Name: אינדוקציה של הפעלה האימהית חיסונית בעכברים בשלב אמצע הריון עם ויראלי לחקות פולי (אני: C) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: חקור שיטה לאינדוקציה של הפעלה אימהית חיסונית בעכברים בהריון באמצעות חיקוי ויראלי. פרוטוקול זה מאפשר חקר השפעת תפקוד לקוי של המערכת החיסונית על התפתחות המוח והתנהגות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו לכבד את פול ה פטרסון המנוח ד&quot;ר על תרומתו התקדמות המודל MIA, אוטיזם, סכיזופרניה ומחקר. אנו מכירים סרקיס ק Mazmanian עבור אהדתו הגדולה על פרוטוקול זה; רובן מ באיון, איווט גרסיה-פלורס, קארן ג Lencioni, ולסלי א נוימן לסיוע מינהלי; עלי Khoshnan ויאן ג Ko על הסיוע על הצילומים; איליין י סיאו ונטליה Malkova עבור עצתם על אינדוקציה MIA; ג&#39;פרי ס Cochrane, חואקין גוטיירז, קוואן פ לי, חיימה רודריגז, לורנה ג סנדובל, ונטלי א Verduzco לגידול צאן המומחה שלהם. עבודה זו נתמכה על ידי פרס מרכז NIH קונטה (NIH 5P50MH086383-04, לפול ח פטרסון); Autism Speaks (# 7670, לפול ח פטרסון); סימונס קרן (# 322,839, כדי סרקיס ק Mazmanian); אימון NIH גרנט (NIH / NRSA T32GM07616 כדי ק-HC); מלגת מחקר לתואר ראשון קיץ Caltech (SURF) (כדי ZY); Amgen חוקרים תוכנית בקלטק (כדי ZY); ו fr אחוות דוקטוריםאום הלאומית למדע המועצה, טייוואן (המל&quot;ל 101-2917-I-564-039, לו&#39;-LW).

