Name: אוסף חלב בעכברוש שימוש נימי צינורות והערכה של שומן חלב תוכן על ידי Creamatocrit (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: למדו איסוף חלב ידני בעכברוש לניתוח הרכב חלב במעבדה. השיטה משתמשת בנימי צינורות ובשיטת Creamatocrit להערכת תוכן השומן, ללא ציוד שאיבה מיוחד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודות זו נתמכה באמצעות מענקים ממדעי הטבע והנדסת מועצת המחקר של קנדה (RGPIN 238,382-2,011) והמכון קנדי ​​לבריאות מחקר (MOP115076). הת&#39;ר פול נתמכה על ידי מלגות לתארים מתקדמים מדעי טבע והנדסת מועצת המחקר של קנדה ומלגת פתרונות בריאות אלברטה מתפתחת. מייגן האלאם נתמכה על ידי מלגה למדעי טבע והנדסת מחקר מועצה שלאחר התואר הראשון, מלגות פרדריק בנטינג וצ&#39;רלס בסט קנדה בוגר, ובית החולים מכון מחקר הדרכת פרס ילדים אלברטה בגנטיקה, התפתחות ילד, ובריאות.

פרוטוקול זה אושר על ידי האוניברסיטה של ועדת טיפול בבעלי חיים קלגרי ותאם את המדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה. 1. סכר נפרד מצאצאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את הסכר מצאצאיה למינימום של 5 דקות לפני חליבת 12. הערה: הסכר ניתן חלב עד 5-6 שעות לאחר הפרדת 1,6,13, לעומת זאת תקופות של הפרדה יותר מ -4 שעות עשויות לשנות הרכב חלב 14. בעוד זמן הפרדה אינו מופיע להשפיע חלב אוסף 12 נפח, מומלץ כי זמן הפרדה עקבי יישמר לאורך כל תקופת המחקר. הרכב חלב עשוי להשתנות בכל הנקה 15, לכן ניסיונות צריכים להיעשות כדי לשמור על היום של חלב אוסף עקבי. ייצור חלב מרבי הוא הציע להתרחש ביום ההנקה 14 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בתא התחממות, להבטיח את הגורים הם מסוגלים לשמור על טמפרטורות גוף נכוניםמחדש ללא הנוכחות של האמא שלהם למשך הליך החליבה. הערה: במחקר שיוצג להלן, חליבה בוצעה בגמילה, כאשר הסכרים היו כ 22 שבועות ישנים וישנים 21 ימי הצאצאים, ולכן אין תא התחממות היה בשימוש. </li></ol> 2. הגדרה והכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את כל החומרים הנדרשים להליך החליבה. הערה: ניתן למצוא את כל החומרים בטבלת החומרים וציוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח כרית חימום על הספסל שבי החליבה תתקיים ולכסות את משטח עם ספסל סופג מתחת לכרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיר את מערכת ההרדמה. ודא שיש במערכת חמצן וisoflurane לפני תחילת מספיק. צרף את מסכת ההרדמה שתשמש לזירוז הרדמה ראשוני למכונה. מניחים את המסכה שתשמש לתחזוקת הרדמה סמוכה אם שונה ממסכת ההרדמה הראשונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף מחט 25 G למזרק 1 מיליליטר לאוקסיטוציןהזרקה באמצעות טכניקת aseptic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את כרית החימום כך שטמפרטורת גוף אימהית נשמר במהלך הליך החליבה. הערה: צג הטמפרטורה של כרית החימום על מנת להבטיח את הכרית לא להיות חם מדי ולגרום לכוויות. לחלופין, להשתמש במקור חום, כגון שולחן כירורגית מחומם, שניתן להגדיר טמפרטורה מסוימת. </li></ol> 3. להרדים את Isoflurane שימוש דאם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את מיכל החמצן ולהפוך את זרימה לL 1 (1,000 סמ&quot;ק) לדקה. הפעל את זרימת isoflurane ולהגדיר עד 5%. זהירות: הימנע משאיפה ישירה של חומר הרדמה ולמנוע הצטברות של אדי חומר הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את הסכר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבור למסכת התחזוקה אם נדרש, הצבת הסכר פרקדן על משטח הספסל הסופג. לאשר הרדמה על ידי חוסר רפלקס דוושה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפחית את זרימת isoflurane ל 2-3% עבור תחזוקה של הרדמה. הרף לפקח סכר לאורך ההליך כדי להבטיח דהpression נשימה אינו מתרחש. הערה: לאחר בהרדמה, יש להגן על העיניים של הסכר באמצעות סיכה עין סטרילי כדי למנוע את העיניים מהתייבשות או להיות שרוט. </li></ol> 4. הזרקת אוקסיטוצין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא אוקסיטוצין (20 USP יחידות / מיליליטר) לא עברו תאריך התפוגה שלה. לחטא את הבקבוקון של אוקסיטוצין עם אלכוהול סטרילי לנגב / כרית ניקוי אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות טכניקה האספטי, לערוך 2 IU (0.1 מיליליטר) של אוקסיטוצין לתוך המזרק. שימוש במחט ומזרק חדש עבור כל סכר שיהיה חלב. הערה: מנות אוקסיטוצין בדרך כלל נעות בין זריקות בודדות של 1 עד 5 IU 1,6,12,16. לחלופין, במינון של 4 IU / קילוגרם משקל גוף יכול לשמש 12. מנה אחת של 2 IU ניתן לחזור פעם אחת אם חליבת קושי הוא נתקלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק אוקסיטוצין intraperitoneally. הכנס את המחט לתוך רבע הימני התחתון של הבטן עם ההצבעה המחט לכיוון הראש, בזוויתשל 15-30 מעלות, כ -0.5 סנטימטרים עמוקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למשוך בחזרה על הבוכנה על מנת להבטיח לחץ שלילי לפני ההזרקה. אם כל נוזל (דם, שתן, תוכן מעיים, וכו &#39;) הוא להישאף לתוך המזרק, להסיר את המחט ולנסות ההזרקה עם מחט ומזרק חדש. אם אין נוזל להישאף להזריק אוקסיטוצין וזורקים את המחט ומזרק מייד למכל Biohazard. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתן כ5-15 דקות לאוקסיטוצין כדי לעורר אכזבת חלב. </li></ol> 5. הכנת חליבת האתרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את האתרים / פטמות שממנו חלב ייאסף. חלב יכול להיות שנאסף מכל פטמה 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוצא בעדינות את הפרווה סביב הפטמות לחליבה עם סתגלן, כפרווה עלולה לגרום לקושי באיסוף דגימה בשל הפתילה של חלב. להיות עדין - העור סביב הפטמות הוא מאוד רגיש ויכול להיות יבש ובתור שכזו הוא רגישה לסריטות ודמעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיקור שלי הפטמהזה לא הכרחי, אבל אופציונלי, לנקות את הפטמה עם מים פושרים לאחר הפרווה הוסרה. הכן לפחות שני אתרים כמו אתר אחד או יותר עשוי להידרש לאוסף חלב. הערה: אם ניתוח חלב כולל אפיון חיידקים, אזור הפטמה עשוי לדרוש עיקור עם יוד 5. </li></ol> אוסף 6. חלב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש ללחוץ בעדינות את הבסיס של הפטמה, לגרש את חלב לאוסף באופן ידני. הערה: אם ניתוח חלב כולל אפיון חיידקים, כמה הטיפות הראשונות של חלב צריך להיות מושלכות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את טיפות חלב לתוך צינור נימים, מילוי צינור הנימים. צינורות נימים שלהכיל כמויות גדולות יותר (לדוגמא, 50 μl) להקל על התהליך. הערה: אם קושי באיסוף חלב הוא נתקל, מנה שנייה של אוקסיטוצין יכולה להינתן. מומלץ המנה לא תעלה על 4 סך IU. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוותר חלב מצינור הנימים לתוך צינור microcentrifuge סטרילי על ידילגעת בקצה הצינורית ששימשה לצייר חלב מהפטמה לצד השני של צינור microcentrifuge - לבחון את חלב נמשך אל מחוץ לצינור הנימים באמצעות פעולת נימים. הערה: &quot;לפוצץ את&quot; חלב שאינו נמשך לתוך הצינור באמצעות מחט 18 G מצורפת מזרק 1 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרף לפקח על הסכר לסימנים של כאב או דיכאון בדרכי הנשימה ולהתאים את זרימת isoflurane בהתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמשיך לאסוף חלב כפי שתואר בסעיף זה עד חלב מספיק כבר נאסף לניתוח חלב בחר. לקביעת ריכוז creamatocrit והחלבון שתתואר להלן, לאסוף 0.25 מיליליטר של חלב. הערה: השתמש באתר חליבה שונה אם אכזבת חלב מאטה או האתר שנבחר לא מגרש חלב מספיק. מרבי של כ 2.5 מיליליטר של חלב לכל בעל חיים יכולים להיות שנאסף 17, או עד 0.5 מיליליטר לפטמה. החוקרים ממליצים שזמן כולל תחת הרדמה להיות מוגבל לכ 45-60 דקות, or 45 דקות של חליבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף חלב לתוך צינור microhematocrit למדידת creamatocrit מדגימות חלב טריים, ולאטום את קצה הצינורית עם איטום חימר. תווית צינור microhematocrit עם זיהוי הסכר ולאחסן את מדגם חלב זקוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר החליבה הושלמה, לכבות את זרימת isoflurane והחמצן. הסר את המסכה מהסכר ותמשיך לעקוב אחר סכר עד ער. מומלץ שאם לא בהכרה מלאה, הסכר צריך להיות ממוקם על משטח ספסל סופג במהלך תקופת ההתאוששות, ולא ישירות על מצעי הכלוב, כדי למנוע את המצעים מלהיות להישאף או מגרדים את עיניו של הסכר במהלך התאוששות. הערה: אל תשאיר את הסכר ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספיק כדי לשמור recumbancy sternal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם לא ניתוח נוסף נדרש, להקפיא חלב ב -80 ° C. אחרים טענו כי חלב יכול להיות מאוחסן במשך עד 3 שעות על 4 מעלות צלזיוס או 5 חודשים ב -20 ° C. 18. </li></ol> 7. מדידת Creamatocrit <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את תכולת השומן בחלב על ידי חישוב creamatocrit חלב (אחוז הקרם במדגם חלב) 19. הערה: מדידות עם חלב אנושי הוכיחו כי חלב אם טרי או קפוא יכול לשמש למדידת creamatocrit, אולם חלב טרי מתואם גבוה יותר (r = 0.92 לעומת r = 0.90) עם ריכוז שומנים בדם 11. השימוש בחלב טרי או קפוא למדידות creamatocrit צריך להישמר עקבי במחקר, כמו חלב מופשר קשור עם ירידה קטנה בcreamatocrit ערכי 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלב טרי, לאסוף דגימה של חלב מהפטמה לתוך צינור microhematocrit; למלא לפחות ¾ (כ 15-20 μl) מלא. לחלופין, לצייר חלב טרי מהמדגם שנאסף לתוך צינור הנימים לאחר הערבוב טוב. חותם את הסוף עם איטום חימר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את צינור הנימים לטווית המטוקריט, עםהסוף אטום והצביע לעבר בחוץ, הבטחת צנטריפוגה הוא מאוזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין ספין המטוקריט (120 שניות ב13,700 XG). הערה: זמן ספין או מהירות עשוי להשתנות בהתאם לדגם של צנטריפוגות בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הצינור מצנטריפוגות לאחר הספין הוא להשלים ולבצע את המדידות לחישוב creamatocrit. שים לב ההפרדה של המדגם לקרם שכבה ושכבה ברורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד ורשום את האורך הכולל של נוזל בצינור והאורך של השומן (השמנת) שכבה באמצעות מחוגה או שליט. הערה: creamatocrit מתבטא באחוז קרם השכבה בתוך מדגם חלב 19, מחושב כ( אורך של קרם שכבה / אורך כולל של עמודת חלב) x 100 (איור 1 א). לחשב ערכי ריכוז ואנרגיה שומן ממדידת creamatocrit כדלקמן: ריכוז שומן (גר &#39;/ ל&#39;) = (creamatocrit (%) - 0.59) /0.146 (איור 1) 19; ערך אנרגיה (KCאל / L) = 290 + (66.8 * creamatocrit (%) (איור 1 ג) 19. </li></ol> קביעת ריכוז חלבון 8. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בסרום שור אלבומין כסטנדרט חלבון, לקבוע את ריכוז חלבון חלב כולל באמצעות assay חלבון סטנדרטי, כגון assay חלבון לורי 6. הערה: דילול של חלב עשוי להיות נחוץ למדידות חלבון חלב ליפול בתוך העקומה סטנדרטית של assay. </li></ol>

