Name: דוגמנות השלבים המוקדמים של סרטן השחלות הפצה בתרבות Organotypic של אדם חלל הבטן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: חקור מודל אורגנוטיפי תלת-ממדי של חלל הבטן האנושי לחקר סרטן השחלות. השיטה משתמשת בתאי מזותל ופיברובלסטים אנושיים ראשוניים לחקירת הידבקות, חדירה והתמדות של תאי סרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לכל המתמחים והרופאים המטפלים, במיוחד לד"ר א.פ. הייני (אוניברסיטת שיקגו, המחלקה למיילדות וגינקולוגיה) על איסוף ביופסיות אומנטליות. כמו כן, אנו מודים לסטייסי טובין וגייל איזנברג על העריכה הקפדנית של כתב היד הזה. עבודה זו נתמכה על ידי Bears Care, מוטב הצדקה של מועדון הכדורגל שיקגו ברס, המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מוחי (NINDS) R21 NS075702, והמכון הלאומי לסרטן מענק R01 CA111882 ל-E.L.

<ol><li>Siegel, R., Ma, J., Zou, Z., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics.</a> CA Cancer J. Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li>
<li>Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer+development+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer development and metastasis.</a> Am. J. Pathol. 177, 1053-1064 (2010).</li>
<li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nat. Med. 19, 1423-1437 (2013).</li>
<li>Correia, A. L., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+microenvironment+is+a+dominant+force+in+multidrug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Resist+Updat%22%5BJournal%5D)">The tumor microenvironment is a dominant force in multidrug resistance.</a> Drug Resist Updat. 15, 39-49 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessories+to+the+crime%3A+Functions+of+cells+recruited+to+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Accessories to the crime: Functions of cells recruited to the tumor microenvironment.</a> Cancer Cell. 21, 309-322 (2012).</li>
<li>Nieman, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+promote+ovarian+cancer+metastasis+and+provide+energy+for+rapid+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth.</a> Nat. Med. 17, 1498-1503 (2011).</li>
<li>Daya, D., McCaughy, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+the+peritoneum%3A+A+review+of+selected+topics%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Diagn.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Pathology of the peritoneum: A review of selected topics.</a> Semin. Diagn. Pathol. 8, 277-289 (1991).</li>
<li>Kenny, H. A., Krausz, T., Yamada, S. D., Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+novel+3D+culture+model+to+elucidate+the+role+of+mesothelial+cells%2C+fibroblasts+and+extra-cellular+matrices+on+adhesion+and+invasion+of+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Use of a novel 3D culture model to elucidate the role of mesothelial cells, fibroblasts and extra-cellular matrices on adhesion and invasion of ovarian cancer cells.</a> Int. J. Cancer. 121, 1463-1472 (2007).</li>
<li>Kenny, H. A., Kaur, S., Coussens, L. M., Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+initial+steps+of+ovarian+cancer+cell+metastasis+are+mediated+by+MMP-2+cleavage+of+vitronectin+and+fibronectin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">The initial steps of ovarian cancer cell metastasis are mediated by MMP-2 cleavage of vitronectin and fibronectin.</a> J. Clin. Invest. 118, 1367-1379 (2008).</li>
<li>Kenny, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesothelial+cells+promote+early+ovarian+cancer+metastasis+through+fibronectin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Mesothelial cells promote early ovarian cancer metastasis through fibronectin secretion.</a> J. Clin. Invest. 124, 4614-4628 (2014).</li>
<li>Strobel, T., Cannistra, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B21-integrins+partly+mediate+binding+of+ovarian+cancer+cells+to+peritoneal+mesothelium+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">β1-integrins partly mediate binding of ovarian cancer cells to peritoneal mesothelium in vitro.</a> Gynecol. Oncol. 73, 362-367 (1999).</li>
