Name: תלת ממד תרבות אלגינט חרוז של תאי אדנומה יותרת המוח האנושי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: למד שיטת תרבית תלת-ממדית בחרוזי אלגינט לתאי אדנומה יותרת המוח האנושית. טכניקה זו מאפשרת חקר ביולוגיית תאי גידול וביטוי סמני חדירות בסביבה פיזיולוגית רלוונטית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים למר א. ריוס על עזרתו הטכנית.

מחקר זה אושר לשימוש חומר אנושי ידי הוועדות מקומיות האתיות של המוסד הרפואי ואת המרכז למחקר המתקדם המחקרים של המכון הפוליטכני הלאומי. 1. רכישה במדגם גידול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג את הביופסיה רקמות יותרת המוח אדנומה מחולה באמצעות הליך כירורגי טרנס-sphenoidal 14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף המדגם יותרת המוח אדנומה ולמקם אותו לתוך בקבוק זכוכית סטרילית המכילה 50 מ&quot;ל של מדיום תרבות 199 טריים (M199) מועשר 10% בסרום שור העובר (FBS), 0.6 מ&quot;ג / סודיום ביקרבונט מ&quot;ל, 2.4 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​HEPES ו -1% אנטיביוטיקה (פניצילין / סטרפטומיצין) ב- pH 7.4. לשמור על המדגם בבקבוק זכוכית על קרח. הערה: רקמת הגידול ניתן לעבד מספר שעות לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הובלה במדגם הגידול למעבדה בבקבוק הזכוכית על קרח. </li></ol> 2. הכנת פתרונות דיסוציאציה רקמות אנזימתי, אתפתרון מעכב טריפסין ואת הפתרונות אלגינט הערה: לפני תחילת ההליך תרבית תאים להכין את הפתרונות הבאים. לסנן את כל הפתרונות באמצעות מסנן הממברנה 0.22 מיקרומטר, לפני השימוש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן פתרון collagenase 1% על ידי המסת 5 מ&quot;ג collagenase (סוג I) ב 5 מיליליטר של חינם M199-סרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן טריפסין פתרון 0.01% על ידי המסת 0.01 גרם של טריפסין ב 10 מ&quot;ל של 0.3% PBS-EDTA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן פתרון מעכב 0.1% טריפסין על ידי המסת 2 מ&quot;ג של מעכבי טריפסין סויה ב 20 מיליליטר של חינם M199-סרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון DNAse ידי המסת 20 μl של DNAse אני 134 U / מ&quot;ל ​​ב 4 מ&quot;ל של הפתרון מעכב טריפסין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון EGTA (1.2 M) על ידי המסת 22.8 מ&quot;ג של EGTA ב 40 מ&quot;ל של 155 מ&quot;מ NaCl. התאם את ה- pH ל -7.4. המשך לנפח סופי של 50 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון HEPES (20 מ&quot;מ) על ידי המסת 238 HEPES מ&quot;ג ב 50 מ&quot;ל של 155 מ&quot;מ NaCl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן פתרון אלגינט 1.2% על ידי המסת 1.2אלגינט נתרן גרם ב 100 מ&quot;ל של פתרון HEPES. חיטוי הפתרון אלגינט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן פתרון סידן (102 מ&quot;מ) על ידי המסת 750 מ&quot;ג של CaCl 2 ב 50 מ&quot;ל פתרון HEPES, כדי להתאים את pH 7.4 </li></ol> Encapsulation תרבות אלגינט 3. תא ראשוני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך בארון זרימה למינרית, למקם את רקמת הגידול בצלחת פטרי 35 מ&quot;מ המכיל כ 20 מ&quot;ל של PBS Ca 2 + ו Mg 2+ חינם, pH 7.4 (PBS *). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את הרקמה עם פינצטה כירורגית ולמקם אותו עוד צלחת פטרי המכיל * PBS טרי, לשטוף בעדינות את הרקמה. חזרו על שלב זה עד כדוריות הדם האדומות ופסולת יוסרו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות פינצטה כירורגית, להחזיק את רקמת אדנומה בבלוטת יותרת המוח, ועם מספרי כירורגיות קטנים, לחתוך אותו לחתיכות קטנות. עם פיפטה פסטר עם קצוות מעוגלים, להעביר את שברי הרקמה ואת PBS * לתוך צינור 15 מ&quot;ל, צנטריפוגה ב 68 XG במשך 10 דקות ב RT. הערה: כדי לעגל את הקצוות של פסטרפיפטה, להבה קצה במקצת של פיפטה עם מבער בונזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את PBS * בעזרת פיפטה פסטר להוסיף 3-5 מ&quot;ל של תמיסת collagenase (כ 5 מ&quot;ל במשך 65 מ&quot;מ 3 של רקמות), לערבב פעמיים עד שלוש פעמים על ידי היפוך. דגירת רקמות collagenase למשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס רוטציה קבועה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה הצינור ב 68 XG במשך 10 דקות ב RT ולהסיר את collagenase עם פיפטה פסטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל של DNAse ומערבבים פעמיים עד שלוש פעמים על ידי היפוך, ואז צנטריפוגות את הצינור ב 68 XG במשך 10 דקות ב RT. הערה: אם הרקמה לא ניתק לחלוטין, לבצע עיכול אנזימטי השני עם טריפסין במשך 3 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. עצור את מערכת העיכול על ידי תוספת של 2 כרכים של פתרון מעכב טריפסין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant עם פיפטה פסטר וזורקים. Re- להשעות גלולה ב 1 עוצמת הקול של פתרון EGTA ומערבבים עם 2 כרכים של פתרון אלגינט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות מערבבים את ההשעיה תא אלגינטעל ידי pipetting עם פיפטה פסטר. קח מזרק סטרילי עם מחט 21 G, להסיר את הבוכנה; להשתמש פיפטה לטעון את המזרק עם הפתרון אלגינט ותא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בעדינות את הבוכנה לתוך המזרק בזהירות לוותר פתרון תאי אלגינט טיפה אחר טיפה לתוך כוס זכוכית המכיל כ 30 מיליליטר של הפתרון העשיר בסידן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את המחט של המזרק כ 5 ס&quot;מ עד הפתרון 2 CaCl. הג&#39;לים ההשעיה אלגינט תאים על קשר עם CaCl 2 כדי ליצור חרוזים כדוריים. שמור את החרוזים אלגינט בפתרון סידן במשך 5 דקות. הערה: מערבב את כוס הזכוכית שבו החרוזים מושמטים. הזז את זה לאט עם היד בתנועות מעגליות, כדי למנוע מהם להידבק זה לזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים בזהירות את הפתרון סידן עם פיפטה פסטר, ולשטוף את החרוזים פעמיים עם 3-5 מ&quot;ל של M199 