 8 65 ובצעו אולטרה-צנטריפוגציה ב-429,460 ×g ובטמפרטורה של 4°C למשך 24 שעות. לאחר מכן, תוך שמירה על המבחנה ללא תזוזה ככל האפשר, בודדו מיד את 0.5 מיליליטר העליונים של התמיסה.לביצוע אנליזת TEM, הכינו חמישה מיליליטר של 2%phospho toic acid וכווננו ל-pH 6.0. סננו את התמיסה באמצעות מסנן מזרק עם גודל נקבים של 0.2 micrometers. טפטפו 20 microliters של דגימת הליפופרוטאין על צלחת סטרילית.לאחר מכן, טפטפו 20 µL של חומצה פוספוטונגסטית מסוננת לצד הדגימה באותה צלחת, כאשר הצד המט פונה אל הדגימה. הנחו בעדינות רשת EM על טיפת הליפופרוטאין והדגירו בטמפרטורת החדר למשך דקה אחת. לאחר מכן, הקישו בעדינות את צד הרשת על נייר סינון כדי להסיר עודפי דגימה מהרשת.לאחר מכן, הנח בעדינות את הרשת כאשר אותו צד מונח על טיפת החומצה של ה-phospho tongue, והדגרי למשך דקה אחת לפני טפיחה עדינה של הרשת על נייר סינון להסרת עודפי התמיסה. לבסוף, בצע TEM כדי ללכוד תמונות של ליפופרוטאינים. מוצגים כאן תאי Caco-2 נורמליים 13 ימים לאחר הגעה למצב של התלכדות (confluent), המראים מבנים בצורת כיפה וטיפות ליפידים תוך-תאיים המאפיינים תאי Caco-2 מובחנים.בשלב זה, יש להוסיף מצע חדש בעדינות, מכיוון שהתאים רגישים יותר להיסתלקות. באמצעות שיטת אלטרה-צנטריפוגציה במדרג צפיפות של נתרן כלוריד, בודדו הליפופרוטאינים שהפרישו תאי caco two ונותחו באמצעות TEM. כאן מוצגים חלק מהקילומיקרונים, שהם ליפופרוטאינים שקוטרם גדול מ-80 ננומטרים.נוכחות של LDLs קטנים יותר קיימת גם כן. אחוז גבוה של חלקיקי קילומיקרון ביחס למספר הכולל של חלקיקי ליפופרוטאין מעיד על הובלת ליפידים יעילה לאחר התפתחותם. טכניקה זו סללה את הדרך עבור חוקרים בתחום מדעי הרוקחות לחקור באופן נרחב יותר את הזמינות הביולוגית של תרופות ליפופיליות המ diberikan במינון פומי.

using-caco-2-cells-to-study-lipid-transport-by-the-intestine

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מדגים טכניקה במבחנה להערכת זמינות ביולוגית של ברזל במקורות מזון מורכבים. הטכניקה משלבת סימולציה של עיכול אנושי יחד עם ספיגת ברזל על ידי תאי Caco-2 ממוינים. היווצרות פריטין תוך תאי פועלת כסמן לספיגת ברזל תאי.

Caco-2 cell bioassay: שיטה חוץ גופית למדידת זמינות ביולוגית של ברזל במקורות מזון מורכבים

יישומים טיפוליים רבים דורשים הובלה בטוחה ויעילה של נשאי תרופות והמטענים שלהם על פני מחסומי תאים שבגוף. מאמר זה מתאר התאמה של שיטות הוקמו על מנת להעריך את השיעור ומנגנון של תחבורה של nanocarriers סמים (NCS) על פני מחסומים סלולריים, כגון במערכת העיכול (GI) אפיתל.

מודלים ושיטות להערכת תחבורה של ליפידיות פני מחסומים נייד

אנו מתארים פרוטוקול במבחנה Microbiome במעיים שיתוף תרבות villi מעיים במשך תקופה ארוכה באמצעות אדם בטן-על-שבב מערכת microphysiological.

