Name: Dissection ו-הרכבה שטוחה של שלד Threespine קוצן branchial (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: למדו את שיטת הפריסה השטוחה של שלד הזימים בקוצן שלוש-הקוצים לחקר ביולוגיה התפתחותית ואבולוציונית. טכניקה זו מאפשרת לחוקרים לחקור תכונות טרופיות ולהבין את הסתגלות בעלי חיים לסביבות חדשות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה בחלקה על ידי NIH R01 #DE021475 ל-CTM ומלגת מחקר לתארים מתקדמים של NSF ל-NAE. תודה למיילס ג'ונסון על הסיוע בהדמיה ולפריסילה אריקסון על הקריאה הביקורתית של כתב היד.

כל העבודה דגים אושרה על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש מאוניברסיטת קליפורניה-ברקלי (מספר פרוטוקול R330). המתת חסד בוצעה באמצעות טבילה 0.025% Tricaine-S שנאגרו עם 0.1% נתרן ביקרבונט 39. כל השלבים מבוצעים בטמפרטורת החדר. 1. הכנה הערה: בצע את פעולות 1.1-1.5 צינורות חרוטים או צלוחיות נצנץ שיכול לאטום בחוזקה להיות מונח אופקי. דגים לא צריכים להיות מזועזע כל הזמן, אבל מנסה לערבב הפתרון לעתים קרובות ככל האפשר על ידי היפוך בעדינות או טלטול מתלה של צינורות או צלוחיות לחשוף את כל הצדדים של הדג לפתרון מכתים ולאפשר כתם לחדור לרקמה שווה. אל תניחו קבוצה גדולה של דגים על שייקר פלטפורמה, כמו המשקל הכבד של הנוזל ישבור שייקר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן או דג טרי מורדם או דגים מאוחסן אתנול עם 10% Neutral שנאגר פורמלין (NBF) הלילה. לחלופין, להשתמש 4% paraformאלדהיד בתמיסה 1x PBS במקום 10% NBF. הערה: אם להפיק ממנה DNA, קליפ חלק קטן של סנפירי זנב או חזה לפני הקיבוע ולאחסן באתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלך לתקן כראוי במנדף כימי ולהחליף עם מי ברז (כלומר ~ pH 7.0) עבור 2 שעות. הימנע משימוש במי דה מיונן כפי שקרה לעתים קרובות יכול להיות חומצי יכול decalcify עצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סר מים ודגי כתם עם 0.008% Alizarin האדום S ב 1% KOH במים למשך 24 שעות. עבור דגים פחות מ -20 מ&quot;מ אורך סטנדרטי, השתמש 0.004% Alizarin האדום ס (ערוך 100x (פתרון מניות 0.8%) של Alizarin האדום S אז מה שיכול להיות מדולל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר כתם (הצבת מיכל פסולת המתאים במנדף) ודגים המקום במי ברז למשך מספר שעות. שינוי מים לפי הצורך עד לשטוף במים הוא בעיקר ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סור דגי מים ומקום לתוך 50% גליצרול, 0.25% KOH לסליקה עדינה לנתיחה שלאחר מכן. הערה: פרוטוקול מכתים זה שונה מן השיטות שתוארו קודם לכן 40,41. </li></ol><pclass = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. Dissection הערה: ראה איור 1 עבור סקירה של מורפולוגיה שלד ראש רלוונטי. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54056/54056fig1.jpg" /> איור 1:. קוצן ראש מורפולוגיה שלד Alizarin האדום מוכתם ראש קוצן threespine צלם עם קרינה תחת סט מסנן rhodamine B. מורפולוגיה שימושיים מתויג: אופ = opercle, Subop = subopercle, BSRs = branchiostegal קרני, Preop = preopercle, Infraorb 1-3 = 1-3 infraorbital (circumorbitals המכונה גם או suborbitals), דנט = dentary, Premax = premaxilla, מקס = maxilla נאס, = אף, לאט. ethm = לרוחב כִּברָתִי, Psph = parasphenoid, Fron = העצם הפרונטלית. לתיאור מפורט יותר של השלד ראש קוצן, לראות אנקר (1974) 31. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54056/54056fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של</a>נתון זה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הדג השטוח (איור 2 א) וכנס המלקחיים של השען # 5 חד לתוך הצד של העין בזווית של 45 מעלות ~ לנקב את הקרום המכסה את העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקלף את הקרום הרחק מן העין, דומה לקליפת מכסת יוגורט (איור 2 ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מלקחיים פתוחים מאחורי העין, לאחוז את עצב הראייה מאחורי העין, ולהסיר את העין (איור 2 ג). אין לנקב את העין כפי שהוא ידלוף מלנין. אם ניקב, מלנין ניתן נשטף במהלך השלבים מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על צד שני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל האחורי, למקום להב מספריים לנתח קטן אחד תחת כנף opercle, להב מספריים גרור dorsally מעל opercle, ואז לחתוך רקמות רכות ועד ארובת העין (איור 2 ד). חותכים הגבו עד עצם opercle. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את העצם הפרונטלית (גב אל ארובת העין) (איור 2E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את העצם parasphenoid קו האמצע סביב tהוא המרכז של ארובת העין (איור 2F). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך opercle חוזר על הצד שכנגד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מלקחיים תחת opercle ולאט לאט לקלף את הפנים מהגוף, זמירה כל רקמות רכות עדיין מחוברות (2G איור - H). שים לב שלא לשבש את השורה הראשונה של rakers זימים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם מלקחיים, לנתק את ceratohyals משני הצדדים מן basihyal קו האמצע תוך קילוף והסרה של שלד craniofacial קדמית (הלסת כולה כולל dentary, premaxilla, ו maxilla; השלד hyoid כולו כולל opercle עורי החיצוני, preopercle, subopercle, ו קרן branchiostegal ואת הגב שבבסיס ואלמנטי endochondral גחון; והחלק הקדמי של הגולגולת כולל האף, כִּברָתִי לרוחב, ועצמות infraorbital, ראה איורים 1 ו 2I). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוצי אגן יכולים להיות מקופלים החוצה מהגוף, ויכולים לשמש כידית עבור מלקחיים לאחוז of כאשר ההווה. שדרות ננעלו במקומו. כדי לבטל את הנעילה, משוך בעדינות את עמוד שדרה עם מלקחיים ישירות מגוף דגים, אז בעדינות לכופף בדיעבד ללחוץ עמוד שדרה שטוחה נגד דגים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכניסו נסגר מלקחיים אחוריים גחון לשלד branchial (ממש מתחת צינור מעיים) ו מלקחיים גרורים קדמי, מתגרים לגזרים את השרירים ורצועות הנותרים המקובעים לשלד branchial (האיור 2J - K). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות קצות מלקחיים סגורים, לגרד ממנו את שרירי הצמדת השלד הגבה branchial אל braincase הגחון בתוך אחורי לכיוון קדמי (האיור 2L). