Name: חיידקי עלה הסתננות Assay עבור אפיון פיין של תגובות הצמחים ביטחון באמצעות Thaliana-Pseudomonas ארבידופסיס syringae Pathosystem (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 50 s
Description: חקור אפיון כמותי של תגובות החיסון ב-Arabidopsis thaliana באמצעות שיטת החדרת מזרק מותאמת. השיטה מאפשרת כימות מדויק של צמיחת Pseudomonas syringae בעלים נגועים ומסייעת לחוקרים להבין מנגנוני הגנה צמחיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לד"ר שאהיד מוכתאר על ביקורת כתב היד ולד"ר שיניאן דונג על קובץ ניתוח הנתונים לדוגמה. עבודה זו נתמכת על ידי פרס NSF-CAREER (IOS-1350244) ל-KPM ולמחלקה לביולוגיה של UAB.

<ol><li>Glazebrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+mechanisms+of+defense+against+biotrophic+and+necrotrophic+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Phytopathol%22%5BJournal%5D)">Contrasting mechanisms of defense against biotrophic and necrotrophic pathogens.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 43, 205-227 (2005).</li>
<li>Hammond-Kosack, K. E., Jones, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+disease+resistance+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Plant disease resistance genes.</a> Annual review of plant biolog. 48, 575-607 (1997).</li>
<li>Pontier, D., Balague, C., Roby, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypersensitive+response.+A+programmed+cell+death+associated+with+plant+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+II%22%5BJournal%5D)">The hypersensitive response. A programmed cell death associated with plant resistance.</a> C R Acad Sci II. 321, 721-734 (1998).</li>
<li>Ryals, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Acquired+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Systemic Acquired Resistance.</a> Plant Cel. 8, 1809-1819 (1996).</li>
<li>Jones, J. D., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">The plant immune system.</a> Natur. 444, 323-329 (2006).</li>
<li>Newman, M. A., Sundelin, T., Nielsen, J. T., Erbs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAMP+%28microbe-associated+molecular+pattern%29+triggered+immunity+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sc%22%5BJournal%5D)">MAMP (microbe-associated molecular pattern) triggered immunity in plants.</a> Front Plant Sc. 4, 139(2013).</li>
<li>Fritig, B., Heitz, T., Legrand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+proteins+in+induced+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial proteins in induced plant defense.</a> Curr Opin Immuno. 10, 16-22 (1998).</li>
<li>Nicaise, V., Roux, M., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+PAMP-triggered+immunity+against+bacteria%3A+pattern+recognition+receptors+watch+over+and+raise+the+alarm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physio%22%5BJournal%5D)">Recent advances in PAMP-triggered immunity against bacteria: pattern recognition receptors watch over and raise the alarm.</a> Plant Physio. 150, 1638-1647 (2009).</li>
<li>Zipfel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+disease+resistance+in+Arabidopsis+through+flagellin+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Bacterial disease resistance in Arabidopsis through flagellin perception.</a> Natur. 428, 764-767 (2004).</li>
<li>Kunze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+N+terminus+of+bacterial+elongation+factor+Tu+elicits+innate+immunity+in+Arabidopsis+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">The N terminus of bacterial elongation factor Tu elicits innate immunity in Arabidopsis plants.</a> Plant Cel. 16, 3496-3507 (2004).</li>
<li>Gust, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria-derived+peptidoglycans+constitute+pathogen-associated+molecular+patterns+triggering+innate+immunity+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Che%22%5BJournal%5D)">Bacteria-derived peptidoglycans constitute pathogen-associated molecular patterns triggering innate immunity in Arabidopsis.</a> J Biol Che. 282, 32338-32348 (2007).</li>
<li>Alfano, J. R., Collmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+III+secretion+system+effector+proteins%3A+double+agents+in+bacterial+disease+and+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Type III secretion system effector proteins: double agents in bacterial disease and plant defense.</a> Annu Rev Phytopatho. 42, 385-414 (2004).</li>
<li>Tyler, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entering+and+breaking%3A+virulence+effector+proteins+of+oomycete+plant+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbio%22%5BJournal%5D)">Entering and breaking: virulence effector proteins of oomycete plant pathogens.</a> Cell Microbio. 11, 13-20 (2009).</li>
<li>He, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+bacterial+suppressors+of+MAMP+signaling+upstream+of+MAPKKK+in+Arabidopsis+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Specific bacterial suppressors of MAMP signaling upstream of MAPKKK in Arabidopsis innate immunity.</a> Cel. 125, 563-575 (2006).</li>
<li>Gimenez-Ibanez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AvrPtoB+targets+the+LysM+receptor+kinase+CERK1+to+promote+bacterial+virulence+on+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">AvrPtoB targets the LysM receptor kinase CERK1 to promote bacterial virulence on plants.</a> Curr Bio. 19, 423-429 (2009).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+PAMP-induced+MAP+kinase+cascade+by+a+Pseudomonas+syringae+effector+activates+plant+immunity+mediated+by+the+NB-LRR+protein+SUMM2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Disruption of PAMP-induced MAP kinase cascade by a Pseudomonas syringae effector activates plant immunity mediated by the NB-LRR protein SUMM2.</a> Cell Host Microb. 11, 253-263 (2012).</li>
<li>Chisholm, S. T., Coaker, G., Day, B., Staskawicz, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions%3A+shaping+the+evolution+of+the+plant+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions: shaping the evolution of the plant immune response.</a> Cel. 124, 803-814 (2006).</li>
<li>Jones, D. A., Takemoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+innate+immunity+-+direct+and+indirect+recognition+of+general+and+specific+pathogen-associated+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Plant innate immunity - direct and indirect recognition of general and specific pathogen-associated molecules.</a> Curr Opin Immuno. 16, 48-62 (2004).</li>
<li>Elmore, J. M., Lin, Z. J., Coaker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+NB-LRR+signaling%3A+upstreams+and+downstreams%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Plant NB-LRR signaling: upstreams and downstreams.</a> Curr Opin Plant Bio. 14, 365-371 (2011).</li>
<li>Gassmann, W., Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector-triggered+immunity+signaling%3A+from+gene-for-gene+pathways+to+protein-protein+interaction+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Microbe+Interac%22%5BJournal%5D)">Effector-triggered immunity signaling: from gene-for-gene pathways to protein-protein interaction networks.</a> Mol Plant Microbe Interac. 25, 862-868 (2012).</li>
<li>Wang, D., Weaver, N. D., Kesarwani, M., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+protein+secretory+pathway+is+required+for+systemic+acquired+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">Induction of protein secretory pathway is required for systemic acquired resistance.</a> Scienc. 308, 1036-1040 (2005).</li>
<li>Bednarek, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+warfare+or+modulators+of+defence+responses+-+the+function+of+secondary+metabolites+in+plant+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Chemical warfare or modulators of defence responses - the function of secondary metabolites in plant immunity.</a> Curr Opin Plant Bio. 15, 407-414 (2012).</li>
<li>Heath, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypersensitive+response-related+death%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol+Bio%22%5BJournal%5D)">Hypersensitive response-related death.</a> Plant Mol Bio. 44, 321-334 (2000).</li>
<li>Fu, Z. Q., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+acquired+resistance%3A+turning+local+infection+into+global+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Systemic acquired resistance: turning local infection into global defense.</a> Annu Rev Plant Bio. 64, 839-863 (2013).</li>
<li>Cao, H., Glazebrook, J., Clarke, J. D., Volko, S., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+gene+that+controls+systemic+acquired+resistance+encodes+a+novel+protein+containing+ankyrin+repeats%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 gene that controls systemic acquired resistance encodes a novel protein containing ankyrin repeats.</a> Cel. 88, 57-63 (1997).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+protein+is+a+receptor+for+the+plant+defense+hormone+salicylic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Re%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 protein is a receptor for the plant defense hormone salicylic acid.</a> Cell Re. 1, 639-647 (2012).</li>