מועשר 20% FBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את חרוזי אלגינט לתוך בתרבית רקמה T25 רגילהבקבוקון בעזרת מרית סטרילי, להוסיף 4-5 מ&quot;ל של M199 מועשר FBS 20% וטופחו על 37 מעלות צלזיוס חממה humidified עם 5% CO 2. שנה את המדיום תרבות מדי יום שלישי. </li></ol> 4. לשחרר תאים מן אלגינט הערה: לפני שחרור תאים מן החרוזים אלגינט, coverslips מ&quot;מ קוטר מעיל 13 עם פולי- D- ליזין. זהירות: גופרתי חומצה הוא מאכל מאוד חומצה, APTS יכול לגרום EYE ועור גירוי. יש להשתמש בכפפות גומי כדי בהודעות האלה חומרים כימיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במנדף, עם פינצטה נקודת לטבול את coverslips בצלחת פטרי זכוכית המכילים חומצה גופרתית מימית 20% במשך שעה 1 ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למזוג חומצה גופרתית, ולשטוף את coverslips חמש פעמים עם מים מזוקקים במשך 5 דקות כל אחד. באמצעות מקום פינצטה נקודת את coverslips נקי בצלחת פטרי המכילה 0.1 M NaOH במשך 5 דקות ב RT 15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למזוג NaOH ולשטוף פעם אחת עם לזקקמים הוביל, לשאוב את המים ולייבש את coverslips. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש micropipette כדי לצפות את coverslips עם APTS (aminopropyl-triethoxysilane) למשך 4 דקות (השתמש 500 μl עבור 6 coverslips) להציף את צלחת פטרי עם מים מזוקקים. במהירות לשאוב מים ולהמשיך לשטוף עם מים מזוקקים, הזזת coverslips עם פינצטה נקודת לאפשר למים לחדור מתחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב מים ולייבש את coverslips, באמצעות מקום פינצטה נקודת את coverslips לתוך צלחת פטרי נקי לעקר אותם בתוך מיקרוגל במהלך 3 פעמים, 45 שניות כל אחד. להוסיף 1,000 μl של מים סטריליים עד 100 מיקרוגרם של פולי- D- ליזין (0.1 מ&quot;ג / מ&quot;ל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה coverslips עם כ 50 μl של D- ליזין פולי במשך 5 דקות ב RT. לשאוב D- ליזין פולי לחלוטין. הערה: זה חשוב כי מסיסי פולי- D- ליזין במדיום תרבות יכול לעכב התפשטות תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את coverslips חמש פעמים עם מים סטריליים עבור 5 דקות כל אחד. לשאוב stמי erile ולאפשר coverslips להתייבש בתוך בארון זרימה למינרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח את cytoskeleton אקטין, לשחרר את תאי בלוטת יותרת המוח מן אלגינט. קח כמה חרוזים אלגינט מהבקבוק התרבות באמצעות קצה פיפטה 1 מ&quot;ל ולהכניס אותם לתוך צינור 15 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל של נתרן ציטרט 55 מ&quot;מ (לפזר 323.6 מ&quot;ג של Na 3 C 6 H 5 O 7, 2 H 2 O ב 20 מ&quot;ל HEPES פתרון) צנטריפוגות ב 68 XG במשך 10 דקות ב RT. לשאוב supernatant וזורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re- להשעות גלולה ב 1 מ&quot;ל של חם M199 מועשר 20% FSB; מערבבים את ההשעיה תא בעדינות עם פיפטה פסטר. זהירות: phalloidin ו DAPI רעיל. יש להשתמש בכפפות לטפל אלה חומרים כימיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לספור את התאים, להעביר 125 μl של פתרון כחול 0.4% Trypan לצינור 1.5 מ&quot;ל. הוסף 75 μl של M199 ו -50 μl של השעיה התא המתקבל בשלב האחרון (גורם לדילול = 5). מערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש קצה micropipette כדי Placדואר כ 10 μl של השעיה כחולות תאי Trypan בתא hemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים שכנגד hemocytometer באמצעות מיקרוסקופ הפוכה עם תאורת שלב ניגודיות. לספור את כל התאים בכיכר במרכז 1 מ&quot;מ וארבעה 1 מ&quot;מ ריבועים בפינה. השג את צפיפות התאים למיליליטר ידי הכפלת ספירת הממוצע לכל מ&quot;ר על ידי גורם לדילול -. 10 4 לדוגמה אם ספירת הממוצע לכל מ&quot;ר הוא 45 תאים x 5 x 104 = 2.25 x 106 תאים / מ&quot;ל. הערה: ספירת תאים בעשרה ריבועים של חדר hemocytometer. אל תסמוך תאי נגיעה בקו אמצעי בתחתית ובצד ימין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרע 35,000 תאים על 13 מ&quot;מ קוטר זכוכית coverslips מכוסה פולי- D- ליזין. </li></ol> הסדר 5. יקטינו נוגדנים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 48 שעות בתרבות, להסיר את המדיום תרבות עם פיפטה פסטר ובמהירות להוסיף 500 μl לכל coverslip של PBS, להסיר באופן מיידי את PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיקון ו permeabilize tהוא התאים עם 500 μl לכל coverslip של חיץ קיבעון (0.1 M צינורות, pH 6.75, 4% PEG-6000, 1 מ&quot;מ EGTA, 1 מ&quot;מ MgSO 4, 0.5% Triton X-100 ו -2% פורמלדהיד) במשך 10 דקות ב 37 מעלות C </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את חוצץ קיבעון ולהוסיף 500 μl לכל coverslip של paraformaldehyde 3.5% ב PBS במשך 30 דקות ב RT. הסר את הפתרון paraformaldehyde. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את coverslips שלוש פעמים על ידי הוספת 500 μl לכל coverslip של PBS במשך 5 דקות כל אחד. שוטפים את coverslips ב RT, ב תסיסה מתמדת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם אמוניום כלוריד 50 מ&quot;מ במשך 10 דקות, לשאוב את הפתרון אמוניום כלוריד וחזור על שלב 5.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירת התאים עם 1% BSA (IgG-חינם, פרוטאזות-חינם) ב PBS למשך 30 דקות, להסיר את פתרון BSA וחזור על שלב 5.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם 50 מיקרומטר של phalloidin rhodamine מצומדות עבור 7 דקות ב RT, חזור על שלב 5.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם 255 מיקרומטר של DAPI מדולל PBS במשך 5 דקות ב RT, חזור על שלב 5.4. לבסוף הר tהוא coverslips עם הרכבה בינונית ולאטום אותם עם לק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש תמונות של הסדרים cytoskeletal אקטין באמצעות מיקרוסקופ סריקת לייזר confocal עם מטרה 63X, באורך גל עירור 541 ננומטר. </li></ol>

