Name: הר שלם באתרו כלת שיטה עבור חלזון הרכיכות Stagnalis Lymnaea (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: למד היברידיזציה in situ שלמים באתרו לחלזון Lymnaea stagnalis. שיטה זו מאפשרת הדמיית תבניות ביטוי גנים בזחלים ועוברים לחקר ביולוגיה התפתחותית ואבולוציה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מימון כדי DJJ דרך JA2108 # פרויקט DFG / 2-1.

<ol><li>Smith, S. A., Wilson, N. G., Goetz, F. E., Feehery, C., Andrade, S. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolving+the+evolutionary+relationships+of+molluscs+with+phylogenomic+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Resolving the evolutionary relationships of molluscs with phylogenomic tools.</a> Nature. 480 (7377), 364-367 (2011).</li>
<li>Brusca, R. C., Brusca, G. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBrusca%2C+RC+%22Invertebrates%22">Invertebrates</a>. , Sinauer. Sunderland. (2002).</li>
<li>Food and Agriculture Organisation of the United Nations. Global Aquaculture Production 1950-2013. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.fao.org/fishery/statistics/global-aquaculture-production/query/en">http://www.fao.org/fishery/statistics/global-aquaculture-production/query/en</a> (2013).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schistosomiasis%3A+number+of+people+treated+in+2011%5BTitle%5D)+AND+%22Week.+Epi.+Rec%22%5BJournal%5D)">Schistosomiasis: number of people treated in 2011.</a> Week. Epi. Rec. 88, 81-88 (2013).</li>
<li>Henry, J. Q., Collin, R., Perry, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+slipper+snail%2C+Crepidula.%3A+an+emerging+lophotrochozoan+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">The slipper snail, Crepidula.: an emerging lophotrochozoan model system.</a> Biol. Bull. 218 (3), 211-229 (2010).</li>
<li>Perry, K. J., Henry, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9-mediated+genome+modification+in+the+mollusc%2C+Crepidula+fornicata%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9-mediated genome modification in the mollusc, Crepidula fornicata.</a> Genesis. 53 (2), 237-244 (2015).</li>
<li>Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+biology+of+memory+storage%3A+a+dialog+between+genes+and+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Bio.+Rep%22%5BJournal%5D)">The molecular biology of memory storage: a dialog between genes and synapses.</a> Bio. Rep. 24, 475-522 (2004).</li>
<li>Jackson, D. J., Ellemor, N., Degnan, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlating+gene+expression+with+larval+competence%2C+and+the+effect+of+age+and+parentage+on+metamorphosis+in+the+tropical+abalone+Haliotis+asinina%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Biol%22%5BJournal%5D)">Correlating gene expression with larval competence, and the effect of age and parentage on metamorphosis in the tropical abalone Haliotis asinina.</a> Mar. Biol. 147, 681-697 (2005).</li>
<li>Carter, C. J., Farrar, N., Carlone, R. L., Spencer, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+expression+of+a+molluscan+RXR+and+evidence+for+its+novel%2C+nongenomic+role+in+growth+cone+guidance%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Developmental expression of a molluscan RXR and evidence for its novel, nongenomic role in growth cone guidance.</a> Dev. Biol. 343 (1-2), 124-137 (2010).</li>
<li>Rittschof, D., McClellan-Green, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molluscs+as+multidisciplinary+models+in+environment+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Pollut.+Bull%22%5BJournal%5D)">Molluscs as multidisciplinary models in environment toxicology.</a> Mar. Pollut. Bull. 50 (4), 369-373 (2005).</li>
<li>Liu, M. M., Davey, J. W., Jackson, D. J., Blaxter, M. L., Davison, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+set+of+maternal+genes%3F+Insights+from+a+molluscan+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A conserved set of maternal genes? Insights from a molluscan transcriptome.</a> Int. J. Dev. Biol. 58 (6-8), 501-511 (2014).</li>
<li>Hohagen, J., Herlitze, I., Jackson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimised+whole+mount+in+situ.+hybridisation+protocol+for+the+mollusc+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">An optimised whole mount in situ. hybridisation protocol for the mollusc Lymnaea stagnalis.</a> BMC Dev. Biol. 15 (1), 19(2015).</li>
<li>Raven, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+the+egg+of+Limnaea+stagnalis.+L.+from+oviposition+till+first+cleavage%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Neth.+J.+Zool%22%5BJournal%5D)">The development of the egg of Limnaea stagnalis. L. from oviposition till first cleavage.</a> Arch. Neth. J. Zool. 1 (4), 91-121 (1946).</li>
<li>Raven, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+the+egg+of+Limnaea+Stagnalis.+L.+from+the+first+cleavage+till+the+troghophore+stage%2C+with+special+reference+to+its%27+chemical+embryology%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Neth.+J.+Zool%22%5BJournal%5D)">The development of the egg of Limnaea Stagnalis. L. from the first cleavage till the troghophore stage, with special reference to its' chemical embryology.</a> Arch. Neth. J. Zool. 1 (4), 353-434 (1946).</li>
