Name: תת עורית אנגיוטנסין II עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות גורם אבי העורקים מפרצת בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: למדו כיצד לחקור מנגנונים מולקולריים של מפרצת אבי העורקים בעכברים באמצעות משאבות אוסמוטיות המשחררות אנגיוטנסין II תת עורית. שיטה זו מאפשרת מעקב מדויק אחר התרחבות אבי העורקים לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודת המחקר המוצגת בכתב היד הזה נתמכה על ידי מענק (HL107319 לאלן דוהרטי ו-HL107326 לליסה א. קסיס) מהמכונים הלאומיים לבריאות של ארצות הברית של אמריקה. התוכן בכתב יד זה הוא באחריות המחברים בלבד ואינו מייצג בהכרח את העמדות הרשמיות של המכונים הלאומיים לבריאות. פרסום כתב היד הזה מומן על ידי תאגיד DURECT.

הצהרת אתיקה: מחקרי עכבר מבוצעים באישור של אוניברסיטת קנטקי המוסדית הטיפול בבעלי חי ועדת שימוש (מספר פרוטוקול IACUC: 2,006-0,009). עכברים מורדמים בסיום שימוש בקוקטייל מנת יתר של קטמין (~ 210 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (~ 30 מ&quot;ג / קילוגרם). 1. חישוב סכום AngII הערה: פרוטוקול זה משתמש בדוגמא של עירוי של AngII (1000 ng / קילוגרם / דקה) במשך 4 שבועות בקולטן 4 LDL זכר - / - עכברים שקבלו תזונה מועשרת בשומן רווי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל ללמוד עכברים לפני חישוב סכום AngII הדרוש לעירוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתבנית (טבלת 1) כדי לחשב את מסת AngII הדרושה לניסוי. השתמש ב&quot; שיעור ממוצע שאיבה &quot;שצוין בהוראה של משאבות כ&quot; קצב השאיבה&quot; בשלב 4 של התבנית. בתבנית, שיא שלבי 1 - 5 באופן ידני, ושלבים 6 - 10 מחושבים באופן אוטומטי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתבנית, מניח שעכברים ירוויחו 1 ​​גרם של משקל גוף במהלך העירוי של AngII 1000 ng / קילוגרם / דקה במשך 4 שבועות. הערה: כל עכבר עשוי להיות עלייה במשקל גוף שונה מאוד שיהיה תלויה במשתנים רבים, כגון זן עכבר ודיאטה. אנו משתמשים באופן שיגרתי &quot;0&quot; או &quot;1 גרם&quot;, המבוססים על הניסיון שלנו ממחקרים קודמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב נפח כולל של 300 μl של פתרון AngII לכל עכבר שכן כל משאבה דורשת כ -250 μl. </li></ol></li></ol> 2. פירוק AngII <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות lyophilized בקבוקוני AngII ב -20 ° C. לאזן בקבוקוני AngII לRT לפני הפתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את המסה מחושבת AngII (7.3 מ&quot;ג כפי שמוצג בטבלה 1) לתוך צינור פלסטיק סטרילי. הערה: לחברת מרק מדד, לא משתמש בצינורות זכוכית לפירוק מאז תמיסה מימית של AngII יש זיקה חזקה לכריכה לזכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף את הנפח המחושב של תמיסת מלח סטרילית (1200 μיב) לתוך צינור הפלסטיק המכיל את AngII, כובע lyophilized, ומערבבים היטב על ידי היפוך עד הפתרון הוא ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספרי עכבר תווית # 1, # 2, # 3, ומס &#39;4 בצינורות פלסטיק סטרילי בודדים עם כובעים (0.5-1.5 מיליליטר). הכן פתרון AngII מתחת למכסת מנוע למינרית לכל עכבר המבוסס על משקל גוף כפי שמחושב בשלב 1.2 ולוח 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדוגמא, פיפטה 3.6 מלוח μl סטרילי לתוך צינור # 1, ולאחר מכן 296.4 μl פתרון AngII, ומערבבים היטב על ידי pipetting למעלה ולמטה בעדינות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספרי עכבר תווית על צינורות פלסטיק עם מכסים (4 מיליליטר; סטרילי). אלה ישמשו לדוגרים משאבות כמתואר בשלב 3.13. </li></ol> מילוי 3. אוסמוטי משאבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג משאבות בשני חלקים נפרדים: הגוף העיקרי של המשאבה ואת זרימת המנחה (איור 1). לכל תיבה גופי 10 משאבה וזרימת מנהלים שהם עטופים בנפרד. רשום את המספר הרבה. הערה: תמיד ללבושכפפות כי שמנים הועברו מהידיים למעטפת החיצונית של משאבות תשפענה לרעה על תפקוד שאיבה. השתמש בכפפות סטריליות, גזה, צינורות, מחט מילוי, ולשקול סירות כדי להכין את המשאבות, כדי למנוע סיכון לזיהום מהשתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח רק מספר גופי משאבה וזרימת מנהלים הדרושים למחקר, כמו אלה לא יכולים להיות מאוחסנים נפתחו פעם אחת. אם יש צורך יותר מ -10 משאבות, להבטיח שהמספרים הרבה משאבות זהים למחקר אחד, שכן יש לי משאבות ממספרים שונים בהרבה נפח שונה Mean מילוי ושאיבת דרג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול כל משאבה (כולל הן את הגוף העיקרי ולזרום מנחה), ושים לב למשקל עד 4 ספרות אחרי נקודה עשרונית (לדוגמא, 1.1443 גרם של # עכבר 1). משקל זה, המכונה &quot;משאבת משקל ריק&quot; בתבנית (טבלת 1), ישמש לחישוב יחס המלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את מחט מילוי משאבה למזרק סטרילי 1 סמ&quot;ק ולמלא את המזרק עם פתרון AngII מכראוי בזהירותצינור פלסטיק ממוספר. חשוב להימנע מציור אוויר לתוך המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל בועות האוויר בזהירות מהמזרק בעוד המחט ממוקמת מטה. שמור את המחט / המזרק בעמדה זו כדי למנוע את כניסתה של בועות לתוך המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בעדינות את מחט המילוי לתוך גוף המשאבה. לקדם את קצה המחט לתוך המשאבה. אל תנוח קצה המחט בחוזקה בחלק התחתון של המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדחוף את בוכנת המזרק לאט למלא את המשאבה עם פתרון AngII. צל כהה בתוך המשאבה מציין את רמת המילוי. מילוי הנפח הוא כ 246 μl, להוראות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפסיק למלא את המשאבה ולהסיר את המחט בזהירות בהקדם חרוז של נוזל עולה מתוך המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס זרימת מנחה למשאבה דרך החור בחלק העליון של גוף משאבה עד שלא ראה פער בין ראש זרימת המנחה והעליון של גוף המשאבה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קלטי moderatאו לגוף המשאבה מובילה לכמה נוזל דולף מפתיחת זרימת המנחה. למחוק בזהירות את כל נוזלים נוספים שייתכן שדלפו במהלך ההשמה של מנהלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול משאבה מלאה. רשום את המשקל תחת &quot;משאבת משקל מלא&quot; בתבנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב יחס תדלוק (%) = (משאבת משקל &quot;המלא&quot; - &quot;ריק&quot;) x 1000 / מתכוונים למלא נפח x 100. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב יחס תדלוק כפי שצוין בטבלה 1. באופן אידיאלי, מילוי יחס צריכה להיות שווה או גדול מ -100%. משאבת מילוי אם יחס המילוי הוא &lt;95% (להפליל שבועות האוויר יכול להיות נוכח במשאבה). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים משאבה מולא לתוך צינור שכותרתו 4 מיליליטר (שלב 2.5) עם ראש המנחה פונה כלפי מעלה. להוסיף נפח מספק של תמיסת מלח סטרילית כדי לכסות את המשאבה. שמור משאבה בצינור של תמיסת מלח עד השתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורות מקום באינקובטור 37 מעלות צלזיוס. דגירה משאבות O / N (שעה לפחות 12) כדי לאפשר תחול חלקי, ולאחר מכן להשתיל לעכברים. משאבהING של AngII מתחיל כ 24 שעות לאחר השתלה, המאפשרת לעכברים להתאושש מניתוח לפני כל לחץ פוטנציאלי הנובע במהלך עירוי AngII. </li></ol> 4. הכנה להשתלת משאבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי (מצב הכבידה, מחזור יבש, 15 דקות) גזה, צמר גפן וכלים כירורגיים כוללים מספריים, hemostat, מלקחיים, סיכות, ומהדק יום לפחות 1 לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחדר הליך, להכין מאדה עבור הרדמה באמצעות isoflurane. פתח את וילונות סטרילי בזרימה למינרית, ולמקם את חרטומו להרדמת isoflurane. הנח בטאדין, 70% אתנול, מים סטריליים, מעקר את החרוז, handrub חיטוי, מטליות, גזה, ומשאבות מולא בברדס למינרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דון מסיכה וגלימה, ואז לפתוח וילון חיצוני במנדף למינרית בידיים נקיות. לשים על כפפות סטריליות ולפתוח את חבילה בתוך סטרילי. </li></ol> 5. נוהל כירורגי של השרשה המשאבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר מקום בצ&#39;אם אינדוקציהתהמר עם זרם isoflurane בקצב זרימה של 1.5 - 2%. צג העכבר על 2 נוספות - 3 דקות אחרי שכיבה. לגלח אזור בערך בגודל של רבע, מעבר לכתף השמאל או ימין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר במנדף למינרית, עם אפה מיושר עם קונוס מחובר ליצוא isoflurane (איור 2 א). מניחים את ראשו של העכבר לכיוון היד הדומיננטית של המנתח. השתמש במשחת וטרינר בעיניו של העכבר כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. ודא שיש לו את העכבר אין תגובה לגירוי של כאב לפני הניתוח. לדוגמא, תגובת דוושה היא אינדיקטור טוב לכאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספוגית ולנגב אזור מגולח עם בטאדין ואחריו שלושה מגבונים עם 70% אתנול. דון או לשנות כפפות סטריליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באזמל כירורגי לעשות חתך סנטימטר ~ 1 מאחורי האוזן על כתפו של הרגל הקדמית. חתך זה צריך להיות בניצב לזנב. השתמש טיפול לחתוך רקמות רק העור ולא בבסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> forc שמירתeps ביד אחת כדי לפתוח חתך, ולהשתמש ביד השנייה כדי להפוך את מנהרה תת עורית מתחת לעור באמצעות hemostat (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדם קצה hemostat כלפי הזנב, וליצור כיס למשאבה. המטרה זו מושגת על ידי פתיחת הלסתות של hemostat בזהירות מתחת לעור כדי לפתוח את כיס. למשוך את hemostat מחתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס משאבה לתוך החתך עם ראש המנחה בעמדה האחורית של העכבר (איור 2 ג). דחף בעדינות את המשאבה לגמרי לתוך הכיס. צריכה להיות מספיק מקום פנוי כדי לסגור את הפצע עם שום מתח או מתיחה של העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שמשאבה הוכנסה, בתקיפות לצבוט את שני הצדדים של החתך, מיישר כדי שהקצוות נפגשים, ואת מקום קליפים פצע 1 או 2 כדי לסגור (איור 2 ד). בדוק את אתר החתך על מנת להבטיח שיש סגירת הפצע מלאה, וכי המשאבה אינה לוחצת ישירות באתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ידוקאין שמנת אקטואלית(4% WT / WT) עם עכבר swab.Remove הכותנה נקי מהחרטום, ולמקם אותו על כרית חימום עד שחוזר להכרה. אחרי שהתאושש, העכבר חזר לכלוב שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח מכשירי ניתוח למעקר חרוז במשך 10 שניות בין עכברים. לאפשר מכשירים להתקרר לפני השימוש. כפפות נקיות עם handrub חיטוי בין עכברים. לפקח על כל העכברים עד להחלמה מלאה מושגת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג עכברים מקרוב לאחר הניתוח. הזרק בולוס של תמיסת מלח סטרילית (0.2-0.3 מיליליטר) תת עורי אם עכבר מראה סימנים של מצוקה, התייבשות או ירידה במשקל נראית לעין. שימו לב עכברים לפחות פעמיים ביום במהלך 10 הימים הראשונים, ולפחות פעם אחת בכל יום לאחר מכן. לבצע נתיחה לאחר מוות באופן מיידי אם כל עכברים מתים במהלך עירוי AngII. הסר קליפים פצע בין 7 - 14 ימים לאחר הניתוח. </li></ol> 6. קציר, תיקון, ניקוי, והדמיה של Aortas <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור לפתוח את בית חזה העכבר וחללים בטן ventrally, לחתוך אופn עלייה ימנית, perfuse עם מי מלח דרך החדר השמאלי של הלב כדי להסיר דם באב העורקים, ואז לקצור את אב העורקים 27. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח aortas נקטף בצינורות פלסטיק המכיל לפחות 3 מיליליטר של paraformaldehyde 4% או 10% פורמלין שנאגרו ניטראלי עבור 24 - 48 שעות 27. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר רקמות adventitial בזהירות. אב העורקים פין בשעווה שחורה עם סיכות. לרכוש תמונות של אב העורקים באותה הגדלה. כולל שליט בכל תמונה לכיול, כפי שמוצג באיור 3. </li></ol> 7. En פנים הדמיה של Aortas <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך אב העורקים פתוחים לאורך ציר העקמומיות החיצונית ופנימית של קשת אב העורקים, ולחתוך ענפים עיקריים פתוחים כולל innominate, עורק תרדמה שמאלי, ועורק subclavian שמאל. אב העורקים פין שטוח עם adventitial החיצוני הנחה סמוך לשעווה השחורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש en פנים תמונה של פני השטח של intimal אב העורקים בהגדלה זהה. כולל שליט בכל תמונה לכיול, כמופעn באיור 4. </li></ol>