<ol><li>Izumi, H., Kosaka, N., Shimizu, T., Sekine, K., Ochiya, T., Takase, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-dependent+expression+profiles+of+microRNAs+and+mRNAs+in+rat+milk+whey%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Time-dependent expression profiles of microRNAs and mRNAs in rat milk whey.</a> PLoS ONE. 9 (2), e0088843(2014).</li>
<li>Hsieh, C. C., Hernández-Ledesma, B., Fernández-Tomé, S., Weinborn, V., Barile, D., de Moura Bell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+Proteins%2C+Peptides%2C+and+Oligosaccharides%3A+Effects+against+the+21st+Century+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22+BioMed+Res.+Int%22%5BJournal%5D)">Milk Proteins, Peptides, and Oligosaccharides: Effects against the 21st Century Disorders.</a> BioMed Res. Int. , (2015).</li>
<li>Rogier, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+from+mother%3A+Long-term+impact+of+antibodies+in+breast+milk+on+the+gut+microbiota+and+intestinal+immune+system+of+breastfed+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Lessons from mother: Long-term impact of antibodies in breast milk on the gut microbiota and intestinal immune system of breastfed offspring.</a> Gut Microbes. 5 (5), 663-668 (2014).</li>
<li>Keen, C. L., Lönnerdal, B., Clegg, M., Hurley, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+composition+of+rat+milk%3A+trace+elements%2C+minerals%2C+protein%2C+carbohydrate+and+fat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+of+Nutr%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in composition of rat milk: trace elements, minerals, protein, carbohydrate and fat.</a> J. of Nutr. 111 (2), 226-236 (1981).</li>
<li>Cabrera-Rubio, R., Collado, M. C., Laitinen, K., Salminen, S., Isolauri, E., Mira, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+milk+microbiome+changes+over+lactation+and+is+shaped+by+maternal+weight+and+mode+of+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Clin.+Nutr%22%5BJournal%5D)">The human milk microbiome changes over lactation and is shaped by maternal weight and mode of delivery.</a> Am. J. Clin. Nutr. 96 (3), 544-551 (2012).</li>
<li>Hallam, M. C., Barile, D., Meyrand, M., German, J. B., Reimer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+high-protein+or+high-prebiotic-fiber+diets+affect+maternal+milk+composition+and+gut+microbiota+in+rat+dams+and+their+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity%22%5BJournal%5D)">Maternal high-protein or high-prebiotic-fiber diets affect maternal milk composition and gut microbiota in rat dams and their offspring.</a> Obesity. 22 (11), 2344-2351 (2014).</li>
<li>Munch, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+Profiling+of+microRNA+by+Next-Gen+Deep+Sequencing+Reveals+Known+and+Novel+miRNA+Species+in+the+Lipid+Fraction+of+Human+Breast+Milk%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Transcriptome Profiling of microRNA by Next-Gen Deep Sequencing Reveals Known and Novel miRNA Species in the Lipid Fraction of Human Breast Milk.</a> PLoS ONE. 8 (2), e50564(2013).</li>
<li>Li, M., Sloboda, D. M., Vickers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+obesity+and+developmental+programming+of+metabolic+disorders+in+offspring%3A+Evidence+from+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Maternal obesity and developmental programming of metabolic disorders in offspring: Evidence from animal models.</a> Exp Diabetes Res. 2011, (2011).</li>
<li>Ellis, P. J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrifty+metabolic+programming+in+rats+is+induced+by+both+maternal+undernutrition+and+postnatal+leptin+treatment%2C+but+masked+in+the+presence+of+both%3A+implications+for+models+of+developmental+programming%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Thrifty metabolic programming in rats is induced by both maternal undernutrition and postnatal leptin treatment, but masked in the presence of both: implications for models of developmental programming.</a> BMC Genomics. 15, 49(2014).</li>
<li>Gomez-Gallago, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+to+collect+high+volumes+of+milk+from+mice+%28Mus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22An.+Vet.+Murcia%22%5BJournal%5D)">A method to collect high volumes of milk from mice (Mus musculus).</a> An. Vet. Murcia. 29, 55-61 (2013).</li>