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על 2.9 ו 2.10 על הצד שכנגד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחוז בבסיס צינור המעיים ולמשוך anteriorly להסיר את הצינור שלד ובמעיים branchial (איור 2M - N). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את צינור המעיים על ידי יצירת האחורי חתך בניצב סוף ceratobranchial החמישי (איור 2 טו </strong&gt;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרת כל שברי עצמות שנותרו מן braincase בצד הגבי של שלד branchial, הכנס מספריים לתוך סל branchial לעשות חתך הגבה (חיתוך קדמי אל אחורי) בין הסטים הבילטרליים של צלחות שן הגבה (איור 3 א - ד). ודא לחתוך מרוכז כדי למנוע נזק לוחות השן הגבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות שני חתכים לרוחב רדודים לומן המעי גומי בקצה האחורי של השלד branchial (הקצה הקדמי של צינור המעיים) כדי לסייע עם פתיחת שלד branchial (איור 3E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח דגים וכל פיסות הרקמה לתוך צנצנת והניח שלד branchial לתוך צינור microcentrifuge עם גליצרול 50%, 0.25% KOH להמשיך סליקה עדינה, או גליצרול 100% אם לא סליקה נוספת נדרשת. צנצנות וצינורות תווית עם מזהה ייחודי, כך שניתן יהיה לעקוב. סכום סליקה הנדרש הוא בעיקר פונקציה של הגודל של הדגים, דגים בוגרים גדולים (מעל 40 מ &#39;מ &#39;אורך סטנדרטי) בדרך כלל לחייב סליקה נוספת. </li></ol><img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54056/54056fig2.jpg" /> איור 2:. לנתיחת שלד branchial קוצן Alizarin האדום מוכתם דגי קוצן threespine מוכנים לנתיחה. עין depigmented מ סליקה נרחבת. חצים כחולים מציינים את כיוון התנועה. (א) להציג לרוחב של ראש קוצן, הקדמי הוא בצד ימין. (ב) הסרת קרום המכסה את העין. (ג) הסרת העין. (ד) הגבה לחתוך מעל opercle. (E) לחתוך עצם פרונטאלית. (F) Parasphenoid לחתוך. (G - אני) הסרת שלד הפנים. (J) הסרת חיבורי רקמות רכות שלד branchial גחון. (K - L) הסרת חיבורי שלד הגבה branchial. (&lt;strong&gt; M - N) הסרת שלד branchial. (O) הפרד את צינור המעיים מן השלד branchial. עיין בשלבים 2.1 דרך 2.16 לפרטים נוספים. סרגל קנה מידה = 5 מ&quot;מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54056/54056fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 3. שלד branchial מחדש מכתים (במידת הצורך) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכתים את כהה שלד branchial או רקמות ברורות יותר, להסיר גליצרול 50%, פתרון KOH 0.25% ולשטוף עם 1% KOH פעמים (לשטוף אחד חמש דקות ואחריו לשטוף את שני 24 שעות תוך רעד אופקי על שייקר פלטפורמה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סר 1% KOH מחדש כתם עם 0.008% Alizarin האדום S ב KOH 1% למשך 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר כתם ולהחליף עם KOH 1% למשך 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר פתרון KOH ולהחליף עם 50% גליצרול, 0.25% KOH. </li></ol> 4. הרכבת branchial שלד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר שלד branchialמ גליצרול 50%, 0.25% KOH או 100% גליצרול מקום קרוב לתחתית של תלוש כיסוי זכוכית 22 מ&quot;מ x 60 מ&quot;מ עם הצד הגבי פונה כלפי מעלה (איור 3F). הוסף כמה טיפות של גליצרול 50%, 0.25% KOH או 100% גליצרול על גבי שלד branchial. אם מעבר מ 50% גליצרול, 0.25% KOH ל -100% גליצרול, פתרון שינוי בצינור microcentrifuge ולנער עבור&gt; 5 דקות לפני הרכבה לאזן רקמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מרדדי שני כדורים קטנים של פלסטלינה ומניח על קצוות של להחליק את המכסה לפעול כמו מפרידים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רופף במקום coverslip שני על גבי בלחץ חזק מספיק כדי לשטח את שלד branchial הקדמי (האיור 3G). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיל לפתוח את דש הגבי עזב כולל צלחות שן מגבות, לרדד, וחלק בין coverslips (האיור 3H). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טכניקה חזור עם דש הגבי תקין ולדחוף השלד כולו branchial מהקצה של coverslip (איור 3I). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנותבאופן מקורי, להחזיק דשי הגבי של חלל פתוח עם מלקחיים ובזהירות מקום coverslip על, משטח את שלד branchial בתנועה אחת חלקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, הר השלד branchial הפוך על תלוש לכסות אחד, מפשק אותן למעלה ולמטה בכל צד הגב החוצה רוחבית כך כוח המשיכה אינו מאפשר השלד branchial לסגור לגבות. ואז לכסות עם תלוש כיסוי הזכוכית שני 22 מ&quot;מ x 60 מ&quot;מ ו להפוך הכנה. הערה: טכניקות הרכבה שונות נוהגות לעבוד טוב יותר או גרוע יותר עבור כל אדם. נסה כל ולראות מה מרגיש הכי נוח. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ קל על coverslip העליון לשטח כדורי חימר מספיק כדי לשמור על שלד branchial הרכוב שטוח, אך היזהרו שלא למחוץ את הדגימה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך תהליך ההרכבה, ceratobranchials יכול לסובב לטשטש שורה של rakers. תרופה זו על ידי הזזה מלקחיים בין coverslips מחדש המכוונת את ceratobranchials או שלד branchial כולו. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות preps שטוחה במגשי שקופית roטמפרטורת אום. רכוב גליצרול 100%, ניתן לאחסן preps בין coverslips לגשר במשך עשור לפחות. מלקחיים ומספריים נקיים עם isopropanol או אתנול וטיפי כיסוי. </li></ol><img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/54056/54056fig3.jpg" /> איור 3:. שטוח הרכבת שלד branchial המניפולציה ואת ההרכבה של שלד branchial מוצג. חצים כחולים מציינים את כיוון התנועה. (א) branchial הגבה שלד למעלה בצד. (B - D) סיבוב חתך בין לוחות שן הגבה. (E), קיצוץ רוחבי ברקמות רכות להמשיך לפתוח את הבסיס של צינור הבטן. (F) שלד branchial ממוקם בחלק התחתון של coverslip מוכן גובר. (G) coverslip השנייה מונחת על החצי הקדמי של שלד branchial (מעל צלחות שן מגבות). (H - I)הרכבה שטוחה של שלד branchial ידי דשי צלחת שן הגבה פתיחת זזה בין שני תלושים לכסות. עיין בשלבים 4.1 עד 4.6 לפרטים נוספים. סרגל קנה מידה = 5 מ&quot;מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54056/54056fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