<ol><li>Brown, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiologic+studies+of+exposure+to+prenatal+infection+and+risk+of+schizophrenia+and+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism.</a> Dev Neurobiol. 72 (10), 1272-1276 (2012).</li>
<li>Fatemi, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+viral+theory+of+schizophrenia+revisited%3A+abnormal+placental+gene+expression+and+structural+changes+with+lack+of+evidence+for+H1N1+viral+presence+in+placentae+of+infected+mice+or+brains+of+exposed+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">The viral theory of schizophrenia revisited: abnormal placental gene expression and structural changes with lack of evidence for H1N1 viral presence in placentae of infected mice or brains of exposed offspring.</a> Neuropharmacology. 62 (3), 1290-1298 (2012).</li>
<li>Shi, L., Tu, N., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+influenza+infection+is+likely+to+alter+fetal+brain+development+indirectly%3A+the+virus+is+not+detected+in+the+fetus%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Maternal influenza infection is likely to alter fetal brain development indirectly: the virus is not detected in the fetus.</a> Int J Dev Neurosci. 23 (2-3), 299-305 (2005).</li>
<li>Knuesel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+immune+activation+and+abnormal+brain+development+across+CNS+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">Maternal immune activation and abnormal brain development across CNS disorders.</a> Nat Rev Neurol. 10 (11), 643-660 (2014).</li>
<li>Meyer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+poly%28i%3AC%29+exposure+and+other+developmental+immune+activation+models+in+rodent+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Prenatal poly(i:C) exposure and other developmental immune activation models in rodent systems.</a> Biol Psychiatry. 75 (4), 307-315 (2014).</li>
<li>Meyer, U., Feldon, J., Yee, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+fetal+brain+cytokine+imbalance+hypothesis+of+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophr+Bull%22%5BJournal%5D)">A review of the fetal brain cytokine imbalance hypothesis of schizophrenia.</a> Schizophr Bull. 35 (5), 959-972 (2009).</li>
<li>Boksa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prenatal+infection+on+brain+development+and+behavior%3A+a+review+of+findings+from+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Effects of prenatal infection on brain development and behavior: a review of findings from animal models.</a> Brain Behav Immun. 24 (6), 881-897 (2010).</li>
<li>Hsiao, E. Y., McBride, S. W., Chow, J., Mazmanian, S. K., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+an+autism+risk+factor+in+mice+leads+to+permanent+immune+dysregulation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Modeling an autism risk factor in mice leads to permanent immune dysregulation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (31), 12776-12781 (2012).</li>
<li>Ito, H. T., Smith, S. E., Hsiao, E., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+immune+activation+alters+nonspatial+information+processing+in+the+hippocampus+of+the+adult+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Maternal immune activation alters nonspatial information processing in the hippocampus of the adult offspring.</a> Brain Behav Immun. 24 (6), 930-941 (2010).</li>
<li>Smith, S. E., Li, J., Garbett, K., Mirnics, K., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+immune+activation+alters+fetal+brain+development+through+interleukin-6%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Maternal immune activation alters fetal brain development through interleukin-6.</a> J Neurosci. 27 (40), 10695-10702 (2007).</li>
<li>Shi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+maternal+immune+system+alters+cerebellar+development+in+the+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Activation of the maternal immune system alters cerebellar development in the offspring.</a> Brain Behav Immun. 23 (1), 116-123 (2009).</li>
<li>Hsiao, E. Y., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+maternal+immune+system+induces+endocrine+changes+in+the+placenta+via+IL-6%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Activation of the maternal immune system induces endocrine changes in the placenta via IL-6.</a> Brain Behav Immun. 25 (4), 604-615 (2011).</li>
<li>Wu, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interaction+between+maternal+immune+activation+and+alpha+7+nicotinic+acetylcholine+receptor+in+regulating+behaviors+in+the+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">The interaction between maternal immune activation and alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor in regulating behaviors in the offspring.</a> Brain Behav Immun. , (2015).</li>
<li>Garay, P. A., Hsiao, E. Y., Patterson, P. H., McAllister, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+immune+activation+causes+age-+and+region-specific+changes+in+brain+cytokines+in+offspring+throughout+development%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Maternal immune activation causes age- and region-specific changes in brain cytokines in offspring throughout development.</a> Brain Behav Immun. 31, 54-68 (2013).</li>
<li>Garbett, K. A., Hsiao, E. Y., Kalman, S., Patterson, P. H., Mirnics, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+maternal+immune+activation+on+gene+expression+patterns+in+the+fetal+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Effects of maternal immune activation on gene expression patterns in the fetal brain.</a> Transl Psychiatry. 2, e98(2012).</li>
<li>Hsiao, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota+modulate+behavioral+and+physiological+abnormalities+associated+with+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microbiota modulate behavioral and physiological abnormalities associated with neurodevelopmental disorders.</a> Cell. 155 (7), 1451-1463 (2013).</li>
<li>Naviaux, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antipurinergic+therapy+corrects+the+autism-like+features+in+the+poly%28IC%29+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Antipurinergic therapy corrects the autism-like features in the poly(IC) mouse model.</a> PLoS One. 8 (3), e57380(2013).</li>
<li>Pratt, L., Ni, L., Ponzio, N. M., Jonakait, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+inflammation+promotes+fetal+microglial+activation+and+increased+cholinergic+expression+in+the+fetal+basal+forebrain%3A+role+of+interleukin-6%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Maternal inflammation promotes fetal microglial activation and increased cholinergic expression in the fetal basal forebrain: role of interleukin-6.</a> Pediatr Res. 74 (4), 393-401 (2013).</li>
<li>Schwartzer, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+immune+activation+and+strain+specific+interactions+in+the+development+of+autism-like+behaviors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Maternal immune activation and strain specific interactions in the development of autism-like behaviors in mice.</a> Transl Psychiatry. 3, e240(2013).</li>
<li>Khan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+effects+of+maternal+immune+activation+on+depression-like+behavior+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Long-term effects of maternal immune activation on depression-like behavior in the mouse.</a> Transl Psychiatry. 4, e363(2014).</li>
<li>Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+transformations+of+neurodevelopmental+sequences+across+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species.</a> J Neurosci. 33 (17), 7368-7383 (2013).</li>
<li>Abazyan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+interaction+of+mutant+DISC1+and+immune+activation+produces+adult+psychopathology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Prenatal interaction of mutant DISC1 and immune activation produces adult psychopathology.</a> Biol Psychiatry. 68 (12), 1172-1181 (2010).</li>
<li>Meyer, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+behavioral+and+pharmacological+dysfunctions+following+disruption+of+the+fetal+brain+balance+between+pro-inflammatory+and+IL-10-mediated+anti-inflammatory+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Adult behavioral and pharmacological dysfunctions following disruption of the fetal brain balance between pro-inflammatory and IL-10-mediated anti-inflammatory signaling.</a> Mol Psychiatry. 13 (2), 208-221 (2008).</li>
<li>Vuillermot, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+immune+activation+interacts+with+genetic+Nurr1+deficiency+in+the+development+of+attentional+impairments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Prenatal immune activation interacts with genetic Nurr1 deficiency in the development of attentional impairments.</a> J Neurosci. 32 (2), 436-451 (2012).</li>
<li>Bechard, A., Nicholson, A., Mason, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Litter+size+predicts+adult+stereotypic+behavior+in+female+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Litter size predicts adult stereotypic behavior in female laboratory mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (4), 407-411 (2012).</li>
<li>Harvey, L., Boksa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stereological+comparison+of+GAD67+and+reelin+expression+in+the+hippocampal+stratum+oriens+of+offspring+from+two+mouse+models+of+maternal+inflammation+during+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">A stereological comparison of GAD67 and reelin expression in the hippocampal stratum oriens of offspring from two mouse models of maternal inflammation during pregnancy.</a> Neuropharmacology. 62 (4), 1767-1776 (2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