<ol><li>Tibbitt, M. W., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogels+as+Extracellular+Matrix+Mimics+for+3D+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Hydrogels as Extracellular Matrix Mimics for 3D Cell Culture.</a> Biotechnol. Bioeng. 103 (4), 655-663 (2009).</li>
<li>Amsden, B., Turner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+characteristics+of+calcium+alginate+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Diffusion characteristics of calcium alginate gels.</a> Biotechnol. Bioeng. 65 (5), 605-610 (1999).</li>
<li>Andersen, T., Strand, B., Formo, K., Alsberg, E., Christensen, B. Alginates as biomaterials in tissue engineering. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAndersen%2C+T+%22Carbohydrate+chemistry%22">Carbohydrate chemistry</a>. Rauter, A. P., Lindhorst, T. K. Vol. 37, Royal Society of Chemistry. 227-258 (2012).</li>
<li>Jonitz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+capacity+of+human+chondrocytes+embedded+in+alginate+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Connect.+Tissue.+Res%22%5BJournal%5D)">Differentiation capacity of human chondrocytes embedded in alginate matrix.</a> Connect. Tissue. Res. 52 (6), 503-551 (2011).</li>
<li>Hill, E., Boontheekul, T., Mooney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+scaffolds+to+enhance+transplanted+myoblast+survival+and+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue.+Eng%22%5BJournal%5D)">Designing scaffolds to enhance transplanted myoblast survival and migration.</a> Tissue. Eng. 12 (5), 1295-1304 (2006).</li>
<li>Purcell, E. K., Singh, A., Kipke, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alginate+composition+effects+on+a+neural+stem+cell-seeded+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue.+Eng.+Part.+C.+Methods%22%5BJournal%5D)">Alginate composition effects on a neural stem cell-seeded scaffold.</a> Tissue. Eng. Part. C. Methods. 15 (4), 541-550 (2009).</li>
<li>Wee, S., Gombotz, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+release+from+alginate+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug.+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Protein release from alginate matrices.</a> Adv. Drug. Deliv. Rev. 31 (4), 267-285 (1998).</li>
<li>Tashjian, A. H. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+strains+of+hormone-producing+pituitary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Clonal strains of hormone-producing pituitary cells.</a> Methods. Enzymol. 58, 527-535 (1979).</li>
<li>Fasekas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+pituitary+adenomas+in+cell+cultures+by+light+and+electron+microscopic+morphology+and+immunolabeling%5BTitle%5D)+AND+%22Folia.+Histochem.+Cytobiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of human pituitary adenomas in cell cultures by light and electron microscopic morphology and immunolabeling.</a> Folia. Histochem. Cytobiol. 43 (2), 81-90 (2005).</li>
<li>Kohler, P. O., Bridson, W. E., Rayford, P. L., Kohler, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormone+Production+by+Human+Pituitary+Adenomas+in+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Hormone Production by Human Pituitary Adenomas in Culture.</a> Metabolism. 18 (9), 782-788 (1969).</li>
<li>Kletzkky, O. A., Marrs, R. P., Rundall, T. T., Weiss, M. H., Beierle, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monolayer+and+suspension+culture+of+human+prolactin-secreting+pituitary+adenoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Monolayer and suspension culture of human prolactin-secreting pituitary adenoma.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 138 (6), 660-664 (1980).</li>
<li>Melmed, S., Odenheimer, D., Carlson, H. E., Hershman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+functional+human+pituitary+tumor+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Establishment of functional human pituitary tumor cell cultures.</a> In Vitro. 18 (1), 35-42 (1982).</li>
<li>Thompson, K. W., Vincent, M. M., Jensen, F. C., Price, R. T., Schapiro, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+hormones+by+human+anterior+pituitary+cells+in+serial+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Soc.+Exp.+Biol.+Med%22%5BJournal%5D)">Production of hormones by human anterior pituitary cells in serial culture.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 102 (2), 403-408 (1959).</li>
<li>Cappabianca, P., Cavallo, L. M., Solari, D., Stagno, V., Esposito, F., de Angelis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+endonasal+surgery+for+pituitary+adenomas%5BTitle%5D)+AND+%22World+neurosurg%22%5BJournal%5D)">Endoscopic endonasal surgery for pituitary adenomas.</a> World neurosurg. 82 (6 Suppl), S3-S11 (2014).</li>
<li>Aplin, J. Model Matrices for Studing Cell Adhesion. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAplin%2C+J+%22Measuring+cell+adhesion%22">Measuring cell adhesion</a>. Curtis, A. S. G., Lackie, J. M. , John Wiley & Sons. 110-111 (1991).</li>
<li>Guiraud, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+prolactin-producing+pituitary+adenomas+in+three-dimensional+culture%5BTitle%5D)+AND+%22In.+Vitro.+Cell.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Human prolactin-producing pituitary adenomas in three-dimensional culture.</a> In. Vitro. Cell. Dev. Biol. 27 (3), 188-190 (1991).</li>
<li>Ma, H. L., Hung, S. C., Lin, S. Y., Chen, Y. L., Lo, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrogenesis+of+human+mesenchymal+stem+cells+encapsulated+in+alginate+beads%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Chondrogenesis of human mesenchymal stem cells encapsulated in alginate beads.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 64 (2), 273-281 (2003).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