<ol><li>Cooper, W. J., Westneat, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+and+function+of+damselfish+skulls%3A+rapid+and+repeated+evolution+into+a+limited+number+of+trophic+niches%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Form and function of damselfish skulls: rapid and repeated evolution into a limited number of trophic niches.</a> BMC Evol. Biol. 9 (24), (2009).</li>
<li>Albertson, R. C., Kocher, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+developmental+basis+of+cichlid+trophic+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Genetic and developmental basis of cichlid trophic diversity.</a> Heredity. 97 (3), 211-221 (2006).</li>
<li>Martin, C. H., Wainwright, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trophic+novelty+is+linked+to+exceptional+rates+of+morphological+diversification+in+two+adaptive+radiations+of+cyprinodon+pupfish%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Trophic novelty is linked to exceptional rates of morphological diversification in two adaptive radiations of cyprinodon pupfish.</a> Evolution. 65 (8), 2197-2212 (2011).</li>
<li>Wainwright, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+pharyngognathy%3A+A+phylogenetic+and+functional+appraisal+of+the+pharyngeal+jaw+key+innovation+in+labroid+fishes+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Syst.+Biol%22%5BJournal%5D)">The evolution of pharyngognathy: A phylogenetic and functional appraisal of the pharyngeal jaw key innovation in labroid fishes and beyond.</a> Syst. Biol. 61 (6), 1001-1027 (2012).</li>
<li>Sibbing, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Food+capture+and+oral+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Cyprinid+Fishes%22%5BJournal%5D)">Food capture and oral processing.</a> Cyprinid Fishes. , 377-412 (1991).</li>
<li>Bell, M., Foster, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBell%2C+M+%22The+Evolutionary+Biology+of+the+Threespine+Stickleback%22">The Evolutionary Biology of the Threespine Stickleback</a>. , Oxford University Press. New York. (1994).</li>
<li>Kimmel, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+development+of+facial+bone+morphology+in+threespine+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Evolution and development of facial bone morphology in threespine sticklebacks.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102 (16), 5791-5796 (2005).</li>
<li>Mcgee, M. D., Wainwright, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergent+evolution+as+a+generator+of+phenotypic+diversity+in+threespine+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Convergent evolution as a generator of phenotypic diversity in threespine stickleback.</a> Evolution. 67 (4), 1204-1208 (2013).</li>
<li>McGee, M. D., Schluter, D., Wainwright, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+basis+of+ecological+divergence+in+sympatric+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional basis of ecological divergence in sympatric stickleback.</a> BMC Evol. Biol. 13, 277(2013).</li>
<li>McGuigan, K., Nishimura, N., Currey, M., Hurwit, D., Cresko, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+genetic+variation+in+static+allometry+in+the+threespine+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Comp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantitative genetic variation in static allometry in the threespine stickleback.</a> Integr. Comp. Biol. 50 (6), 1067-1080 (2010).</li>
<li>Caldecutt, W. J., Bell, M. A., Buckland-Nicks, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+and+geographic+variation+in+dentition+of+threespine+stickleback%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Copeia%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism and geographic variation in dentition of threespine stickleback, Gasterosteus aculeatus.</a> Copeia. 2001 (4), 936-944 (2001).</li>
<li>Berner, D., Moser, D., Roesti, M., Buescher, H., Salzburger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+architecture+of+skeletal+evolution+in+european+lake+and+stream+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Genetic architecture of skeletal evolution in european lake and stream stickleback.</a> Evolution. 68 (6), 1792-1805 (2014).</li>
<li>Jamniczky, H. a, Barry, T. N., Rogers, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eco-evo-devo+in+the+study+of+adaptive+divergence%3A+examples+from+threespine+stickleback+%28Gasterosteus+aculeatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Comp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Eco-evo-devo in the study of adaptive divergence: examples from threespine stickleback (Gasterosteus aculeatus).</a> Integr. Comp. Biol. 55 (1), 166-178 (2015).</li>
<li>Magnuson, J., Heitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gill+raker+apparatus+and+food+selectivity+among+mackerels%2C+tunas%2C+and+dolphins%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Bull%22%5BJournal%5D)">Gill raker apparatus and food selectivity among mackerels, tunas, and dolphins.</a> Fish. Bull. 69 (2), 361-370 (1971).</li>
<li>Kahilainen, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+gill+raker+number+variability+in+adaptive+radiation+of+coregonid+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Evol.+Ecol%22%5BJournal%5D)">The role of gill raker number variability in adaptive radiation of coregonid fish.</a> Evol. Ecol. 25 (3), 573-588 (2011).</li>
<li>Arnegard, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+ecological+divergence+during+speciation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genetics of ecological divergence during speciation.</a> Nature. 511 (7509), 307-311 (2014).</li>
<li>Gross, H. P., Anderson, J. M., Gross, H. P., Anderson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geographic+variation+in+the+gillrakers+and+diet+of+European+threespine+sticklebacks%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Copeia%22%5BJournal%5D)">Geographic variation in the gillrakers and diet of European threespine sticklebacks, Gasterosteus aculeatus.</a> Copeia. 1984 (1), 87-97 (1984).</li>
<li>Hagen, D., Gilbertson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geographic+variation+and+environmental+selection+in+Gasterosteus+aculeatus+L+in+the+Pacific+Northwest%2C+America%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Geographic variation and environmental selection in Gasterosteus aculeatus L in the Pacific Northwest, America.</a> Evolution. 26 (1), 32-51 (1972).</li>
<li>McPhail, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecology+and+evolution+of+sympatric+sticklebacks+%28Gasterosteus%29%3A+morphological+and+genetic+evidence+for+a+species+pair+in+Enos+Lake%2C+British+Columbia%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Zool%22%5BJournal%5D)">Ecology and evolution of sympatric sticklebacks (Gasterosteus): morphological and genetic evidence for a species pair in Enos Lake, British Columbia.</a> Can. J. Zool. 62 (7), 1402-1408 (1984).</li>
<li>Schluter, D., McPhail, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecological+character+displacement+and+speciation+in+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Nat%22%5BJournal%5D)">Ecological character displacement and speciation in sticklebacks.</a> Am. Nat. 140 (1), 85-108 (1992).</li>
<li>Robinson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trade+offs+in+Habitat-specific+foraging+efficiency+and+the+nascent+adaptive+divergence+of+sticklebacks+in+lakes%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">Trade offs in Habitat-specific foraging efficiency and the nascent adaptive divergence of sticklebacks in lakes.</a> Behaviour. 137 (7), 865-888 (2000).</li>
<li>Glazer, A. M., Cleves, P. A., Erickson, P. A., Lam, A. Y., Miller, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+developmental+genetic+features+underlie+stickleback+gill+raker+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Evodevo%22%5BJournal%5D)">Parallel developmental genetic features underlie stickleback gill raker evolution.</a> Evodevo. 5 (1), (2014).</li>