<li>Raven, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenesis+in+Limnaea+stagnalis.+and+its+disturbance+by+lithium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool%22%5BJournal%5D)">Morphogenesis in Limnaea stagnalis. and its disturbance by lithium.</a> J. Exp. Zool. 121 (1), 1-77 (1952).</li>
<li>Raven, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature+and+origin+of+the+cortical+morphogenetic+field+in+Limnaea%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The nature and origin of the cortical morphogenetic field in Limnaea.</a> Dev. Biol. 7, 130-143 (1963).</li>
<li>Morrill, J. B., Blair, C. A., Larsen, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulative+development+in+the+pulmonate+gastropod%2C+Lymnaea+palustris.%2C+as+determined+by+blastomere+deletion+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Regulative development in the pulmonate gastropod, Lymnaea palustris., as determined by blastomere deletion experiments.</a> J Exp Zool. 183 (1), (1973).</li>
<li>Van Den Biggelaar, J. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+the+phases+of+the+cell+cycle+during+the+period+of+asynchronous+division+up+to+the+49-cell+stage+in+Lymnaea%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Emb.+Exp.+Morph%22%5BJournal%5D)">Timing of the phases of the cell cycle during the period of asynchronous division up to the 49-cell stage in Lymnaea.</a> J. Emb. Exp. Morph. 26 (3), 367-391 (1971).</li>
<li>Verdonk, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+in+early+development+of+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene expression in early development of Lymnaea stagnalis.</a> Dev. Biol. 35 (1), 29(1973).</li>
<li>Gall, J. G., Pardue, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+and+Detection+of+Rna-Dna+Hybrid+Molecules+in+Cytological+Preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+Of+The+National+Academy+Of+Sciences+Of+The+United+States+Of+America%22%5BJournal%5D)">Formation and Detection of Rna-Dna Hybrid Molecules in Cytological Preparations.</a> Proceedings Of The National Academy Of Sciences Of The United States Of America. 63 (2), 378-383 (1969).</li>
<li>Iijima, M., Takeuchi, T., Sarashina, I., Endo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+patterns+of+engrailed+and+dpp+in+the+gastropod+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Expression patterns of engrailed and dpp in the gastropod Lymnaea stagnalis.</a> Dev Genes Evol. 218 (5), 237-251 (2008).</li>
<li>Shimizu, K., Sarashina, I., Kagi, H., Endo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+functions+of+Dpp+in+gastropod+shell+formation+and+shell+coiling%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Possible functions of Dpp in gastropod shell formation and shell coiling.</a> Dev Genes Evol. 221 (2), 59-68 (2011).</li>
<li>Koop, D., Richards, G. S., Wanninger, A., Gunter, H. M., Degnan, B. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+MAPK+signaling+in+patterning+and+establishing+axial+symmetry+in+the+gastropod+Haliotis+asinina%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of MAPK signaling in patterning and establishing axial symmetry in the gastropod Haliotis asinina.</a> Dev. Biol. 311 (1), 200-212 (2007).</li>
<li>Lartillot, N., Lespinet, O., Vervoort, M., Adoutte, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+pattern+of+Brachyury+in+the+mollusc+Patella+vulgata+suggests+a+conserved+role+in+the+establishment+of+the+AP+axis+in+Bilateria%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Expression pattern of Brachyury in the mollusc Patella vulgata suggests a conserved role in the establishment of the AP axis in Bilateria.</a> Development. 129 (6), 1411-1421 (2002).</li>
<li>Jackson, D. J., Wörheide, G., Degnan, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+expression+of+ancient+and+novel+molluscan+shell+genes+during+ecological+transitions%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Dynamic expression of ancient and novel molluscan shell genes during ecological transitions.</a> BMC Evol. Biol. 7 (1), 160(2007).</li>
<li>Jackson, D. J., Meyer, N. P., Seaver, E., Pang, K., McDougall, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+expression+of+COE.+across+the+Metazoa+supports+a+conserved+role+in+neuronal+cell-type+specification+and+mesodermal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Developmental expression of COE. across the Metazoa supports a conserved role in neuronal cell-type specification and mesodermal development.</a> Dev Genes Evol. 220, 221-234 (2010).</li>