פרוטוקול זה יש כמה שלבים קריטיים. הראשונה היא ההומוגניות גודל חרוז, אשר נדרש כדי לשמור על אותם תנאים של דיפוזיה של חומרים מזינים וגזים בכל תרבית תאים. מניסיוננו, שימוש במחט G 21 לעשות את החרוזים אלגינט מאפשר לרכישת תרבות יעילה של גודל חרוז אחיד. הגורם החשוב השני הוא המרחק בין המחט; המרחק זה חייב להיות לא יותר מ 5 סנטימטרים מהפתרון סידן להימנע פנינים מעוותות תאים מתים בשל ההתנגשות של הנחל של פתרון אלגינט / תא עם פני שטח של פתרון סידן. שלב קריטי שלישי הוא ערבוב הזכוכית שבו החרוזים מ...

פיגומים תלת ממדי נעשה שימוש נרחב ב culturing תא כי הם מספקים תמיכה מבנית תלת ממדי עבור תאים בתרבית לבין שמירה על התא אל התא תקשורת 1. באופן טבעי חומרים פולימריים נגזר שימשו לעשות תלת מימדי פיגומים כולל סוג אני קולגן, chitosan ו אלגינט. אלגינט הוא פולימר טבעי נגזר Macrocystispyrifera אצות הים החום (קלפ). פולימר זה מורכב מיחידות חוזרות של חומצה β-D-mannuronic (M) ו α-L-guluronic חומצה (G) 2 וצורות ג&#39;לים יציבים בנוכחות קטיונים divalent מסוימים, כגון סידן בריום. פתרונות סידן כלוריד (2 CaCl) משמשים גם מגיב crosslinking ליצירת חרוזי אלגינט. פתרונות אלגינט ירדו לתוך CaCl 2 להיוצר מייד ג&#39;לים כדורי תלת ממדי. כאשר הפתרון אלגינט הוא מעורבב עם תאים, התאים במארז לתוך b אלגינטEADS 3. יש אלגינט נכסים אשר אפשרו לו לשמש כמטריצה ​​אנקפסולציה של מגוון תאים, כולל chondrocytes 4, myoblasts השלד 5 ותאי גזע עצביים 6. זהו חומר אינרטי ומתיר דיפוזיה של חומרים מזינים, חמצן ומוצרי מטבולית המקיימות תא הישרדות ותפקוד; יתר על כן, בניגוד למערכות תרבות אחר מבוסס ג&#39;ל, תאים בתרבית בתוך חרוזי אלגינט יכול גם להיות משוחררת מן הפיגום באמצעות chelators סידן, כגון נתרן ציטרט, והתאים ניתן לקצור אז עבור חקירות נוספות 7. אדנומות יותרת המוח הם בדרך כלל גידולים שפירים עם שיעורי התפשטות נמוך. שורות תאי יותרת המוח אדנומה עכברוש היו בתרבית בהצלחת מערכת דו-ממדית 8. עם זאת, התרבות זו של גידולי תא יותרת המוח אנושיים פרשה אינה פיתוח יעיל; תאי בלוטת יותרת המוח הגידול התפזרו לגדול גרועבתרבות, תאים להפגין מצורף מוגבלת והפצה, והתאים בדרך כלל בצורת אגרגטים צפה בצלחת התרבות 9,10. מספר ניסיונות נעשו כדי לקבל השעיה תא יותרת המוח הגידול, כולל גישה האנזימטית פיזור מכני 11, גישה פיזור מכני אך ורק 12 ואת culturing של explants הגידול 10. עם גישות אלה, מחברים שונים שהשיגו תרבויות חסידות מעשיות עבור טווחים זמן שונים. הקיבולות של תאי פרשת גידול לשרוד במערכות דו ממדים אלה תלויים בסוג הגידול ושיעורי שגשוגם 9. עם זאת, בתרבויות לטווח ארוך, תאים עם פנוטיפים פיברובלסטים שולטים 11,13. המאמר זה מתאר שיטה לקבלת תרבות עיקרית מתא אדנומה בבלוטת יותרת המוח גלום חרוז אלגינט שמשחרר אותם עוד יותר מן הפיגום אלגינט המאפשר ניתוחים מפורטים שלהיבטים של הביולוגיה של התא שלהם, למשל, הסדרי cytoskeletal שלהם.

