Name: דגם bm12 העין מתנהל של זאבת אדמנתית המערכתית (לופוס) בC57BL עכברים / 6 (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: חקור את התפשטות תאי T פוליקולריים עוזרים, תאי B מרכז נבט ותאי פלזמה בדגם bm12 של זאבת אדמנתית מערכתית בעכברי C57BL/6 באמצעות ציטומטריית זרימה. שיטה זו מאפשרת ניתוח מעמיק של דינמיקת תאים חיסוניים במחלה אוטואימונית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי מכון המחקר לופוס, CA138617 מענק NCI, DK090978 מענק NIDDK, פרס שרלוט שמידלאפ (ל-E.M.J.), ומלגת אלברט ג'יי ראיין (לג'יי.קיי). אנו אסירי תודה על התמיכה והמכשור הניתנים על ידי ליבת המחקר של ציטומטריית זרימה בחטיבה לראומטולוגיה במרכז הרפואי לילדים בסינסינטי, הנתמכת בחלקה על ידי NIH AR-47363, NIH DK78392 ו-NIH DK90971.

<ol><li>Helmick, C. G., Felson, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Part+I.+Arthritis+Rheum%5BTitle%5D)+AND+%22Estimates+of+the+prevalence+of+arthritis+and+other+rheumatic+conditions+in+the+United+States%22%5BJournal%5D)">Part I. Arthritis Rheum.</a> Estimates of the prevalence of arthritis and other rheumatic conditions in the United States. 58, 15-25 (2008).</li>
<li>Lupus Foundation of America Web Site. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus">http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus</a> (2015).</li>
<li>Somers, E. C., Marder, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population-based+incidence+and+prevalence+of+systemic+lupus+erythematosus%3A+The+Michigan+lupus+epidemiology+and+surveillance+program%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Population-based incidence and prevalence of systemic lupus erythematosus: The Michigan lupus epidemiology and surveillance program.</a> Arthritis and Rheumatol. 66, 369-378 (2014).</li>
<li>Perry, D., Sang, A., Yin, Y., Zheng, Y. -Y., Morel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Murine models of systemic lupus erythematosus.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 271694(2011).</li>
<li>Lindholm, L., Rydberg, L., Strannegård, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+host+plasma+cells+during+graft-versus-host+reactions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development of host plasma cells during graft-versus-host reactions in mice.</a> Eur J Immunol. 3 (8), 511-515 (1973).</li>
<li>Fialkow, P. J., Gilchrist, C., Allison, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmunity+in+chronic+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Autoimmunity in chronic graft-versus-host disease.</a> Clin Exp Immunol. 13, 479-486 (1973).</li>
<li>Streilein, J. W., Stone, M. J., Duncan, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+Specificity+of+Autoantibodies+Produced+in+Systemic+Graft-vs-Host+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Studies on the Specificity of Autoantibodies Produced in Systemic Graft-vs-Host Disease.</a> J Immunol. 114 (1), 255-260 (1975).</li>
<li>Gleichmann, E., Gleichmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diseases+caused+by+reactions+of+T+lymphocytes+to+in+compatible+structures+of+the+major+histocompatibility+complex.+I.+Autoimmune+hemolytic+anemia%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Diseases caused by reactions of T lymphocytes to in compatible structures of the major histocompatibility complex. I. Autoimmune hemolytic anemia.</a> Eur J Immunol. 6 (12), 899(1976).</li>
<li>Morris, S., Cohen, P. L., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+induction+of+systemic+lupus+erythematosus+by+recognition+of+foreign+Ia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Experimental induction of systemic lupus erythematosus by recognition of foreign Ia.</a> Clin Immunol Immunopathol. 57 (2), 263-273 (1990).</li>
<li>Chen, F., Maldonado, M., Madaio, M., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Host+%28Endogenous%29+T+Cells+in+Chronic+Graft-Versus-Host+Autoimmune+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Role of Host (Endogenous) T Cells in Chronic Graft-Versus-Host Autoimmune Disease.</a> J Immunol. 161 (11), 5880-5885 (1998).</li>
<li>Klarquist, J., Hennies, C. M., Lehn, M. A., Reboulet, R. A., Feau, S., Janssen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STING-Mediated+DNA+Sensing+Promotes+Antitumor+and+Autoimmune+Responses+to+Dying+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">STING-Mediated DNA Sensing Promotes Antitumor and Autoimmune Responses to Dying Cells.</a> J Immunol. 193, 6124-6134 (2014).</li>
<li>Petri, M., Orbai, A. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+and+validation+of+systemic+lupus+international+collaborating+clinics+classification+criteria+for+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Derivation and validation of systemic lupus international collaborating clinics classification criteria for systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 64 (8), 2677-2686 (2012).</li>
<li>Zangala, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+genomic+DNA+from+mouse+tails%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of genomic DNA from mouse tails.</a> J Vis Exp. (6), e246(2007).</li>
<li>Lorenz, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymerase+Chain+Reaction%3A+Basic+Protocol+Plus+Troubleshooting+and+Optimization+Strategies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies.</a> J Vis Exp. (63), e3998(2012).</li>