<li>Perry, K. J., Lyons, D. C., Truchado-Garcia, M., Fischer, A. H. L., Helfrich, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deployment+of+regulatory+genes+during+gastrulation+and+germ+layer+specification+in+a+model+spiralian+mollusc%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Deployment of regulatory genes during gastrulation and germ layer specification in a model spiralian mollusc.</a> Dev. Dyn. , (2015).</li>
<li>Iijima, M., Takeuchi, T., Sarashina, I., Endo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+patterns+of+engrailed+and+dpp+in+the+gastropod+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Expression patterns of engrailed and dpp in the gastropod Lymnaea stagnalis.</a> Dev Genes Evol. 218 (5), 237-251 (2008).</li>
<li>Shimizu, K., Iijima, M., Setiamarga, D. H. E., Sarashina, I., Kudoh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left-right+asymmetric+expression+of+dpp+in+the+mantle+of+gastropods+correlates+with+asymmetric+shell+coiling%5BTitle%5D)+AND+%22EvoDevo%22%5BJournal%5D)">Left-right asymmetric expression of dpp in the mantle of gastropods correlates with asymmetric shell coiling.</a> EvoDevo. 4 (1), 15(2013).</li>
<li>Christodoulou, F., Raible, F., Tomer, R., Simakov, O., Trachana, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ancient+animal+microRNAs+and+the+evolution+of+tissue+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ancient animal microRNAs and the evolution of tissue identity.</a> Nature. 463, (2010).</li>
<li>Koga, M., Kudoh, T., Hamada, Y., Watanabe, M., Kageura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+triple+staining+method+for+double+in+situ+hybridization+in+combination+with+cell+lineage+tracing+in+whole-mount+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">A new triple staining method for double in situ hybridization in combination with cell lineage tracing in whole-mount Xenopus embryos.</a> Dev Growth Differ. 49 (8), 635-645 (2007).</li>
<li>Lauter, G., Söll, I., Hauptmann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-color+fluorescent+in+situ+hybridization+in+the+embryonic+zebrafish+brain+using+differential+detection+systems%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Two-color fluorescent in situ hybridization in the embryonic zebrafish brain using differential detection systems.</a> BMC Dev. Biol. 11 (1), 43(2011).</li>
<li>Davison, A., Frend, H. T., Moray, C., Wheatley, H., Searle, L. J., Eichhorn, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mating+behaviour+in+Lymnaea+stagnalis.+pond+snails+is+a+maternally+inherited%2C+lateralized+trait%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Mating behaviour in Lymnaea stagnalis. pond snails is a maternally inherited, lateralized trait.</a> Biol. Lett. 5 (1), 20-22 (2009).</li>
<li>Kuroda, R., Endo, B., Abe, M., Shimizu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chiral+blastomere+arrangement+dictates+zygotic+left-right+asymmetry+pathway+in+snails%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chiral blastomere arrangement dictates zygotic left-right asymmetry pathway in snails.</a> Nature. 462 (7274), 790-794 (2009).</li>
<li>Shibazaki, Y., Shimizu, M., Kuroda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+handedness+is+directed+by+genetically+determined+cytoskeletal+dynamics+in+the+early+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Body handedness is directed by genetically determined cytoskeletal dynamics in the early embryo.</a> Curr. Biol. 14 (16), 1462-1467 (2004).</li>
<li>Lu, T. Z., Feng, Z. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sodium+leak+current+regulates+pacemaker+activity+of+adult+central+pattern+generator+neurons+in+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A sodium leak current regulates pacemaker activity of adult central pattern generator neurons in Lymnaea stagnalis.</a> PLoS One. 6 (4), e18745(2011).</li>
<li>Dawson, T. F., Boone, A. N., Senatore, A., Piticaru, J., Thiyagalingam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Splicing+of+an+Invertebrate+Beta+Subunit+%28LCav-beta%29+in+the+N-Terminal+and+HOOK+Domains+and+Its+Regulation+of+LCav1+and+LCav2+Calcium+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Gene Splicing of an Invertebrate Beta Subunit (LCav-beta) in the N-Terminal and HOOK Domains and Its Regulation of LCav1 and LCav2 Calcium Channels.</a> PLoS ONE. 9 (4), e92941(2014).</li>
<li>Smith, S. A., Wilson, N. G., Goetz, F. E., Feehery, C., Andrade, S. C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolving+the+evolutionary+relationships+of+molluscs+with+phylogenomic+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Resolving the evolutionary relationships of molluscs with phylogenomic tools.</a> Nature. 480 (7377), 364-367 (2011).</li>
<li>Gregory, T. R., Nicol, J. A., Tamm, H., Kullman, B., Kullman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eukaryotic+genome+size+databases%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc.+Acids.+Res%22%5BJournal%5D)">Eukaryotic genome size databases.</a> Nuc. Acids. Res. 35 (Database issue), D332-D338 (2007).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