<table><tbody><tr><td><חזק>ריאגנט&nbsp; </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>199 מדיום תרבות&nbsp;</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>31100-027</td><td>לתרבות, לחמם ב-37 מעלות; אמבט מים C לפני השימוש&nbsp;</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי&nbsp;</td><td>PAA</td><td>A15-751</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט (NaHCO<תת>3)</td><td>Merck</td><td>106329</td><td></td></tr><tr><td>N-(2-הידרוקסיאתיל) פיפרזין-N&acute;-2אתנסולפונית חומצה (HEPES)</td><td>סיגמא&nbsp;</td><td>H-4034</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>PAA</td><td>P11-010</td><td></td></tr><tr><td>PBS (מי מלח חוצץ פוספט של Dulbecco)</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>21600-044</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג I</td><td>וורת'ינגטון</td><td>4176</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין&nbsp;</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>27250-018</td><td></td></tr><tr><td>אתילנדיאמין-טטראצטי חומצה (EDTA)</td><td>Research Organics</td><td>3002E</td><td></td></tr><tr><td>מעכב טריפסין סורבי&nbsp;</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>17075-029</td><td></td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Worthington</td><td>2139</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אלגינית, מ- Macrocystis pyrifera (קלפ)</td> <td>סיגמא&nbsp;</td><td>A-2158</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלורי (CaCl2)</td><td>J.T. Baker</td><td>1332</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ציטראט (Na3C6H5O7)</td><td>J.T. Baker</td><td>3646</td><td></td></tr><tr><td>Piperazine-N,N&prime;-bis(2-ethanesulfonic acid) (PIPES)</td><td>Research Organics</td><td>9624P</td><td></td></tr><tr><td>פוליאתילן גליקול 6000 (PEG 6000)</td><td>Calbiochem</td><td>528877</td><td></td></tr><tr><td>אתילן גליקול חומצה טטראצטית (EGTA)</td><td>Research Organics</td><td>9574E</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום סולפט (MgSO4)</td><td>J.T. Baker</td><td>2500</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Sigma</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>פורמלדהיד</td><td>J.T. Baker</td><td>2106</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום כלוריד (NH<תת>4Cl)</td><td>J.T. Baker</td><td>660</td><td></td></tr><tr><td>BSA בקר סרום אלבומין ללא IgG</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>001-000-161</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin&ndash; טטרמתילרודמין B איזותיוציאנט</td><td>סיגמא</td><td>P1951</td><td>רעיל. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה&nbsp;</td></tr><tr><td>4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול, דיהידרוכלוריד (DAPI)</td><td>אינוויטרוגן&nbsp;</td><td>D1306</td><td>רעיל. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה&nbsp;</td></tr><tr><td>חומצה גופרתית (H2SO4)</td><td>J.T. Baker</td><td>9681</td><td>קורוזיבית מאוד. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה&nbsp;</td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד (NAOH)</td><td>Merck</td><td>1.06498</td><td>עלול לגרום לגירוי בעיניים ובעור. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה&nbsp;</td></tr><tr><td>(3-אמינופרופיל)טריאתוקסילן (APTS)</td><td>סיגמא</td><td>A-3648</td><td></td></tr><tr><td>פולי-די-ליזין הידרוברומיד</td><td>סיגמא</td><td>P7280</td><td></td></tr><tr><td>תמיסה כחולה</td><td>טריפאן סיגמא</td><td>T8154&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td><שם>חזק&nbsp; &nbsp; </חזק></td><td><חזק>חברה&nbsp; </חזק></td><td><חזק>מק"ט&nbsp; </td><td>תגובות</td></tr><tr><td>ציוד&nbsp; </חזק></td><td></td><td></td><td>רעיל: עלול לגרום לסרטן. השתמש בכפפות כדי לטפל במגיב זה&nbsp;</td></tr><tr><td>מסובב&nbsp;</td><td>Boekel Scientific</td><td>דגם 230300</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>DuPont Corporation&nbsp;</td><td>דגם שייקר סורוול TC6</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>מכשירי קו מעבדה</td><td>דגם 314-820&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