עמית תרבות Microbiome חי עם Microengineered אדם המעיים villi בתוך גוט-על-שבב מכשיר microfluidic

אנו מתארים שיטות פשוטות כדי ללמוד את הרגולציה של טרנספורטר הסרוטונין במעיים (בהלבשה) פונקציה וביטוי באמצעות מודל תרבית תאים במבחנה של תאי קאקו-2 גדל ב -3 D ו מודל vivo לשעבר של מעי עכבר. שיטות אלו חלות על המחקר של מובילי אפיתל אחרים.

שיטות לחקר תפקוד החלבון התחבורה אפיתל וביטוייה המעי Native ו קאקו-2 תאים שגודלו ב -3 D

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד והתרבות של תאי מעי דק בעכברים מעורבים. תרבויות מעיים העיקריות אלה מאפשרות החקירה של מסלולי איתות שבבסיס הפרשת פפטיד בטן באמצעות מספר הטכניקות.

תרבויות עיקריות מעורבות של Murine מעי דק המיועד לחקר הפרשת הורמון גוט וההדמיה של תא חי תאי Enteroendocrine

אנו מציגים פרוטוקול לחקור crosstalk בין X-ray-מוקרן קאקו-2 תאי תאי דם היקפיים (PBMC). הפרוטוקול מתחיל עם קאקו-2 הקרנה ולהגדרה של תרבות משותפת עם PBMC; לאחר מכן, ההתנגדות החשמלית הטרנס-אפיתל נמדד באופן קבוע מעל 48 חשופה h ומערביות הופיעה קאקו-2 ו- PBMC.

שיטה תרבות משותפת לחקור Crosstalk בין רנטגן מוקרן קאקו-2 תאים, PBMC

שתי שיטות מוצגים כאן כדי לקבוע פונקציה מכשול המעי. מטר אפיתל (וולט/אוהם) משמש עבור מדידות של ההתנגדות החשמלית transepithelial של epithelia בתרבית ישירות בבארות תרביות רקמה. בעכברים, שיטת gavage FITC-לתוספי משמשת כדי לקבוע את חדירות המעי ויוו.

במבחנה , גישות In Vivo כדי לקבוע חדירות תאים אפיתל המעי

פרוטוקול זה מתאר את התצורה של היווצרות droplet (LD) של השומנים במבנה המעי האנושי על גירוי עם חומצות שומן. אנו דנים כיצד משתמשים באותה שיטת לכימות היווצרות LD, וכיצד ניתן להשתמש בה עבור הקרנת תפוקה גבוהה עבור תרופות המשפיעות על היווצרות LD.

שיטת פלואורסצנטית מבוססת על האפיון והקוונפיקציה של היווצרות Droplet ליפיד בגוף מעיים אנושי

חשפנו מערכת מיקרופיזיולוגית (MPS) עם אורגנואידים במעי וכבד פרצטמול (APAP). מאמר זה מתאר את השיטות לייצור אורגנואידים והערכות רכוש פרמקוקינטי וטוקסיקולוגי APAP ב MPS. הוא גם מתאר את ניתוחי פונקציונליות הרקמה הדרושים כדי לאמת את התוצאות.

מערכת מיקרופיזיולוגית מעיים/כבד להערכת תרופות פרמקוקנטיות וטוקסיקולוגיות

הבדיקה הביולוגית של תאי Caco-2 לזמינות ביולוגית של ברזל (Fe) מייצגת גישה חסכונית ורב-תכליתית להערכת הזמינות הביולוגית של Fe ממזונות, מוצרי מזון, תוספי מזון, ארוחות ואפילו משטרי תזונה. הוא מאומת ביסודיות למחקרים בבני אדם, ומייצג את מצב האמנות למחקרים על זמינות ביולוגית של Fe.

הבדיקה הביולוגית של תאי Caco-2 למדידת זמינות ביולוגית של ברזל במזון

חקור תחבורת ליפידים במעי באמצעות תאי Caco-2 כמודל מעבדתי. השיטה כוללת בידוד ליפופרוטאינים באולטרה-צנטריפוגה וניתוח גודל חלקיקים. המחקר מספק תובנות למנגנוני ספיגת שומנים וזמינות ביולוגית של תרופות.

באמצעות קאקו-2 תאים לחקר ליפידים תחבורה במעי

גלה סרטונים נוספים