MIA אינדוקציה בחלונות זמן שונים מדאיגה אירועי התפתחות המוח שונים במכרסמים, וכתוצאה מכך מובילה ליקויי neuropathologies התנהגותיים שונים אצל צאצאיהם. כאן, אנו תארנו פרוטוקול לגרום MIA בעכברים עם פולי (אני: C) הזרקה ב E12.5. שיטה זו של אינדוקצית MIA מובילה התנהגותי, נוירולוגיות, אימונולוגית, וחריגות עיכול הקשורים לאוטיזם וסכיזופרניה אצל צאצאיהם 8,10,11,16. חשוב לציין, כי MIA הוא גורם סיכון סביבתי, את הפנוטיפ של הצאצאים צפויים להיות וריאציה גבוהה מזו של עכברים ממודלים גנטיי...

הרעיון של הפעלת החיסון האמהית (MIA) מקורו מחקרים באפידמיולוגיה על הקשר בין זיהום אימהי עם אוטיזם וסכיזופרניה 1. בשל העדר של פתוגנים ויראליים שכפול לגילוי בשליה או במוח העוברי לאחר זיהום ויראלי אימהי 2,3, השפעת הזיהום על הצאצאים משערת להיגרם על ידי הפעלת המערכת האימהית החיסון ולא פתוגנים עצמם . כדי להבהיר את היחס אפקט-ו-הגורם בין MIA והפרעות פסיכיאטריות, הזרקת מסונתז כימית, polyinosinic גדילי RNA כפול ויראלי לחקות: חומצה polycytidylic (פולי (אני: C)) לתוך מכרסמים בהריון כבר בשימוש נרחב כמו במודל חיה עבור MIA 4,5. פולי (אני: C) הוא מוכר על ידי קולטן לחיוג כמו 3 (TLR3), ומנהל מערכתי של פולי (אני: C) גורם לתגובה דלקתית חריפה ויראלי דמוי. אחד המנגנונים שבאמצעותם פולי (אני: C) יחסי ציבורליקויי neuropathologies התנהגותי oduces אצל צאצאיהם הם לגרום לחוסר איזון של ציטוקינים דלקתיים פרו ואנטי בציר האימהי-שליה-העוברי 6. כמה קבוצות אימצו את המודל MIA להבין את האטיולוגיה של הפרעות פסיכיאטריות 7, ובשל אינטרסים מגוונים בקרב קבוצות מחקר, בנקודות זמן שונות של הפעלה חיסונית שימשו להשיג הפרעות שונות על התפתחות המוח והתנהגויות 7. המעבדה פול ה פטרסון במכון הטכנולוגי של קליפורניה מאמצת את האסטרטגיה של הזרקת פולי (אני: C) לעכברים בהריון עובריים 12.5 ימים (E12.5), אשר הוכיחה בהצלחה כי MIA הוא מסוגל גרימת התנהגותי, נוירולוגיות, ושינויים אימונולוגיים אצל צאצאיהם המשויכים אוטיזם וסכיזופרניה 8-11. העבודות הקודמות שלנו מראות כי צאצאי MIA להציג ליקויים התנהגותיים (למשל, impairmen החברתיt, גירעון תקשורת, התנהגות שחוזרת על עצמו, התנהגות כמו חרדה, ונסתרי עיכוב גירעון 8,10,12), חוסר איזון dysregulation וציטוקינים חיסוני 8,13,14, שינוי של ביטוי גנים במוח עוברי 15, אובדן של תאי פורקינג ב lobule VII של מוח קטן 11, שינוי של נכסים הסינפטי בהיפוקמפוס 9, אינטראקצית סביבת x גן 13, שינוי של חדירות מעי, ורכב חיידקים במעיים 16. יתר על כן, אסטרטגיות טיפוליות-מונעות מפותחות גם 13,16,17 מערכת מודל זה. גרימת MIA ב E12.5, ואחרים הראו כי MIA מייצרת ההפעלה microglial עוברית שינוי התפתחותי כולינרגית בקידמתו הבזליים 18, אינטראקציה ספציפית זן 19, המוח מוחין synaptosomal מומים ultrastructural, מומים hyperfunction שרשרת הנשימה במיטוכונדריה מוחין, downregulation של מולקולות synaptosomal מוחין 17 ,התנהגויות דיכאוניות דמוי, ירידת קוגניציה הגברה לטווח ארוך בהיפוקמפוס (LTP), והגירעון הנוירוגנזה בהיפוקמפוס מבוגר 20. כאן, אנו מספקים שיטה מפורטת של איך לגרום MIA ב E12.5 ידי פולי (אני: C), כמו גם פרדיגמות של איך ליישם מודל זה ללמוד את האטיולוגיה של אוטיזם וסכיזופרניה. חשוב לציין כי MIA הוא גורם סיכון עבור מגוון רחב של הפרעות 4, ותוצאותיה רגישות במיוחד את הזמן ואת שיטת האינדוקציה וכן הבעלים של הסכרים בהריון. ככזה, אפילו סתירות קלות בין מעבדות לעתים לגרום שחזור נמוך ו / או פנוטיפים שונים אצל צאצאיהם. השיטה שלנו היא תוכננה במיוחד עבור אלו המעוניינים ללמוד MIA כגורם סיכון סביבתי לאוטיזם וסכיזופרניה, ואת התיאור המפורט הניתנים יסייע לחוקרים לשפר השחזור של הנתונים שלהם.