תלת ממד תרבות אלגינט חרוז של תאי אדנומה יותרת המוח האנושי

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

שיטת תרבות תלת ממדים מתוארים שבו תאי אדנומה בבלוטת יותרת מוח העיקרי מגודלי חרוזי אלגינט. אלגינט הוא פולימר נגזר אצות ים חומות. בקצרה, רקמת הגידול נחתכה לחתיכות קטנות שהוגשה לבית עיכול אנזימטי עם collagenase טריפסין. לאחר מכן, השעית תא מתקבלת. השעית התאים הסרטנית היא מעורבב עם אלגינט נתרן 1.2% וצנחה פתרון 2 CaCl, ואת השעיית אלגינט / תא בג&#39;ל על קשר עם CaCl 2 כדי ליצור חרוזים כדוריים. התאים מוטבעים החרוזים אלגינט מסופקים עם חומרים מזינים שמספקים התקשורת והתרבות הועשר 20% FBS. תלת ממד התרבות בחרוזי אלגינט שומרת על יכולת הקיום של תאי אדנומה לתקופות זמן ארוכים, עד ארבעה חודשים. יתר על כן, התאים יכולים להיות משוחררים מן אלגינט על ידי שטיפת החרוזים עם ציטראט נתרן זרעו על coverslips זכוכית עבור ניתוחי immunocytochemical נוספת. שימוש cell מודל התרבות מאפשר קיבוע וויזואליזציה של שלד התא אקטין עם חוסר ארגון מינימלי. לסיכום, חרוזי אלגינט לספק מערכת תרבות אמינה לשמירה על תאי אדנומה בבלוטת יותרת המוח.

פרוטוקול זה יושם בהצלחה בתרבות ותחזוקה של תאי בלוטת יותרת המוח אדנומה בחרוזים אלגינט לתקופות זמן שונות איור 1 מציג תאים מוטבע חרוזים אלגינט לאחר שלושה חודשים.; תאים אלה להציג דו-שבירת צורות מעוגלות תחת מיקרוסקופ אור הפוך (איור 1). תרשים 2 מציגים את הלוקליזציה של N-cadherin בתאים אדנומה בבלוטת יותרת מוח עכברוש המוטבע אלגינט. N-cadherin הוא מקומי על קשר תאי תאים (איור 2 א ו 2...

תרבית תלת מימדית בחרוזי אלגינט, בשל פשטותה ויכולת השחזור שלה, נבחרה כדי לשמור על תאי אדנומה של יותרת המוח. ההליכים כללו עיכול אנזימטי ראשוני ודיסוציאציה מכנית של רקמת הגידול, והשעיית התאים שלאחר מכן נעטפה בחרוזי אלגינט.