<li>Smith, J. M., Heese, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+bioassay+to+measure+early+reactive+oxygen+species+production+in+Arabidopsis+leave+tissue+in+response+to+living+Pseudomonas+syringae%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Rapid bioassay to measure early reactive oxygen species production in Arabidopsis leave tissue in response to living Pseudomonas syringae.</a> Plant Method. 10, 6(2014).</li>
<li>Nomura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bacterial+virulence+protein+suppresses+host+innate+immunity+to+cause+plant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">A bacterial virulence protein suppresses host innate immunity to cause plant disease.</a> Scienc. 313, 220-223 (2006).</li>
<li>Katagiri, F., Thilmony, R., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+thaliana-Pseudomonas+syringae+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22The+Arabidopsis+book%2FAmerican+Society+of+Plant+Biologist%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae interaction.</a> The Arabidopsis book/American Society of Plant Biologist. 1, (2002).</li>
<li>Sawada, H., Suzuki, F., Matsuda, I., Saitou, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+analysis+of+Pseudomonas+syringae+pathovars+suggests+the+horizontal+gene+transfer+of+argK+and+the+evolutionary+stability+of+hrp+gene+cluster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Evo%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic analysis of Pseudomonas syringae pathovars suggests the horizontal gene transfer of argK and the evolutionary stability of hrp gene cluster.</a> J Mol Evo. 49, 627-644 (1999).</li>
<li>Xin, X. F., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+DC3000%3A+a+model+pathogen+for+probing+disease+susceptibility+and+hormone+signaling+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000: a model pathogen for probing disease susceptibility and hormone signaling in plants.</a> Annu Rev Phytopatho. 51, 473-498 (2013).</li>
<li>Dong, X., Mindrinos, M., Davis, K. R., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Arabidopsis+defense+genes+by+virulent+and+avirulent+Pseudomonas+syringae+strains+and+by+a+cloned+avirulence+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Induction of Arabidopsis defense genes by virulent and avirulent Pseudomonas syringae strains and by a cloned avirulence gene.</a> Plant Cel. 3, 61-72 (1991).</li>
<li>Mackey, D., Holt 3rd, B. F., Wiig, A., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RIN4+interacts+with+Pseudomonas+syringae+type+III+effector+molecules+and+is+required+for+RPM1-mediated+resistance+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">RIN4 interacts with Pseudomonas syringae type III effector molecules and is required for RPM1-mediated resistance in Arabidopsis.</a> Cel. 108, 743-754 (2002).</li>
<li>Tornero, P., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high%E2%80%90throughput+method+for+quantifying+growth+of+phytopathogenic+bacteria+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journa%22%5BJournal%5D)">A high‐throughput method for quantifying growth of phytopathogenic bacteria in Arabidopsis thaliana.</a> The Plant Journa. 28, 475-481 (2001).</li>
<li>Ishiga, Y., Ishiga, T., Uppalapati, S. R., Mysore, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+seedling+flood-inoculation+technique%3A+a+rapid+and+reliable+assay+for+studying+plant-bacterial+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis seedling flood-inoculation technique: a rapid and reliable assay for studying plant-bacterial interactions.</a> Plant Method. 7, 32(2011).</li>
<li>Zheng, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronatine+promotes+Pseudomonas+syringae+virulence+in+plants+by+activating+a+signaling+cascade+that+inhibits+salicylic+acid+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Coronatine promotes Pseudomonas syringae virulence in plants by activating a signaling cascade that inhibits salicylic acid accumulation.</a> Cell Host Microb. 11, 587-596 (2012).</li>
<li>Pajerowska-Mukhtar, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HSF-like+transcription+factor+TBF1+is+a+major+molecular+switch+for+plant+growth-to-defense+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">The HSF-like transcription factor TBF1 is a major molecular switch for plant growth-to-defense transition.</a> Curr Bio. 22, 103-112 (2012).</li>
<li>Rusterucci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+resistance+to+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+is+associated+with+the+transition+to+flowering+in+Arabidopsis+and+is+effective+against+Peronospora+parasitica%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+and+molecular+plant+patholog%22%5BJournal%5D)">Age-related resistance to Pseudomonas syringae pv. tomato is associated with the transition to flowering in Arabidopsis and is effective against Peronospora parasitica.</a> Physiological and molecular plant patholog. 66, 222-231 (2005).</li>
<li>Boyes, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+stage%E2%80%93based+phenotypic+analysis+of+Arabidopsis+a+model+for+high+throughput+functional+genomics+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Growth stage–based phenotypic analysis of Arabidopsis a model for high throughput functional genomics in plants.</a> The Plant Cell Onlin. 13, 1499-1510 (2001).</li>
<li>Regna, P. P., Wasselle, L. A., Solomons, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stability+of+streptomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistr%22%5BJournal%5D)">The stability of streptomycin.</a> Journal of Biological Chemistr. 165, 631-638 (1946).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+plant+immune+responses+by+a+central+circadian+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Timing of plant immune responses by a central circadian regulator.</a> Natur. 470, 110-114 (2011).</li>
<li>Hua, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+plant+immunity+by+light%2C+circadian+rhythm%2C+and+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Modulation of plant immunity by light, circadian rhythm, and temperature.</a> Current opinion in plant biolog. 16, 406-413 (2013).</li>
<li>Cuppels, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+by+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbio%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis by Pseudomonas syringae pv. tomato.</a> Appl Environ Microbio. 54, 629-632 (1988).</li>
<li>Qutob, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytotoxicity+and+innate+immune+responses+induced+by+Nep1-like+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Phytotoxicity and innate immune responses induced by Nep1-like proteins.</a> The Plant Cell Onlin. 18, 3721-3744 (2006).</li>
<li>Pimentel, D., Lach, L., Zuniga, R., Morrison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+economic+costs+of+nonindigenous+species+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22BioScienc%22%5BJournal%5D)">Environmental and economic costs of nonindigenous species in the United States.</a> BioScienc. 50, 53-65 (2000).</li>
<li>Zeng, W., Melotto, M., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+stomata%3A+a+checkpoint+of+host+immunity+and+pathogen+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+biotechnolog%22%5BJournal%5D)">Plant stomata: a checkpoint of host immunity and pathogen virulence.</a> Current opinion in biotechnolog. 21, 599-603 (2010).</li>
<li>Ton, J., Flors, V., Mauch-Mani, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifaceted+role+of+ABA+in+disease+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+plant+scienc%22%5BJournal%5D)">The multifaceted role of ABA in disease resistance.</a> Trends in plant scienc. 14, 310-317 (2009).</li>
<li>Mahajan, S., Tuteja, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cold+salinity+and+drought+stresses%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+biochemistry+and+biophysic%22%5BJournal%5D)">Cold salinity and drought stresses: an overview.</a> Archives of biochemistry and biophysic. 444, 139-158 (2005).</li>
<li>León, J., Rojo, E., Sánchez‐Serrano, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+signalling+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botan%22%5BJournal%5D)">Wound signalling in plants.</a> Journal of Experimental Botan. 52, 1-9 (2001).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