<li>Product information: Thermo Scientific FastDigest PsuI. , Thermo Scientific. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf">https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf</a> (2012).</li>
<li>Matheu, M. P., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+2-photon+imaging+of+peripheral+lymph+nodes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection and 2-photon imaging of peripheral lymph nodes in mice.</a> J Vis Exp. (7), e265(2007).</li>
<li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+mapping+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Lymph node mapping in the mouse.</a> J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).</li>
<li>Covelli, V. Chapter 3, Internal examination. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCovelli%2C+V+%22Guide+to+the+necroscopy+of+the+mouse%22">Guide to the necroscopy of the mouse</a>. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html">http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html</a> (2009).</li>
<li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester+%28CFSE%29+to+monitor+lymphocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation.</a> J Vis Exp. (44), e2259(2010).</li>
<li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+CD4%2B+T+cells+from+mouse+lymph+nodes+using+Miltenyi+MACS+purification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of CD4+ T cells from mouse lymph nodes using Miltenyi MACS purification.</a> J Vis Exp. (9), e53319(2007).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), e2771(2012).</li>
<li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+Blood+Collection+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Methods of Blood Collection in the Mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li>
<li>Cohen, M., Varki, N. M., Jankowski, M. D., Gagneux, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Unfixed%2C+Frozen+Tissues+to+Study+Natural+Mucin+Distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution.</a> J Vis Exp. (67), e3928(2012).</li>
<li>Cohen, P. L., Maldonado, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+SLE%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol.%22%5BJournal%5D)">Animal models for SLE.</a> Curr Protoc Immunol.. Chapter 15, Unit 15.20(2003).</li>
<li>Seavey, M. M., Lu, L. D., Stump, K. L. Animal models of systemic lupus erythematosus (SLE) and ex vivo assay design for drug discovery. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSeavey%2C+MM+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22">Curr Protoc Pharmacol</a>. Chapter 5, Unit 5(2011).</li>
<li>McKenna, K. C., Vicetti Miguel, R. D., Beatty, K. M., Bilonick, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+caveat+for+T+cell+transfer+studies%3A+generation+of+cytotoxic+anti-Thy1.2+antibodies+in+Thy1.1+congenic+mice+given+Thy1.2%2B+tumors+or+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">A caveat for T cell transfer studies: generation of cytotoxic anti-Thy1.2 antibodies in Thy1.1 congenic mice given Thy1.2+ tumors or T cells.</a> J Leukoc Biol. 89 (2), 291-300 (2011).</li>
<li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+mouse+male-specific+transplantation+antigen+H-Y.%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of a mouse male-specific transplantation antigen H-Y.</a> Nature. 376, 695-698 (1995).</li>
<li>Joly, E., Hudrisier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+trogocytosis+and+what+is+its+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">What is trogocytosis and what is its purpose.</a> Nat Immunol. 4 (9), 815(2003).</li>
<li>Brown, D. R., Calpe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+an+NK+cell-independent+role+for+Slamf4+in+controlling+humoral+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: an NK cell-independent role for Slamf4 in controlling humoral autoimmunity.</a> J Immunol. 187 (1), 21-25 (2011).</li>
<li>Morris, S. C., Cheek, R. L., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allotype-specific+immunoregulation+of+autoantibody+production+by+host+B+cells+in+chronic+graft-versus+host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allotype-specific immunoregulation of autoantibody production by host B cells in chronic graft-versus host disease.</a> J Immunol. 144 (3), 916-922 (1990).</li>
<li>Choudhury, A., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+require+%E2%80%9Cnurturing%E2%80%9D+by+CD4+T+cells+during+development+in+order+to+respond+in+chronic+graft-versus-host+model+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">B cells require “nurturing” by CD4 T cells during development in order to respond in chronic graft-versus-host model of systemic lupus erythematosus.</a> Clin Immunol. 136 (1), 105-115 (2010).</li>
<li>Slifka, M. K., Antia, R., Whitmire, J. K., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humoral+immunity+due+to+long-lived+plasma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Humoral immunity due to long-lived plasma cells.</a> Immunity. 8 (3), 363-372 (1998).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