<table><tbody><tr><td>פולינוזיני&ndash; חומצה פוליציטידילית מלח אשלגן</td><td>SIGMA</td><td>P9582</td><td></td></tr><tr><td>0.9% נתרן כלורי INJ. USP</td><td>HOSPIRA</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>MONOJECT אינסולין סירינג' 3/10 מ"ל 29 גרם x 1/2 אינץ'</td> <td>COVIDIEN</td><td>8881600145</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות כובע בורג חרוטי</td><td>ארה"ב SCIENTIFIC</td><td>1500-1211</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop 1000 ספקטרופוטומטר</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>1000</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>אופציונלי Wild Heerbrugg</td><td>M5A</td><td>אופציונלי</td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים קצה אינוקס גודל .10 X .06 מ"מ</td><td>Roboz</td><td>RS-5045</td><td>מגיב</td></tr><tr><td>ייצוב RNA אופציונלי RNAlater</td><td>Qiagen</td><td>76104</td><td>מגיב</td></tr><tr><td>TRIzol</td> אופציונלי <td>Life Technologies</td><td>15596-026&nbsp;</td><td>אופציונלי</td></tr><tr><td>RQ1 ללא Rnase, DNase</td><td>Promega</td><td>M610A</td><td>ערכת</td></tr><tr><td>סינתזה אופציונלית iScript cDNA</td><td>Bio-Rad</td><td>170-8891</td><td>אופציונלי</td></tr><tr><td>FastStart אוניברסלי SYBR ירוק מאסטר תערובת עם ROX&nbsp;</td><td>Roche</td><td>4913922001</td><td>אופציונלי</td></tr><tr><td>PCR בזמן אמת</td><td>ABI</td><td>7300</td> פריימר <td>אופציונלי</td></tr><tr><td>: Il6 forward</td><td>Life Technologies</td><td>TAGTCCTTCCCCCCCAATTTCC</td> פריימר <td>אופציונלי</td></tr><tr><td>: Il6 Reverse</td><td>Life Technologies</td><td>TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC</td> פריימר <td>אופציונלי</td></tr><tr><td>: beta-actin forward</td><td>Life Technologies</td><td>AGAGGGAAATCGTGCGTGAC</td><td>אופציונלי</td></tr><tr><td>פריימר: בטא-אקטין טכנולוגיות חיים הפוכות</td><td></td><td>CAATAGTGATGACCTGGCCGT</td><td>אופציונלי</td></tr><tr><td>מיקרו-אמפ אופטי 96 בארות</td><td>צלחת תגובה טכנולוגיות חיים</td><td>4306737</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>MicroAmp סרט דבק אופטי&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>4311971</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>EthoVision</td><td>Noldus</td><td>EthoVision</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>מכשירי SR-LAB (PPI)</td><td>San Diego Instruments&nbsp;</td><td>SR-LAB</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>שיש</td><td>PENN-PLAX</td><td>אבני חן כחולות Optionl</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline (DPBS)</td><td>Life Technologies</td><td>21600-069</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>MACRON</td><td>2621-59</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1000 S</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>נתרן אזיד</td><td>Sigma</td><td>S2002</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>Triton x-100</td><td>Sigma</td><td>X100</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>תמיסת מי חמצן</td><td>Sigma</td><td>18312</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>Goat Serum</td><td>Vector Laboratories</td><td>S-1000</td><td></td></tr><tr><td>Optionl Rabbit נוגדן נגד קלבינדין</td><td>Abcam</td><td>ab11426</td><td></td></tr><tr><td>Optionl עז ביוטינית נגד ארנב IgGantibody</td><td>Vector Laboratories</td><td>BA-1000</td><td>Optionl</td></tr><tr><td>VECTASTAIN ABC Kit</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-4000</td><td>Optionl</td></tr></tbody></table>