בהפחתה חקלאית זמין והגדלת אוכלוסייה, חוקרים ברחבי העולם מאותגרים עם צרכי דחופים ליבול השבחה. התשואה יכולה להיות מושפעת במידה רבה מלחצי יוטיים ואביוטי מגוון. ביניהם, זיהום הפתוגן הוא אחד הגורמים המובילים של הפחתת תשואת יבול, אחראי לכ -12% הפסדים בארה&quot;ב 45 בלבד. כדי לפתור בעיה זו, מחקר מאסיבי נערך בארבידופסיס המודל - פ pathosystem syringae לאפיין באופן מקיף את הרכיבים ומנגנוני ויסות של התגובות חיסוני הצמח. כאן, אנו מציגים פ מותאם assay חדיר...

בשל אופיים הנייח, צמחים מאוימים ללא הרף על ידי שפע של פתוגנים המציגים את אורח החיים שונים ואסטרטגיות תזונתיות 1. להערכה ראשונה, פתוגנים biotrophic לשומרם מארח בחיים כדי לאחזר חומרים מזינים, ואילו רעלים באופן פעיל סוד פתוגנים necrotrophic ואנזימים להרוג רקמת מארח ולהאכיל על התאים המתים 1. קבוצה נוספת של פתוגנים, hemibiotrophs מכונה, מתחילה כמובן הזיהום שלהם עם שלב biotrophic ומשמרות לשלב necrotrophic עם הגיע לסף מסוים של הפתוגן הצטברות 2. על מנת להגן על עצמם יעילות נגד מיקרואורגניזמים אלה, צמחים התפתחו מערכת חיסון מולדת מסובכת מצויד במנגנון מעקב מרובה כדי לזהות את התקפת הפתוגן ולעורר מקומיים מתוכנת תא מוות 3, כמו גם התנגדות המערכתית נרכשת (SAR) 4. על אפיון sig החיוני מחקר נוכחי מתמקדרכיבי naling וצלב-שיחות בתוך המערכת החיסונית הצמח 5. כפי שהוצע במודל &quot;זיג-זג&quot; 5, השכבה הראשונה של התגובה החיסונית המולדת הצמח דורשת הנוכחות של תבנית-מקומי קרום פלזמה ההכרה רצפטורים (PRRs) כדי לזהות את הפלישה של חיידק. PRRs מסוגל לזהות דפוסי חיידקים, Associated מולקולרי (MAMPs) ולהקים חסינות מופעלת על-MAMP (MTI) 6. מלבד גרימת upregulation תעתיק של גני המקודדים חלבוני יחסי ציבור מיקרוביאלית 7, MTI מוביל למגוון רחב של אירועים שיעצור את צמיחת הפתוגן, כוללים הייצור של מינים חמצן תגובתי (ROS) ומיני חנקן תגובתי (RNS), בתצהיר של callose לקיר התא כמו גם את ההפעלה של איתות קינאז מרובה מסלולי 8. עד עכשיו, כמה MAMPs זוהה להפעיל MTI בארבידופסיס, לרבות flg22 חיידקי 9 </sup&gt; (שבר 22 חומצות אמינו הנגזר מflagellin), elf18 10 (18 חומצות אמינו מגורם חיידקי התארכות תרגום ט&quot;ו) וקיר תא רכיב מבני peptidoglycans 11. להקים זיהום מוצלח, כמה פתוגנים מיוחדים התפתחו יכולת חלבוני מפעיל אלימות סוד לחללים תאיים או אינטר, וכתוצאה מכך להדחיק MTI ולעורר רגישות מופעלת על-מפעיל (ETS) 12,13. לדוגמא, effectors הארסיות יכולה להשבית מפלי קינאז זירחון (MAPK) חלבון פעיל-mitogen של MTI לגרום להתפתחות המחלה בתוך הרקמה נגועה 14-16. במהלך שיתוף האבולוציה הדינמית בין מארחים ופתוגנים, צמחים פיתחו גם את אסטרטגית התקפת נגד להכיר חלבוני מפעיל ולהחליש את ארסיות הפתוגן מולקולות 17. הכרת מפעיל ישירה או עקיפה זה מתווכת על ידי התנגדות מחלה חלבונים (R) 18. רוב tאמרה הן חברים של NB-LRR (נוקלאוטיד כריכה ולאוצין-ריץ חזרות) משפחה 19. התפיסה של מפעיל לֹא אַלִים ידי חלבון R מעורר תגובה חיסונית חזקה יותר ורחב יותר מאופיינת כחסינות מופעלת על-מפעיל (ETI) 20. מלבד גרימת הביטוי של גני ההגנה 21 והייצור של מטבוליטים הגנה 22, אתי לעתים קרובות מוביל למוות מהיר מקומי לתכנת תאים הידועים כרגישה להפליא תגובה (HR) כדי להגביל את הפתוגן מלהתפשט לרקמות הסמוכות 3. בנוסף למקומי מתוכנת המוות של תאי 23, צמחים מסוגלים ליזום טווח ארוך ותגובה חיסונית מערכתית כינה מערכתית נרכשת התנגדות (SAR) 4. על אתגר עם הפתוגן biotrophic, תאי צמח לעורר את ביוסינתזה והצטברות של חומצה סליצילית phytohormone אנדוגני (SA) וחלבוני יחסי הציבור בשתי רקמות מערכתיות ומקומיות 24. באמצעות tהתהליך שלו, מדינה מוגברת של מוכנות מושגת