<ol><li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li>
<li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> J Surg Res. 99 (2), 371-376 (2001).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+angiotensin+II+infusion+promotes+atherogenesis+in+low+density+lipoprotein+receptor+-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+NY+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Chronic angiotensin II infusion promotes atherogenesis in low density lipoprotein receptor -/- mice.</a> Ann NY Acad Sci. 892 (1), 108-118 (1999).</li>
<li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li>
<li>Deng, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urokinase-type+plasminogen+activator+plays+a+critical+role+in+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Urokinase-type plasminogen activator plays a critical role in angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm.</a> Circ Res. 92 (5), 510-517 (2003).</li>
<li>King, V. L., Trivedi, D., Gitlin, J. M., Loftin, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+cyclooxygenase-2+inhibition+with+celecoxib+decreases+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Selective cyclooxygenase-2 inhibition with celecoxib decreases angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm formation in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26 (5), 1137-1143 (2006).</li>
<li>Uchida, H. A., Poduri, A., Subramanian, V., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urokinase-type+plasminogen+activator+deficiency+in+bone+marrow-derived+cells+augments+rupture+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Urokinase-type plasminogen activator deficiency in bone marrow-derived cells augments rupture of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (12), 2845-2852 (2011).</li>
<li>Wang, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+increases+urokinase-type+plasminogen+activator+expression+and+induces+aneurysm+in+the+abdominal+aorta+of+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II increases urokinase-type plasminogen activator expression and induces aneurysm in the abdominal aorta of apolipoprotein E-deficient mice.</a> Am J Pathol. 159 (4), 1455-1464 (2001).</li>
<li>Bruemmer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II-accelerated+atherosclerosis+and+aneurysm+formation+is+attenuated+in+osteopontin-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II-accelerated atherosclerosis and aneurysm formation is attenuated in osteopontin-deficient mice.</a> J Clin Invest. 112 (9), 1318-1331 (2003).</li>
<li>Gavrila, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+E+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+angiotensin+II-infused+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Vitamin E inhibits abdominal aortic aneurysm formation in angiotensin II-infused apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (8), 1671-1677 (2005).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgE+actions+on+CD4%2B+T+cells%2C+mast+cells%2C+and+macrophages+participate+in+the+pathogenesis+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">IgE actions on CD4+ T cells, mast cells, and macrophages participate in the pathogenesis of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> EMBO Mol Med. 6 (7), 952-969 (2014).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li>
<li>Usui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammasome+activation+by+mitochondrial+oxidative+stress+in+macrophages+leads+to+the+development+of+angiotensin+II-induced+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammasome activation by mitochondrial oxidative stress in macrophages leads to the development of angiotensin II-induced aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 127-136 (2015).</li>
<li>Mellak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+mobilizes+spleen+monocytes+to+promote+the+development+of+abdominal+aortic+aneurysm+in+apoe-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II mobilizes spleen monocytes to promote the development of abdominal aortic aneurysm in apoe-/- mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 378-388 (2015).</li>
<li>Krishna, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+antagonist+of+thrombospondin-1+promotes+abdominal+aortic+aneurysm+progression+in+the+angiotensin+II-infused+apolipoprotein-E-deficient+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Peptide antagonist of thrombospondin-1 promotes abdominal aortic aneurysm progression in the angiotensin II-infused apolipoprotein-E-deficient mouse.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 389-398 (2015).</li>
<li>Norman, P. E., Curci, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+effects+of+tobacco+smoke+on+the+pathogenesis+of+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Understanding the effects of tobacco smoke on the pathogenesis of aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1473-1477 (2013).</li>
<li>Daugherty, A., Powell, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+highlights+of+ATVB%3A+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Recent highlights of ATVB: aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34 (4), 691-694 (2014).</li>
<li>Liu, J., Daugherty, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+and+abdominal+aortic+aneurysms%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Design%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II and abdominal aortic aneurysms: an update.</a> Curr Pharm Design. , (2015).</li>
<li>Rateri, D. L., Howatt, D. A., Moorleghen, J. J., Charnigo, R., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+infusion+of+angiotensin+II+in+apoE%28-%2F-%29+mice+promotes+macrophage+recruitment+with+continued+expansion+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prolonged infusion of angiotensin II in apoE(-/-) mice promotes macrophage recruitment with continued expansion of abdominal aortic aneurysm.</a> Am J Pathol. 179 (3), 1542-1548 (2011).</li>
<li>Saraff, K., Babamusta, F., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aortic+dissection+precedes+formation+of+aneurysms+and+atherosclerosis+in+angiotensin+II-infused%2C+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Aortic dissection precedes formation of aneurysms and atherosclerosis in angiotensin II-infused, apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (9), 1621-1626 (2003).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+pathologies+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Zhejiang+Univ+Sci+B%22%5BJournal%5D)">Complex pathologies of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 12 (8), 624-628 (2011).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D. L., Charo, I. F., Owens, A. P., Howatt, D. A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+infusion+promotes+ascending+aortic+aneurysms%3A+attenuation+by+CCR2+deficiency+in+apoE-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II infusion promotes ascending aortic aneurysms: attenuation by CCR2 deficiency in apoE-/- mice.</a> Clin Sci (Lond). 118 (11), 681-689 (2010).</li>
<li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell-specific+deficiency+of+Ang+II+type+1a+receptors+attenuates+Ang+II-induced+ascending+aortic+aneurysms+in+LDL+receptor-%2F-+mice%29%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell-specific deficiency of Ang II type 1a receptors attenuates Ang II-induced ascending aortic aneurysms in LDL receptor-/- mice).</a> Circ Res. 108 (5), 574-581 (2011).</li>
<li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+endothelial+or+smooth+muscle+cell-specific+angiotensin+II+type+1a+receptors+does+not+influence+aortic+aneurysms+or+atherosclerosis+in+LDL+receptor+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Depletion of endothelial or smooth muscle cell-specific angiotensin II type 1a receptors does not influence aortic aneurysms or atherosclerosis in LDL receptor deficient mice.</a> PLoS One. 7 (12), 10-1371 (2012).</li>
<li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+induces+region-specific+medial+disruption+during+evolution+of+ascending+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II induces region-specific medial disruption during evolution of ascending aortic aneurysms.</a> Am J Pathol. 184 (9), 2586-2595 (2014).</li>
<li>Davis, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+cell+deletion+of+low-density+lipoprotein+receptor-related+protein+1+augments+angiotensin+II-induced+superior+mesenteric+arterial+and+ascending+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle cell deletion of low-density lipoprotein receptor-related protein 1 augments angiotensin II-induced superior mesenteric arterial and ascending aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 155-162 (2015).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+experimental+designs+for+atherosclerosis+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.</a> Methods. 36 (2), 129-138 (2005).</li>
<li>Henriques, T. A., Huang, J., D'Souza, S. S., Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orchidectomy%2C+but+not+ovariectomy%2C+regulates+angiotensin+II-induced+vascular+diseases+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Orchidectomy, but not ovariectomy, regulates angiotensin II-induced vascular diseases in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Endocrinology. 145 (8), 3866-3872 (2004).</li>
<li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonism+of+AT2+receptors+augments+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Antagonism of AT2 receptors augments angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms and atherosclerosis.</a> Br J Pharmacol. 134 (4), 865-870 (2001).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiency+of+receptor-associated+protein+attenuates+angiotensin+II-induced+atherosclerosis+in+hypercholesterolemic+mice+without+influencing+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Deficiency of receptor-associated protein attenuates angiotensin II-induced atherosclerosis in hypercholesterolemic mice without influencing abdominal aortic aneurysms.</a> Atherosclerosis. 220 (2), 375-380 (2011).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D., Lu, H., Balakrishnan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+blood+pressure+in+mice+using+volume+pressure+recording%2C+a+tail-cuff+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method.</a> J Vis Exp. (27), e1291(2009).</li>
</ol>