<li>Wang, C. D., Chu, P. S., Mellen, B. G., Shenai, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creamatocrit+and+the+nutrient+composition+of+human+milk%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Creamatocrit and the nutrient composition of human milk.</a> J. Perinatol. 19 (5), 343-346 (1999).</li>
<li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim%22%5BJournal%5D)">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li>
<li>Godbole, V. Y., Grundleger, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+of+rat+milk+from+day+5+to+20+of+lactation+and+milk+intake+of+lean+and+preobese+zucker+pups%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Composition of rat milk from day 5 to 20 of lactation and milk intake of lean and preobese zucker pups.</a> J. Nutr. 111 (3), 480-487 (1981).</li>
<li>Del Prado, M., Delgado, G., Villalpando, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+lipid+intake+during+pregnancy+and+lactation+alters+milk+composition+and+production+and+litter+growth+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Maternal lipid intake during pregnancy and lactation alters milk composition and production and litter growth in rats.</a> J. Nutr. 127 (3), 458-462 (1997).</li>
<li>Nicholas, K. R., Hartmann, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+secretion+in+the+rat%3A+progressive+changes+in+milk+composition+during+lactation+and+weaning+and+the+effect+of+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+A.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Milk secretion in the rat: progressive changes in milk composition during lactation and weaning and the effect of diet.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. Comp. Physiol. 98 (3-4), 533-542 (1991).</li>
<li>Azara, C. R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+intake+during+lactation+alters+milk+nutrient+composition+and+growth+and+mineral+status+of+rat+pups%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Res%22%5BJournal%5D)">Ethanol intake during lactation alters milk nutrient composition and growth and mineral status of rat pups.</a> Biol. Res. 41 (3), 317-330 (2008).</li>
<li>Keen, C. L., Lönnerdal, B., Sloan, M. V., Hurley, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+milking+procedure+on+rat+milk+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Effects of milking procedure on rat milk composition.</a> Physiol. Behav. 24 (3), 613-615 (1980).</li>
<li>Romeu-Nadal, M., Castellote, A. I., Lòpez-Sabater, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+cold+storage+on+vitamins+C+and+E+and+fatty+acids+in+human+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Effect of cold storage on vitamins C and E and fatty acids in human milk.</a> Food Chem. 106 (1), 65-70 (2008).</li>
<li>Lucas, A., Gibbs, J. A., Lyster, R. L., Baum, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creamatocrit%3A+simple+clinical+technique+for+estimating+fat+concentration+and+energy+value+of+human+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Creamatocrit: simple clinical technique for estimating fat concentration and energy value of human milk.</a> Br. Med. J. 1 (6119), 1018-1020 (1978).</li>
<li>Furtado, K., Andrade, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+beneficial+and+adverse+effects+of+inhalable+and+injectable+anaesthetics+in+animal+models%3A+a+mini-review%5BTitle%5D)+AND+%22OA+Anaesthetics%22%5BJournal%5D)">Comparison of the beneficial and adverse effects of inhalable and injectable anaesthetics in animal models: a mini-review.</a> OA Anaesthetics. 1 (2), 20(2013).</li>
<li>Hausman Kedem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+advanced+maternal+age+upon+human+milk+fat+content%5BTitle%5D)+AND+%22Breastfeed.+Med%22%5BJournal%5D)">The effect of advanced maternal age upon human milk fat content.</a> Breastfeed. Med. 8 (1), 116-119 (2013).</li>
<li>Mandel, D., Lubetzky, R., Dollberg, S., Barak, S., Mimouni, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+and+energy+contents+of+expressed+human+breast+milk+in+prolonged+lactation%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Fat and energy contents of expressed human breast milk in prolonged lactation.</a> Pediatrics. 116 (3), e432-e435 (2005).</li>
</ol>