<li>Strobel, T., Swanson, L., Cannistra, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+inhibition+of+CD44+limits+intra-abdominal+spread+of+a+human+ovarian+cancer+xenograft+in+nude+mice%3A+A+novel+role+for+CD+44+in+the+process+of+peritoneal+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo inhibition of CD44 limits intra-abdominal spread of a human ovarian cancer xenograft in nude mice: A novel role for CD 44 in the process of peritoneal implantation.</a> Cancer Res. 57, 1228-1232 (1997).</li>
<li>Iwanicki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer+spheroids+use+myosin-generated+force+to+clear+the+mesothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer spheroids use myosin-generated force to clear the mesothelium.</a> Cancer Discov. 1, 144-157 (2011).</li>
<li>Lessan, K., Aguiar, D., Oegema, T. R., Siebenson, L., Skubitz, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD44+and+%CE%B21+integrin+mediate+ovarian+carcinoma+cell+adhesion+to+peritoneal+mesothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">CD44 and β1 integrin mediate ovarian carcinoma cell adhesion to peritoneal mesothelial cells.</a> Am. J. Pathol. 154, 1525-1537 (1999).</li>
<li>Ahmed, N., Riley, C., Rice, G., Quinn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+integrin+receptors+for+fibronectin%2C+collagen+and+laminin+in+the+regulation+of+ovarian+carcinoma+functions+in+response+to+a+matrix+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Role of integrin receptors for fibronectin, collagen and laminin in the regulation of ovarian carcinoma functions in response to a matrix microenvironment.</a> Clin. Exp. Metastasis. 22, 391-402 (2005).</li>
<li>Kaur, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B23-integrin+expression+on+tumor+cells+inhibits+tumor+progression%2C+reduces+metastasis%2C+and+is+associated+with+a+favorable+prognosis+in+patients+with+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">β3-integrin expression on tumor cells inhibits tumor progression, reduces metastasis, and is associated with a favorable prognosis in patients with ovarian cancer.</a> Am. J. Pathol. 175, 2184-2196 (2009).</li>
<li>Niedbala, M. J., Crickard, K., Bernacki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+degradation+of+extracellular+matrix+by+human+ovarian+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">In vitro degradation of extracellular matrix by human ovarian carcinoma cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 5, 181-197 (1987).</li>
<li>Kanemoto, T., Martin, G. R., Hamilton, T. C., Fridman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+synthetic+peptides+and+protease+inhibitors+on+the+interaction+of+a+human+ovarian+cancer+cell+line+%28NIH%3AOVCAR-3%29+with+a+reconstituted+basement+membrane+%28matrigel%29%5BTitle%5D)+AND+%22Invasion+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Effects of synthetic peptides and protease inhibitors on the interaction of a human ovarian cancer cell line (NIH:OVCAR-3) with a reconstituted basement membrane (matrigel).</a> Invasion Metastasis. 11, 84-92 (1991).</li>
<li>Rieppi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesothelial+cells+induce+the+motility+of+human+ovarian+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mesothelial cells induce the motility of human ovarian carcinoma cells.</a> Int. J. Cancer. 80, 303-307 (1999).</li>
<li>Barbolina, M. V., Adley, B. P., Ariztia, E. V., Liu, Y., Stack, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+membrane+type+1+matrix+metalloproteinase+activity+in+ovarian+carcinoma+cells+via+collagen-induced+EGR1+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of membrane type 1 matrix metalloproteinase activity in ovarian carcinoma cells via collagen-induced EGR1 expression.</a> J. Biol. Chem. 282, 4924-4931 (2007).</li>