המודל מושרה bm12 הוא דרך קלה יחסית ויעילה ללמוד את התהליכים התאיים ומולקולריים של SLE. הפעלה כרונית של תאי CD4 T הועברו adoptively המכוון נגד אנטיגנים עצמיים מובילה להצטברות של TFH, GC תאי B, ותאי פלזמה אשר ניתן למדוד על ידי cytometry זרימה, כפי שתואר כאן. מחקרים עתידיים באמצעות מודל זה יכול לחקור את התפקיד של גני מועמדים וטיפולים חדשניים בתהליכי המרכז נבטי אוטואימוניות שדומות לאלו המתרחשים בחולים עם SLE, וסופו של דבר קובעים את ההצטברות פתולוגית של נוגדנים עצמיים במהירות ובקלות. י...

זאבת אדמנתית מערכתית (לופוס) היא מחלה אוטואימונית מורכבת המאופיינת prototypically על ידי נוגדן אנטי-גרעיני ייצור (ANA) וגלומרולונפריטיס. סיבוכים רבים אחרים, כוללים עורי, לב-ריאה, ונגעים בכבד קשורים למחלה אצל אנשים מסוימים. הערכות שכיחות בארה&quot;ב משתנות במידה רבה, מ150,000-1,500,000 1,2, עם שכיחות גבוהה במיוחד בנשים ומיעוטים 3. למרות אטיולוגיה של SLE כבר קשה להבחין, הוא חשב שינבע ממשחק הגומלין של גורמים גנטיים וסביבתיים שונים, שיגיעו לשיאו באוטואימוניות המערכתית. מודלים של בעלי חיים רבים כבר מועסקים ללמוד גורמים מובילים להופעת מחלה והתקדמות. מודלים עכבר קלאסיים של SLE כוללים זני נטייה גנטית עכבר כוללים NZB x מודל NZW F1 ונגזרי NZM, המתח / LPR הקה&quot;ע, ומתח BXSB / Yaa, ומערכות מושרה, כגון pristane ודגמי מחלת שתל נגד המארח כרוני (cGVHD) 4. דיווחים מוקדמים של ייצור נוגדנים בדגמי GVHD משמשים זנים שונים עכבר או זני אוגר להורה להעברות F1 5 - 8; שיטות נפוצות יותר בשימוש ללמוד מחלה כמו זאבת-כיום כוללות הורה DBA / 2 → (DBA / 2 x C57BL / 6) F1, ומודל העברת bm12 המתואר כאן. לכל אחד יש מודל האזהרות שלה, אבל הם בדרך כלל לשתף מערך משותף של תכונות המתואמים עם מאפיינים קליניים של מחלה אנושית. הפרמטרים לרוב דיווחו במודלים של עכברים כוללים splenomegaly, בלוטות הלימפה, דלקת כליות, ייצור ANA, וברמה התאית, ההתרחבות של תאי T זקיקי עוזר (TFH), תאי B נבטי מרכז (GC), ותאי פלזמה. מודל bm12 מושרה מושגת על ידי העברת המאמצת של לימפוציטים מIA bm12 B6 (C) - H2 - עכברים (bm12) AB1 bm12 / KhEgJ, מתח