יש המחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף. כל הניסויים בבעלי החיים נערכו בהתאם לפרוטוקולי CCAC אושר.

חקירות על מרכיבי חלב אם גדלו ככל שהעניין במחקר התפתחות מוקדם בחיים גובר. כמקור התזונה היחיד בתקופת היילוד, התרכובות הביו-אקטיביות בחלב חיוניות לגדילה והתפתחות אידיאליות, במיוחד בהקשר של בריאות המעיים ומערכת החיסון3. השיטה המוצגת כאן היא שיטה פשוטה ולא פולשנית לאיסוף חלב מהחולדה המניקה בכמויות המספיקות לניתוח במורד הזרם, כגון פרופיל אוליגוסכריד6. השיטה אינה דורשת ציוד ואקום מיוחד ויכולה להתבצע על ידי אדם אחד. 
בעוד שפרוטוקול זה מיועד לשימוש בנקודת זמן אחת במהלך ההנקה, אחרי...

חלב הוא המקור היחיד לתזונה ליונקים יילוד, לספק אנרגיה וחומרים מזינים לצמיחת תינוק ו1,2 פיתוח. בעוד חלב מורכב בעיקר של תאים, שומנים, וחלבונים 1, הוא מכיל גם שפע של תרכובות ביו לווסת פיתוח חייו המוקדם של צאצאים כוללים אנזימים, פחמימות, הורמונים, נוגדנים, גורמי גדילה, ציטוקינים, exosomes, microvesicles, וRNA הקטן כזה כמייקרו-רנ&quot;א 1,2. התפקיד הבסיסי של חלב אימהי בהקמת צאצאים חיסוניים ובריאות מעיים 3, יחד עם ראיות לכך שהנקת תינוקות הם פחות רגישים למחלה 2, מדגיש את החשיבות של זיהוי מרכיבי חלב הקשורים לתהליכי מחלה בתחילת החיים והמנגנונים המולקולריים מעורבים במעשיהם. עכברוש הפיתוח הוא מודל פופולרי לחקירת ההשפעה של תזונה שונות, פיסיולוגי, והתערבויות כימיות בתחילהפיתוח&#39;החיים 4. הניתוח של חלב חולדה לכן עשוי לספק תובנות רומן לבריאות האם וצאצאים. התקדמות מדעית נוכחית כעת לספק הגדלת הזדמנויות לחקירות מעמיקות של ההשפעות של מרכיבי חלב ספציפיים על בריאות ומחלה. לדוגמא, רצף של פרופילי חיידקי החלב הובהר תפקידם בהתישבות במעי המוקדמת של מעי התינוק 5, ניתוח ספקטרומטר מסה של אוליגוסכרידים חלב סיפק תובנה השינוי של פרופילי oligosaccharide חלב באמצעות דיאטה אימהית 6, ורצף עמוק של microRNA מופרש ב כדוריות השומן של חלב מדגישה תפקידים אפשריים בשעתוק הגנים, חילוף חומרים, ואת תפקוד מערכת חיסון 7. מודלים של עכברים מייצגים את אחד אורגניזמים המודל הפופולריים ביותר בשימוש במחקרים אימהיים 8,9. יתרון אחד הוא תקופות קצרות שלהם להריון והנקה, שנמשכות רק approximatאיליי 21 ימים כל אחד; לכן הזמן הכולל מתחילת ההריון להנקה מייצג פרק זמן קצר שבו יכולים להיות שנוצרו נתונים יקרי ערך. הגודל הגדול יותר של חולדות בהשוואה לעכברים, בהקשר של אוסף חלב, עשוי לספק יתרון משמעותי ביחס להיקף של חלב וקלות אוסף חלב; ייצור חלב בעכבר למשל נראה,, להיות תלוי במשקל גוף כולל עם עכברים כבדים לייצר יותר חלב 10. כאן, תיאור כללי לאיסוף הידני של חלב מחולדות מניקות מסופק. פרוטוקול זה דורש ציוד מינימאלי, אינו פולשני, זול, וניתן להשתמש בם כדי לאסוף כמויות מספיקות של חלב לניתוחים נוספים במורד הזרם. בקיצור, הסכר הוא הרדים עם isoflurane, אכזבת חלב היא מגורה על ידי אוקסיטוצין, וחלב נאסף לתוך צינורות נימים באמצעות ביטוי ידני של חלב. לבסוף, כשני מרכיבים עיקריים של חלב הם שומן וחלבונים, descriptio קצרn של הערכת תכולת שומן חלב באמצעות מדידות creamatocrit 11 וכימות של ריכוז חלבון כולל באמצעות assay חלבון סטנדרטי מוצג.