<li>Miller, C. T., Glazer, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+skeletal+evolution+in+sticklebacks+is+controlled+by+additive+and+clustered+quantitative+trait+loci%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Modular skeletal evolution in sticklebacks is controlled by additive and clustered quantitative trait loci.</a> Genetics. 197 (1), 405-420 (2014).</li>
<li>Glazer, A. M., Killingbeck, E. E., Mitros, T., Rokhsar, D. S., Miller, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+assembly+improvement+and+mapping+convergently+evolved+skeletal+traits+in+sticklebacks+with+Genotyping-by-Sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22G3%22%5BJournal%5D)">Genome assembly improvement and mapping convergently evolved skeletal traits in sticklebacks with Genotyping-by-Sequencing.</a> G3. 5, 1463-1472 (2015).</li>
<li>Wainwright, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+morphology+of+the+pharyngeal+jaw+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Physiol.+Fish+Biomech%22%5BJournal%5D)">Functional morphology of the pharyngeal jaw apparatus.</a> Fish Physiol. Fish Biomech. , 77-102 (2006).</li>
<li>Hulsey, C. D., Fraser, G. J., Streelman, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+development+of+complex+biomechanical+systems%3A+300+million+years+of+fish+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Evolution and development of complex biomechanical systems: 300 million years of fish jaws.</a> Zebrafish. 2 (4), 243-257 (2005).</li>
<li>Lauder, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+design+and+evolution+of+the+pharyngeal+jaw+apparatus+in+euteleostean+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Zool.+J.+Linn.+Soc%22%5BJournal%5D)">Functional design and evolution of the pharyngeal jaw apparatus in euteleostean fishes.</a> Zool. J. Linn. Soc. 77, 1-38 (1983).</li>
<li>Fraser, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ancient+gene+network+is+co-opted+for+teeth+on+old+and+new+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">An ancient gene network is co-opted for teeth on old and new jaws.</a> PLoS Biol. 7 (2), e1000031(2009).</li>
<li>Stock, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+dentition+in+comparative+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool.+B.+Mol.+Dev.+Evol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish dentition in comparative context.</a> J. Exp. Zool. B. Mol. Dev. Evol. 308, 523-549 (2007).</li>
<li>Liem, K., Greenwood, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+approach+to+the+phylogeny+of+the+pharyngognath+teleosts%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Zool%22%5BJournal%5D)">A functional approach to the phylogeny of the pharyngognath teleosts.</a> Am. Zool. 21 (1), 83-101 (1981).</li>
<li>Anker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+and+kinetics+of+the+head+of+the+stickleback%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Trans.+Zool.+Soc.+London%22%5BJournal%5D)">Morphology and kinetics of the head of the stickleback, Gasterosteus aculeatus.</a> Trans. Zool. Soc. London. 32 (5), 311-416 (1974).</li>
<li>Meyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometrics+and+allometry+in+the+trophically+polymorphic+cichlid+fish%2C+Cichlusomu+citrinelfum%3A+Alternative+adaptations+and+ontogenetic+changes+in+shape%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Zool.%2C+Lond%22%5BJournal%5D)">Morphometrics and allometry in the trophically polymorphic cichlid fish, Cichlusomu citrinelfum: Alternative adaptations and ontogenetic changes in shape.</a> J. Zool., Lond. 221, 237-260 (1990).</li>
<li>Huysseune, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+plasticity+in+the+lower+pharyngeal+jaw+dentition+of+Astatoreochromis+alluaudi+%28Teleostei%3A+Cichlidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Phenotypic plasticity in the lower pharyngeal jaw dentition of Astatoreochromis alluaudi (Teleostei: Cichlidae).</a> Arch. Oral Biol. 40 (11), 1005-1014 (1995).</li>
<li>Muschick, M., Indermaur, A., Salzburger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergent+Evolution+within+an+adaptive+radiation+of+cichlid+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Convergent Evolution within an adaptive radiation of cichlid fishes.</a> Curr. Biol. 22 (24), 2362-2368 (2012).</li>
<li>Cleves, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolved+tooth+gain+in+sticklebacks+is+associated+with+a+cis-regulatory+allele+of+Bmp6%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolved tooth gain in sticklebacks is associated with a cis-regulatory allele of Bmp6.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111 (38), 13912-13917 (2014).</li>
<li>Ellis, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+developmental+and+genetic+mechanisms+underlie+convergently+evolved+tooth+gain+in+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct developmental and genetic mechanisms underlie convergently evolved tooth gain in sticklebacks.</a> Development. (142), 2442-2451 (2015).</li>
<li>Tucker, A. S., Fraser, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+developmental+diversity+of+tooth+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Evolution and developmental diversity of tooth regeneration.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 25-26, 71-80 (2014).</li>
<li>Erickson, P. A., Glazer, A. M., Cleves, P. A., Smith, A. S., Miller, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+developmentally+temporal+quantitative+trait+loci+underlie+convergent+evolution+of+increased+branchial+bone+length+in+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+R.+Soc.+B%22%5BJournal%5D)">Two developmentally temporal quantitative trait loci underlie convergent evolution of increased branchial bone length in sticklebacks.</a> Proc. R. Soc. B. 281, (2014).</li>
<li>Leary, S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeary%2C+S+%22AVMA+Guidelines+for+the+Euthanasia+of+Animals%22">AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals</a>. , American Veterinary Medical Association. Schaumburg, IL. (2013).</li>
<li>Bell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+phenetics+and+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Evol.+Genet.+Fishes%22%5BJournal%5D)">Evolutionary phenetics and genetics.</a> Evol. Genet. Fishes. , 431-528 (1984).</li>
<li>Taylor, W. R., Van Dyke, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+procedures+for+staining+and+clearing+small+fishes+and+other+vertebrates+for+bone+and+cartilage+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cybium%22%5BJournal%5D)">Revised procedures for staining and clearing small fishes and other vertebrates for bone and cartilage study.</a> Cybium. 9 (2), 107-119 (1985).</li>
<li>Erickson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+190+base+pair%2C+TGF-%CE%B2+responsive+tooth+and+fin+enhancer+is+required+for+stickleback+Bmp6+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A 190 base pair, TGF-β responsive tooth and fin enhancer is required for stickleback Bmp6 expression.</a> Dev. Biol. 401 (2), 310-323 (2015).</li>
<li>Miller, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cis-Regulatory+changes+in+Kit+ligand+expression+and+parallel+evolution+of+pigmentation+in+sticklebacks+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">cis-Regulatory changes in Kit ligand expression and parallel evolution of pigmentation in sticklebacks and humans.</a> Cell. 131 (6), 1179-1189 (2007).</li>
<li>Aigler, S. R., Jandzik, D., Hatta, K., Uesugi, K., Stock, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+and+constraint+underlie+irreversibility+of+tooth+loss+in+cypriniform+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Selection and constraint underlie irreversibility of tooth loss in cypriniform fishes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (21), 7707-7712 (2014).</li>
<li>Pasco-Viel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+trends+of+the+pharyngeal+dentition+in+Cypriniformes+%28Actinopterygii+Ostariophysi%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evolutionary trends of the pharyngeal dentition in Cypriniformes (Actinopterygii Ostariophysi).</a> PLoS One. 5 (6), e11293(2010).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

