שיטה להערכת מאפייני החיזוק של אתנול בחולדות ללא מצוקת מים, סכרין Fading או הדרכת גישה מורחבת

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא ליזום במהירות תגובה אופרנטית לאלכוהול בחולדות בשיטה הנוחה למתנסים, ובניגוד לשיטות הסטנדרטיות, אינה דורשת חסך במים, או דהיית סוכרוז סכרין. אם כן, השיטה הזו היא כלי שימושי מאוד לענות על שאלות מפתח על הנוירוביולוגיה והנוירו-פרמקולוגיה של תגמול אלכוהול בחיפוש אלכוהול בחולדות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא אינה דורשת דהיית סוכרוז סכרין כדי ליזום תגובת אלכוהול בחולדות.

ראשית, ביטול הנפילה הפוטנציאלית של שימוש בממתיקים בהליך ניהול עצמי של אתנול. לצורך ניסוי זה, השג חולדות במשקל 200 עד 225 גרם. כאן משתמשים בזכרי וויסטאר.

שכן אותם בזוגות או בנפרד, תלוי ברציונל הניסוי. שמרו על המושבה במחזור הפוך של 12-12 אור-חושך עם טמפרטורה ולחות מבוקרות וערכו את הניסויים בשלב החשוך. שקלו את בעלי החיים מדי שבוע, ואפשרו להם להתאקלם לפחות שבוע לפני תחילת הניסוי.

אל תגביל את הגישה של החולדה למזון ומים. זה לא הכרחי להתניות. ערכו את כל אימוני ההתנהגות בתא אופרנטי בגודל זהה עם רשת הצפה ומחבת אשפה.

יש להתאים את החדר לתא מאוורר ומחליש קול. בכל תא חייבים להיות אורות גירוי, משאבות מזרק ושני מנופים נשלפים. יש למקם את המפלסים לרוחב לשקע נוזלי.

כל תא צריך להיות בשליטה אוטומטית עם ממשק מחשב. השתמש בתוכנה זו כדי להכין את תוכנית ההתניה האופרנטית לפי הצורך. לדוגמה, בצע את הפקודות הבאות.

האריכו שני מנופים כדי לסמן את תחילת הפגישה ולאותת על זמינות אלכוהול. בקש מידית האתנול, בלחיצה, להעביר 100 מיקרוליטר של 20% אתנול לבאר השתייה הסמוכה, ופסק זמן למשך חמש שניות. אותת על פסק הזמן על ידי הארת נורית רמז מעל הידית.

למנוף השני, כאשר לוחצים עליו, אין תוצאה מתוכנתת, והוא משמש כבקרה להתנהגות לא ספציפית. אפילו במהלך פסק זמן, רשום כיצד החולדות משתמשות במנופים, אם כי אין לכך השלכות על החולדה. לאחר 30 דקות, משוך את שני המנופים כדי לסמן את סיום הפגישה.

טען תמיסת אתנול, העשויה מ-95% אתנול ומי ברז, למזרק. הוצא את התמיסה מבלי להכניס בועות אוויר לקווי הברז. אשר באופן ידני את זרימת הפתרון.

בדוק תמיד את המכשירים באופן ידני. כמו כן, יש לייבש תמיד את מיכל התמיסה לפני תחילת כל מפגש. לפני תחילת הפעלה, טען את פקדי התוכנה וודא שהכל פועל.

העבירו את החולדות לחדר הבדיקות בכלוב הובלה, והקצו חולדה אחת לכל תא. שמור על חדר הבדיקות באותה טמפרטורה ולחות כמו הוויווריום. העמיסו את החולדות לתאים שלהן באופן עקבי, ובאותה שעה ביום לכל מפגש.

לאחר מכן הפעל את התוכנה כדי להתחיל את ההפעלה. לאחר סיום הפגישה, החזירו את החולדות לוויווריום והשתמשו בחומר חיטוי לניקוי כלובי המיזוג האופרנטיים. ערכו את המפגשים מדי יום, חמש עד שש פעמים בשבוע.