אניdentical לC57BL / 6 למעט 3 החלפות חומצת אמינו בכיתת MHC II, לIA ב C57BL / 6 עכברים (B6). Alloactivation של תורם CD4 T תאים על ידי נמען נגמ&quot;שים מוביל לcGVHD עם תסמינים דומים SLE מקרוב. באופן ספציפי, אלה כוללים הרחבת TFH תורם נגזרות, התרחבות של תאי שמקורם נמען GC B ותאי פלזמה, וייצור של אנאס כולל אנטי-dsDNA, אנטי-ssDNA, אנטי-הכרומטין, ונוגדנים נגד RBC 9. לאורך זמן, עכברי נמען לפתח גלומרולונפריטיס הקשורים פיקדונות IgG בגלומרולרי, ביניים, ואזורים של כלי דם של הכליות 10. הראינו לאחרונה כי, בדומה למחלות של בני אדם, יש גם תפקיד קריטי עבור סוג אני IFN במודל זה 11. יש לציין, הקריטריונים המגדירים עבור SLE האנושי כוללים את הפיתוח של דלקת כליות תואמות עם SLE בנוכחות נוגדנים נגד dsDNA 12, שניהם מאפיינים בולטים של מודל עכבר זה. יש seיתרונות veral של מודל bm12 על המודלים ספונטניים. מודלים קלאסיים שלפתח סימנים כמו SLE-ספונטני להסתמך על שני זנים היברידיים עכבר, זנים טהורים עכבר לא על רקע B6, או לוקוסים גנטיים גדולים על רקע B6, שהופכים את מעבר לפצצה או עכברים מהונדסים גנטי אחר קשה זמן רב. עם המודל מושרה bm12, עכברים מהונדסים גנטי יכולים לשמש גם תורם או נמען, המאפשרים זיהוי מהיר יותר של התא הסלולרי שבגנים מסוימים עשויים להיות חשובים למחלה. יתר על כן, התפתחות מחלה במודל bm12 היא הרבה יותר מהר, הדורש רק 2 שבועות עד להופעת אנאס, בהשוואה למספר חודשים לדגמים ספונטניים ביותר. יתר על כן, בניגוד לדגמים ספונטניים שמתפתחים מחלה בנקודות זמן שונה, תחילת המחלה וההתקדמות במודל B6 → bm12 מסונכרנת מאוד. זה מאפשר לדור של קבוצות בגודל המתאימה שיכולות בהדואר משמש לאסטרטגיות התערבותית או טיפוליות בכל שלב של התפתחות מחלה. להלן פרוטוקול מפורט לייזום אוטואימוניות כמו SLE-ידי העברת המאמצת של לימפוציטים bm12 לעכברי C57BL / 6, או וריאנטים גנטיים על רקע B6. בנוסף, אנו מתארים פרוטוקול מכתים הזרימה cytometric לספירת TFH, GC תאי B, וסוגי תאי פלזמה תאים הקשורים למחלות אנושיות. חשוב לציין, יכולים לשמש גם פרוטוקולים אלה לאפיין מחלה ברוב דגמי עכבר של SLE ולזהות TFH, GC תאי B ותאי פלזמה בדגמי מחלה אחרים.