השלד המסועף הוא קבוצה מורכבת של עצמות בגרון של דג שמתמרן, מסנן ולועס פריטי מזון בדרכם לוושט. תכונות טרופיות מעניינות רבות, כולל דפוס של מגרפות זימים, שיני לוע ועצמות ענפיות, משתנות בין המינים ובתוכם. את רוב התכונות הללו קשה עד כמעט בלתי אפשרי למדוד במדויק עם השלד המסועף באתרו (למשל, אורך מגרפת הזימים, אורך עצם הענף). פרוטוקול הרכבה שטוח זה מציב את כל רכיבי השלד המסועפים במישור דו-ממדי פשוט כדי להקל על הדמיה וכימות של תכונות מרובות. 
מגבלה אחת של פרוטוקול זה היא שלמרות שניתן ל...

סכום מדהים של מגוון קיים בשלד הראש בין חוליות, במיוחד בקרב דגים. במקרים רבים המגוון הזה הופך לפשוט אסטרטגיות האכלה שונות 1 - 4, והוא יכול לכלול שינויים משמעותיים הוא דפוסי craniofacial חיצוניים ופנימיים. שלד branchial ממוקם באופן פנימי בגרון של דג והמקיף ביותר של חלל buccal. שלד branchial מורכב 5 מקטעים הומולוגיים סדר, הקדמיים וארבעת מהם לתמוך הזימים. יחד חמישה קטעים אלה כממשק בין דגים ופירות שלהם 5. וריאצית שפע של תכונות כולל rakers זימים, שיני בלוע, ועצמות branchial לתרום ליקוט יעיל על סוגים שונים של מזון. הקוצנים עברו קרינה אדפטיבית לאחר צורות אושיאניק האבות יישבו אגמי מים מתוקים ונחלים ברחבי חצי הכדור הצפוני. המעבר בתזונהמ זואופלנקטון קטן באוקיינוס ​​כדי טרף גדול במים מתוקים הביא וריאציה trophic דרמטית תכונות כמה craniofacial 6. בעוד מחקרים רבים התמקדו על הבדלי craniofacial חיצוניים הקוצנים 7 - 13, שינויי craniofacial חשובים להתפתח שוב ושוב בשלד branchial הפנימי. היכולת ליצור כלאיים פורים בין אוכלוסיות קוצן ברורות מורפולוגית מספקת הזדמנות מצוינת כדי למפות את הבסיס הגנטי של שינויים התפתחו עד שלד branchial. תכונה אחת trophic של משמעות אקולוגית היא הדפוסים של rakers זימים, עצמות עורי תקופתיות המרפדות את פניהם הקדמיים וגם אחוריים של עצמות branchial ומשמשים לסנן פריטים טרפים. דגים כי בדרך כלל ניזונים טרף קטנים נוטים להיות יותר ויותר בצפיפות הזימים במרווחים rakers לעומת דגים הניזונים טרף גדול יותר 14,15. וריאציה rakers הזימים דווחה הן within ובין מיני 14-19, והיבטים של דפוסי מגרפות זימים לתרום נישות trophic וכושר 16. עשרות שנים של מחקר תיעדו בהרחבה מספר זיז הזים וריאציה בהרחבה הקוצנים threespine 17 - 21; עם זאת, מחקרים אלה מתמקדים בדרך כלל בשורה הראשונה של rakers זימים. מחקר שנערך לאחרונה הוכיח מודולריות בבקרה הגנטית של מספר מגרפות זימים פני שלד branchial 22,23 ועל פני שורה אחת מגרפות זימים ריווח 23 ואורך 24 המדגיש את החשיבות של לימוד יותר משורה אחת או מגרפות זימים אחת להבין את בסיס גנטי ההתפתחותי של הפחתת מגרפות זימים. אחת מתכונותיהן trophic שניות של שניהם המשמעות האקולוגית ביו הן הדפוסים של שיניים בלועות. שיני דגים יכולות להיות ממוקמות בשני הלסת האוראלית בשלד branchial, המכונות שיני בלוע. שיני Oral משמשות בעיקר עמ &#39;rey ללכוד בשיניים בלוע משמשים מניפולציה לעיסה וטרף 25 - 27. שתי הסדרות יוצרים באמצעות מנגנונים התפתחותיים משותף ונחשבים מבחינה התפתחותית הומולוגיים 28. מודולריות מעניין מתרחש תוך שלחלק מינים, כגון דג זברה, שיני בלוע פה ועל גב חוסר 29 בעוד מינים אחרים ceratobranchials מספר שיניים, pharyngobranchials, ולפעמים שיני basihyal ו hypobranchials 30. בשנת הקוצנים, שיניים בלוע נמצאים ventrally על ceratobranchial ו dorsally החמישי על הקדמי וגם האחורי pharyngobranchials 31. קינמטיקה על האכלת קוצן להראות הלסת האוראלית משמשת בעיקר עבור לכידת טרף והקלת האכלת יניקת 9 עוזב לעיסה ללסת הבלוע. בשנת ציקלידים, מורפולוגיה הלסת בלוע התחתון משתנה באופן דרמטי 32,33 ו הוכח להיות אדפטיבית בקורלציה עם נישה trophic 34. רַבאוכלוסיות קוצן מים מתוקים ple התפתחו מגדילה דרמטית במספר שן בלוע גחון 23,35,36. מחקר שנערך לאחרונה הוכיח כי הבסיס הגנטי ההתפתחותי של רווח השן התפתח זה הנו ייחודי, בעיקר בשתי אוכלוסיות נגזרות עצמאי של הקוצנים מים מתוקים 36. בניגוד שיניים יונקים, דגים להתחדש שיניהם ברציפות לאורך החיים הבוגרים 37. שתי אוכלוסיות מים מתוקות שיניים גבוהות שתוארו לעיל אלה התפתחו בקצב החלפת שן מואץ, ובכך יוצרים מערכת החולייתנים נדירה לחקר הבסיס הגנטי של התחדשות 36. אחת מתכונותיהן trophic שלישי התפתח שוב ושוב הקוצנים מים מתוקים ארוכה עצמות epibranchial ו ceratobranchial, את homologs קשת המגזרי branchial של הלסת העליונה והתחתונה, בהתאמה 38. עצמות branchial ארוכות להעניק חלל buccal גדול וסבירות הם אדפטיבית על שאפשרו פריטי טרף גדולים להיות גonsumed. יתר על כן, בדגים אחרים, עצמות epibranchial חשובות לדיכאון של צלחות שן בלוע הגבה 25. כמו זיז זים ושיני בלוע, עצמות branchial הן פנימיות ולכן, קשה לדמיין או לכמת בקלות. כאן אנו מציגים פרוטוקול מפורט לנתח שטוח הר שלד branchial, המאפשרים הדמיה קלה וכימות של מגוון תכונות craniofacial חשובים. בעוד פרוטוקול זה מתאר לנתיחת קוצן, באותה שיטה זו פועלת על מגוון רחב של דגים אחרים.