השיטה המתוארת כאן מאפשרת הדמיה היעילה של תעתיקי רנ&quot;א עם הנראה רמות ביטוי שונות בתוך כל שלבי ההתפתחות של Lymnaea stagnalis. כדי להסיר עבר זחלים מן הכמוסות שלהם אנו trialed מגוון של כימיקלים, הלם אוסמוטי וטיפולים פיסיים ודווח encapsulated- אחר פיתוח אורגניזמים מודל. עם זאת, בידינו השיטה אנו מתארים כאן היא טכניקת התפוקה גבוהה רק שמסירה את הקרום קופסית הקשה מבלי לפגוע בעוברים וזחלים. בעקבות decapsulation, החומר יכול להיות מאוחסן או, או מטופלים עם משטר בשלב מסוים של prote...

רכיכות הן קבוצה של בעלי חיים אשר מחזיקים את האינטרס של מגוון רחב של דיסציפלינות מדעיות. למרות מגוון מורפולוגיים שלהם 1, מיני עושר (שני רק פרוקי הרגליים מבחינת מספר מינים 2) ורלוונטי למגוון רחב של מסחרי 3, רפואיות ומדעיים 4 סוגיות 5-8, קיימים מעט מאוד מיני molluscan כי יכול לטעון בשני מודלים מדעיים מאובזרים וקל לתחזוקה בסביבה להיות במעבדה. רכיכות אחד משמשת במידה רבה על ידי דיסציפלינות כגון נוירוביולוגיה 9, ecotoxicology 10 וביולוגיה אבולוציונית ולאחרונה 11,12, הוא stagnalis Lymnaea, בעיקר בגלל ההפצה הנרחבת שלה וקל קיצוניים של תחזוקה. למרות הפופולריות שלו כאורגניזם &quot;מודל&quot; וההיסטוריה הארוכה של שימוש על ידי ביולוגים התפתחותיים 13-19, טווח וכוח של כלים מולקולריים לרשות L. stagnהקהילה המדעית alis טמונה הרחק מאחור כי מודלים של בעלי חיים מסורתיים יותר (דרוזופילה, עכבר, קיפוד ים, נמטודות). הרצון שלנו לפתח Lymnaea כמודל מולקולרי נובע עניין המנגנונים המולקולריים מנחה היווצרות פגז. זה הניע לנו לחדד סט של טכניקות שתאפשרנה להדמיה היעילה, עקבית ורגישה של ביטוי גנים במהלך ההתפתחות של Lymnaea. הר שלם הכלאה באתרו (WMISH) מועסק נרחב עבור מגוון רחב של אורגניזמים מודל כבר בשימוש במשך יותר מ -20 40 שנה. בתחפושות שונות שלה, שאני עורך יכול להיות מועסק על מנת לבצע לוקליזציה לוקוסים ספציפיים מרחבית על הכרומוזומים, rRNA, mRNA ו-RNAs מיקרו. אחד האתגרים שאנחנו צריכים לטפל לפני תחילת תהליך זיקוק שיטת WMISH עבור L. stagnalis היה בסוגיית בעדינות וביעילות לחילוץ עוברים וזחלים של שלבים הנעים בין tהוא קפסולות הביצה שבה הם מופקדים. מיצוי זה, או &#39;decapsulation&#39;, צריך להיות מושג בצורה יעילה כדי לאסוף חומר מתאים לשיעור נתון בניסוי באתרו, ואילו באותו זמן שמירה על שלמות מורפולוגיים הסלולר. בעוד אורגניזמים מודל אחרים גם לעבור התפתחות כמוסה, בידינו אף אחת מהשיטות ודווחו מינים אלה יכולים להיות מועסקים בהצלחה ל stagnalis. מטרות העל של שיטה זו הן אפוא: לחלץ ל stagnalis עובר זחלים מן הכמוסות שלהם באופן תפוקה גבוהה, כדי להחיל טיפולים מראש כלאה המביאות למרב את אות WMISH, להכין עוברים וזחלים עם WMISHsignals משביע רצון עבור הדמיה.