לאחר כל מפגש, חשב את המספר הממוצע של לחיצות מנוף פעילות, לחיצות מנוף לא פעילות ותגמולי אלכוהול. הביצועים יתייצבו כאשר במשך שלושה מפגשים רצופים התגמולים לא ישתנו ביותר מ-15%לאחר מכן ניתן לתמרן חולדות בקו בסיס יציב. מניפולציה אפשרית אחת עבור חולדות על קו הבסיס המיוצב היא להעריך את המוטיבציה שלהן לתגמולי האתנול.

כדי לעשות זאת, הכפיפו אותם ללוח זמנים של יחס פרוגרסיבי. תכנת את התאים כך שיספקו בתחילה נפח יחיד של אלכוהול בלחיצת מנוף אחת, אך הגדל את מספר לחיצות המנוף הנדרשות לאחר כל מחזק אלכוהול. כל חיה תגיע לנקודת שבירה, המתאימה למספר הלחיצות שבוצעו עבור החיזוק האחרון שהרוויח.

מודל זה הוערך על תוקף הניבוי שלו באמצעות התרופה האלכוהוליסטית המאושרת, נלטרקסון. ואכן, תוקף ניבוי נקבע, ולכן ניתן להשתמש במודל כדי להעריך מועמדים לתרופות חדשות. בתחילה, הזריקו לחולדות מי מלח 30 דקות לפני כל מפגש כדי להרגיל אותן להזרקה.

נתח את תוצאות המפגשים והמשך כאשר מספר התגמולים בין שני המפגשים האחרונים משתנה ב-15% או פחות. לאחר מכן, העבירו את הנלטרקסון במי מלח עם pH מותאם לניטרלי. לחלק את סדר הבדיקות באופן אקראי בין קבוצות הטיפול השונות, וקבוצת הביקורת הלא מטופלת.

בין מתן תרופות, תנו לכל חולדה לעבור שני מפגשים רגילים ללא טיפול, ונחשפו רק למי מלח. זה מתפקד כתקופת השטיפה, ומאפס את החולדה. חזור על הבדיקות עד שבסופו של דבר כל חולדה מותנית מקבלת כל רמת טיפול פעם אחת, וטיפול הביקורת פעם אחת.

לאחר ניתוח הנתונים, ניתן לבחור את המינון היעיל ביותר לשימוש על בעלי החיים במהלך בדיקת יחס פרוגרסיבי. באמצעות הפרוטוקול המתואר, 239 חולדות משמונה קבוצות שונות אומנו לנהל בעצמן את תגמול האלכוהול ללא מחסור במים או דעיכת סוכרוז סכרין. החולדות החלו בלחיצת מנוף במהירות, והשיגו יותר מ-10 תגמולים בפגישה הראשונה.

בסופו של דבר, החולדות השיגו שיעורי תגובה יציבים, והרוויחו כ-24 תגמולים בכל מפגש של חצי שעה. תרופה שאושרה על ידי ה-FDA, נלטרקסון, נבדקה בשלושה ריכוזים. כצפוי, הטיפול בנלטרקסון הביא לירידה תלוית מינון במתן עצמי של אלכוהול, מה שסיפק אימות פרמקולוגי חשוב לפרוטוקול זה.

כמו כן, כצפוי, נלטרקסון הפחית את המוטיבציה של החולדה לאלכוהול תחת לוח זמנים פרוגרסיבי, כפי שמוצג על ידי הירידה במדד נקודת השבירה. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליזום במהירות תגובה אופרנטית של אתנול בחולדות מבלי להשתמש בהליך מחסור במים או בהליך דהיית סוכרוז סכרין. עם פרוטוקול זה, חולדות רוכשות שיעורי ניהול עצמי יציבים תוך כשבועיים, מה שמביא לריכוזי אלכוהול בדם רלוונטיים מבחינה פרמקולוגית.

בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לשמור על המצב היומיומי עקבי ככל האפשר. זה גם קריטי שהאתנול יועבר בצורה נכונה לתוך השקע מהתגובה המחוזקת הראשונה, שכן כל תקלה עלולה לשנות או לעכב את רכישת הניהול העצמי של אתנול. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע ניסויים אחרים כדי לחקור את הבסיס העצבי של חיפוש ונטילת אלכוהול.