<table><tbody><tr><td>אשלגן הידרוקסיד (KOH)</td><td>EMD</td><td>PX1480-1</td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G7893-4L</td><td></td></tr><tr><td>10% ניטרלי חוצץ פורמלין (NBF)</td><td>Azer Scientific</td><td>NBF-4-G</td><td></td></tr><tr><td>אליזרין אדום S</td><td>EMD</td><td>AX0485-3</td><td></td></tr><tr><td>משקפיים כיסוי מיקרוסקופ 22 מ"מ x 60 מ"מ</td><td>VWR</td><td>16004-350</td><td></td></tr><tr><td>100 מ"מ x 10 מ"מ זכוכית פטרי צלחת</td><td>קימבל צ'ייס</td><td>23064-10010</td><td>לניתוח דגימות על</td></tr><tr><td>סילגארד 184 ערכת אלסטומר סיליקון</td><td>דבקי אלסוורת'</td><td>184 ערכת סיל אלאסט 0.5 ק"ג</td><td>ניתן לשפוך לתוך צלחות פטרי מזכוכית או פלסטיק להכנת צלחות ניתוח</td></tr><tr><td>דוגמנות חימר</td><td>סרג'נט ארט</td><td>22-4000</td><td>1 ק"ג בקבוקוני</td></tr><tr><td>נצנוץ קרם (מארז של 500)</td> <td>זכוכית בורוסיליקט 986586 וויטון</td><td></td><td>עם מכסה בורג</td></tr><tr><td>מלקחיים-דומונט #5 Inox (טיפ ביולוגי)</td><td>FST</td><td>11252-20</td><td>Dumostars הם מספריים אלטרנטיביים</td></tr><tr><td>לניתוח&nbsp;</td><td>FST</td><td>15003-08</td><td>גדלים חלופיים זמינים בהתאם לגודל המדגם</td></tr><tr><td>ניתוח מיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>S6E עם KL300 LED</td><td>דגמים רבים אחרים עובדים יפה, בעלי בסיס שטוח מסייע</td></tr><tr><td>לצינורות מיקרוצנטריפוגה 1.7 מ"ל</td><td>דנוויל</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>מגש שקופיות קרטון</td><td>פישר</td><td>12-587-10</td><td></td></tr></tbody></table>

dissection ו-הרכבה שטוחה של שלד threespine קוצן branchial

Dissection and Flat-mounting of the Threespine Stickleback Branchial Skeleton

מקטעי הלוע האחוריים של ראש החולייתנים מולידים את השלד המסועף, האתר העיקרי של עיבוד מזון בדגים. המורפולוגיה של השלד הענפי של הדג מותאמת לתזונה של המין. דג תלת-קוצים (Gasterosteus aculeatus) הופיע כמערכת מודל לחקר הבסיס הגנטי וההתפתחותי של הבדלים אבולוציוניים במגוון תכונות. אוכלוסיות ימיות של סטיקלבקים התיישבו שוב ושוב באינספור אגמים ונחלים חדשים של מים מתוקים. הסתגלות לתזונה החדשה בסביבות מים מתוקים אלה עומדת ככל הנראה בבסיס סדרה של שינויים גולגולתיים שהתפתחו שוב ושוב באוכלוסיות מים מתוקים שמקורן באופן עצמאי. אלה כוללים שלושה שינויי דפוס עיקריים בשלד הענף: הפחתה במספר ובאורך עצמות מגרפת הזימים, עלייה במספר שיני הלוע והגדלת אורכי העצם המסועפים. כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט לניתוח והרכבה שטוחה של השלד הענפי הפנימי בדגי סטיקלבק תלת-שדרתיים. חיתוך של כל השלד המסועף התלת מימדי והרכבתו שטוחה להכנה דו-ממדית ברובה מאפשרת הדמיה וכימות קלים של מורפולוגיה של שלד מסועף. שיטת דיסקציה זו זולה, מהירה, קלה יחסית וישימה למגוון רחב של מיני דגים. בסטיקלבק, שיטה יעילה זו מאפשרת לכמת את המורפולוגיה של השלד בהכלאות גנטיות כדי למפות אזורים גנומיים השולטים בדפוס הגולגולת.