<table><tbody><tr><td>מלקחיים במשקל נוצה</td><td>Ehlert & שותף</td><td>#4181119</td><td></td></tr><tr><td>צינורות סיליקון</td><td>Glasger&auml; tebau OCHS GmbH</td><td>760070</td><td></td></tr><tr><td>נימי זכוכית</td><td>הילגנברג</td><td>1403547</td><td></td></tr><tr><td>12 כלי תרבית רקמות</td><td>באר Carl Roth</td><td>CE55.1</td><td></td></tr><tr><td>37% פורמלדהיד</td><td>Carl Roth</td><td>P733.1</td><td>זהירות - עלול לגרום לסרטן. רעיל בשאיפה, במגע עם העור ובמקרה של בליעה. רעיל: סכנה להשפעות בלתי הפיכות חמורות מאוד בשאיפה, במגע עם העור ובמקרה של בליעה.</td></tr><tr><td>אתילנדיאמין חומצה טטראצטית</td><td>קרל רוט</td><td>CN06.3</td><td>זהירות - גורם לגירוי בעיניים. עלול לגרום לגירוי בדרכי הנשימה ובעור. הימנע מנשימת אבק. יש להימנע ממגע עם העיניים, העור והבגדים. יש להשתמש רק עם אוורור נאות</td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד</td><td>Carl Roth</td><td>2189.1</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Carl Roth</td><td>9127.1</td><td>אזהרה - עלול להזיק בשאיפה. עלול לגרום לגירוי בדרכי הנשימה. עלול להזיק אם נספג דרך העור. עלול לגרום לגירוי בעור. עלול לגרום לגירוי בעיניים. עלול להזיק במקרה של בליעה.</td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>קארל רוט</td><td>3957.1</td><td></td></tr><tr><td>פיקול סוג 400</td><td>קארל רוט</td><td>CN90.1</td><td></td></tr><tr><td>פוליוויניל פירולידון K30 (MW 40)</td><td>קארל רוט</td><td>4607.1</td><td>אזהרה - עלול להזיק בשאיפה. עלול לגרום לגירוי בדרכי הנשימה. עלול להזיק אם נספג דרך העור. עלול לגרום לגירוי בעור. עלול לגרום לגירוי בעיניים. עלול להזיק במקרה של בליעה.</td></tr><tr><td>Nuclease freeBovine סרום אלבומין</td><td>קארל רוט</td><td>8895.1</td><td></td></tr><tr><td>זרע סלמון</td><td>קארל רוט</td><td>5434.2</td><td></td></tr><tr><td>הפרין</td><td>קארל רוט</td><td>7692.1</td><td>זהירות - תופעות לוואי כוללות דימום, גירוי מקומי. תגובה אלרגית אפשרית במקרה של שאיפה, בליעה/מגע. מגרה את העיניים/עור/דרכי הנשימה. רגישות יתר אפשרית. במהלך ההריון דווח כמגביר את הסיכון ללידה שקטה</td></tr><tr><td>פרוטאינאז-K</td><td>קארל רוט</td><td>7528.1</td><td></td></tr><tr><td>גליצין</td><td>קארל רוט</td><td>3790.2</td><td></td></tr><tr><td>פורממיד נטול יונים</td><td>קארל רות'</td><td>P040.1</td><td>אזהרה - מגרה את העיניים והעור. עלול להזיק בשאיפה, במגע עם העור ובמקרה של בליעה. עלול לגרום נזק לילד שטרם נולד. היגרוסקופי.</td></tr><tr><td>פורממיד סטנדרטי</td><td>Carl Roth</td><td>6749.3</td><td>אזהרה - מגרה את העיניים והעור. עלול להזיק בשאיפה, במגע עם העור ובמקרה של בליעה. עלול לגרום נזק לילד שטרם נולד. היגרוסקופי.</td></tr><tr><td>טריאתנולאמין</td><td>קארל רוט</td><td>6300.1</td><td>זהירות - הימנע מנשימת אדים או ערפל. יש להימנע ממגע עם העיניים. יש להימנע ממגע ממושך או חוזר עם העור. יש לשטוף היטב לאחר הטיפול.</td></tr><tr><td>אנהידריד אצטי</td><td>קארל רוט</td><td>4483.1</td><td>זהירות - גורם לכוויות קשות בעור ובעיניים. מגיב באלימות עם מים. מזיק במקרה של בליעה. אדים מגרים את העיניים ודרכי הנשימה</td></tr><tr><td>חומצה מאלית</td><td>קרל רוט</td><td>K304.2</td><td>זהירות - מסוכן מאוד במקרה של קשר עין (מגרה), של בליעה, . מסוכן במקרה של מגע עור (מגרה), של שאיפה (מגרה ריאות). מעט מסוכן במקרה של מגע עור (מחלחל). קורוזיבי לעיניים ולעור.</td></tr><tr><td>בנזיל בנזואט</td><td>Sigma</td><td>B6630-250ML</td><td>אזהרה - עלול להזיק בשאיפה. עלול לגרום לגירוי בדרכי הנשימה. עלול להזיק אם נספג דרך העור. עלול לגרום לגירוי בעור. עלול לגרום לגירוי בעיניים. מזיק במקרה של בליעה.</td></tr><tr><td>בנזיל אלכוהול</td><td>סיגמא</td><td>10,800-6</td><td>אזהרה - מזיק במקרה של בליעה. מזיק בשאיפה. גורם לגירוי חמור בעיניים.</td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>קארל רוט</td><td>3783.1</td><td></td></tr><tr><td>אבקת חסימה</td><td>Roche</td><td>11096176001</td><td></td></tr><tr><td>Anti DIG Fab שברי Fab AP מצומד</td><td>Roche</td><td>11093274910</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Carl Roth</td><td>9090.3</td><td></td></tr><tr><td>4-Nitro blue tetrazolium chloride בדימתילפורממיד&nbsp;</td><td>Carl Roth</td><td>4421.3</td><td>זהירות - עלול לגרום נזק לילד שטרם נולד. מזיק בשאיפה ובמגע עם העור. מגרה את העיניים.</td></tr><tr><td>5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate</td><td>Carl Roth</td><td>A155.3</td><td>זהירות - עלול להזיק אם הוא נבלע. אין לעלות על העור, בעיניים או על בגדים. פוטנציאל לגירוי בעור ובעיניים.&nbsp;</td></tr><tr><td>N-אצטיל ציסטאין</td><td>Carl Roth</td><td>4126.1</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Carl Roth</td><td>6908.1</td><td>אזהרה - עלול לגרום לגירוי בעיניים ובעור. עלול לגרום לגירוי בדרכי הנשימה והעיכול. התכונות הטוקסיקולוגיות של חומר זה לא נחקרו במלואן.</td></tr><tr><td>טרגיטול</td><td>סיגמא</td><td>NP40S</td><td>אזהרה - עלול להזיק בשאיפה. עלול לגרום לגירוי בדרכי הנשימה. עלול להזיק אם נספג דרך העור. עלול לגרום לגירוי בעור. עלול לגרום לגירוי בעיניים. עלול להזיק במקרה של בליעה.</td></tr><tr><td>נתרן דודציל סולפט</td><td>Carl Roth</td><td>CN30.3</td><td>אזהרה - מזיק במקרה של בליעה. רעיל במגע עם העור. גורם לגירוי בעור. גורם לנזק חמור לעיניים. עלול לגרום לגירוי בדרכי הנשימה.</td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>קארל רוט</td><td>6781.1</td><td></td></tr><tr><td>די-נתרן מימן פוספט דיהידראט (Na2HPO4&#8226; 2H2O)</td><td>Carl Roth</td><td>4984.1</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן דימימן פוספט (KH2PO4)</td><td>Carl Roth</td><td>3904.1</td><td></td></tr><tr><td>Tri sodium citrate dihydrate (C6H5Na3O7&#8226; 2H2O)</td><td>Carl Roth</td><td>3580.1</td><td>אזהרה - עלול לגרום לגירוי בעיניים, בעור ובדרכי הנשימה. התכונות הטוקסיקולוגיות של חומר זה לא נחקרו במלואן.</td></tr><tr><td>שמן מינרלי&nbsp;</td><td>קארל רוט</td><td>HP50.2</td><td></td></tr><tr><td>InSituPro-VSI&nbsp;</td><td>Intavis</td><td></td><td>www.intavis.de/products/automated-ish-and-ihc</td></tr></tbody></table>