<table><tbody><tr><td>ציוד <חזק> - מזרקי חליבה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל</td><td>BD-Canada</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>25 גרם מחטי</td><td>BD-Canada</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>18 גרם</td><td>BD-Canada</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>50 &mu; l מיקרו-דיספנסר צינורות נימיים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>21-169D</td><td></td></tr><tr><td>אוקסיטוצין (20 יחידות USP / מ"ל)</td> <td>Bimeda-MTC</td><td>1OXY015</td><td></td></tr><tr><td>PPC וטרינר איזופלורן אינהלציה הרדמה, 250 מ"ל</td><td>Fresenius Kabi</td><td>M60302</td><td>בשימוש בהזמנת וטרינר</td></tr><tr><td>כרית הכנה לאלכוהול סטרילי</td><td>Dukal</td><td>853</td><td></td></tr><tr><td>ספסל סופג תחתון</td><td>VWR</td><td>82020-845</td><td></td></tr><tr><td>Maxi-Therm Hyper/Hypothermia Blanket</td><td>Cincinnati Sub-Zero</td><td>274</td><td></td></tr><tr><td>מכונת הרדמת מכרסמים עם וופורייזר</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td></td><td>בכפוף לצרכי מעבדה</td></tr><tr><td>אישיים מסכות לבעלי חיים</td><td>בנסון תעשיות רפואיות בע"מ</td><td>50100/50102</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>Axygen</td><td>MCT-060-C</td><td></td></tr><tr><td>ChroMini גוזם מקצועי</td><td>Wahl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ציוד - Creamatocrit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>StatSpin SafeCrit צינורות מיקרוהמטוקריט מפלסטיק (לא מטופלים)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-274-914</td><td></td></tr><tr><td>Critoseal מגש איטום צינור נימי</td><td>VWR</td><td>470161-478</td><td></td></tr><tr><td>StatSpin CritSpin צנטריפוגה מיקרוהמטוקריט</td><td>בקמן קולטר, בע"מ</td><td>X00-004999-001</td><td></td></tr></tbody></table>

אוסף חלב בעכברוש שימוש נימי צינורות והערכה של שומן חלב תוכן על ידי creamatocrit

Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

חלב, כמקור התזונה היחיד ליונק שזה עתה נולד, מספק את החומרים המזינים והאנרגיה הדרושים לצמיחה והתפתחות של צאצאים. הוא מכיל גם מספר עצום של תרכובות ביו-אקטיביות המשפיעות מאוד על התפתחות היילוד. ניתוח מרכיבי החלב יעזור להבהיר גורמי מפתח המקשרים בין חילוף החומרים והבריאות של האם לבין גדילה והתפתחות של צאצאים. חולדת המעבדה מייצגת אורגניזם מודל פופולרי למחקרי אימהות, וניתן להשתמש בחלב חולדות כדי לבחון את ההשפעה של התערבויות פיזיולוגיות, תזונתיות ופרמקולוגיות אימהיות שונות על רכיבי החלב, אשר עשויות להשפיע על בריאות הצאצאים. כאן מתוארת שיטה פשוטה לאיסוף ידני של חלב מהחולדה המניקה, שיכולה להתבצע על ידי חוקר יחיד, אינה דורשת ציוד ואקום או יניקה מיוחד, ומספקת מספיק חלב לניתוח בהמשך הזרם. מוצגת גם שיטה להערכת תכולת השומן בחלב על ידי מדידת אחוז השמנת בתוך דגימת החלב, המכונה creamatocrit. בסופו של דבר ניתן להשתמש בשיטות אלה כדי להגביר את התובנה לגבי בריאות האם והילד ולהבהיר גורמים אימהיים המעורבים בגדילה והתפתחות תקינה של צאצאים.

חלב נאסף כמתואר בגמילה מסכרי Wistar (כ 22 שבועות, במשקל של 350-400 ז) שצרך שליטה (AIN-93G, n = 5), חלבון גבוה (40% WT קזאין / WT, n = 5) , או סיבי prebiotic גבוהים (21.6% WT / WT, 1: 1 יחס של אוליגופרוקטוז ואינולין, n = 4) דיאטה במהלך הריון והנקה. מינון האוקסיטוצין היה 2 IU. חלב נאסף באמצעות צינורות נימים, וצינור אחד היה סובב באמצעות טווה המטוקריט לקבוע creamatocrit (איור 1 א), ששמש אז להעריך ריכוז שומן וערך אנרגיה על פי: ריכוז שומן (גר &#39;/ ל&#39;) = (creamatoc...

חלב הוא מקור תזונה עיקרי ליילוד. ניתוח מרכיבי החלב עשוי לספק תובנה לגבי גורמים אימהיים המשפיעים על בריאות הצאצאים. פרוטוקול זה מתאר שיטה ידנית לאיסוף דגימות חלב מהחולדה המניקה, אשר לאחר מכן יכולה לשמש לניתוח נוסף במורד הזרם.