<html> תוצאות פרוטוקול זה שלד branchial רכוב גזור ושטוח (איור 4) שבו מגוון של תכונות תזונתיות חשובות ניתן לכמת. מתוך תפיסת גב, כל השורות של rakers זימים, כל צלחות השן בלועה, וכמעט כל עצמות branchial ניתן מדמיינים בקלות לכמת 22 - 24,35,36,38,42. Alizarin האדום S גם מאיר על rhodamine או מסנן אדום דומה המאפשר תיוג כפול עם סמנים אחרים (למשל, מהונדס GFP 42) שיטה חלופית של ויזואליזציה. ...

השלד המסועף, כולל מגרפות זימים, שיני לוע ועצמות מסועפות, משמש כאתר העיקרי לעיבוד מזון ברוב הדגים. כאן אנו מתארים פרוטוקול לניתוח והרכבה שטוחה של השלד הפנימי הזה בסטיקלבק תלת-שדרתי. שיטה זו ישימה גם למגוון מיני דגים אחרים.

Dissection ו-הרכבה שטוחה של שלד Threespine קוצן branchial

The posterior pharyngeal segments of the vertebrate head give rise to the branchial skeleton, the primary site of food processing in fish. The morphology ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבצע דיסקציה והרכבה שטוחה (flat-mount) של השלד הברנכיאלי של דג הסטיקלבק. שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחומי ההתפתחות, הגנטיקה והאבולוציה, כגון כיצד בעלי חיים מסתגלים לסביבות חדשות וכיצד נוצר שונות במורפולוגיה של בוגרים במהלך ההתפתחות.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שעל ידי דיסקציה והרכבה שטוחה (flat-mounting) של השלד הבלעמי, ניתן להבחין במגוון של תכונות טרופיות שלא ניתן לחקור בדגימות שלמות (whole-mount). כהכנה, יש לסקור את המורפולוגיה של שלד הראש של דג הסטיקלבק בעל שלושה קוצים (three spine stickleback). לאחר הכנת הדג לדיסקציה, התחילו בהחדרת פינצטה חדה מספר 5 לצד העין, בזווית של 45 מעלות, כדי לנקב את הקרומי המכסה את העין.לאחר מכן, קלפו את קרומי העין, בדומה להסרת המכסה של גביע יוגורט. כעת, הכניסו פינצטה פתוחה מאחורי העין, אחזו בעצב הראייה והוציאו את העין. היזהרו שלא לנקב את העין, כדי למנוע דליפה של מלנין.חזור על תהליך זה עם העין בצד הנגדי. לאחר מכן, הנח את להב מספריים קטנים תחת הצד האחורי של תflap של ה-opercle, וגזור דרך הרקמה הרכה גבייה מעל ה-opercle, לכיוון מחסום העין. לאחר מכן, גזור דרך עצם המצח, הנמצאת גבית למחסום העין.לאחר מכן, חתכו דרך קו האמצע של עצם ה-parasphenoid, סביב מרכז מחלול העין. חזרו על חיתוך ה-opercle בצד הנגדי. בשלבים הבאים, ניתן להשתמש בקוצי האגן כנקודות אחיזה.אתה פותח אותם על ידי משיכה עדינה ישירות הרחק מהגוף. כעת, הכנס את הפינצטה מתחת לאופרקלום (opercle), וקלף לאט את הפנים מהגוף. תוך כדי התהליך, גזור כל רקמה רכה שעדיין מחוברת.היו זהירים סביב מסנני הזימים, והקפידו לא להפגיע בהם. קל לתפוס בטעות את העצם הריסית הראשונה (ceratobranchial bone), יחד עם ה-percoll, בעת הסרת השלד הפניםי. הסתכלו מתחת ל-percoll בעודכם מקלפים אותו קדימה כדי לוודא שאינכם מחזיקים ברכיב נוסף.כעת, בעזרת פינצטה, נתקו את ה-ceratohyals משני צדי ה-basihyal בקו האמצע, תוך써 קישוף והסרה של השלד הפניםי גולגולתי קדמי (anterior cranial facial skeleton). חזרו על הפעולה בצד המ相对. השלד הפניםי גולגולתי קדמי כולל את הלסת כולה, את כל שלד הלשון (hyoid skeleton), את האלמנטים הגביים והאנדוכונדרליים שמתחתיהם ואת החלק הקדמי של הגולגולת.בשלב הבא, הכניסו פינצטה סגורה ממש מתחת לצינור המעי, וגררו אותה קדימה (אנטריאלית), תוך הפרדת השרירים והרצועות שנותרו המחוברים לשלד הזיקים. לאחר מכן, השתמשו בקצה הפינצטה הסגורה כדי לגרד ולהסיר את השרירים המחברים את השלד הזיקים הגבי (דורסלי) למארז המוח הגחוני (בנטרלי).גרדו בתנועה מאחור לפנים. חזרו על תהליך הסרת השרירים בצדו השני של הדג הקוצני. לאחר מכן, הסירו את שלד הזימים על ידי תפיסת בסיס צינור המעי ומשיכה לכיוון anterior.הפרידו את צינור מערכת העיכול באמצעות חיתוך ניצב, מאחור ל-ceratobranchial החמישי. טעות נפוצה היא תפיסה קדמית מדי של צינור מערכת העיכול, מה שמותיר את הצינור הפרונטלי ונטרלי הרחק מאחור. הקפידו לתפוס בעומק בחלק האחורי של חלל בית החזה; ניתן תמיד להסיר את שארית צינור מערכת העיכול בשלב מאוחר יותר.לאחר הסרת שאריות רססי עצם מבית המוח בצד הגבי (dorsal) של השלד הבלתיות (branchial skeleton), הכניסו מספריים לסל הבלתיות ובצעו חיתוך גבי בין זוגות לוחות השיניים הגביים הדו-צדדיים. יש לשמור על חיתוך מרכזי כדי למנוע נזק ללוחות השיניים הגביים.בשלב הבא, בצעו שני חתכים צידיים רדודים בתוך חלל המעי הגומי בקצה האחורי של השלד הברנכיאלי. בקצה הקדמי של צינור המעי, כדי לסייע בפתיחת השלד הברנכיאלי.כעת, העבירו את השלד למסורת מיקרו-צנטריפוגה המכילה 50% glycerol ו-0.25% potassium hydroxide לצורך הבהרה עדינה. לחלופין, העבירו אותו ל-glycerol טהור אם אין צורך בהבהרה נוספת. אם נדרש צביעה חוזרת, פרטים מופיעים בפרוטוקול הכתוב.כדי להכין את הדגימה להרכבה, החליפו את התמיסה בגליצרין טהור ונערו את המבחנה במשך חמש דקות לפחות. לאחר מכן, הוציאו את השלד הברנכיאלי והניחו אותו קרוב לתחתית של זכוכית כיסוי בגודל 22 על 60 מילימטר, כאשר הצד הגבי פונה כלפי מעלה. כעת, העבירו מספר טיפות של גליצרין על השלד.בשלב הבא, גלגלו שני כדורים קטנים של פלסטלינה, והניחו אחד בכל קצה של זכוכית כיסוי; הם משמשים כמעצברים. לאחר מכן, הניחו בעדינות זכוכית כיסוי שנייה מעל הדגימה, עם לחץ מספיק כדי להשטיח את השלד ה branchial הקדמי. כעת, קלפו בעדינות את המכסה הגבית השמאלית, כולל לוחות השיניים הגביים, והחליקו את המכסה בין זכוכיות הכיסוי.לאחר מכן, בצעו את אותו התהליך עם השפופרת הגבית הימנית. דחפו את כל השלד הזיקיאה הרחק מקצה זכוכית הכיסוי. כדי להשלים את הפרוצדורה, לחצו קלות על זכוכית הכיסוי העליונה כדי לשטח את כדורי החימר.כמות מספיקה כדי לשמור על השלד הברנכיי מקובע בצורה שטוחה, אך לא כל כך הרבה עד שיהיה מעוך. אם במהלך התהליך שורה של רייקרים (rakers) נסתרת, החליקו פינצטה בין הזרימות וסדרו מחדש את ה-ceratobranchial או את כל הדגימה.כאשר הדגימה מורכבת באופן שטוח בגליצרין טהור, ניתן לאחסנה בצורה שטוחה בטמפרטורת החדר למשך עשור לפחות. פרוטוקול זה מביא לשלד בסיסי (branchial skeleton) מנוסח ומורכב באופן שטוח, שבו ניתן לתעד באופן כרונולוגי מגוון של תכונות תזונתיות חשובות.במבט גבי (דורסלי), ניתן לדמות ולתעד בקלות את כל שורות מסנני הזימים, את כל לוחות השיניים הלועיים וכמעט את כל העצמות בראכיאליות. Alizarin red S פולט פלואורסנציה גם תחת פילטר רודמין או פילטר אדום דומה, מה שמאפשר סימון כפול עם סמנים אחרים ושיטות חלופיות לוויזואליזציה. בתמונה זו, מסנני הזימים מסומנים באמצעות סימני קרה (&lt;).שיניים מסומנות בחצי חץ, ועצמות מסומנות בכוכביות. לאחר רכישת המיומנות, ניתן לבצע את הנתיחה תוך דקות ספורות ובמספר מאות בעלי חיים במהירות יחסית. ואף שביצענו הדגמה של נתיחה של שלד בראשו של דג הסטיקלבק, אנו מקווים שפרוצדורה זו תשמש כמדריך עבור מגוון מיני דגים.על ידי נתיחה של השלד הברנקיאלי (branchial skeleton), אנו יכולים להמחיש במהירות ובקלות מגוון של תכונות תזונתיות חשובות, שאינן נראות בדגימות שלמות. דבר זה מאפשר הבנה טובה יותר של ההתפתחות והאבולוציה של השלד הפנים-גולגולתי.