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

המטרה הכוללת של שיטה זו היא לתאר תרבית תלת-ממדית של חרוזי אלגינאט לשמירה על תאי אדנומה של בלוטת הפיתואיטרי בבני אדם. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הביולוגיה של תאי גידול, כגון ביטוי של סמנים שונים לפלישה (invasiveness). היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שפיגום האלגינאט, בניגוד למערכות תלת-ממדיות אחרות, מאפשר לתאי אדנומה של בלוטת הפיתואיטרי להשתחרר מחרוזי האלגינאט לצורך בדיקות נוספות.את הפרוצדורה תדגים קרמן סולאנו-אגמה, עוזרת מחקר מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, בעבודה בתוך תא זרימה למינרית, הניחו רקמת גידול אדנומה שהושגה בעבר בצלחת של 35 מילימטר, המכילה כ-20 מיליליטר של PBS ללא סידן ומגנזיום. בעזרת פינצטה כירורגית, העבירו את הרקמה לצלוחית פטרי אחרת המכילה PBS טרי כדי לשטוף את הרקמה.חזור על ההעברה לבאפר טרי עד להסרת כדוריות הדם האדומות והפסולת. לאחר מכן, החזק את רקמת האדנומה של בלוטת הפיטואיטרי בעזרת פינצטה כירורגית, וגזור את הרקמה לחתיכות קטנות בעזרת מספריים כירורגיים קטנים. לאחר מכן, העבר את מקטעי הרקמה והבאפר לשפופרת של 15 milliliter באמצעות פיפט פסטור בעלת קצוות מעוגלים.סבבו בצנטריפוגה ב-68 ×g בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. לאחר הסבב, השתמשו בפיפט פסטור כדי להסיר את ה-PBS, והוסיפו שלוש עד חמש מיליליטר של תמיסת קולגנאז. ערבבו פעמיים עד שלוש על ידי הפיכת המבחנה, והדגרירו את הרקמה בקולגנאז ב-37 °C תחת סיבוב רציף למשך 30 דקות.סבב את המבחנה שוב בצנטריפוגה למשך 10 דקות, והסר את תמיסת הקולגנאז באמצעות פיפט פסטור. הוסף 5 milliliters של TNase, ועורר את התערובת פעמיים עד שלוש באמצעות הפיכת המבחנה, ולאחר מכן סבב את הדגימה שוב בצנטריפוגה. אם הרקמה לא התפרקה לחלוטין, בצע עיכול אנזימטי שני בהתאם לפרוטוקול הכתוב.בשלב הבא, שאבו את הנוזל העליון (supernatant) והשליכו אותו. לאחר מכן, השתמשו בנפח אחד של תמיסת EGTA כדי להחזיר את המשקע למצב של סספנזיה, וערבבו בעדינות עם שני נפחים של תמיסת אלגינאט. הוציאו את הבוכנה ממזרק סטרילי המכיל מחט בכילייב 21, והשתמשו בפיפטה כדי להעביר את תמיסת האלגינאט והתאים אל תוך המזרק.החדירו בעדינות את הבוכנה לתוך המזרק, והניחו את מחט המזרק בתוך הכוס, במרחק של כחמישה סנטימטרים מתמיס calcium chloride. כעת, טפטפו בזהירות את תרחיף התאים של ה-alginate לתוך הכוס. התרחיף יהפוך לג'ל במגע עם התמיסה וייצור חרוזיים כדוריים.ערבבו באיטיות את כלי הזכוכית בתנועות סיבוביות כדי למנוע מהחרוזים להידבק. לאחר מכן, השאירו את חרוזי האלגינט בתמיסת calcium chloride למשך חמש דקות. לאחר הדגירה, הסירו בזהירות את תמיסת הסידן, והשתמשו ב-3 עד 5 milliliters של M199 מועשר ב-20% of FBS כדי לשטוף את החרוזים פעמיים.בעזרת שפכטל סטרילי, העבירו את חרוזי האלגינט לבקבוק תרבית רקמות רגיל מסוג T25, והוסיפו ארבעה עד חמישה מיליליטרים של M199 עם FBS. דגרו בטמפרטורה של 37 °C עם 5% carbon dioxide באינקובטור לח.כדי לנתח את שלד התא מאקטין, השתמש בפפטה כדי להעביר 1 milliliter של חרוזי alginate מבקבוק התרבית לשפופרת של 15 milliliter. הוסף 5 milliliters של sodium citrate בריכוז 55 millimolar, וסבב בצנטריפוגה ב-68 ×g בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. לאחר מכן, שאב את העלייה (supernatant) והשלך אותה.באמצעות מיליליטר אחד של M199 חמים המועשר ב-20% FBS, נשעה את המשקע ונערבב בעדינות את תרחיף התאים. לאחר מכן, לאחר ספירת התאים בהתאם לפרוטוקול הכתוב, נזרע 35,000 תאים על לוחות כיסוי מזכוכית מצופים ב-poly-D-lycine בקוטר של 13 מיליליטר. לאחר דגירה של התאים למשך 48 שעות, נסיר את מצע הגידול ונשטוף את התאים פעם אחת באמצעות PBS.לאחר מכן, הוסף 500 µL לכל זכוכית כיסוי של תמיסת קיבוע לצורך קיבוע והחדרה לתאים, והדגר בטמפרטורה של 37 °C למשך 10 דקות. הסר את תמיסת הקיבוע והוסף 500 µL לכל זכוכית כיסוי של 3.5% paraformaldehyde ב-PBS. לאחר מכן, הדגר בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות לפני הסרת התמיסה.לבסוף, לאחר שטיפת התאים ודגירה בתמיסת phalloidin מצומד ל-rhodamine ו-dapi, בהתאם לפרוטוקול הכתוב, השתמשו במיקרוסקופ סריקה לייזרי קונפוקאלי עם עדשה אובייקטיבית 63x ואורך גל עירור של 541 כדי לרכוש תמונות של שלד התא מאקטין. איור זה מציג תאי אדנומה של בלוטת התת-המוח המוטמעים בחרוזי alginate לאחר שלושה חודשים. כפי שמוצג כאן, התאים מראים צורות עגולות בעלות שבירה כפולה תחת מיקרוסקופ אור הפוך.באיור זה ניתן לראות את הלוקליזציה של N-cadherin בתאי אדנומה של בלוטת הפיתוئیטריה של חולדה המוטמעים באלגינאט. ה-N-cadherin ממוקם בממגשי התאים, והגרעין מציג כרומטין פרוס. בניסוי זה, מדד השגשוג התקבל מ-10 אדנומות לא מתפקדות של בלוטת הפיתוئیטריה אנושית, באמצעות תגובתיות חיסונית ל-Ki67, והתקבל מדד סימון ממוצע של 19.2 פלוס או מינוס 1.5%.כאן, שלד האקטין של תאים שאינם פולשניים הראה צורות מוארכות עם סיבי מאמץ קטנים של אקטין. השפע והסידורים של פילמנטים של אקטין השתנו בהתאם לאדנומה של בלוטת הפיתואיטרי, ללא תלות במערכת התרבית. לדוגמה, באדנומה פולשנית שאינה מתפקדת, הצורה השלטת בקרב תאים אלו הייתה עגולה, עם טבעות קורטיקליות מקוטעות של פילמנטים של אקטין.לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע את התרבית הראשונית של אדנומה של בלוטת הפיתוئیטרסרי בתוך שלוש שעות. ניתן לבצע אנקפסולציה של אלגינאט בתוך 15 דקות אם הפעולה מבוצעת כראוי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לשמור על מרחק של לא יותר מחמישה סנטימטרים בין המחט לבין תמיסת הסידן, כדי למנוע היווצרות של פנינים קשיחות ותאי דם מתים כתוצאה מהתנגשות זרם תמיסת תאי האלגינאט עם פני תמיסת הסידן.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות נוספות, כגון קיבוע של חלקי האלגינאט, ולאחריו דהידרטציה באמצעות polyethylene glycol, כדי לענות על שאלות נוספות, כגון האופן שבו תאי אדנומה של בלוטת התת-היפופיזה מארגנים את השלד התאי שלהם בפיגום תלת-ממדי זה. לאחר צפייה בסרטון זה, צריכה להיות לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו מתחזקים תאי אדנומה של בלוטת התת-היפופיזה בתרבית תלת-ממדית של חרוזי אלגינאט.

three-dimensional-alginate-bead-culture-human-pituitary-adenoma

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

כאן אנו מתארים את השימוש של הרכבה עצמית 3 ממדי הפיגום לתרבות תאים אנושיים אבי עצביים. אנו מציגים פרוטוקול לשחרר את התאים מן הפיגומים כדי להיות מנותח למשל לאחר מכן על ידי cytometry הזרימה. פרוטוקול זה עשוי להתאים סוגי תאים אחרים לבצע מחקרים מפורטים באופן מכניסטי.

טיפוח האדם ובתאים עצבית ב Hydrogel עצמית להרכבת 3 מימדי פפטיד

אנו מציגים פלטפורמה פשוטה agarose כיסוי לגדול spheroids תאיים 3D באמצעות נוירואנדוקריניים שורות תאים סרטניים. שיטה זו מספקת דרך נוחה מאוד לבחון את ההשפעה של תרופות טיפוליות על תאים סרטניים נוירואנדוקריניים. זה יכול גם לעזור לנו לקבוע אדם spheroids סרטניים נוירואנדוקריניים לטיפול בסרטן.