הר שלם<em&gt; באתרו</em&gt; כלת שיטה עבור חלזון הרכיכות<em&gt; stagnalis lymnaea</em

A Whole Mount In Situ Hybridization Method for the Gastropod Mollusc Lymnaea stagnalis

הר שלם הכלאה באתרו (WMISH) היא טכניקה המאפשרת את הרזולוציה המרחבית של מולקולות של חומצות גרעין (לעתים קרובות mRNAs) בתוך תכשיר &#39;הר שלם&#39; רקמות, או שלב התפתחותי (כגון עובר או זחל) של עניין. WMISH היא בעלת עוצמה אדירה, כי זה יכול לתרום באופן משמעותי את האפיון הפונקציונלי של הגנום מטזואניים מורכבים, אתגר נהיה יותר של צוואר בקבוק עם מבול של נתונים רצף הדור הבא. למרות הפשטות המושגית של הטכניקה הרבה זמן יש צורך לעיתים קרובות כדי לייעל את הפרמטרים השונים הגלומים לניסויים WMISH למערכות מודל הרומן; הבדלים דקים במאפייני הסלולר ביוכימיים בין סוגי רקמות שלבי התפתחות אומרים כי שיטת WMISH יחידה לא יכולה להיות מתאימה לכל המצבים. פתחנו מערכת של שיטות WMISH עבור stagnalis Lymnaea מודל חלזון מתעורר מחדש שיוצרים עקבאותות WMISH ברורים עבור מגוון של גנים, ועל פני כל שלבי ההתפתחות. שיטות אלה כוללות הקצאה של זחלים של גיל כרונולוגי ידוע חלון ד&quot;ר מר, ההסרה ביותר של עבר זחלים מן קפסולות הביצה שלהם, היישום של טיפול proteinase-K מתאים לכל חלון ד&quot;ר מר, הכלאה, כלאה-פוסט immunodetection צעדים. שיטות אלה מספקים בסיס שממנו את האות שהתקבל עבור תעתיקי הרנ&quot;א נתונים יכול להיות מעודן יותר עם התאמות ספציפיות בדיקה (בדיקת ריכוז בעיקר וטמפרטורת הכלאה).

דפוסי מכתים נציג WMISH שמוצג באיור 3 נוצרו באמצעות הטכניקה המתוארת לעיל, ומשקפים מגוון של דפוסי הביטוי המרחבי עבור גנים המעורבים מגוון של תהליכים מולקולריים החל היווצרות פגז (גן Novel 1, 2, 3 ו -4), כדי איתות תאים תאים (DPP) לרגולציה שעתוק (Brachyury) על פני מגוון של שלבים התפתחותיים. אמנם יש לנו לא כמתנו את רמות הביטוי של גנים אלה אנו מצפים שהוא קיימים גם להשתנות באופן משמעותי, מה שמעיד כי השיטה...

מטרת פרוטוקול זה היא לספק למשתמשים סט של שיטות לפירוק קפסולציה בתפוקה גבוהה של עוברים וזחלים של Lymnaea stagnalis כהכנה להכלאה שלמה באתר, ולטיפולים הבאים לפני ואחרי הכלאה.

הר שלם<em&gt; באתרו</em&gt; כלת שיטה עבור חלזון הרכיכות<em&gt; Stagnalis Lymnaea</em

Whole mount in situ hybridization (WMISH) is a technique that allows for the spatial resolution of nucleic acid molecules (often mRNAs) within a ...