אוסף חלב בעכברוש שימוש נימי צינורות והערכה של שומן חלב תוכן על ידי Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לתאר כיצד לאסוף באופן ידני חלב מחולדה מניקה לצורך ניתוח מעבדתי של הרכב החלב. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום בריאות האם והילד, כגון השפעת התזונה של האם על הרכב החלב. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לבצעה על ידי חוקר יחיד ללא צורך בציוד ואקום או שאיבה ייעודי.לא. כדי להתחיל, יש להפריד את האם מהצאצאיה למשך חמש דקות לפחות לפני החליבה. לאחר מכן, אספו את כל החומרים הדרושים להליך החליבה כפי שמוצג כאן. לאחר מכן, הניחו פד ספיגה למשטח עבודה על שולחן ניתוח מחומם, או השתמשו בפד חימום נפרד כדי למנוע איבוד חום מהאם במהלך הליך החליבה.בשלב הבא, בדקו את מערכת ההרדמה כדי לוודא כי במערכת יש מספיק חמצן ו-isoflurine לפני הפרוצדורה. לאחר מכן, חברו למכשיר את המסכה שתשמש להשראת ההרדמה הראשונית והניחו את מסכת התחזוקה בקרבת מקום. פתחו את מיכל החמצן והגדירו את קצב הזרימה ל-1 liter per minute.לאחר מכן, הפעל את זרימת ה-isofluorine וכוון את קצב הזרימה ל-5%. ברגע שהבעלה הורדמה, העבר אותה למסכת תחזוקה. ודא רמת הרדמה מספקת על ידי בדיקת היעדר רפלקס כף הרגל. לאחר מכן, הנח את הבעלה בתנוחת שכיבה על גב על פד ספיגה על השולחן.הפחית את זרימת ה-isoflurane ל-2% עד 3%. עקב אחרי את הנקבה באופן רציף לאורך הפרוצדורה והתאם את זרימת ה-isoflurane לפי הצורך כדי למנוע כאב ודיכוי נשימתי. לאחר מכן, השתמש במגבון אלכוהול סטרילי או בפד ניקוי כדי לחטא בקבוקון של oxytocin; בעזרת מזרק של 1 mL המצויד במחט gauge 25, שאב 0.1 mL של oxytocin. לאחר מכן, החדר את המחט לרביע הימני התחתון של בטנו של הנקבה, כאשר המחט פונה לכיוון הראש בזווית של 15 עד 30 מעלות, לעומק של כ-0.5 cm.משכו את הבוכנה לאחור כדי להבטיח לחץ שלילי לפני ההזרקה. אם לא נשאב נוזל, הזריקו את האוקסיטוצין והשליכו את המחט והמזרק באופן מיידי למכל פסולת ביולוגית. המתינו כ-5 עד 15 דקות עד שהאוקסיטוצין יעורר את הפרשת החלב.במהלך זמן ההורדה, בחרו את הפטמות מהן ייאסף החלב. השתמשו במספרי עיצוב כדי להסיר בעדינות את הפרווה מסביב לפטמות שנבחרו, שכן פרווה עלולה לגרום לקושי באיסוף הדגימות. לאחר מכן, נקו את הפטמות במים פושרים.הכינו לפחות שני אתרים, שכן ייתכן שיהיה צורך ביותר מאתר אחד לאיסוף החלב. לאחר שהחלב התחיל לזרום, לחצו בעדינות על בסיס ה-Tet כדי להוציא חלב באופן ידני. לצורך האיסוף, אספו את טיפות החלב לתוך צינור נימי של 50 microliter.לאחר המילוי המלא, העבירו את החלב מתוך צינור הנימי אל מבחנה מיקרו-צנטריפוגה סטרילית, על ידי נגיעה של קצה הצינור ששימש לשאיבת החלב מהפינוק בדופן מבחנת המיקרו-צנטריפוגה. לאחר מכן, השתמשו במחט gauge 18 המחוברת למזרק של 1 ml כדי לדחוף החוצה שאריות חלב שלא נשאבו לתוך הצינור. חזרו על תהליך איסוף החלב והעבירו אותו למבחנת המיקרו-צנטריפוגה עד שייאסף כמות מספקת של חלב.עבור האנליזה הנבחרת, נסו להגביל את סך הזמן שבו נקבת האם נמצאת תחת הרדמה לפחות משעה אחת. עם סיום החליבה, הפסיקו את זרימת ה-isof fluorine והחמצן והסירו את המסכה מנקבת האם. המשיכו לנטר את נקבת האם עד שתחזור להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה על הבטן (sternal recumbent).אם אין צורך בניתוחים נוספים, יש להקפיא את החלב בטמפרטורה של 80- מעלות. כדי להכין את הדגימה למדידת CCR, טענו 15 עד 20 µL של חלב לתוך צינור מיקרו-המטוקריט ישירות מה-Tet. לאחר מכן, אטמו את קצה הצינור באמצעות חומר איטום מחימר.הנח את צינור הנימי במסובב ההמטוקריט כאשר השקע של האיטום פונה כלפי חוץ, וודא שהצנטריפוגה מאוזנת. לאחר מכן, סובב את הדגימה ב-13,700 ×g למשך שתי דקות. עם סיום הסבב, הוצא את הצינור מהצנטריפוגה.צפו בהפרדת הדגימה לשכבת שמנת ושכבה צלולה. מדדו ורשמו את האורך הכולל של הנוזל במבחנה ואת אורכה של שכבת השומן או השמנת באמצעות סרגל או קליבר. השתמשו במידע זה כדי לחשב את ה-CCR כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט הנלווה, וזאת כדי לקבוע כיצד התזונה במהלך ההיריון וההנקה משפיעה על הרכב החלב.דגימות חלב נאספו בזמן הגמילה מפרות של גזע Worcester שהוזנו בתזונה עשירה בחלבון, בתזונה עשירה בסיבים פרה-ביוטיים, או בתזונה מבוקרת. החלב שנאסף מהפרות בתזונה העשירה בסיבים פרה-ביוטיים הראה את הערכים הגבוהים ביותר מבחינה מספרית עבור המטוקריט C, ריכוז השומן וערך האנרגיה. עם זאת, הבדלים אלו לא היו מובהקים סטטיסטית בכל הנוגע לחלבון.עם זאת, החלב שנאסף מהאמהות בתזונה העשירה בחלבון הראה את ריכוז החלבון הגבוה ביותר. שוב, הבדל זה לא היה מובהק סטטיסטית. לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע אותה בפחות משעה מרגע ההרדמה הראשוני של האמה, במידה שהיא מבוצעת נכונה.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לנטר באופן רציף את נקבת האם כדי להבטיח שלא תתרחש דיכוי נשימה תחת הרדמה לאחר הפרוצדורה. ניתן להשתמש בשיטות אחרות, כגון ספקטרומטריית מסות, כדי לענות על שאלות נוספות, כמו קביעת הרכב האוליגוסכרידים בחלב. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה של אופן ביצוע האיסוף הידני של חלב מחולדה מlactating.