<li>Burleson, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+carcinoma+ascites+spheroids+adhere+to+extracellular+matrix+components+and+mesothelial+cell+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Ovarian carcinoma ascites spheroids adhere to extracellular matrix components and mesothelial cell monolayers.</a> Gynecol. Oncol. 93, 170-181 (2004).</li>
<li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMOCC-1%2C+a+human+monoclonal+antibody+that+inhibits+adhesion+of+ovarian+cancer+cells+to+human+mesothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">HMOCC-1, a human monoclonal antibody that inhibits adhesion of ovarian cancer cells to human mesothelial cells.</a> Gynecol. Oncol. 95, 290-298 (2004).</li>
<li>Kishikawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+pattern+of+peritoneal+involvement+shown+by+in+vitro+and+in+vivo+ovarian+cancer+dissemination+models%5BTitle%5D)+AND+%22Invas.+Metast%22%5BJournal%5D)">Two distinct pattern of peritoneal involvement shown by in vitro and in vivo ovarian cancer dissemination models.</a> Invas. Metast. 15, 11-21 (1995).</li>
<li>Casey, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+in+vitro+assay+to+measure+the+invasion+of+ovarian+carcinoma+cells+through+mesothelial+cell+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Establishment of an in vitro assay to measure the invasion of ovarian carcinoma cells through mesothelial cell monolayers.</a> Clin. Exp. Metastasis. 20, 343-356 (2003).</li>
<li>Niedbala, M. J., Crickard, K., Bernacki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+human+ovarian+tumor+cells+with+human+mesothelial+cells+grown+on+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Interactions of human ovarian tumor cells with human mesothelial cells grown on extracellular matrix.</a> Exp. Cell Res. 160, 499-513 (1985).</li>
<li>White, E. A., Kenny, H. A., Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+modeling+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional modeling of ovarian cancer.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 79-80, 184-192 (2014).</li>
<li>Kenny, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+high+throughput+screening+using+a+primary+human+three-dimensional+organotypic+culture+predicts+in+vivo+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Comm%22%5BJournal%5D)">Quantitative high throughput screening using a primary human three-dimensional organotypic culture predicts in vivo efficacy.</a> Nature Comm. , (2015).</li>
<li>Sawada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((c-Met+overexpression+is+a+prognostic+factor+in+ovarian+cancer+and+an+effective+target+for+inhibition+of+peritoneal+dissemination+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">c-Met overexpression is a prognostic factor in ovarian cancer and an effective target for inhibition of peritoneal dissemination and invasion.</a> Cancer Res. 67, 1670-1680 (2007).</li>
<li>Kenny, H. A., Lengyel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP-2+functions+as+an+early+response+protein+in+ovarian+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+cycle%22%5BJournal%5D)">MMP-2 functions as an early response protein in ovarian cancer metastasis.</a> Cell cycle. 8, 683-688 (2009).</li>
<li>Sawada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+E-cadherin+promotes+ovarian+cancer+metastasis+via+alpha+5-integrin%2C+which+is+a+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Loss of E-cadherin promotes ovarian cancer metastasis via alpha 5-integrin, which is a therapeutic target.</a> Cancer Res. 68, 2329-2339 (2008).</li>
<li>Mitra, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ligand-independent+activation+of+c-Met+by+fibronectin+and+%CE%B1%285%29%CE%B2%281%29-integrin+regulates+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Ligand-independent activation of c-Met by fibronectin and α(5)β(1)-integrin regulates ovarian cancer invasion and metastasis.</a> Oncogene. 30, 1566-1576 (2011).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