האדם תאים סרטניים נוירואנדוקריניים קווים כמו מודל תלת ממדי לחקר הטיפול האנושי גידול נוירואנדוקריניים

סרטון זה מדגים טכניקה לביסוס תרבית תלת ממדית של תאי גלייה. תאי גלייה שמקורם במוח חולדה עטופים בתוך מטריצה פולימרית הניתנת להצלבה המכילה רכיבי מטריצה חוץ-תאיים. עם הדגירה במדיום גדילה, תאי הגליה מתרבים בתוך המטריצה התומכת ליצירת תרבית תלת ממדית.

הקמת תרבית תלת-ממדית של תאי גלייה שמקורם במוח חולדה

סרטון זה מדגים כיצד גליומאספירות, שמקורן בגידולי מוח, מופרדות לתאים בודדים ועטופות בהידרוג'ל המבוסס על חומצה היאלורונית. תהליך זה מקדם אינטראקציות בין תאים ויוצר מודל גליובלסטומה תלת-ממדי מובנה.

הידרוג'ל על בסיס חומצה היאלורונית לתרבית תלת מימדית של תאי גליובלסטומה

בשיטות סטנדרטיות תרבות תאים נלקחים מתוך הסביבה הפיזיולוגית שלהם וגדלו על משטח הפלסטיק של מנה. כדי לחקור את התנהגותם של תאים במח עצם אנושיים ראשוניים שיצרנו מערכת תרבות 3-D בו תאים גדלים בתנאים משחזרים microenvironment יליד הרקמות.

דגם תרבות רקמות תלת ממדי למחקר עיקרי עצם אדם מח וממאיר שלו

שלוש תרבות ממדית של תאי אפיתל החלב בקרום במרתף מחדש היא שיטה שימושית לשחזר את ארכיטקטורת vivo של השד השפיר, וכדי לבדל את הפנוטיפ הממאיר מפנוטיפ שפיר בשד. חשוב מכך, מערכת זו יכולה להיות מיושמת ללמוד קרצינומות פולשני ברקמות אחרות.

שלוש תרבויות ממדים: כלי ללמוד רגיל אדריכלות acinar לעומת שינוי ממאיר של תאי שד

תאי סרטן מוטבעים בג'ל קולגן ולאחר מכן נדחקים בג'ל פיברין תאי כדי ליצור מערכת תרבית תלת מימדית שבה ניתן לנטר את הפולשניות והיווצרות גידולי לווין.

תלת ממדי Assay תרבות לחקור הפולשנות תאים סרטניים היווצרות גידולים בלוויין

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לתרבות תלת מימדי של החולה-derived גליובלסטומה תאים בתוך orthogonally tunable biomaterials כחיקוי של מטריקס המוח. גישה זו מספקת במבחנה, פלטפורמה ניסיוני זה שומר על מאפיינים רבים של ויוו גליובלסטומה תאים בדרך כלל לאיבוד בתרבות.

חומצה היאלורונית מבוסס Hydrogels לתרבות תלת-ממדי של החולה-Derived גליובלסטומה תאים

תרבויות תלת ממדיות של החולה BMPC דגימות ו xenografts של סרטן הערמונית גרורתי העצם לשמור על טרוגניות תפקודית של גידולים המקורי שלהם וכתוצאה מכך ציסטות, spheroids ו מורכבים, גידול כמו אורגנואידים. כתב יד זה מספק אסטרטגיה מיטוב ופרוטוקול לתרבות תלת-ממדית של מטופלים הטרוגנית דגימות נגזרות והניתוח שלהם באמצעות IFC.

הקמה וניתוח של תלת מימדי (3D) אורגנואידים נגזר החולה סרטן הערמונית העצם גרורות דגימות ושתלי Xenografts להם

בלוטת יותרת המוח היא הרגולטור העיקרי של המערכת האנדוקרינית של הגוף. מאמר זה מתאר את ההתפתחות של organoids מן בלוטת יותרת המוח העכבר כמו מודל הפריה חוץ גופית 3D רומן לחקור את אוכלוסיית תאי הגזע של הבלוטה אשר הביולוגיה והתפקוד נשארים מובנים היטב.

פיתוח של Organoids מן בלוטת יותרת המוח עכבר כמו מודל במבחנה כדי לחקור ביולוגיה של תאי גזע בלוטת יותרת המוח

הפרוטוקול הנוכחי מתאר פלטפורמה ניסיונית להערכת ההשפעות של רמזים מכניים וביוכימיים על תגובות כימותרפיות של תאי גליובלסטומה שמקורם בחולה בתרביות מטריצה-מימטיות תלת-ממדיות באמצעות התקן תאורת UV מותאם אישית המאפשר פוטו-קרוסלינקינג בתפוקה גבוהה של הידרוג'לים עם תכונות מכניות הניתנות לכוונון.

מערכי הידרוג'ל מאפשרים תפוקה מוגברת לסינון השפעות של רכיבי מטריצה וטיפולים במודלים תלת-ממדיים של גידולים

למד שיטת תרבית תלת-ממדית בחרוזי אלגינט לתאי אדנומה יותרת המוח האנושית. טכניקה זו מאפשרת חקר ביולוגיית תאי גידול וביטוי סמני חדירות בסביבה פיזיולוגית רלוונטית.

תלת ממד תרבות אלגינט חרוז של תאי אדנומה יותרת המוח האנושי

גלה סרטונים נוספים