פרסומו של מאמר זה הוא בחסות Alzet.

משאבות אוסמוטי מתן תת עורי AngII היא גישה שגרתית לגרימת פרצת אב העורקים בעכברים. בהתבסס על נתונים ממעבדות רבות, היו ממצאים עקביים שזו שיטה אמינה לשחזור ללמוד שני AAAS 3,4 ותעש 22-26 בעכברים. לכן, מודל עכבר זה נחשב מודל שמשחזר כמה תכונות של מפרצת אב העורקים אנושית ומספק תובנות מכניסטית למחלות הרסניות אלה. בעוד הזדקנות היא גורם סיכון לAAAS בבני אדם, זה לא נחקר באופן שיטתי לAAAS המושרה AngII בעכברים. עם זאת, נראה שכיחות וחומרה של AAAS המושרה AngII דומות בעכברים בגיל 8-48 שבועות 4,5,7. נכון לעכשיו, יש רק מעט מחקרים שדיווחו תעש מושרה AngII בעכברים בגיל 8-24 שבועות 22-26, שלא הראו הבדלים הקשורים לגיל נראות לעין על היווצרות TAA. יש נקבות עכברים שכיחות נמוכה בהרבה של AAAS מאשר עכברי זכרי חדורי AngII 4,28. זה גם ראוי לציין כי השכיחות של AAAS המושרה AngII היא הרבה יותר גבוהה בהיפר מאשר עכברי normo-cholesterolemic, אשר הוא יותר מ -50% לעומת פחות מ -30%, בהתאמה. בנוסף, קרע של אב העורקים הוא תכוף (כ 10 - 30%) בשני עכברי normo- וhypercholesterolemic במהלך עירוי AngII. יש עכברים שקבלו תזונה רגילה או מערבית, אפקטים מקסימאלי בAAA - עירוי של AngII בשיעור של 1,000 ng / קילוגרם / דקה לעכברים hypercholesterolemic, כגון קולט LDL - / - עכברים שהוזנו בדיאטה מערבית או אפוליפופרוטאין (apoE) - / פיתוח 3,4,29. קצב עירוי זה הוא אופטימלי עבור מחקר שבו מניפולציה גן של עניין בעכברי hypercholesterolemic צפוי להפחית AAAS. אם מניפולציה בעכברי hypercholesterolemic צפויה להגדיל AAAS, מומלץ להשרות AngII בשיעור של 500 ng / קילוגרם / דקה או נמוכה 30. בניגוד לAAAS, אין הדגמהעמותת nstrated בין מין זכר או היפרכולסטרולמיה ותעש המושרה AngII 25. עם זאת, בדומה לAAAS, אם מניפולציה של גן של העניין צפוי להגדיל את תעש, אנו ממליצים קצב עירוי נמוך מ -1,000 ng / קילוגרם / דקה לעירוי AngII. כמו כן, חשוב לדעת כי שכיחות וחומרה של פרצת אב העורקים הנגרמת AngII להשתנות בין עכברים בודדים ובין מחקרים. אם עכברים לא לפתח מפרצת אב העורקים, אפשרות אחת היא שפוטנציאל AngII אולי לא נמסר בהצלחה לעכברים. לאימות של קצב עירוי גבוה של AngII, כגון 1,000 ng / קילוגרם / דקה, מדידת לחץ דם מומלצת לפני, ובמהלך, עירוי AngII באמצעות שיטת זנב שרוול לא פולשנית 31. עירוי AngII בשיעור של 1,000 ng / קילוגרם / דקה מגבירה את לחץ דם הסיסטולי בעכברים. כמו כן, ריכוזי רנין פלזמה ניתן למדוד בעירוי או בסיום AngII שכן יש AngII משוב שלילי על rהפרשת enin. לכן, עירוי AngII מוביל לירידה בריכוזי רנין פלזמה. אם יש עכבר חדורי AngII לא פתולוגיות לכאורה אב העורקים, אין עלייה בלחץ דם, ולא ירידה של ריכוז רנין הפלזמה, זה מצביע על כך שAngII לא נמסר ביעילות באמצעות משאבת מיני האוסמוטי המושתל. אנו ממליצים על הסרת העכבר הזה מהמחקר. כמו כן, חשוב לשים לב שחלק מעכברים לא לפתח מפרצת אב העורקים למרות לחצי דם סיסטולי מוגברים וירידת ריכוזי רנין פלזמה. עכברים אלו צריכים להישאר במחקר. לסיכום, עירוי AngII מושגת על ידי השתלה תת עורית באמצעות משאבות האוסמוטי לגרום לפרצת אב העורקים בעכברים. שיטה זו מספקת AngII כל הזמן בקצב מוגדר לתקופות ייעודיות המשמשות ללמוד שני AAAS ותעש.