אינדוקציה של הפעלה האימהית חיסונית בעכברים בשלב אמצע הריון עם ויראלי לחקות פולי (אני: c)

Induction of Maternal Immune Activation in Mice at Mid-gestation Stage with Viral Mimic Poly(I:C)

מודל הפעלה חיסונית אימהית (MIA) מוערך יותר ויותר כמודל מכרסמים לגורם הסיכון הסביבתי להפרעות פסיכיאטריות שונות. מחקרים רבים הוכיחו כי מודל MIA מסוגל להראות תוקף פנים, בנייה וניבוי הרלוונטיים לאוטיזם וסכיזופרניה. כדי לדגמן MIA, החוקרים משתמשים לעתים קרובות בחיקוי ויראלי פוליאינוסיני: חומצה פוליציטידילית (poly(I:C)) כדי להפעיל את מערכת החיסון במכרסמים בהריון. בדרך כלל, הצאצאים מסכר המופעל על ידי מערכת החיסון מציגים חריגות התנהגותיות ושינויים פיזיולוגיים הקשורים לאוטיזם וסכיזופרניה. עם זאת, הזרקת פולי (I:C) במינונים שונים ובנקודות זמן שונות עלולה להוביל לתוצאות שונות על ידי הפרעה להתפתחות המוח בשלבים שונים. כאן אנו מספקים שיטה מפורטת להשראת MIA על ידי הזרקה תוך-צפקית (i.p.) של 20 מ"ג/ק"ג פולי (I:C) באמצע ההריון 12.5 ימים (E12.5). שיטה זו הוכחה כגורמת לתגובה דלקתית חריפה בציר האם-שליה-עובר, מה שבסופו של דבר מביא להפרעות במוח ולפנוטיפים התנהגותיים הקשורים לאוטיזם וסכיזופרניה.

<html> הזרקה של 20 מ&quot;ג / קילו פולי (אני: C) ב E12.5 יכולה לעורר תגובה דלקתית חריפה בציר האימהי-שליה-עוברית לזרז השפעה כרונית להתפתחות מוח פנוטיפים התנהגותיים 12,13. רמות גבוהות של ציטוקינים מעודדי דלקת, Interleukin (IL) -6, הוא אינדיקטור אמין של תגובה דלקתית חריפה לאחר MIA. זמן השיא עבור ביטוי גנים Il6 בשליה והמוח של העובר נמצא hr 3 שלאחר פולי (אני: C) הזרקת 12,13. הראינו פולי (אני: C) גורם ביטוי גני Il6 ...

הפעלה חיסונית אימהית (MIA) היא מודל לגורם סיכון סביבתי לאוטיזם וסכיזופרניה. מטרת מאמר זה היא לספק הליך שלב אחר שלב כיצד לגרום ל-MIA בעכברים בהריון על מנת לשפר את יכולת השחזור של מודל זה.