מודל organotypic של מייקרו-סביבת הצפק הוקם על מנת להעריך את התפקוד האישי וקולקטיבי (ים) של שני המרכיבים התאיים ומולדים של מייקרו-הסביבה בהפצת סרטן השחלות. הפרוטוקולים הספציפיים עבור ציפוי והתאמה אישי של תרבות organotypic 3D לחקור הידבקות תא סרטני, ופלישת השחלות מסופקים. תאים ראשוניים אדם omental mesothelial ופיברובלסטים בודדו מחולים ומשמשים במעבר מוקדם כדי לשמור על מורפולוגיה נורמלית ווריאצית מטופל. במודל זה, fibroblasts omental הנורמלי וECM (אני סוג קולגן בדרך כלל) היו שכבות עם m...

סרטן השחלות הוא הגידול הגינקולוגי הקטלני ביותר1. רוב החולים מאובחנים לאחר שהסרטן התפשט בכל חלל הצפק. לאחר שהסרטן התפשט בכל חלל הצפק, ניתוחים ציטורדקטיים וכימותרפיה לרוב אינם טיפול מספיק כדי למנוע הישנות סרטן ועמידות לכימותרפיה, וכתוצאה מכך שיעור הישרדות של פחות מ-30% ל-5 שנים. גרורות סרטן השחלות מוגבלות בעיקר לחלל הצפק, ומספר סוגי סרטן אחרים, כולל סרטן הקיבה, הלבלב והמעי הגס, שולחים גרורות לאותם אתרים אנטומיים בחלל הצפק. באופן כללי, תאי סרטן השחלות מתנתקים מהקרצינומה באתרה בחצוצרה או בגידול השחלות הראשוני, נעים בנוזל הצפק כתאים בודדים או ספרואידים, ונצמדים למשטחים מרופדים במזותל של האומנטום, המעי ודופן הבטן2. 
המיקרו-סביבה של הגידול ממלאת תפקיד חשוב בהתקדמות המחלה ובעמידות לכימותרפיה בסוגי סרטן רבים3-6. חלל הצפק הוא מיקרו-סביבה ייחודית, עם חד-שכבת תא מזותל המכסה את רוב המשטחים (איור 1A)7. רירית המזותל פועלת כמחסום היוצר משטח בעל חיכוך נמוך, הנוטה להגן מפני הידבקות תאים סרטניים8. מיד מתחת למשטח מרופד במזותל זה נמצאת שכבה העשויה בעיקר מפיברובלסטים ומטריצה חוץ-תאית (ECM), המקדמים הידבקות ופלישה של תאים סרטניים8. תאי סרטן השחלות מפרישים גורמים הגורמים לשינויים ברירית תאי המזותל המשפרים את ההידבקות, הפלישה והגרורות של תאי סרטן השחלות9,10. תאי סרטן השחלות נצמדים למשטח המזותל באמצעות מנגנונים בתיווך אינטגרין ו-CD44 (איור 1B)11-16. 
מבחינה היסטורית, פותחו מספר מודלים תלת-ממדיים כדי לחקור אינטראקציות של סרטן השחלות עם המיקרו-סביבה. חלק מהמודלים הראשונים חקרו ממשק סרטן השחלות-ECM17-21, תקשורת בין סרטן השחלות לתאי מזותל13,14,21-24, או שניהם25 (נסקר על ידינו 26). Niedbala et al. גילה שתאי סרטן השחלות מציגים הידבקות מהירה ומוצקה יותר ל-ECM מאשר לתאי מזותל או לפלסטיק בלבד25. עם זאת, מודלים אלה לא דמו מבחינה היסטולוגית למיקרו-סביבה הצפקית. לכן, הקמנו מודל אורגנוטיפי תלת מימדי כדי לשכפל בצורה יסודית יותר את המיקרו-סביבה של סרטן השחלות. על מנת להבין טוב יותר את תפקיד המיקרו-סביבה ואת האינטראקציה בין תאי סרטן ותאי צפק, פיתחנו מודל תלת מימדי של תרבית אורגנוטיפית במבחנה של רירית חלל הצפק (סכמטי באיור 1C). המודל המוצע מורכב מפיברובלסטים אנושיים ראשוניים ו-ECM, מכוסים בשכבה של תאי מזותל אנושיים ראשוניים - כל סוג תא מבודד מאומנטום אנושי. מבחינה היסטולוגית, מודל זה דומה לרירית הצפק או האומנטלית הרגילה, ומספק משטח שעליו אנו יכולים לחקור את המיקרו-סביבה של הגידול, את האינטראקציה בין תאים סרטניים לרקמה תקינה, ואת תהליכי ההדבקה, הפלישה וההתפשטות של תאי סרטן8.