<table><tbody><tr><td>ב6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>001162</td><td>CD45.1+ זן עכבר BoyJ</td></tr><tr><td>B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>001162</td><td>זן עכבר Bm12</td></tr><tr><td>FastDigest PsuI</td><td>Life Technologies</td><td>FD1554</td><td>אנזים עיכול הגבלה לגנוטיפ</td></tr><tr><td>1X RBC Lysis Buffer</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30228.01</td><td></td></tr><tr><td>צינור הפרדת פלזמה (PST)</td><td>BD</td><td>365974</td><td>צינור איסוף דם עם צינור הפרדת סרום דיפוטסיום EDTA</td></tr><tr><td>(SST)</td><td>BD</td><td>365967</td><td>צינור איסוף דם עם מפעיל קרישים / ג'ל SST</td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02&nbsp;</td><td>פתרון הפרדת תאים בצפיפות גבוהה</td></tr><tr><td>Lympholyte-M</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td>תמיסת הפרדת תאים בצפיפות גבוהה</td></tr><tr><td>GL-7-biotin</td><td>eBioscience</td><td>13-5902-82&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-BUV395</td><td>BD</td><td>564176</td><td></td></tr><tr><td>CD138-BV421</td><td>BioLegend</td><td>142508</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV510</td><td>BioLegend</td><td>100559</td><td></td></tr><tr><td>TCR&beta;-BV605</td><td>BD</td><td>562840</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-BV711</td><td>BioLegend</td><td>110739</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-FITC</td><td>BioLegend</td><td>109806</td><td></td></tr><tr><td>PD-1-PE</td><td>BioLegend</td><td>135206</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PerCP</td><td>BioLegend</td><td>115532</td><td></td></tr><tr><td>Fas-PE-Cy7</td><td>BD</td><td>557653</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-APC</td><td>BioLegend</td><td>145506</td><td></td></tr><tr><td>צבע כדאיות קבוע ef780</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV421</td><td>BioLegend</td><td>100443</td><td></td></tr><tr><td>1.2 מ"ל תוספות צינור FACS, מתלה</td><td>USA Scientific</td><td>1412-1400</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon&trade; צינורות BD תחתונים עגולים</td><td></td><td>352017</td><td></td></tr></tbody></table>

דגם bm12 העין מתנהל של זאבת אדמנתית המערכתית (לופוס) בc57bl עכברים / 6

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

זאבת אדמנתית מערכתית (SLE) היא מחלה אוטואימונית בעלת ביטויים קליניים ואימונולוגיים מגוונים. מספר מודלים ספונטניים וניתנים להשראה של בעלי חיים משקפים מרכיבים נפוצים של מחלות אנושיות, כולל מודל ההעברה bm12. עם העברת טחול bm12 או תאי CD4 T מטוהרים, עכברי C57BL/6 מפתחים במהירות תדרים גדולים של תאי עזר זקיקי T (Tfh), תאי B של מרכז הנבט (GC) ותאי פלזמה ואחריהם רמות גבוהות של נוגדנים אנטי-גרעיניים במחזור הדם. מכיוון שמודל זה משתמש בעכברים על רקע C57BL/6 טהור, חוקרים יכולים לחקור במהירות ובקלות את התקדמות המחלה בזני עכברים טרנסגניים או נוקאאוט בפרק זמן קצר יחסית. כאן אנו מתארים פרוטוקולים לאינדוקציה של המודל ולכימות תאי Tfh, GC B ותאי פלזמה על ידי ציטומטריית זרימה מרובת צבעים. חשוב לציין, ניתן להשתמש בפרוטוקולים אלה גם כדי לאפיין מחלה ברוב המודלים של זאבת בעכברים ולזהות תאי Tfh, GC B ותאי פלזמה במודלים אחרים של מחלה.

עכברים חולים לפתח splenomegaly קטן כמו 14 ימים, מציגים טחולים 2-3 פעמים בגודל של עכברים בריאים במונחים של מסה וcellularity (איור 2). Splenocytes הם מגודרת ברצף על פיזור אור (FSC-ידי SSC-), חיסול כפילויות (FSC-W או -H ידי FSC-A), תאי קיימא (הכתמה נמוכה של צבע כדאיות), וCD4 + TCRβ + (איור 3A). תאי תורם נבדלים מתאי נמען מבוססים על CD45.1 וCD45.2 (איור 3...

העברת לימפוציטים bm12 למושתל C57BL/6 היא מודל מבוסס של זאבת אדמנתית מערכתית. כאן אנו מתארים כיצד ליזום מחלה באמצעות מודל זה וכיצד לאפיין תאי עזר זקיקי T, תאי B במרכז הנבט ותאי פלזמה על ידי ציטומטריית זרימה.