בעלים נגוע המאפשר להרכבת תגובות הגנה מהירות יותר במהלך זיהום לאחר מכן על ידי קשת רחבה של פתוגנים 24. SA ותחליפיו סינטטיים כגון benzo- (1,2,3) -thiadiazole 7-carbothioic-אסתר -methyl S החומצה (BTH) וחומצת 2,6-dichloroisonicotinic (INA) מסוגלים כימי התרמה חומצה סליצילית (SA) חסינות -Triggered (STI) על יישום חיצוני 24. Nonexpressor של גנים הקשורים פתוגנזה 1 (NPR1) מוצע לאחד את הקולטנים SA ומתפקד כרגולטור תעתיק עיקרי בתגובת הגנת תיווך SA בשתי רקמות מערכתיות ומקומיות 21,25,26. הוכח בודאות כי NPR1 נדרש לכינון SAR ואובדן NPR1 מוביל לרגישות דרמטית לקראת syringae Pseudomonas 25. הרחבה לאפיין את התרומה המולקולרית של צמחרכיבים באינטראקציות צמח לפתוגן, bioassays מרובה פותחו כדי למדוד אירועים ביטחוניים ספציפיים, כולל ROS פרץ 27, callose תצהיר 28, ביטוי גני הגנה והצטברות של מוצרי החלבון שלהם 21. בעוד מבחני הבודדים אלה יכולים לספק תובנות צורה מסוימת של התגובה החיסונית הצמח, אף אחד מהם, לעומת זאת, יכול לייצג את תגובת הגנה המלאה ברמת המפעל כולו. לעומת זאת, כימות של צמיחת הפתוגן לאחר ההדבקה מספקת הערכה כוללת של תגובה חיסונית ברמת האורגניזם. לכן, הפיתוח ואופטימיזציה של assay חיסון הפתוגן מדויק ואחיד ביותר הוא קריטי לדלק את המחקר ותגליות בתגובות החיסונית ארבידופסיס. Pseudomonas syringae, חיידק גראם שלילי, זוהה כphytopathogen מסוגל לגרום למחלות במגוון של מארחי מפעל כולל Arabidopsהוא 29. כמערכת מודל הצמח לפתוגן, ארבידופסיס - פ האינטראקציה syringae כבר מיושמת באופן נרחב כדי להבין את המנגנונים המולקולריים תגובות הגנת צמח בסיס 29. עד עכשיו, יותר מ- 50 P. pathovars syringae זוהה על סמך יכולתם כדי להדביק מיני צמחים שונים 30 . פ syringae PV. DC3000 עגבניות (PST DC3000) 31 ופ syringae PV. maculicola ES4326 (PSM ES4326) 32 שני זנים אלימים ביותר בשימוש נרחב והרחבה המאופיינת. מלבד להיות מוכר על ידי המפעל ומפעיל את תגובת MTI, PST DC3000 וPSM ES4326 מסוגל להפריש חלבוני מפעיל ארסיים לדכא MTI ולעורר ETS להעדיף 31,33 צמיחת הפתוגן. פונקציונלי לנתח את האינטראקציה בין ארבידופסיס ופ syringae, מרובה0; שיטות זיהום הפתוגן פותחו בהתבסס על גישת מסירת הפתוגן. לצמחים שגודל באדמה, הפתוגן יכול להיות מועבר על ידי חדירת מזרק, חדירת אבק, חיסון טבילה וחיסון תרסיס 29,34. לאחרונה, assay שיטפון חיסון השתיל פותח כדי לבצע מסכי בקנה מידה גדול בתרבית רקמת צלחות גדלו צמחי ארבידופסיס צעירים 35. חדירת מזרק, כאחד מהגישה הנפוצה ביותר, באופן ידני מספקת את הפתוגן לאפופלסט דרך הפתחים טבעי העלה כינו הפיוניות 29. באמצעות גישה זו, כמויות שווה מפ syringae יכול להיות חדר לעלה הנגוע ואת הכוח של תגובה חיסונית מפעל בקורלציה הופך לרמות צמיחת הפתוגן. לכן, כימות של צמיחת הפתוגן משמשת כגישה אופטימלית כדי להעריך את תפקוד מערכת החיסון ברמת המפעל כולו. בנוסף, חדירת מזרק יכולה להבחין הרקמה מערכתית והמקומית, שיכול בדואר החל באפיון המנגנונים המולקולריים שבבסיס SAR 36. בפרוטוקול הבא, אנו מתארים assay חדירת מזרק מותאם עם PSM ES4326 למסך מוטציות ארבידופסיס לרגישות מוגברת למחלות (EDS). פרוטוקול זה יעסיק שני גנוטיפים ארבידופסיס: אקוטיפ wild-type קולומביה-0 (Col-0) צמחים (שליטה) ומוטציות פסד של הפונקציה npr1-1 (רגיש במידה קיצונית) אשר נגוע בזן חיידקים הארסי PSM ES4326 37. המוטציה npr1-1 נושאת מוטציה נקודה בתוך רצף קונסנסוס ankyrin-חוזר של מולקולת NPR1, אשר משנה את היסטידין השמור ביותר לטירוזין והופך את החלבון שאינו פונקציונלי 25. בנוסף, מספר השינויים של assay חדירת מזרק מתואר המאפשר כימות של פגמים בשכבות מסוימות של תגובה חיסונית, כולל MTI וSTI.