<table><tbody><tr><td><חזק>1. בידוד ותרבית של תאים ראשוניים</חזקים></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH3001304</td><td></td></tr><tr><td>סכיני גילוח חד פיפיות פישר</td><td>סיינטיפיק</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>15 ס"מ צלחות תרבית</td><td>BD Biosciences</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק זכוכית</td><td>?</td><td>?</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Life Technologies</td><td>16000044_3616914956</td><td></td></tr><tr><td>DMEM עם קורנינג L-גלוטמין</td><td></td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>MEM ויטמינים</td><td>קורנינג</td><td>25-020-Cl</td><td></td></tr><tr><td>MEM חומצות אמינו לא חיוניות</td><td>קורנינג</td><td>25-025-CI</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>קורנינג</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>שייקר&nbsp;</td><td>Thermo-Fisher</td><td>MaxQ 4450</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>5702</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור</td><td>Thermo-Fisher</td><td>Forma Series II חממת CO2 עם מעטפת מים דגם 3100</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin EDTA, 1x (0.25%)</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS002592</td><td></td></tr><tr><td>T-75 Flasks</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>353136 T-175 צלוחיות</td><td>BD Biosciences</td><td>353112</td><td></td></tr><tr><td>טיפים לפיפט</td><td>Rainin</td><td>P2, P10, P20, P200 ו-P1000</td><td></td></tr><tr><td>טיפים</td><td>לפיפט</td> טיפים <td>מסוננים P2, P10, P20, P200 ו-P1000</td><td></td></tr><tr><td>שם המגיב / ציוד</חזק></td><td><חזק>חברה</חזק></td><td><חזק>מספר קטלוגי</חזק></td><td>Comments/Description</td></tr><tr><td>2. ציפוי תרבית תלת מימד </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מונה תאים</td><td>Invitrogen</td><td>רוזנת</td><td></td></tr><tr><td>רוזנת תא ספירת תאים שקופיות</td><td>Invitrogen</td><td>C10313</td><td></td></tr><tr><td>כתם כחול טריפן (0.4%)</td> <td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>קולגן סוג I (זנב עכברוש)</td> <td>BD Biosciences</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 96 בארות, תחתית שקופה, BD שחור</td><td> Biosciences</td><td>353219</td><td></td></tr><tr><td>שם המגיב / ציוד< / חזק</td> <td>><חזק >חברה < חזק ></td><td><חזק >מספר קטלוגי < חזק ></td><td><חזק >הערות / תיאור< חזק</td></tr> <tr><td>><חזק >3. בדיקת הדבקה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>רב ערוצי פיפט</td><td>Eppendorf</td><td>Xplorer 300</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פרפורמלדהיד 4% ב-PBS</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-281692</td><td></td></tr><tr><td>קורא צלחות</td><td>מכשירים מולקולריים</td><td>Minimax</td><td></td></tr><tr><td>שם המגיב / ציוד< / חזק></td><td><חזק>חברה< / חזק></td><td>מספר קטלוגי</td><td>הערות/תיאור</td></tr><tr><td>5. מבחן פלישה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מוסיף תרבית תאים (8um, 24-well)</td><td>BD Biosciences</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>צמר גפן</td><td>Q-tips</td><td>צמר גפן</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>Zeiss</td><td>Axiovert 200m</td><td></td></tr><tr><td>Cell Profiler</td><td>נחלת הכלל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>24 באר צלחת</td><td>BD Biosciences</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td><חזק>שם המגיב / ציוד< / חזק ></td><td><חזק >חברה < חזק ></td><td><חזק >מספר קטלוגי < חזק ></td><td><חזק >הערות / תיאור< חזק ></td></tr><tr><td><חזק >6. נוגדנים</חזקים></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אנטי-אינטגרין ואלפא; V&BETA; 3 נוגדנים, שיבוט LM609</td><td>EMD Millipore</td><td>MAB1976</td><td></td></tr><tr><td>בטא 1&nbsp;</td><td>Oncosynergy</td><td>OS2966</td><td></td></tr><tr><td>Alpha 5 [CD49e]</td><td>ID Pharmingen</td><td>555615</td><td></td></tr><tr><td>Beta 4 [CD104]</td> <td>EMD Millipore</td><td>MAB 2058</td><td></td></tr></tbody></table>

דוגמנות השלבים המוקדמים של סרטן השחלות הפצה בתרבות organotypic של אדם חלל הבטן

Modeling the Early Steps of Ovarian Cancer Dissemination in an Organotypic Culture of the Human Peritoneal Cavity

דפוס הגרורות של סרטן השחלות שונה באופן ניכר מזה של רוב גידולי האפיתל האחרים, מכיוון שהוא מתפשט לעתים רחוקות באופן המטוגני. במקום זאת, תאי סרטן השחלות שעברו פילינג מהגידול הראשוני נישאים על ידי נוזל הצפק לאתרים גרורתיים בתוך חלל הצפק. אתרים אלה, בעיקר הצפק הבטני והאומנטום, הם איברים המכוסים במשטח מרופד במזותל. כדי לחקור את תהליכי התפשטות סרטן השחלות, הרכבנו מערכת תרבית תלת מימדית מורכבת המשחזרת את רירית חלל הצפק במבחנה. פיברובלסטים אנושיים ראשוניים ותאי מזותל בודדו מאומנטום אנושי. לאחר מכן עורבבו הפיברובלסטים עם מטריצה חוץ-תאית וכוסו בשכבה של תאי המזותל האנושיים הראשוניים כדי לחקות את משטחי הצפק והאומנטל שבהם נתקלים תאי סרטן השחלות השולחים גרורות. המודל האורגנוטיפי המתקבל משמש, כפי שהוצג, לבחינת השלבים המוקדמים של התפשטות סרטן השחלות, כולל הידבקות של תאי סרטן, פלישה והתפשטות. מודל זה שימש במספר מחקרים כדי לחקור את תפקיד המיקרו-סביבה (תאית ותאית) בהפצת סרטן השחלות המוקדם. הוא גם הותאם בהצלחה לבדיקות סקר בתפוקה גבוהה ושימש לזיהוי ובדיקה של מעכבים של גרורות סרטן השחלות.