מפרצת של אב העורקים להציג התרחבות luminal קבועה של אב העורקים שמבשר קרע ובדרך כלל מוביל למוות. מחלה זו מתרחשת בשני אזורי אב העורקים בבטן ובית חזה, הנקראים כמו מפרצת אב העורקים בבטן (AAAS) ופרצת אב העורקים החזי (תעש), בהתאמה. בשל הבנה חלקית של מנגנונים מולקולריים ותהליכי pathophysiologic, אין טיפול רפואי מוכח שיכול למנוע התפשטות או קרע של שני סוגי פרצות אב העורקים. מכיוון שקשה לרכוש דגימות מטופל ולבצע ניסויים בבני אדם באופן ישיר, מחקר מתמקד בהגדרת מנגנונים של AAAS כבר להסיק לעתים קרובות ממודלים של בעלי החיים. מודל חיה נפוץ הוא עירוי תת עורי של אנגיוטנסין II (AngII) לעכברים. בהשוואה לגישות כירורגיות אחרות לגרימת AAAS בעכברים, כגון זלוף תוך אב העורקים אלסטט או יישום פרי-אב העורקים של סידן כלורי הדורשים 1,2 laparotomy, metho זהד אינו מחייב כניסה לחלל הגוף ודורש מומחיות כירורגית מינימאלית 3,4. עירוי תת עורי של AngII באמצעות משאבות האוסמוטי לגרום AAAS בתחילה דווח בצפיפות הנמוכה-ליפופרוטאין קולט (LDL) - / - עכברים שקבלו תזונה מועשרת בשומן רווי 3, ולאחר מכן בapoE - / - עכברים שקבלו תזונה רגילה מעבדה 4. גם מחקרים שנעשה לאחרונה הראו כי רבים AngII גורם AAAS בעכברי normolipidemic 5-7. הגישה של AngII יציקת הוחל לגרום AAAS ולחקור מנגנונים מולקולריים כמו גם פיתוח אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות (למשל, 5-15) מאז מודל זה משחזר תכונות רבות נצפו בAAAS האנושי. לדוגמא, גורמי סיכון של AAAS האנושי כגון עישון, הזדקנות, ומין זכר גם להגדיל AAAS המושרה AngII בעכברי 16,17. העמותה של היפרכולסטרולמיה עם AAAS בבני אדם דורשת הבהרה. עם זאת, יש לה להיותen עקבי שהיפרכולסטרולמיה מרחיבה AngII-induced AAAS בעכברים 18. פתולוגיות של AAAS המושרה AngII בעכברים הטרוגניים מאוד ומתאפיינות בחדירה עמוקה מקרופאג, השפלה קולגן, היווצרות פקקה ורזולוציה, וneovascularization 19-21. בניגוד למיקום הנפוץ ביותר infrarenal אב העורקים של AAAS בבני אדם, הנגרם על-AngII AAAS בעכברים להתרחש באזור אב העורקים suprarenal. תכונה בכל מקום אחר של AAAS המושרה AngII היא ההפסקה המדיאלי transmural, שהוביל לפקק transmural. לא ברור אם קרע אלסטין transmural מתרחש בבני אדם מאז ההתפתחות פתולוגית של AAAS בבני אדם לא נחקרה באופן בלעדי בשל חוסר רקמות aneurysmal מהשלבים מוקדמים יותר. עירוי AngII לעכברים גם מוביל להרחבה עמוקה של אזור אב העורקים החזי, שהוא בעיקר מוגבלת לאב העורקים עולים שהוא האזור הנפוץ ביותר עבור תעש בבני אדם <sעד&gt; 19,22-26. בדומה לAAAS המושרה AngII, תעש מושרה במהלך עירוי AngII גם לשחזר תכונות רבות של תעש אנושי 25. עם זאת, בניגוד לAAAS המושרה AngII, תעש מושרה AngII אינם משויך היפרכולסטרולמיה ואין לי הבדלים בין המינים. המטרה הכוללת של עירוי תת עורי AngII לעכברים היא ללמוד תכונות פתולוגיים ומנגנונים מולקולריים של AAAS ותעש.

<table><tbody><tr><td>תרכובת אנגיוטנסין II</td><td>Bachem</td><td>H-1705</td><td>המשמשת להשראת מפרצת אבי העורקים</td></tr><tr><td>משאבות אוסמוטיות Alzet</td><td>תאגיד DURECT דגם</td><td>2004</td><td>אפשרי לעירוי של 28 יום בעכברים במשקל > 20 גרם</td></tr><tr><td>תזונה מועשרת בשומן רווי</td><td>Harlan Teklad</td><td>TD.88137</td><td>42% קלוריות/קלוריות לגירוי היפרכולסטרולמיה בעכברים -/-</td></tr></tbody></table>

תת עורית אנגיוטנסין ii עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות גורם אבי העורקים מפרצת בעכברים

Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

משאבות אוסמוטיות מעבירות תרכובות בקצב קבוע לבעלי חיים קטנים. מאמר זה מציג פרוטוקול סטנדרטי המשמש להשראת מפרצת אבי העורקים באמצעות עירוי תת עורי של אנגיוטנסין II (AngII) ממשאבות אוסמוטיות מושתלות. פרוטוקול זה כולל חישוב כמות AngII ופירוק, מילוי משאבה אוסמוטית, השתלת משאבות אוסמוטיות תת עורית, תצפית לאחר השתלת משאבה וקציר אבי העורקים כדי להמחיש מפרצת אבי העורקים בעכברים. עירוי תת עורי של AngII באמצעות משאבות אוסמוטיות בעקבות פרוטוקול זה הוא טכניקה אמינה וניתנת לשחזור לגרימת מפרצת אבי העורקים הבטני והחזה בעכברים. משך העירוי נע בין מספר ימים למספר חודשים בהתאם למטרת המחקר. AngII 1,000 ננוגרם/ק"ג/דקה מספיק כדי לספק השפעות מקסימליות על היווצרות מפרצת אבי העורקים הבטני במודלים של עכברים היפרכולסטרולמיים זכרים כגון עכברים עם מחסור באפוליפופרוטאין E או עכברים חסרי קולטן ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה. שכיחות מפרצת אבי העורקים הבטני הנגרמת על ידי עירוי AngII באמצעות משאבות אוסמוטיות נמוכה פי 5 - 10 בעכברים היפרכולסטרולמיים נקבות וגם נמוכה יותר בשני המינים של עכברים נורמו-כולסטרולמיים. לעומת זאת, מפרצת אבי העורקים החזה הנגרמת על ידי AngII בעכברים אינה היפרכולסטרולמיה או תלויה במגדר. חשוב לציין, תכונות מרובות של מודל עכבר זה מסכמות את אלה של מפרצת אבי העורקים האנושית.