<table><tbody><tr><td>מטרומיקס 360&nbsp;</td><td>Grosouth</td><td>SNGMM360</td><td></td></tr><tr><td>עציצים גדולים</td><td>Grosouth</td><td>TEKUVCC10TC</td><td></td></tr><tr><td>12 x 6 תוספות</td><td>Grosouth</td><td>LM1206</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 דירות ללא חורים</td><td>Grosouth</td><td>LM1020</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 דירות עם חורים</td><td>Grosouth</td><td>LM1020H</td><td></td></tr><tr><td>כיפות התפשטות ויניל</td><td>Grosouth</td><td>CW-221</td><td></td></tr><tr><td>Proteose פפטון</td><td>פישר מדעי</td><td>DF0122-17-4</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פוספט דו-בסיסי טריהידרט&nbsp;</td><td>MP ביומדיקל</td><td>151946</td><td></td></tr><tr><td>אגר&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A360-500</td><td></td></tr><tr><td>סטרפטומיצין סולפט</td><td>ביו בייסיק בע"מ</td><td>SB0494</td><td></td></tr><tr><td>100 x 15 מ"מ צלחות פטרי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>150 x 15 מ"מ צלחות פטרי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>R80150</td><td></td></tr><tr><td>צלחת מלבנית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-565-450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 Hexahydrate</td><td>Bio Basic Inc</td><td>MB0328</td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>ביו בייסיק בע"מ</td><td>GB0232</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp; </td><td>Bio Basic Inc</td><td>MN1988</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>NC9992493&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666-A</td><td></td></tr><tr><td>צינורות טחינה&nbsp;</td><td>דנוויל סיינטיפיק</td><td>B1257</td><td></td></tr><tr><td>כובעים לצינורות שחיקה</td><td>דנוויל סיינטיפיק</td><td>B1254</td><td></td></tr><tr><td>כדור שחיקה מנירוסטה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>2150</td><td></td></tr><tr><td>96 באר צלחת&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-556-008</td><td></td></tr><tr><td>נתרן סליצילט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>s3007-1kg</td><td></td></tr><tr><td>flg22 (QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA)</td><td>Genescript</td><td>מיוצר לפי הזמנה</td><td></td></tr><tr><td>elf18 (Ac-SKEKFERTKPHVNVGTIG)</td><td>Genescript</td><td>מיוצר לפי הזמנה</td><td></td></tr><tr><td>מנקב חורים</td><td>סיכות</td><td>146308</td><td></td></tr><tr><td>ביופוטומטר פלוס</td><td>אפנדורף</td><td></td><td></td>952000006</tr><tr><td>PowerGen הומוגנייזר בעל תפוקה גבוהה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-215-503</td><td></td></tr><tr><td>Accu ספין מיקרו צנטריפוגה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-100-675</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה רב ערוצית (10-100 ומיקרו; l)</td> <td>Eppendorf</td><td>3122 000.043</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה רב ערוצית (30-300 ומיקרו; l)</td> <td>Eppendorf</td><td>3122 000.060</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה (20 ומיקרו; l)</td> <td>Eppendorf</td><td>3120 000.038</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטה</td><td>Fisher Scientific</td><td>3552-HR</td><td></td></tr><tr><td>Sharpie טוש קבוע</td><td>Staples</td><td>507130</td><td></td></tr><tr><td>צינור 1.5 מ"ל</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-890</td><td></td></tr></tbody></table>

חיידקי עלה הסתננות assay עבור אפיון פיין של תגובות הצמחים ביטחון באמצעות<em&gt; thaliana-pseudomonas ארבידופסיס syringae</em&gt; pathosystem

Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem

בהיעדרם של תאים חיסוניים ניידים מיוחדים, צמחים לנצל מקומי מותם המתוכנת תא והמערכתי נרכשת ההתנגדות להגן על עצמם נגד התקפת הפתוגן. תרומתו של גן ארבידופסיס ספציפי לתגובה החיסונית הצמח הכולל יכולה להיות ספציפי וכמותית הוערכה על ידי מנסה לאמוד את צמיחת הפתוגן בתוך הרקמה נגועה. במשך יותר משלושה עשורים, את חיידק Pseudomonas hemibiotrophic syringae PV. Maculicola ES4326 (ES4326 PSM) כבר מיושם באופן נרחב כמחולל מחל המודל כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים שבבסיס התגובה החיסונית ארבידופסיס. כדי לספק פתוגנים לתוך רקמת העלה, שיטות חיסון מרובות הוקמו, למשל, חדירת מזרק, חיסון טבילה, ריסוס, חדירת אבק, וחיסון מבול. הפרוטוקול הבא מתאר שיטת חדירת מזרק מותאמת לספק ארסי PSM ES4326 לעלים של מבוגריםהאדמה גדלה צמחי ארבידופסיס ומדויק למסך לרגישות משופרת מחלה (EDS) לפתוגן זו. בנוסף, פרוטוקול זה ניתן להשלים עם-טיפולים מראש מרובים לנתח נוסף פגמים חיסוניים ספציפיים בתוך שכבות שונות של הגנת צומח, הכוללים חומצה סליצילית (SA) חסינות -Triggered (STI) וחסינות מופעלת על-MAMP (MTI).

הפרוטוקול אנו מתארים כאן מייצג פ מותאם assay חדירת מזרק syringae להעריך כמותית את התגובה החיסונית בצמחי ארבידופסיס. כפי שמודגם באיור 1, חדירת המזרק של PSM ES4326 ואחריו חילוץ הפתוגן וכימות באמצעות מניין דילולים ומושבות סידוריים. כפי שתוארו בשלב 3 בטקסט הפרוטוקול, רגישות משופרת מחלות (EDS) נגד PSM ES4326 ניתן להעריך על ידי זיהום עם הבידוד עם OD = 0.0002...