תרבות organotypic הורכבה על ידי הערבוב הראשון fibroblasts האנושי ראשוני עם אני סוג קולגן ולאחר מכן כיסה את התרבות הזאת עם 5 פעמים את מספר תאי mesothelial. התרבות הייתה טופחה במשך לפחות 18 שעות לפני תאי סרטן השחלות נוספו ללמוד הידבקות, פלישה או הפצה. כל assay חזר על עצמו עם מספר (n = 3-5) תרבויות 3D המתקבלות ממטופלים שונים ובארות רבות נבדקו בכל תנאים להידבקות (n = 5), ריבוי מבחני (n = 5) ופלישה (n = 3) . תאי סרטן השחלות דבקו בתרבות organotypic 3D לאחר 4 שעות (איור</...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבניית מודל תלת מימדי במבחנה של רירית חלל הצפק, המורכב מתאי מזותל אנושיים ראשוניים ופיברובלסטים בשכבות עם מטריצה חוץ-תאית, ככלי לחקירת הדבקה, פלישה והתפשטות של תאי סרטן השחלות.

דוגמנות השלבים המוקדמים של סרטן השחלות הפצה בתרבות Organotypic של אדם חלל הבטן

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. ...

המטרה הכללית של ניסוי זה היא ליצור מודל אורגנוטיפי המדמה את המיקרו-סביבה הפריטונאלית, על מנת לשפר את הבנתנו את הביולוגיה של סרטן השחלה. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום של סרטן השחלה, כגון כיצד אינטראקציות בין תאי סרטן למיקרו-סביבה תורמות לפתוגנזה של המחלה, וכיצד ניתן לבחון מעכבים פוטנציאליים של אינטראקציות אלו. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא השימוש בתאים אנושיים ראשוניים ממשיים המרכיבים את המזוטליום המצפה את פני החלל הפריטונאלי, בתוך תרבית משותפת (co-culture) של תאי סרטן השחלה.למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי סרטן השחלה, ניתן להחיל אותה גם על חקר סוגי סרטן אחרים המתפשטים בחלל הפריטונאום, כגון סרטן קיבה, לבלב ומעי הגס. עם קבלת דגימה כירורגית של אומנטום אנושי, יש להטbil את הדגימה באופן מיידי ב-PBS בטמפרטורת החדר. בתוך שעתיים מההטבלה, העבירו את האומנטום לשפופרת קונית של 50 milliliters המכילה 20 milliliters של PBS טרי. העבירו את שטיפת ה-PBS הנותרת, המכילה תאי מזותליום אנושיים ראשוניים (HPMC) ותאי דם אדומים, לשפופרת קונית חדשה של 50 milliliters וסובבו את התאים במ centri-fuge לצורך שקיעתם.לאחר מכן, שפכו את תכולת המבחנה לתוך צלחת תרבית סטרילית של 10 סנטימטר והשתמשו בשני סקלפלים כדי לקצוץ את הרקמה לחתיכות של חמישה מילימטר מעוקב. כדי לבודד תאי מזותליום אנושיים ראשוניים

modeling-early-steps-ovarian-cancer-dissemination-an-organotypic

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Assay אישור mesothelial המתוארת כאן מנצלת את התאים שכותרתו fluorescently ואת זמן לשגות מיקרוסקופיה וידאו להמחיש כמותית למדוד את יחסי הגומלין של סרטן השחלות spheroids תאיים ו monolayers התא mesothelial. Assay מתווך זה מדגים את השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות.

ב Assay עמילות חוץ גופית mesothelial כי מודלים השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות

Heterotypic תלת ממדי<em&gt; במבחנה</em&gt; מידול של אינטראקציות stromal-אפיתל בייזום והתקדמות סרטן השחלות

בסרטון זה אנו מדגימים פיתוח מודל תלת מימדי במבחנה של רירית חלל הצפק. תרבית אורגנוטיפית זו יכולה לסייע בחקירת הידבקות תאי סרטן השחלות, פלישה והתפשטות.