אינדוקציה של הפעלה האימהית חיסונית בעכברים בשלב אמצע הריון עם ויראלי לחקות פולי (אני: C)

Maternal immune activation (MIA) model is increasingly well appreciated as a rodent model for the environmental risk factor of various psychiatric ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להשרות הפעלה חיסונית אימהית, או MIA, בעכברים באמצעות הזרקה תוך-peritonium של המדמה הוויראלי poly בשלב העוברי של אמצע ההיריון. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הנוירו-אימונולוגיה, כגון כיצד תפקוד חיסוני לקוי יכול להוביל להפרעות בהתפתחות המוח ובהתנהגות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא תוכננה במיוחד עבור חוקרים המעוניינים לחקור MIA כגורם סיכון סביבתי לאוטיזם וסכיזופרניה.בדרך כלל, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקלו בקשיים, מכיוון שהבדלים קטנים בשיטת השראת ה-MIA עלולים לשנות באופן משמעותי את התגובה ההמשכית בצאצאים. כדי להקים זוגות להרבעה מתוזמנת, התחילו בגידול של חמש עכברות לכל כלוב, אחת לצד השנייה בכלובים סטנדרטיים לעכברים כדי לסנכרן את מחזורי הנסתרת (estrus) שלהן, והשתמשו במנקב אוזניים כדי לסמן כל בעל חיים. בין שעה לשעתיים לפני תחילת מחזור החשיכה, העבירו את העכברות כך שיהיו שתיים בכל כלוב, שקלו ורשמו את משקל הגוף של כל עכברה בנפרד, ולאחר מכן הוסיפו עכבר זכר אחד לכל כלוב שבו שתי עכברות.בין אפס לארבע שעות לאחר סיום מחזור החשיכה, הרימו בעדינות כל עכברה נקבה מבסיס הזנב, ואפשרו לבעל החיים להיאחז בסבכת הכלוב בעזרת הרגליים הקדמיות, כדי לקבוע אם קיימת מסה לבננה בפתח הנרתיק. אם לא נראה פקק, הכניסו בעדינות טיפ של פיפטה בנפח 200 microliter לתוך פתח הנרתיק. התנגדות כתוצאה מקרישה מאשרת את היווצרותו של פקק.העבירו את העכברים עם הפקק לנכס חדש, שכן נוכחותו של פקק נמקני מאשרת רק שבוצע זיווג. בימים עובריים 10.5 עד 11.5, הרימו כל נקבה עם פקק בבסיס הזנב ובדקו אם קיימת בליטה בבטן, לאחר מכן שקלו את העכברים כדי לאשש את ההיריון, ושכנו את בעלי החיים ההריות בכלובים נקיים בנפרד. שקלו את אבקת ה-poly(I:C) בתוך מבחנה קונית של 50 milliliter.ביום עוברי 12.5, הוסיפו את הנפח המתאים של 0.9% sodium chloride לנפח התואם של poly(I:C) בשפופרת קונוסית, וסגרו את הפקק. גלגלו בעדינות את טיפת הסלין על גבי האבקה עד שהתמיסה תהיה צלולה. לאחר מכן, צנטריפוגו את השפופרת והעבירו את תמיסת ה-poly(I:C) לשפופרת מיקרוצנטריפוגה.השתמש בספקטרופוטומטר כדי למדוד את היחס בין 260 ל-280 של תמיסת ה-poly(I:C). היחס צריך להיות בין 1.54 ל-1.82, כפי שמתואר על ידי היצרן. לאחר מכן, שקול את העכבר הראשון ומלא מזרק אינסולין של 0.3 milliliter בנפח המחושב התואם של תמיסת ה-poly(I:C).