דגם bm12 העין מתנהל של זאבת אדמנתית המערכתית (לופוס) בC57BL עכברים / 6

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לאפיין את התרחבותם של תאי T follicular helper, מרכזים נבטניים (germinal centers), תאי B ותאי פלזמה באמצעות ציטומטריה של זרימה במודל BM 12 של לופוס אריתמטוזי סיסטמי, או SLE. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובה לשאלות מפתח בתחום הלופוס, כגון האם הת targeting של מסלולים מולקולריים מסוימים באמצעות טיפולים תרופתיים עשוי לעצור או להאט את התקדמות המחלה. היתרון העיקרי של מודל SLE זה הוא שהוא עושה שימוש בעכברים על רקע CPD seven black six טהור, כך שחוקרים יכולים ללמוד במהירות ובקלות על התקדמות המחלה בזני עכברים טרנסגניים או נטרפים (knockout) בפרק זמן קצר יחסית.לאחר בידוד והזרקת תאי תורם BM 12 לעכברים, קביעת יעילות השתחת והדשת העכברים בהתאם לפרוטוקול הכתוב, רססו קלות 70% ethanol כדי להרטיב את בטנו של העכבר בעזרת מספריים כירורגיים. בצעו חתך שטחי קטן כסנטימטר אחד מעל האיבריים המיניים, משכו את עור הבטן לכיוון העצם הסטרנום תוך שמירה על שלמות הפסציה הפריטונאלית. התאימו מזרק של חמישה מיליליטר עם מחט בכי মাপ 18, כאשר המחט מופנית מעלה לכיוון ראש החיה ובזווית של 15 מעלות למישור הפסציה.החדירו את המחט לרביע השמאלי התחתון של הבטן. מקמו את המחט סמוך לקצה העקום (cecum) כדי למנוע סתימה של המחט על ידי המעי בזמן שאיבת הנוזל מהבטן (ascites). לאחר מכן, סובבו בזהירות את העכבר על צדו.לא

the-bm12-inducible-model-systemic-lupus-erythematosus-sle-c57bl6

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

וידאו זה מראה כיצד לגרום hypophysitis אוטואימוניות בעכברים SJL וכיצד להעריך חומרתה ידי histopathology.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

הסרטון מדגים השראת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכברי על ידי הזרקת שילוב של גליקופרוטאינים אוליגודנדרוציטים מיאלין ושחפת מיקובקטריום בלתי פעילה. המודל מאפשר לחוקרים לחקור מנגנוני מחלה ולבחון התערבויות טיפוליות.

אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכבר

בסרטון זה, מודל עכבר של טרשת נפוצה נקבע באמצעות אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE). העכבר מוזרק עם תחליב המכיל פפטיד עצבי ואדג'ובנט, המפעיל תגובה חיסונית המפעילה תאי T אוטוריאקטיביים. לאחר מכן מתבצעת הזרקה של רעלן שעלת (PTX) כדי להגביר את חדירות מחסום הדם-מוח, מה שמאפשר לתאי T האוטו-תגובתיים לחדור למוח. חדירה זו יוזמת מפל איתות שבסופו של דבר גורם לנזק למיאלין, המחקה את המצב הדה-מיאלינציה של טרשת נפוצה.

Encephalomyelitis אוטואימוניות הניסויי (EAE) הוא מודל חיה הוקם בטרשת נפוצה. C57BL / 6 עכברים שחוסנו עם גליקופרוטאין oligodendrocyte המיאלין פפטיד (MOG) 35-55 (ש"א 35-55), וכתוצאה משיתוק רפה עולה שנגרם על ידי תאי מערכת החיסון אוטוריאקטיבים במערכת העצבים המרכזית. פרוטוקולים לזירוז מחלה וניטור יידונו.