milk-collection-rat-using-capillary-tubes-estimation-milk-fat-content

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

איסוף חלב ממודלים של בעלי חיים מקל על כיווני מחקר שונים: הבנת חסינות פסיבית, זיהוי פתוגנים האחראים להעברה אנכית, ובאמצעות שימוש בעכברים טרנסגניים, אפילו ייצור מסחרי של חלבונים המצויים בחלב אם. כאן אנו מדגימים שיטה פשוטה לאיסוף חלב בעכברים ובאייל המונטג'אק של ריבס.

שיטות איסוף חלב לעכברים וריבס &#39;Muntjac צביים

תרבית עובר שלם של יונקים (WEC) נמצאת בשימוש נרחב בטרטולוגיה ובביולוגיה התפתחותית. סרום חולדות צנטריפוגה מיידי מסופק בדרך כלל כמדיום הן ל-WEC של עכבר והן לחולדות. בסרטון זה, אנו מדגימים את הפרוטוקול הסטנדרטי שלנו להכנת סרום חולדות איכותי המתאים ל-WEC של יונקים.

הכנת סרום העכברוש מתאים לתרבות עובר שלמה יונקים

כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה הזנב וריד דם הדגימה בחולדות שאינם מרדימים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום. שיטה זו מפחיתה את הסיכון בחשיפה ישירה דם ומפשטת לקיחת דגימות מרובים venipuncture יחיד.

חזר על איסוף דם של וריד הזנב של חולדות שאינם מרדימים עם מערכת איסוף דם ואקום

מאמר זה מתאר שיטת השתלת להשתיל השתל בפטמות האפיתל התאים לתוך משטח שומן לבן של בעלי חיים הנמען. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לבחון את השפעות המארחים ו/או התורמים בהתפתחות האפיתל של הפטמות ומבטלת את הצורך בניקוי מראש, ובכך מרחיב את התועלת שבטכניקה זו.

חולדה השתלת תא האפיתל לתוך משטח שומן לבן הגלימה

מאמר זה מתאר ומדגים את ניהול החיסונים התוך-אנלתיים ואת איסוף החלב מארנבים מניקים (Oryctolagus cuniculus) כאמצעי להערכת חסינות הרירית במודל מתאים מבחינה תרגומית של חיסון אימהי.

חיסון תוך-כלי ואוסף חלב במחקרים על חיסון אימהי בארנבים הלבנים של ניו זילנד (Oryctolagus cuniculus)

הפרוטוקול מראה איסוף חוזר של נוזל המוח השדרה ודם מחולדות אפילפטיות, המבוצע במקביל לניטור וידאו-אלקטרואנצפלוגרם רציף (EEG). אלה חיוניים לחקר קשרים אפשריים בין שינויים במולקולות שונות של נוזל הגוף לבין פעילות התקפים.

דגימת נוזל מוחי ודם מווריד זנב לטרלי בחולדות במהלך רישומי EEG

כאן אנו מציגים שילוב של הגבלת חולדות יעילה ושיטות ניקור ורידים תת-קרקעיות המאפשרות איסוף דם מהיר, בטוח וחוזר בחולדות ללא הרדמה.

דגימת דם של ורידים תת-קלאביים בחולדות מודעות

מאמר זה מתאר כיצד להרכיב מכשיר שניתן להשתמש בו לאיסוף חלב מעכברי מעבדה. מכשיר זה זול, נייד ומאפשר איסוף של 0.1-0.5 מ"ל חלב על ידי אדם מיומן אחד. פרוטוקול חליבה מפורט כלול גם כן.

טכניקה יעילה לאדם יחיד לדגימת חלב מעכברי מעבדה

פרוטוקול זה נועד לזרז ולאפשר בידוד יעיל של שלפוחיות חוץ-תאיות מחלב אם אנושי בטוהר גבוה.

בידוד מהיר של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן בחלב אם

מאמר זה מתאר פרוטוקול מגיב רומן ולהגדיר מיועד מדידה רגישה של ההשפעות הנוירו של תרכובות וטיפולים על שיתוף תרבויות של נוירונים האסטרוציטים באמצעות ניתוח תוכן גבוהה. תוצאות מראים כי ניתוח תוכן גבוהה מהווה טכנולוגיה חדשנית מרגש להערכה neurotoxicity.

עצב Astrocyte שותף תרבות Assay לניתוח תכולה גבוהה של neurotoxicity

למדו איסוף חלב ידני בעכברוש לניתוח הרכב חלב במעבדה. השיטה משתמשת בנימי צינורות ובשיטת Creamatocrit להערכת תוכן השומן, ללא ציוד שאיבה מיוחד.

אוסף חלב בעכברוש שימוש נימי צינורות והערכה של שומן חלב תוכן על ידי Creamatocrit

גלה סרטונים נוספים