המטרה הכללית של פרוטוקול זה היא ויזואליזציה יעילה של דפוסי ביטוי מרחביים של גנים בודדים בדגימות שלמות (whole mounts) של עוברים וזחלים של חלזון המים המתוקים Lymnaea stagnalis. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחומי ה-Evo-Devo והביולוגיה ההתפתחותית, כגון היכן ומתי גנים באים לידי ביטוי, כיצד הם מקיימים אינטראקציות זה עם זה ומה עשויות להיות תפקודיהם. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהוצאת חומרים עובריים וזחליים מקליפות הביצים שלהם היא מהירה, קלה ואפקטיבית.חומר זה מסווג לאחר מכן בהתאם למפת דרכים התפתחותית שאנו מספקים בחומרים הנלווים, ואז מעובד באמצעות שלבי טרום-היברידיזציה ספציפיים לשלב ההתפתחותי. כדי להתחיל בהליך זה, חברו מזרק חד-פעמי של 20-milliliter לצינור סיליקון. לאחר מכן, הצמידו בעזרת סרט דביק זכוכית מיקרוסקופ סטנדרטית לתבנית פטרי גדולה הפוכה.לאחר מכן, הדביקו את צינור הסיליקון בעזרת סרט דביק בסמיכות למשטח הזכוכית של המיקרוסקופ. לאחר מכן, הניחו מחט זכוכית דקה (pulled glass needle) על משטח הזכוכית. הכניסו אותה בעדינות אל תוך צינור הסיליקון עד שקצה המחט בולט בכ-20% מקוטר הפנים של הצינור.ברגע שהמחט נמצאת במיקומה, הדביקו אותה בעזרת סרט הדבקה לפטרי ד יש. אפשרו לקצה החופשי של צינור הסיליקון להישען בתוך פטרי ד יש אחר שיאסוף את החומר ששחרר מהמעטפת.השתמשו במסננת תה מפלסטיק כדי לדלות את צבר הביצים הצף מהמים. לאחר מכן, בצעו מיון וסיווג של החומר תחת המיקרוסקופ בהתאם למדריך זה. הניחו את צבר הביצים על נייר סופג ובצעו חתך לאורך מסת הביצים באמצעות פינצטה עדינה.לאחר מכן, גלגלו את קפסולות הביצים מתוך מסננת הביצים והסירו כמה שיותר מחומר הג'לי מכל קפסולה על ידי הלהטתה על גבי נייר סופג. לאחר מכן, באמצעות פינצטה עדינה, העבירו את קפסולות הביצים לצלחת פטרי המכילה 5 milliliters של מי ברז. המשיכו לאסוף לצלוחית זו קפסולות ביצים ללא ג'לי בשלבי ההתפתחות הרצויים.אספו מספיק קפסולות מכל שלבי ההתפתחות עבור ניסוי ה-WMISH המתוכנן לפני המעבר לשלב הבא. כעת, הרפו זחלים שגילם עולה על חמישה ימים לאחר הביתוח הראשון בתוך תמיסה בריכוז של 2% משקל לנפח של magnesium chloride hexahydrate למשך 30 דקות לפני הקיבוע. לאחר 30 דקות, העריכו את מידת ההרפיה על ידי טבילת מספר זחלים, בעודם עדיין בתוך קפסולות הביצה שלהם, בתוך תמיסת הקיבוע ומעקב אחר תגובתם תחת מיקרוסקופ.זחלים שלא נרפו באופן מלא יסוגו אל תוך הקונכיות שלהם, בעוד שזחלים רפויים לחלוטין לא יגיבו. לאחר שהזחלים נרפו, העבירו את קפסולות הביצים באמצעות פיפטת פלסטיק בעלת פיה רחבה לשפופרת ניתנת לסגירה המספקת נפח הגדול פי 10 מנפח קפסולות הביצים.בשלב הבא, שאבו מהמבחנה כמה שיותר נוזל והחליפו אותו בתמיסת קיבוע בנפח הגדול פי 10 מנפח קפסולות הביצים ששקעו. סובבו בעדינות את קפסולות הביצים בתוך תמיסת הקיבוע בטמפרטורת החדר למשך הזמן המתאים לכל שלב התפתחותי. לאחר מכן, הפסיקו את הסיבוב ואפשרו לקפסולות לשקוע.שאבו את תמיסת הקיבוע אל מכל פסולת מתאים. שטפו את קפסולות הביצים על ידי החלפת תמיסת הקיבוע ב-PBTw, וסובבו אותן בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות.שאבו את ה-PBTw ושטפו פעמיים נוספות. לאחר מכן, הוציאו את העובריים והזחלים מהמעטפות שלהם באמצעות המכשיר. שאבו את המעטפות לתוך מזרק של 20-milliliter.לאחר מכן, חברו את המזרק לצינורית. דחפו את הקפסולות דרך הצינורית ומחט הזכוכית אל תוך צלחת האיסוף. לאחר מכן, אספו את העוברים והזחלים שהוסרו מהם הקפסולות אל תוך מבחנה של 1.5-milliliter באמצעות מיקרו-פיפט.לאחר מכן, יש לבצע דהידרטציה ואחסון של החומר המקובע, או לבצע את שלבי ה-Proteinase K, ה-TEA והקיבוע המשני. עם השלמת שלבים אלו, יש לבצע היברידיזציה מקדימה קצרה של החומר ולהוסיף את ה-riboprobes. חשיבותו של טיפול הולם ב-Pro K לתוצאות הסופיות של ניסוי in situ היא קריטית עבור Lymnaea stagnalis.דבר זה בא לידי ביטוי בטווח רחב של ריכוזי Pro K הנדרשים לשלבי התפתחות שונים, הנעים בין 0 ל-500 micrograms to mil. במהלך ההיברידיזציה, הוצא מבחנה אחת מבלוק החימום. סובב אותה במהירות בין האגודל לאצבע המורה כדי להשעות את הלרווה מבלי להפריע לשכבת השמן, והחזר אותה לבלוק החימום.חזור על הליך זה אחת ל-6 עד 12 שעות. דפוסי ביטוי הגנים המוצגים כאן נוצרו באמצעות זחלים משלבי התפתחות שונים. כל הדגימות הועמדו וצולמו ב-Murray's Clear.גילאים מקורבים מצוינים בפינה הימנית העליונה של כל תמונה. כיוון התצפית מצוין בפינה הימנית התחתונה, ואורתולוגיה של גנים מצוינת בפינה השמאלית התחתונה. תוצאות אלו ממחישות את דפוסי הביטוי של גנים המעורבים במגוון תהליכים מולקולריים, החל מיצירת קונכייה, דרך תעתוק ועד לאיתות בין-תאי.בכל המקרים, ניתן להבחין בדפוס צביעה תאי ייחודי וברור, והתוצאות עקביות מאוד בין זחלים בודדים בתוך ניסוי אחד, ובעלות הדירות גבוהה בין ניסויים שונים. לאחר רכישת המיומנות, הזמן הפעיל הכולל הנדרש לביצוע טכניקה זו הוא פחות מיומיים. מרבית הזמן מוקדש לאיסוף ולהכנת חומרי עוברים וזחלים לצורך היברידיזציה ולאיסוף תמונות של התוצאות.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור שסביר להניח שכל riboprobe ידרוש התאמות קלות של פרמטרים חשובים כגון טמפרטורת ההיברידיזציה, ריכוז הגשוש (probe) ומשך ההיברידיזציה. לאחר פיתוחה, טכניקה זו אפשרה לנו לאפיין באופן הולם קבוצה של גנים המעורבים ביצירת הקונכייה, אשר זוהו בסריקות טרנסקריפטומיות ופרוטאומיות קודמות.