לאחר מכן, הרימו את העכבר באמצעות הזנב, הניחו אותו על גג הכלוב וקבעו אותו באחיזת עורף. כעת הכניסו את המחט, כאשר הצד המשופע פונה כלפי מעלה, למרכז שבין שתי הפטמות העליונות בזווית של כ-20 מעלות ביחס לעכבר, והזריקו את תמיסת ה-poly(I:C). לאחר מכן, החזירו את העכבר לכלוב.לאחר שכל העכברים הוזריקו, שכן את הכלובים בחדר שקט עם תנועה מועטה כדי למנוע השפעות מבלבלות אחרות, ושקול את העכברים למחרת בבוקר. לפחות שלושה ימים לפני הבדיקה ההתנהגותית, החלף את מצע הכלוב של צאצאי ההפעלה החיסונית האימהית (MIA) הבוגרים, בני 8 עד 12 שבועות. 30 דקות לפני הבדיקה, דאג להסתגלות של העכברים לחדר הבדיקה.לבדיקת עיכוב תגובת הבהלה (pre-pulse inhibition), הגבילו את העכברים בצילינדרי פלקסיגלס המונחים על חיישן פ piezoelectric. התאימו את העכבר לתא עיכוב תגובת הבהלה למשך חמש דקות, באמצעות שישה ניסיונות של רעש לבן בעוצמה של 120 decibels. לאחר מכן, חשפו את העכברים לתערובות אקראיות של צלילים, כפי שמפורט בטבלה, והשוו את התוצאות לתגובת הבהלה הבסיסית (baseline startle response), כדי לקבוע את רמת עיכוב תגובת הבהלה של חיות ה-MIA.עבור מבחן שדה פתוח, מקמו עכבר בפינה של זירה ריבועית פתוחה, בעלת אזור מרכזי מוגדר של 17 על 17 סנטימטר, והקליטו את מסלולו של העכבר למשך 10 דקות באמצעות מצלמה המותקנת בתקרה. לאחר מכן, כמתו את מספר הכניסות לאזור המרכזי ואת הזמן שהועבר בו. עבור מבחן קבורת גולות, התאימו עכבר לכלוב בדיקה המכיל מצע של שבבי עץ אספן נקיים ודחוסים בעומק של 5 סנטימטר למשך 10 דקות, לאחר מכן החזירו את העכבר לכלוב הבית, וסדרו בעדינות 20 גולות זכוכית בצבע כחול כהה ובקוטר של 1.5 סנטימטר במטריצה של ארבע על חמש בתוך כלוב הבדיקה.כעת החזירו את העכבר לכלוב הבדיקה למשך 10 דקות, לאחר מכן החזירו את בעל החיים לכלוב הבית, וספרו את מספר הגולות שנקברו במהלך תקופת הבדיקה. הזרקה של Poly(I:C) ביום עוברי 12.5 יכולה לעורר תגובה דלקתית חריפה בציר השילייה-עובר האימהי, ולהוביל להשפעה כרונית על התפתחות המוח ועל פנוטיפים התנהגותיים. ואכן, poly(I:C) משרה ביטוי גבוה יותר של הגן Il6 בטחול האימהי, בשילייה ובמוח העובר, שלוש שעות לאחר ההזרקה.באופן כללי, בהשוואה לצאצאים בוגרים שטופלו בתמיסת מלח, צאצאים בוגרים עם MIA מראים פחות כניסות לאזור המרכזי ומשך זמן קצר יותר באזור המרכזי במבחן השטח הפתוח. בעלי חיים שהוזרק להם poly(I:C) מפגינים גם התנהגויות קבירה תכופות יותר במבחן קבירת הגולות, ועכבה מקדימה (pre-pulse inhibition) נמוכה יותר. אובדן של תאי פורינז'ה באונה השביעית של המוחון הוא סימן היכר נוסף של צאצאים עם MIA, כאשר נצפו פחות תאי פורינז'ה חיוביים לקאלבינדין באונה השביעית של המוחון בבעלי חיים אלו, בהשוואה לקבוצות ביקורת שהוזרק להן מלח.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור שלא להפריע לעכברים ההריות לאחר השראת MIA. לאחר מכן, ניתן להשרות גורמים נוספים, כגון סטרס פוסטנטלי או זיהום, כדי לחקור אינטראקציות נוספות עם הסביבה.