כימות צמיחת פתוגנים הוא כלי רב עוצמה לאפיון תגובות חיסוניות שונות של Arabidopsis thaliana (להלן: Arabidopsis). השיטה המתוארת כאן מציגה בדיקת חדירת מזרק אופטימלית לכימות Pseudomonas syringae pv. מקוליקולה גידול ES4326 בעלים בוגרים של Arabidopsis.

חיידקי עלה הסתננות Assay עבור אפיון פיין של תגובות הצמחים ביטחון באמצעות<em&gt; Thaliana-Pseudomonas ארבידופסיס syringae</em&gt; Pathosystem

In the absence of specialized mobile immune cells, plants utilize their localized programmed cell death and Systemic Acquired Resistance to defend ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לאפיין באופן כמותי את התגובה החיסונית של Arabidopsis diliana באמצעות בדיקת חדרת מזריק (syringe infiltration) מותאמת. הדבר משיג תחילה על ידי שימוש בחדרת מזריק להחדרה ידנית של חיידקים אל העלה דרך הפתחים הטבעיים הנקראים סתומה (stomata). השלב השני הוא השגת דיסקיות של רקמת עלה מזוהמת לאחר התפתחות תסמיני המחלה.בשלב הבא, החיידקים מופקים מדיסקיות העלה באמצעות הומוגנזציה בסביבה בעלת תפוקה גבוהה. השלב הסופי הוא דילול סדרתי ופיזור (spotting) על צלחות לספירת חיידקים לצורך ספירת המושבות. בסופו של דבר, ניתן להסיק מתאם בין הצמיחה החיידקית בכל דיסקית עלה לבין העוצמה היחסית של התגובה החיסונית של הצמח.שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובה לשאלות מפתח בתחום החסינות של צמחים, כגון זיהוי גנים התורמים לתגובות הגנה מפני עקה ביוטית. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות הוא שהיא מאפשרת כימות מדויק של צמיחת פתוגנים ברקמת הצמח הנגועה, ומסייעת במניעת שגיאות ניסיוניות הנגרמות מדגימת עלים במצבים התפתחותיים שונים. שיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי התגובה החסינית של הצמח לזיהום על ידי פתוגן חיידקי וירולנטי, וניתן ליישמה גם במערכות אחרות, כגון תגובות חיסוניות המופעלות על ידי חומצה סליצילית או תבניות מולקולריות הקשורות למיקרובים.בדרך כלל, אנשים שאינם מכירים את השיטה זו יתקשו להחדיר את החיידקים אל העלה ללא פגיעה ברקמה. את הפרוצדורה הבאה ידגימו הפוסט-דוקטורנטית Hindu והסטודנטים לתואר מתקדם shalu ו-yali Soon מהמעבדה שלי. בסרטון זה יודגם המבחן לרגישות מוגברת למחלה.לפני הניסוי, הכין מצעים של King's B או KB; הכן ליטר אחד של מצע KB מוצק כפי שמתואר בטקסט של הפרוטוקול והשאר אותו להתקרר על בוחש מגנטי. כאשר המצע התקרר לטמפרטורה שניתן לגעת בה, הוסף למצע 80% glycerol, מגנזיום סולפט בריכוז מולרי אחד וסטרפטומייצין; מזוג למצעי KB בשני גדלים שונים. פטרית הפטרי השמיעה תשמש כצלחת תרבית החיידקים הראשונית, ופטריית הפטרי הגדולה יותר תשמש כצלחת לספירת החיידקים.יש לאחסן את הצלחותיות בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס יומיים לפני זריעת הבדיקה. PSM ES 43 26. יש לזרוע חיידקים ממאגר גליצרין במינוס 80 מעלות צלזיוס על צלחת תרבית חיידקים KB strep ולהדגיר בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס למשך 24 עד 48 שעות ביום למחרת.יש להכין את התרבית הנוזלית בתוך מבחנה סטרילית עם ארבעה מיליליטרים של מצע kb נוזלי המכיל 50 micrograms per milliliter של streptomycin. יש לנער ב-250 RPM בטמפרטורה של 28 degrees Celsius למשך לילה. צמחי ה-Arabidopsis עבור הניסוי גודלים בתנאים המפורטים בטקסט הפרוטוקול באותו היום שבו מושקת התרבית הבקטריאלית הנוזלית.סמנו את עליכי העלה מספר חמש ושש בעזרת טוש קהה ועמיד למים, כדי לאפשר זיהוי קל של הרקמה המודבקת בעת הדגימה. כדי לשפר את פתיחת ה-STA ולהקל על חדירת תמיסת הפתוגן אל תוך העלה, השקו את הצמחים היטב על ידי השריה של התחתית למשך 20 דקות.לאחר 20 דקות, נקז את עודפי המים. ביצוע ההדבקה של צמחי ה-arabidopsis הושלם. היום שאחרי תחילת התרבית הנוזלית.העבר את תרבית החיידקים לשפופרת מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 milliliter וסבב במהירות של 9,600 Gs למשך שתי דקות. בטמפרטורת החדר, השלך את העלייה (supernatant) והשהה מחדש את משקע החיידקים ב-one milliliter של Magnesium chloride סטרילי בריכוז 10 millimolar; דלל את תגלי החיידקים עם nine milliliters של 10 millimolar magnesium chloride בשפופרת צנטריפוגה של 50 milliliter. לאחר מדידת הצפיפות האופטית של החיידקים, דלל את החיידקים באמצעות 10 millimolar magnesium chloride עד ל-OD 600 סופי של 0.0002.עבור בדיקת הזיהום ב-EDS. לצורך החדרת הנוזל (infiltration) משתמשים במזרק ללא מחט עם קצה קהה בנפח של מיליליטר אחד, המוכר בדרך כלל כמזרק אינסולין. מלאו את המזרק ב-0.5 עד 0.6 מיליליטר של התמיסה הבקטריאלית המדוללת כדי להשיג שליטה טובה יותר במהלך תהליך ההחדרה; אין למלא את המזרק עד לקיבולתו המלאה.חשוף את פני השטח התחתונים של העלה על קצה האצבע המורה, ולאחר מכן, בעזרת האגודל, כוון בעדינות את מיקום העלה. מקם את המזרק בצורה אנכית כנגד פני השטח של העלה כדי להבטיח פיזור אחיד של הלחץ ולהפחית את הנזק לעלה. השתדל להימנע מאזור העורק המרכזי במהלך ההסננה.דחפו באיטיות את הבוכנה כדי להחדיר את התמיסה הבקטריאלית. כניסת הנוזל למזופיל של העלה תזוהה על ידי צבע כהה יותר של העלה; החדירו את התמיסה לכל שטח פני העלה, גם אם הדבר דורש מספר ניסיונות. עם השלמת ההחדרה, ספגו בעדינות את העלה בעזרת נייר סופג כדי להסיר את עודפי תמיסת הפתוגן.