a-whole-mount-situ-hybridization-method-for-gastropod-mollusc-lymnaea

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הר שלם<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה של E8.5 לעוברי E11.5 עכבר

בסרטון זה אנו מראים שיטה ליצירת אוכלוסייה מסונכרנת התפתחותית של C. elegans בוגרים סטריליים. הפרוטוקול לדוגמה מסנכרן תולעים כדי לחקור את שיעורי צריכת החמצן בבעלי חיים חיים.

סנכרון נמטודות: שיטה להשגת אוכלוסיות של תולעים בשלבי התפתחות זהים

על ידי שילוב של כל שיטות להר...

רנ&quot;א<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה בעוברי הר שלמים והיסטולוגיה הסלולרית מותאמת לElasmobranchs הימי

שינויים הנגרמים לדיג דיג סרטנים מנוצל, כגון דיג הלובסטר האמריקאי, שעלולים להשפיע על דינמיקת הרבייה שלהם, מה שמוביל לירידה בהצלחת הזדווגות. מטרתו של מחקר זה הייתה לפתח שיטה לא פולשנית לבירור ההצלחה ההזדווגות של לובסטרים נשיים שיכול להיות מבחינה פיזיולוגית או תפקודי בוגר.

שיטה לא פולשנית ל<em&gt; באתרו</em&gt; קביעת ההצלחה זיווג בלובסטרים אמריקאים נקבה (<em&gt; Americanus Homarus</em&gt;)

פרוטוקול וידאו זה מדגים שיטה לחקר השפעות נוזל הזרע בגסטרופודים, באמצעות חילזון המים המתוקים ההרמפרודיטי Lymnaea stagnalis.

השפעה של זכר אבזר בלוטת מוצרים בהטלת ביצים ברכיכות חלזון

האבחנה של זיהום איימריה בתרנגולות נותרה תובענית. גישות המובלות על ידי מורפולוגיה של טפילים ופתולוגיה של מארח אינן חד משמעיות בדרך כלל, בעוד שגישות מולקולריות המבוססות על PCR הוכיחו את עצמן כתובעניות מבחינת עלות ומומחיות. מטרת פרוטוקול זה היא לבסס הגברה איזותרמית בתיווך לולאה (LAMP) כאבחון מולקולרי פשוט לזיהום איימרי.

Isothermal הגברה מבחני בתיווך לולאה (LAMP) לאיתור המינים ספציפי של<em&gt; Eimeria</em&gt; כי להדביק תרנגולות

פרוטוקול זה מאפשר הדמיה של ביטוי גנים בעובריים Astyanax cavefish. גישה זו פותחה במטרה למקסם את אות של ביטוי גנים, תוך מזעור צביעת הרקע לא ספציפית.

Wholemount ב באתרו הכלאה עבור עוברי Astyanax

המטרה של פרוטוקול זה היא גנוטיפ של כלנית המים ne, שושנת הימים במהלך המאבק מבלי להקריב את העובר.

הגנוזות של כלנית ימית במהלך ההתפתחות המוקדמת

שימור מוסמי מים תלוי בניטור דפוסי הרבייה ותהליכי המינים. מחקר זה מתקן פרוטוקול שאינו קטלני לדגימת תוכן הגיל, אפיון פיתוח זחל ואספקת מאגר דיגיטלי למידע שנאסף. זה פרוטוקול-חבילת מסד הנתונים יהיה כלי חשוב עבור חוקרי מולים בהתאוששות מינים מחויילים.

סטנדרטיזציה של שיטה שאינה קטלנית לאפיון מעמד הרבייה והתפתחות הזחל של מולים מים מתוקים (ביובלויה: Unionida)

המאמר מציג שיטות לתרבית זחלים של הגסטרופוד Crepidula fornicata במערכת בקנה מידה מעבדתי קטן ובמערכת מזוקוסמוס של מי ים שניתן לפרוס בשטח.

מעבדה ותרבית שדה של זחלים של צלע נעלי בית, Crepidula fornicata

למד היברידיזציה in situ שלמים באתרו לחלזון Lymnaea stagnalis. שיטה זו מאפשרת הדמיית תבניות ביטוי גנים בזחלים ועוברים לחקר ביולוגיה התפתחותית ואבולוציה.

הר שלם

גלה סרטונים נוספים