induction-maternal-immune-activation-mice-at-mid-gestation-stage-with

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מקור: Lutz, D., et al. הערכת פרמטרים של נוירופלסטיות אולטרה-מבנית לאחר התמרה ברחם של מוח העכבר וחוט השדרה המתפתחים. J. Vis. Exp. (2019).סרטון זה מדגים התמרה ויראלית באמצעות הזרקה תוך רחמית בעוברי עכברים. מכינים עכברה בהריון לניתוח, ומבצעים חתך בקו האמצע כדי לחשוף את קרני הרחם. תערובת של וירוס המכיל את הגן הרצוי וצבע מעקב מוזרקת לעוברים בתוך שקי הרחם במיקומים הממוקדים. לאחר מכן מחזירים את קרני הרחם לפני התפירה.

התמרה ויראלית ברחם בעכבר

ציטומגלווירוס זיהום (HCMV) אנושי של ילודים מייצג גורם חשוב של פיגור שכלי, אולם האירועים המולקולריים המובילים להיווצרות מחלה הנגרמת וירוס עדיין הם הבינו היטב. כדי לחקור את הדינמיקה של דלקת המוח, התאמנו כל הבעלים...

שימוש<em&gt; בvivo</em&gt; הדמיה למעקב אחר ההתקדמות של זיהום ציטומגלווירוס עכבר ניסיוני בילודים

פיתחנו מודל של chorioamnionitis כדי לדמות חשיפה עוברית לדלקת אימהית (FEMI) ללא סיבוכים של אורגניזמים חיים כדי לבחון את ההשפעות של FEMI על התפתחות מערכת העיכול של הצאצאים. זה מאפשר מחקר של סיבות מכניות להתפתחות של פגיעה במעיים בעקבות chorioamnionitis.

מודל מורין של חשיפה עוברית לדלקת אימהית כדי ללמוד את ההשפעות של Chorioamnionitis חריפה על התפתחות מעיים שזה עתה נולד

זיהום אימהי הוא גורם סיכון להפרעות נוירו-התפתחותיות. מודלים עכבריים של הפעלת מערכת החיסון האימהית (MIA) עשויים להבהיר את השפעת הזיהום על התפתחות המוח ותפקודו. כאן, הנחיות כלליות ונוהל ניתנים כדי לייצר צאצאים עמידים ורגישים באופן אמין שנחשפו ל- MIA.

יצירת מודל ניתן לשחזור של הפעלה חיסונית אימהית באמצע ההריון באמצעות Poly(I:C) לחקר רגישות וחוסן בצאצאים

לידה מוקדמת (לידה &lt; שבוע 37) היא בעיה בריאותית עולמית דחופה עם אפשרויות מניעה וטיפול לא אופטימליות. אנו מציגים מודל עכברי של לידה מוקדמת הנגרמת על ידי זיהום חיידקי בנרתיק ומתארים כיצד לנתח את התחלואה והתמותה של היילודים כתוצאה מכך.

מידול זיהום נרתיקי עולה, לידה מוקדמת ותחלואה בילודים בעכברים

המאמר מספק פרוטוקול מקיף ליצירת מודל עכבר להפעלה חיסונית אימהית (MIA) לחקר השפעות הדלקת המוקדמת בהריון על התפתחות נוירולוגית, כולל מדדים מרכזיים להבטחת אמינות ושחזוריות.

יצירת מודל עכבר להפעלת מערכת החיסון של האם בהריון מוקדם להערכת דלקת טרום-לידית על התפתחות נוירולוגית

וידאו זה מראה כיצד לגרום hypophysitis אוטואימוניות בעכברים SJL וכיצד להעריך חומרתה ידי histopathology.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

כאן אנו מתארים שיטת הבידוד של stellate בתאי הכבד מהכבד העכבר. עבור טיהור תא stellate, כבדי עכבר...

שבעה צעדים Stellate תאים

חיידקי ליסטריה הוא אורגניזם מודל ללימוד המערכת החיסונית ורגישות גנטית תאיים לחיידקים בעכברים. שיטה זו מאפשרת למדוד עומס חיידקים ליצור תא בודד השעיות של הכבד והטחול מעכברים לניתוח FACS לקבוע שינויים בתאי המערכת החיסונית עקב זיהום ליסטריה.

מדידת עומס בקטריאלי ותגובות החיסון של עכברים נגועים עם חיידקי ליסטריה</em

פרוטוקול ספציפי ומהיר במקביל לחקירת פונקציה נכונה לב, דלקת ריאות, והתגובה החיסונית מתואר ככלי למידה. וידאו ודמויות מתארים פיזיולוגיה וטכניקות microdissection בצוות גישה מאורגנת שניתנת להתאמה לשימוש לקטן למחקרים בגודל גדולים.

מדידות נכונות חדרית סיסטולי לחץ בשילוב עם קציר של ריאה ודגימות רקמה חיסוניות בעכברים

חקור שיטה לאינדוקציה של הפעלה אימהית חיסונית בעכברים בהריון באמצעות חיקוי ויראלי. פרוטוקול זה מאפשר חקר השפעת תפקוד לקוי של המערכת החיסונית על התפתחות המוח והתנהגות.

אינדוקציה של הפעלה האימהית חיסונית בעכברים בשלב אמצע הריון עם ויראלי לחקות פולי (אני: C)

גלה סרטונים נוספים