4 קולט LDL זכר - / - העכברים שתוארו בסעיף הפרוטוקול היו מורדמים לאחר 4 שבועות של עירוי AngII. Aortas נקצרו, ניקה, וצלם לדמיין dilations אב העורקים. כפי שניתן לראות באיור 3, יש לי aortas מספר מאפיינים שונים כולל הרחבה של אזור suprarenal (AAAS; איור 3 א), הרחבת האזור עולה (תעש; איור 3), או הרחבה של שני האזורים (נוכחות של שני AAAS ותעש; איור 3 ג), ואילו במורפולוגיה עכבר אחד היה גס נורמלי (איור 3D). התרחבות של אב העורקים בבטן היא לכמת על ידי מדידת הרוחב המקסימאלי vivo לשעבר של אזור suprarenal, כפי שמודגם על ידי הקו האדום באיור 3 א. כדי למדוד עולה התרחבות אב העורקים, aortas נחתכו פתוח והצמיד כפי שמוצג באיור 4. שטח פן intimal נמדדו באזור עולה אב העורקים (האזור המוקף הקווים אדומים דואר באיור 4 א) ללכמת תעש. שליט נכלל בכל תמונה כדי לתקנן מדידות, כפי שמוצג בשני האיורים 3 ו -4. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig1.jpg" /> . 1. תמונת נציג איור של משאבה האוסמוטי מולא כל משאבה מכילה שני חלקים נפרדים: גוף עיקרי וזרימת מנחה. לאחר מילוי גוף המשאבה עם AngII, זרימת המנחה מוכנסת לאטום את המשאבה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig2.jpg" /> תהליך איור 2. ניתוח השתלת משאבה () עכבר ממוקם בברדס למינרית עם חרטום שהוא ברציפות שחרור isoflurane וחמצן.; Hemostat ישר (ב) מוכנס לתוך החתך בעור כדי להפוך את המנהרה תת עורית; (ג) המשאבה מוחדרת דרך<html> חתך בעור בעדינות; החתך בעור (ד &#39;) הוא מהודק לאחר כניסה משאבה. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig3.jpg" /> 3. תמונות איור אבי העורקים (לשעבר vivo) מעכברי חדורי AngII ng AngII 1000 / קילוגרם / דקה הייתה חדור בקולטן ה- LDL זכר -. / - עכברים במשך 28 ימים. () AAAS מלווה פקקת; קו אדום (2.05 מ&quot;מ) מציג את המדידה של רוחב המקסימאלי של אב העורקים באזור suprarenal. (ב) עולה התרחבות אב העורקים (TAA) עם אב העורקים בבטן רגיל גס; (ג) dilations עמוק בשני עולה ואזורי אב העורקים suprarenal (תעש וAAAS); אב העורקים נורמלים בעליל ללא התרחבות ניכרת של עולה או אזור אב העורקים suprarenal (ד &#39;). 4.jpg &quot;/&gt; איור 4. תמונות פנים צמודים של אזורי אב העורקים החזי מעכברי חדורי AngII AngII 1000 ng / קילוגרם / דקה הייתה חדור בקולטן ה- LDL זכר -. / - עכברים במשך 28 ימים. השטח המתואר על ידי קו אדום מייצג את אזור אב העורקים עולה לרבות חלק מקשת אב העורקים. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 1 </td><td colspan="2"> מינון הנדרש </td><td></td><td> 1,000 </td><td colspan="2"> ng / קילוגרם / דקה </td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td colspan="3"> התחל משקל גוף (עכבר הגדול ביותר) </td><td> 24.8 </td><td> ז </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td colspan="3"> עלייה במשקל גוף מוערך סה&quot;כ </td><td> 1 </td><td> ז </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4 </td><td> שיעור שאיבה </td><td></td><td></td><td> 0.25 </td><td> μl / hr </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td colspan="2"> נוmber של עכברים </td><td></td><td> 4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td colspan="2"> מנה לשעה לבעלי חיים </td><td></td><td> 1,518 </td><td> ng </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> קונצרט כלשהו צורך </td><td></td><td></td><td> 6072 </td><td> ng / μl </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td colspan="2"> לפתרון ul 300 </td><td></td><td> 1.82 </td><td colspan="2"> מ&quot;ג / 300 μl </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="2"> דרושי פתרון </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td colspan="2"> AngII סה&quot;כ (מ&quot;ג) </td><td></td><td> 7.3 </td><td> מ&quot;ג </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 </td><td colspan="2"> מומס בתמיסת מלח ו160 #; </td><td></td><td> 1,200 </td><td> μl </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> עכבר </td><td> משקל גוף </td><td> גורם לדילול </td><td colspan="2"> נפח (μl) </td><td colspan="2"> משאבת משקל (גרם) </td><td> יחס מולא </td></tr><tr><td> # </td><td> (ז) </td><td></td><td> AngII </td><td> מלוח </td><td> ריק </td><td> פָּטוּם </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296.4 </td><td> 3.6 </td><td> 1.1443 </td><td> 1.3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278.2 </td><td> 21.8 </td><td> 1.1677 </td><td> 1.4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263.7 </td><td> 36.3 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="7"> גורם לדילול = משקל גוף של משקל עכבר / גוף של העכבר הגדול </td><td></td></tr></tbody></table><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> עכבר </td><td> משקל גוף </td><td> גורם לדילול </td><td colspan="2"> נפח (μl) </td><td colspan="2"> משאבת משקל (גרם) </td><td> יחס מולא </td></tr><tr><td> # </td><td> (ז) </td><td></td><td> AngII </td><td> מלוח </td><td> ריק </td><td> פָּטוּם </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296.4 </td><td> 3.6 </td><td> 1.1443 </td><td> 1.3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278.2 </td><td> 21.8 </td><td> 1.1677 </td><td> 1.4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263.7 </td><td> 36.3 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr></tbody></table> טבלה 1: חישוב לעירוי של 28 ימים באמצעות משאבות האוסמוטי.