בצעו בדיקה חזותית של רקמת העלה הנגועה כדי לאתר נזקים. השאירו את הצמחים שהוחדרו לחומר לייבש במשך שעה עד שעתיים, ולאחר מכן החזירו את הצמחים לתנאי הגידול המקוריים שלהם. רססו כיפה שקופה במים וכסו את הצמחים הנגועים למשך שעתיים.לאחר מכן, סננו את כיפת הפטרייה כדי ליצור פתח של שתיים עד שלוש אינץ', והשאירו אותה כך לאורך שאר ניסוי ההדבקה, הנמשך בדרך כלל שלושה ימים. יום אחד לפני כימות גדילת הפתוגן, ייבשו מראש את צלחות מצע ה-KB בגודל 150 מילימטר על 15 מילימטר.ייבשו את הפלטות על ידי השארתן בטמפרטורת החדר למשך כ-24 שעות. עיבדו את הרקמה הנגועה לאחר הופעת הסקלרוזיס (Sclerosis), המזוהה על ידי הצהבה של הרקמה הנגועה בגנוטיפים הרגישים, אך לפני התפתחות של נגעים נמקריים. עבור כל גנוטיפ, הכינו שש מבחנות ריסוק.הניחו כדור טחינה אחד מפלדת אל-חלד והוסיפו 500 µL של מגנזיום כלוריד סטרילי בריכוז 10 mM לכל מבחנה. לאחר מכן, הסירו את העלה המודבק מהצמח ונקבו דיסקה של עלה באמצעות מחסן נייר בעל חור אחד בעזרת פינצטה באופן אקראי; הניחו שתי דיסקאות עלה משני צמחים שונים בכל מבחנת טחינה. אטמו את המבחנות והומוגניזו את הרקמה באמצעות הומוגניזר בעל תפוקה גבוהה במהירות מקסימלית למשך 10 דקות.חזור על תהליך זה במידת הצורך עד שהרקמה תהיה הומוגנית היטב והתמיסות יהפכו לירוקות עקב שחרור כלורופיל מהעלים המודבקים במהלך ההמתנה. לצורך ההומוגניזציה, מלא כל באער בשש השורות הראשונות של פלטת תרבית בעלת 96 באערים ב-180 µL של Magnesium chloride בריכוז 10 mM. העבר 20 µL מת suspension של הרקמה הטחונה לכל באער בשורה הראשונה של פלטת ה-96 באערים, וערבב על ידי שאיבה והזרקה חוזרת של הנוזל באמצעות פיפט.אם שברי רקמה קטנים סתמו את הקצה, קצצו אותו בשני עד שלושה מילימטרים כדי לסייע בהשגת הנפח הנכון של התמיסה, ובכך לספק מספיק מקום לטיפה בחלקו העליון של הלוח; מקמו את הרקמות מגנוטיפים שונים בשורות לסירוגין. כדי להכין דילול סדרתי של פי עשרה, העבירו 20 µL של תמיחת רקמה לשורה השנייה וחזרו על פעולה זו עד לדילול השישי. באמצעות קצות פיפטה מחולקים, העבירו 20 µL של התמיסה מלוח ה-96 בעל הדפנות ללוח KB בגודל 150 millimeter על 15 millimeter.עבדו מהסספנסיה המדוללת ביותר לסספנסיה המרוכזת ביותר, כדי שלא יהיה צורך להחליף קצות פיפטה בין הדילוציות. ייבשו את הפיתח בטמפרטורת החדר כאשר המכסה פתוח מעט. ברגע שלא ניתן להבחין בנוזלים נוספים על פני השטח של הפיתח, סגרו את המכסה, הפכו את הפיתח והדגירו אותו בטמפרטורת החדר.דגרו את הצלחות למשך 40 עד 60 שעות עד להופעת המושבות. ודאו כי החיידקים על הצלחות משקפים את הירידה הצפויה של פי עשרה ביחידות יוצרות מושבות (CFU).ספרו את החיידקים לפני שהם גדלים יתר על המידה והמושבות מתמזגות. קבעו את מספר החיידקים בדילול הנמוך ביותר שבו אין מושבות חופפות. בדרך כלל, הדילול המועדף לספירה יכיל בין 10 ל-50 מושבות, וערך זה עשוי להשתנות בין חזרות טכניות.כדי לחשב את רמות השגשוג הבקטריאלי, קבעו את מספר היחידות יוצרות המושבות (CFU) לכל דיסקית עלה באמצעות נוסחה זו, כאשר R הוא מספר השורה ו-T הוא מספר הבקטריות בכל שכפול טכני. הנתונים משמשים לאחר מכן להפקת גרף. כל נקודת נתון מיוצגת כממוצע של שישה שכפולים טכניים בסקלה לוגריתמית.סטיות התקן מייצגות את רווח הביטחון של 95% עבור הממוצע של המחלה המוגברת. הרגישות ל-P-S-M-E-S 43 26 נבדקה על ידי הדבקה באינוקולום בעל OD 600 של 0.0002. התוצאות מראות כי למוטנטים NPR one dash one בעלי רגישות גבוהה יש כ-2.5 log או פי 300 יותר צמיחה של פתוגן בהשוואה לצמחי wild type Columbia zero.ניתן לשנות את בדיקת החדרת המזרק כדי להעריך שכבות שונות של תגובה חיסונית. כדי להעריך חסינות המופעלת על ידי חומצה סליצילית, נעשה שימוש במריחה חיצונית של נתרן סליצילאט להפעלת התגובה החיסונית, אשר נמדדת על ידי צמיחת הפתוגן. אובדן של NPR1, המתפקד כקולטן לחומצה סליצילית וכמסייע מרכזי בבקרת שעתוק של גנים מטרה התלויים בחומצה סליצילית, מוביל לחוסר רגישות למריחה חיצונית של נגזרת החומצה הסליצילית.כדי לאפיין חסינות המופעלת על ידי תבניות מולקולריות הקשורות למיקרובים, צמחים טופלו מראש בשני מעוררים מוכרים. FLAG 22 ו-L 18; צמחיסוג הפרא Columbia zero שטופלו ב-FLAG 22 הראו הפחתה של סדר גודל אחד או פי 10 באוכלוסיית החיידקים, בעוד שצמחי המוטציה FLS two לא הצליחו להפעיל את אפקט הגבלת הצמיחה החיידקית. באופן דומה, צמחי המוטציה EFR לא הגיבו לטיפול מוקדם ב-L 18.לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לכמת את התגובה החיסונית של Arabic opsys באמצעות בדיקת חדירה באמצעות מזרק. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לנטר את התפתחות המחלה ולדגום את הרקמה לאחר הופעת corsis. ה-pseudomona pather cul cola S phos 3, 2 6 הוא פתוגן hemi atrophic.לפיכך, יש לבצע את הדגימה לפני המעבר לשלב הנויטרופי. לאחר הליך זה, ניתן לבצע שיטות נוספות כגון quantitative real time PCR ואנליזת Western blood כדי לענות על שאלות נוספות, כמו איזה מסלול איתות חיסוני ספציפי נפגע. אל תשכחו שאתם עובדים עם חיידקים חיים.למרות ש-Pseudomona Senge אינה פתוגנית לבני אדם, אנא זכרו להשליך כראוי חומרים מתכלים מזוהמים וצמחים נגועים בעת ביצוע פרוצדורה זו.