המיאלין oligodendrocyte גליקופרוטאין (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) מושרה ניסויי אוטואימוניות Encephalomyelitis (EAE) בעכברים C57BL / 6

כתב יד זה מתאר את השיטות לאינדוקציה וניקוד של מודל דלקת המוח האוטואימונית הניסויי (EAE), יחד עם הערכת התפלגות תאי החיסון ורמות ציטוקינים mRNA בבלוטות הלימפה, הטחול, הדם וחוט השדרה באמצעות ציטומטריית זרימה ו-PCR כמותי, בהתאמה, בשלבי מחלה שונים.

אינדוקציה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis עכברים וההערכה של הפצת מחלות התלויה של תאים חיסוניים ברקמות שונות

פרוטוקול זה מתאר כיצד לקבוע אם טיפולים תרופתיים לדלקת מוח אוטואימונית ניסיונית מראים הגנה על מערכת העצבים המרכזית כתוצאה מדיכוי חדירת תאי חיסון או שהם מגנים על עצבים במהלך מתקפה של חדירת תאי חיסון.

דיכוי מערכת החיסון קביעת לעומת להגנת CNS להתערבויות פרמקולוגיים demyelination אוטואימוניות

כאן אנו מציגים שיטה יעילה כדי לחקור את הפעילות האנטיפיברוטית של תאים בעלי מזון מסטרומה האנושית מתוך הגוף הפנימי שהתקבלו מן החבל הטבור כולו בעקבות אינדוקציה של פגיעה בריאה על ידי הזרקה אנדוקנה של ליאומיצין ב C57BL /6 עכברים. פרוטוקול זה ניתן להרחיב בקלות לבדיקה טרום קלינית של therapeutics אחרים.

אינדוקציה של פגיעה בריאות העכבר על ידי הזרקת אנדוקנה של ליאומיצין

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה למעקב אחר התקדמות זאבת בעכברים. שני הליכים נוספים מוצגים כדי לאפיין זאבת נפריטיס בהתבסס על חדירת תאים ותצהיר חלבון בכליות.

ניתוחים של פרוטאינוריה, חדירה כלייתית של לויקוציטים ותצהיר כלייתי של חלבונים בעכברי MRL/lpr המועדים לזאבת

הפרוטוקול הנוכחי מתאר אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכברי המשתמש בגליקופרוטאין מיאלין אוליגודנדרוציטים וניטור תהליך המחלה באמצעות מערכת ניקוד קלינית. תסמינים אוטואימוניים ניסיוניים הקשורים לאנצפלומיאליטיס מנותחים באמצעות ניתוח טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת של עצם הירך ובדיקת שדה פתוח כדי להעריך את תהליך המחלה באופן מקיף.

אינדוקציה ומדדי הערכה מגוונים של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית היא אחד המודלים הנפוצים ביותר של טרשת נפוצה. בפרוטוקול הנוכחי, עכברי C57BL/6J משני המינים מחוסנים בפפטיד גליקופרוטאין אוליגודנדרוציטים מיאלין, וכתוצאה מכך בעיקר פרזיס עולה של הזנב והגפיים. כאן אנו דנים בפרוטוקול של אינדוקציה והערכה של EAE.

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

כאן, אנו מדווחים על פרוטוקול המבסס מודל עכבר של דלקת מפרקים שגרונית (RA) באמצעות העברה מאמצת של תאי CD4+ T מעכברי SKG, המספק כלי ניסיוני מהיר ואמין לחקירת המנגנונים החיסוניים, התקדמות פתולוגית ופיתוח טיפולים חדשים לדלקת מפרקים שגרונית.

מודל העברה מאמץ של דלקת מפרקים שגרונית בעכברים

חקור את התפשטות תאי T פוליקולריים עוזרים, תאי B מרכז נבט ותאי פלזמה בדגם bm12 של זאבת אדמנתית מערכתית בעכברי C57BL/6 באמצעות ציטומטריית זרימה. שיטה זו מאפשרת ניתוח מעמיק של דינמיקת תאים חיסוניים במחלה אוטואימונית.

דגם bm12 העין מתנהל של זאבת אדמנתית המערכתית (לופוס) בC57BL עכברים / 6

גלה סרטונים נוספים