השתלה תת עורית של משאבות האוסמוטי מספקת גישה נוחה למסירה ממושכת ועקבית של תרכובות. גישה זו נעשתה שימוש נרחב כדי ללמוד שני פרצות אב העורקים בבטן ובית חזה בעכברים.

תת עורית אנגיוטנסין II עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות גורם אבי העורקים מפרצת בעכברים

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals.  This article introduces a standard protocol used to induce aortic ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לחקור את המאפיינים הפתולוגיים והמנגנונים המולקולריים של מפרצת באבי העורקים בעכברים. הדבר משיג תחילה באמצעות הכנת משאבה אוסמוטית עם תמיסת angiotensin two. לאחר מכן נוצר כיס בעור גבו של בעל החיים, שבו מוחדרת המשאבה.בסופו של דבר, ניתן להעריך את התרחבות האורטה באזורי האורטה החזיית והבטנית באמצעות דימות ex vivo. לכן, יישמנו תחילה טכניקה זו כיוון שרצינו להגדיר את תפקידו של לחץ הדם בעת עירוי של angiotensin לקידום התפתחות טרשת העורקים. את הפרוצדורה ידגימו דבורה הארט ואנג'יו בנאן, שניהם חברים במרכז המחקר הקרדיווסקולרי Soha, לצורך מילוי המשאבות האוסמוטיות.התחילו ברישום מספר האצווה של המשאבות ומתכווני הזרימה המצורפים לגוף המשאבה הראשי ולמתכוון הזרימה, תוך כדי חבישת כפפות כדי למנוע העברה של שומן מהידיים למעטפת החיצונית של המשאבה. לאחר מכן, פתחו רק את מספר המשאבות ומתכווני הזרימה הדרושים למחקר.לאחר מכן שקלו כל משאבה, כולל הגוף הראשי וממתן הזרימה, ורשמו את המשקל עד ארבעה ספרים אחרי הנקודה. משקל זה, המכונה בתבלה "משקל המשאבה כשהיא ריקה", ישמש לחישוב יחס המילוי לאחר שכל המשאבות יישקלו. חברו את מחט מילוי המשאבה למזרק סטרילי של 1 cc ומלאו בזהירות את המזרק בתמיסת angiotensin two שהוכנה הרגע מהמבחנה הפלסטית בעלת המספר המתאים.הסר בזהירות את כל בועות האוויר מהמזרק כאשר המחט מופנית כלפי מטה. לאחר מכן, השאר את המזרק בעמדה זו כדי למנוע חדירת בועות למשאבה. הכנס בעדינות את מחט המילוי לגוף המשאבה.כאשר המחט במקומה, העבירו את הקצה אל תוך המשאבה עד שייגע בתחתית המשאבה. לאחר מכן, לחצו באיטיות על הבוכנה כדי להחליט כ-246 µL מהתמיסה. ניתן להשתמש בצל הכהה בתוך המשאבה כדי לעקוב אחר רמת המילוי.המשאבה מלאה. כאשר טיפת נוזל עולה מתוך המשאבה, הוצא בזהירות את המחט והכנס את מווסת הזרימה אל המשאבה דרך החור בחלק העליון של גוף המשאבה, עד שלא ייראה רווח בין ראש מווסת הזרימה לבין החלק העליון של גוף המשאבה. ספוג בזהירות כל דליפת נוזל עודפת שנגרמה מההכנסה.לאחר מכן, שקלו את המשאבה המלאה ורשמו את המשקל בתא המתאים למשקל המשאבה כשהיא מלאה בתוך התבנית. ניתן לאחר מכן לחשב את יחס המילוי באמצעות הנוסחה, ולהזין נתון זה לתא יחס המילוי בתבנית. באופן אידיאלי, יחס המילוי צריך להיות שווה או גבוה מ-95%. כאשר המשאבה מלאה, הניחו אותה לתוך מבחנה פלסטית סטרילית מתאימה בנפח של ארבעה מיליליטר, כאשר ראש הממתן פונה כלפי מעלה, והוסיפו נפח מספיק של תמיסת מלח סטרילית כדי לכסות את המשאבה.לאחר שכל המשאבות אוחסנו, הניחו את המבחנות באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 12 שעות לפחות כדי לאפשר הכנה חלקית של המשאבות ביום ההשתלה. בעודכם לובשים חלוק, מסכה וכפפות, גלחו שטח בגודל של רבע (מטבע) מעל הכתף של עכבר מורדם והעבירו את החיה למקרן זרימה למינרית. לאחר מריחת משחה על עיני החיה ואישור היעדר תגובה לצביטה של בהונות, נגבו את האזור המגולח עם Betadine, ולאחר מכן בצעו שלושה ניגובים עם 70% ethanol.בשלב הבא, השתמשו בסכין מנתחים שעברה סטריליזציה באוטוקלאב כדי לבצע חתך של סנטימטר אחד בעור, בניצב לזנב ומאחורי האוזן, מעל השכמה של הרגל הקדמית. לאחר מכן, בעזרת פינצטה ביד אחת, פתחו את החתך באמצעות המוסטט. ביד השנייה, צרו תעלה תת-עורית מתחת לעור תוך קידום קצה ההמוסטט לכיוון הזנב.פתח בזהירות את לסנאט של ה-hemostat כדי לפתוח כיס עבור המשאבה. לאחר מכן, החלף את ה-hemostat במשאבה המתאימה, כאשר ראש הממתן (moderator head) ממוקם בחלקו האחורי של העכבר, ודחף בעדינות את המשאבה לחלוטין לתוך הכיס. צריך להישאר מספיק מרווח כדי לסגור את הפצע ללא מתח או מתיחה של העור.לאחר שהמשאבה נמצאת במיקומה, צבצו בחוזקה והחליקו את שני צדדי החתך כך שהקצוות ייפגשו, וסגרו את העור באמצעות אטב wound clip אחד או שניים. בדקו את אתר החתך כדי לוודא שהפצע סגור לחלוטין ושהמשאבה אינה לוחצת ישירות על החתך. לאחר מכן, השתמשו במקלון צמר נקי למריחת קרם לידוקאין מקומי על האזור.לבסוף, העבירו את העכבר למצע חימום עד שיחזור להסירתו, ואז החזירו את החיה לכלובה. בניסוי זה, לאחר ארבעה שבועות של עירוי angiotensin II באמצעות משאבות שהושתלו כפי שהודגם זה עתה, נגזרו אאורטות אלו מעכברים עם נוק-אאוט לרספטור לליפופרוטאין בצפיפות נמוכה (low density lipoprotein receptor knockout mice) לצורך הדמיה של ההרחבות האאורטליות שלהם. כפי שנראה בתמונות, האאורטות הראו מספר מאפיינים שונים, כולל הרחבה של האזור שמעל הכליות (supra renal region), הרחבה של האזור העולה (ascending region), או הרחבה של שני האזורים, כאשר עכבר אחד הראה מורפולוגיה תקינה לחלוטין.לאחר מכן כוונתה התרחבות האורטה הבטנית על ידי מדידת הרוחב המקסימלי של אזור הסנואל ex vivo, כפי שמוצג על ידי הקו האדום למדידת התרחבות האורטה העולה. לאחר מכן נפתחה האורטה וכווןה באמצעות סיכות כפי שמוצג. שטח הפנים של האינטימה נמדד באזור האורטה העולה באמצעות הסריגים בכל אחת מהתמונות הללו והבאות אחריהן, כדי להבטיח סטנדרטיזציה של המדידות לאחר השליטה בטכניקה.ביצוע פרוצדורה זו לא אמור לארוך יותר מחמש דקות לכל מסה.