bacterial-leaf-infiltration-assay-for-fine-characterization-plant

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מוות מבוססי תא assay עבור PTI בצמחים ניקוטיאנה benthamiana מתואר.

Assay עבור תבנית הפתוגן-Associated מולקולרית (PAMP)-שהופעלו חסינות (PTI) בצמחים

פיתחנו פרוטוקול פשוט לגשת לשחזור בתגובה הפיוניות לחיידקים לחיות. שיטה זו מקטינה ופצע ומניפולציה של העלה, לעומת השימוש קליפות אפידרמיס שדווח קודם לכן.

הערכת התגובה הפיוניות לחיות תאים חיידקיים באמצעות הדמיה עלה שלמים

מקור: Lee, H. et al., מערכת חלבון פלואורסצנטי ירוקה מפוצלת להדמיית אפקטורים המועברים מחיידקים במהלך זיהום. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים שיטה לניטור זיהום חיידקי ואספקת חלבון אפקטור בתאי צמחים באמצעות השלמת חלבון פלואורסצנטי ירוק מפוצל (sfGFP) בשילוב עם מיקרוסקופיה קונפוקלית. הגישה מאפשרת הדמיה מדויקת של טרנסלוקציה של אפקטור לציטוזול התא המארח.

ניטור זיהום חיידקי ואספקת חלבון אפקטור בתאי הצמח

מקור: רופיאן, י. ס., et.al. ניתוח תא יחיד של ביטוי גני Pseudomonas syringae ברקמת הצמח. J. Vis. Exp. (2022)הסרטון הזה מדגים שיטת חדירה בוואקום להכנסת פתוגן חיידקי לעלי הצמח של ארבידופסיס . הגישה עושה שימוש במתלה חיידקי מוכן ובפולסים של ואקום כדי לאפשר כניסה אחידה דרך סטומטה, מה שמוביל לזיהום עלים מבוקר.

חיסון פתוגן חיידקי לעלים של ארבידופסיס באמצעות חדירת ואקום

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Assessing Pseudomonas syringae Infection Load in Arabidopsis thaliana Leaves

אנחנו מדווחים על שיטה פשוטה רב-תכליתי לביצוע פלורסנט לחיות-הדמיה של עלים תודרנית לבנה על פני תקופה ארוכה של זמן. אנו משתמשים צמח תודרנית הטרנסגניים לבטא גן כתב פלורסנט תחת השליטה של יזם הקשורות חסינות כדוגמה להשגת הבנה ייתכן של תגובות חיסוניות הצמח.

שיטה רב-תכליתי עבור הרכבה תודרנית יוצא Intravital הדמיה בצילום מואץ

נייר זה מתאר שתי שיטות לכמת את התגובות ההגנה באריידאופזיס thaliana בעקבות החשיפה elicitors החיסונית: פרץ חמצוני חולף, ואת עיכוב צמיחת שתיל.

תבנית-המופעל חמצוני ושתיל עיכוב הצמיחה שתילה Assays באריידרופסיס thaliana

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה המאפשרת ניתוח ביטוי גנים של תא בודד על אוכלוסיות מזרקי Pseudomonas הגדלות בתוך אפופלסט הצמח.

אנליזה חד-תאית של ביטוי גנים של מזרקי Pseudomonas בתוך רקמת הצמח

כאן, אנו מציגים שיטה פשוטה לתצפית ישירה ומדידה אוטומטית של תגובות סטומאטליות לפלישת חיידקים ב - Arabidopsis thaliana. שיטה זו ממנפת מכשיר הדמיה סטומטלי נייד, יחד עם צינור ניתוח תמונה המיועד לתמונות עלים שצולמו על ידי המכשיר.

תצפית ישירה ומדידה אוטומטית של תגובות סטומאטליות למזרקי Pseudomonas PV . עגבניה DC3000 ב Arabidopsis thaliana

פרוטוקול זה מתאר גישה בעלת תפוקה גבוהה להערכת דליפת יוני צמחים, פעילות פרוקסידאז וייצור קלוז באותה דגימה.

הערכת תגובות עלים למטבוליטים משניים מיקרוביאליים באמצעות פורמט בעל תפוקה גבוהה

חקור אפיון כמותי של תגובות החיסון ב-Arabidopsis thaliana באמצעות שיטת החדרת מזרק מותאמת. השיטה מאפשרת כימות מדויק של צמיחת Pseudomonas syringae בעלים נגועים ומסייעת לחוקרים להבין מנגנוני הגנה צמחיים.

חיידקי עלה הסתננות Assay עבור אפיון פיין של תגובות הצמחים ביטחון באמצעות

גלה סרטונים נוספים