מידול גרורות סרטן השחלות ברירית חלל הצפק: שיטה להקמת מודל תלת ממדי במבחנה של רירית הצפק

בסרטון זה, אנו מקימים תרבית איברים אומנטליים ex vivo המכוסה בתאי סרטן שחלות המבטאים GFP כדי לחקור נשאות של סרטן השחלות בתוך הצמח האומנטי. פרוטוקול זה מנתח את מבני תאי מערכת החיסון בתוך האומנטום הידועים ככתמים חלביים המקדמים גרורות.

מידול התיישבות תאי סרטן השחלות של Omentum: שיטת Ex Vivo לביסוס התיישבות נקודה חלבית של תאי סרטן שחלות המסומנים באופן פלואורסצנטי בצמחי אומנטום מורין

פלישת תאי סרטן השחלות לmesothelial הבטנה של הצפק היא תהליך דינמי לאורך זמן. ניצול מנתח בזמן אמת, את היכולת פולשני של תאי סרטן שחלות במודל תא שיתוף תרבות אליפטית-mesothelial ניתן לכמת על פני תקופות זמן ממושכות, המספקת תובנות גורמים המסדירים את התהליך גרורתי.

הערכה של קובץ מצורף סרטן השחלות אליפטית ופלישה של תאי mesothelial בזמן אמת

אנו מתארים פרוטוקול המיישם גישות in vivo ו-ex vivo לחקר קולוניזציה של סרטן השחלות ברקמות השומן הצפקיות, במיוחד האומנטום. יתר על כן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות וניתוח מבני תאים חיסוניים באומנטום המכונים כתמים חלביים, המקדמים גרורות של שומן צפק.

In vivo לשעבר vivo גישות לחקר סרטן השחלות גרורתי התיישבות של מבני ספוט החלב בהצפק שומני

כדי להבהיר את תהליך רב שלבי של הפצת הצפק של קרצינומה השחלות, המחקר הנוכחי מציג מודל ניסיוני בעכברים של התפתחות גידולים המקורי וגרורות הצפק באמצעות חיסון orthotopic עם תאים סרטניים אלה.

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

כדי ללמוד התקדמות גידול שחלות במודל רלוונטי מבחינה פיזיולוגית, spheroids רב-תאיים היו בתרבית microdevice תחת זרימת נוזל מדומה. מודל 3D דינמיקה זו מחק את סביבת intraperitoneal עם המרכיבים התאיים מכאניים שבו גרורות סרטן השחלות מתרחשות.

דוגמנות התנהגות אליפטית סרטן השחלות תאיים בתוך Microdevice הצפק 3D דינמי

פרוטוקול זה מתאר את הקמתו של מודל אקס ויו תלת-ממדי (3D) של אינטראקציה בין תאים סרטניים ל-omentum. המודל מספק פלטפורמה להבהרת מנגנונים מעודדי גידול בתוך נישת השומן ולבדיקת טיפולים חדשניים.

מודל Ex Vivo של סרטן השחלות גרורות פריטוניאליות באמצעות Omentum אנושי

פרוטוקול זה מפרט את הפיתוח של מודלים של עכברים בדרגה גבוהה של קרצינומה שחלות סרוזית (HGSOC) במבחנה וב-vivo. מגזירת אורגנואידים של חצוצרות עכברים, השינוי הגנטי שלהם לסיכום גנטיקה של HGSOC אנושי, והחדרתם לבורסה השחלתית של עכברים סינגניים להתפתחות גידולים in vivo .

פיתוח קווי אורגנואידים שמקורם בעכבר מתאי אפיתל חצוצרות למידול קרצינומה של שחלות סרוזיות בדרגה גבוהה

חקור מודל אורגנוטיפי תלת-ממדי של חלל הבטן האנושי לחקר סרטן השחלות. השיטה משתמשת בתאי מזותל ופיברובלסטים אנושיים ראשוניים לחקירת הידבקות, חדירה והתמדות של תאי סרטן.

דוגמנות השלבים המוקדמים של סרטן השחלות הפצה בתרבות Organotypic של אדם חלל הבטן

גלה סרטונים נוספים