subcutaneous-angiotensin-ii-infusion-using-osmotic-pumps-induces

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אולטראסאונד הדמיה הפך מודאליות נפוצות לקבוע את מידות luminal של מפרצת אבי העורקים החזי והבטן בעכברים. פרוטוקול זה מתאר את ההליך כדי לרכוש תמונות אולטרסאונד מימדי לשחזור ואמין של אבי העורקים עולה והבטן בעכברים.

אולטראסאונד הדמיה של העורקים בית החזה והבטן בעכברים כדי לקבוע מידות מפרצת

אנו מתארים פרוטוקול כירורגי כדי לגרום בעקביות בירידה חזקה בבית החזה של אבי העורקים בעכברים. ההליך כולל כריתת האונה השמאלית, החשיפה של אבי העורקים החזה, ומיקום של ספוג ספוגה הלבלב לבלב חזירי על הקיר של אבי העורקים.

המודל הכירורגי של מורנה של Elastase אקטואלי המושרה מפרצת אבי העורקים החזי

זה מודל הרומן יוצר מאוד חזק הבטן התחתית בבית האבי העורקים בתוך החזיר באמצעות שילוב של אנגיופלסטיקה בלון, elastase/קוליזיה perfusion, יישום מקומי elastase, ומתחם אוראלי β-aminopropionitrile המינהל, אשר מפריעה עם קולגן חוצה קישור.

המודל הפורצין של מפרצת אבי העורקים הבטני

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה כירורגית מתוקננת עבור מודל AAA המושרה אלסטאז באמצעות יישום ישיר של אלסטאז להרפתקנטיה של אבי העורקים הבטן האינפרא-יותרת בעכברים.

עכבר בטן מפרצת אבי העורקים מודל המושרה על ידי יישום פרי וסקולרי של אלסטאז

פרוטוקול זה מתאר השתלה רצופה של משאבה אוסמוטית כדי לגרום למפרצת אבי העורקים הבטני על ידי שחרור אנגיוטנסין II בעכברים חסרי אפוליפופרוטאין E (ApoE) ושל יציאת גישה וסקולרית עם קטטר ורידים ג'וגולרי לטיפול תרופתי חוזר. ניטור התפתחות מפרצת על ידי אולטרסאונד תלת מימדי מתבצע ביעילות למרות השתלים הגביים.

טיפול תרופתי על ידי קטטר ורידי מרכזי במודל עכבר של אנגיוטנסין II מפרצת אבי העורקים הבטני המושרה וניטור על ידי אולטרסאונד 3D

פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר של מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) המושרה על-ידי סידן פוספט, כדי לחקור את התכונות הפתולוגיות והמנגנונים המולקולריים של AAAs.

מודל מפרצת אבי העורקים בבטן הנגרמת על-ידי סידן פוספט על-ידי עכבר

כתב יד זה מציג פרוטוקול לביסוס מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר באמצעות סידן כלורי ואלסטאז, המשלב את היתרונות של שיטות מידול קודמות. מודל זה יכול לשמש לחקר המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס מפרצת אבי העורקים הבטני.

מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר על ידי Periadventitial סידן כלורי והסננת אלסטאז

פרוטוקול זה מתאר גישה כירורגית שיטתית למידול מפרצות מתקדמות באבי העורקים הבטני בעכברים על ידי שילוב של יישום אלסטאז ישירות על אבי העורקים האינפרא-כלייתי ומתן ß-aminopropionitrile דרך מי שתייה.

מידול מפרצת אבי העורקים הבטני מתקדם בעכברים על ידי שילוב של אלסטאז מקומי ו-ß-aminopropionitrile פומי

פרוטוקול זה מספק הליך מפורט, שלב אחר שלב, לאינדוקציה של דיסקציה של אבי העורקים החזי בעכברים. באופן ספציפי, הוא כולל חישוב מדויק של המינונים הנדרשים של β-אמינופרופיוניטריל ואנגיוטנסין II, הליך מילוי המשאבה האוסמוטית וטכניקת ההשתלה של המשאבה האוסמוטית.

מודל עכברי של דיסקציה של אבי העורקים החזי המושרה על ידי עירוי β-אמינופרופיוניטריל דרך הפה ואנגיוטנסין II תת עורי

פרוטוקול זה מספק שיטה ניתנת לחזרה ואמינה להשראת מפרצות אאורטה בטנית (AAAs) בעכברים C57BL/6 באמצעות רגישות לאלסטין ויישום אלסטאז פריוסקולרי, כמודל AAA הכולל רכיב רגישות חיסונית.

יצירת מודל אמין של אנוריזמה באאורטה בטנית בעכבר באמצעות רגישות לאלסטין ואלסטאז פריוסקולרי

למדו כיצד לחקור מנגנונים מולקולריים של מפרצת אבי העורקים בעכברים באמצעות משאבות אוסמוטיות המשחררות אנגיוטנסין II תת עורית. שיטה זו מאפשרת מעקב מדויק אחר התרחבות אבי העורקים לאורך זמן.

תת עורית אנגיוטנסין II עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות גורם אבי העורקים מפרצת בעכברים

גלה סרטונים נוספים