dissection-flat-mounting-threespine-stickleback-branchial

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Visualizing תאים בודדים ברקמות דחוסות, כגון תאים סופניים שוואן (SCS) בneuromuscular צמתים (NMJs), מאתגר. "משכית תמונת הלבנה-" מאפשר תיחום SCS מסוף היחיד, למשל בexplant triangularis sterni השריר, הכנה נוחה עצבי שרירים, שם ניתן לשלב הלבנה רציפה עם הדמית זמן לשגות...

תמונה רציפה-הלבנה להתוות תאי שווא יחידים בצומת Neuromuscular

סרטון זה מתאר טכניקה של בידוד הלב מדגי זברה בשלבים התפתחותיים מרובים כדי לחקור התפתחות לבבית, התבגרות והזדקנות.

דיסקציה של הלב: שיטה להתבוננות בהתפתחות הלב של דגי זברה

תהליכים התפתחותיים כגון התפשטות, דפוסים, בידול, והדרכה האקסון יכולים להיות מודל בקלות בחוט השדרה דג הזברה. במאמר זה, אנו מתארים הליך הרכבה לעוברי דג הזברה, אשר מייעל את ההדמיה של אירועים אלה.

נתיחה והרכבה לרוחב של עוברי דג הזברה: ניתוח התפתחות חוט השדרה

Lampreys לשחזר תנועה לאחר פגיעה בחוט השדרה מלאה. עם זאת, חלק מתאי העצב מקרין שדרה הם regenerators טוב ואחרים לא. מאמר זה ממחיש את הטכניקות לזחלי צמד ים ים דיור (ומבוגרים הפכו לאחרונה), הפקת transections חוט השדרה מלאה והכנת מוח wholemount וחוט שדרה לכלאה באתר.

חוט השדרה מלא פגיעה ומוח Dissection פרוטוקול Wholemount לאחר<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה בזחל ים צמד ים

נייר זה מציג את השיטות המשמשות לחיטוט כימי מרחבית מתואמת, מבני, ותכונות מכאניות של קנה המידה רב שכבתית של מרית Atractosteus (מרית א ') באמצעות nanoindentation, התמרת אינפרא אדום ספקטרוסקופיה (FTIR), במיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM), וה-X ray טומוגרפיה ממוחשבת (CT רנטגן). תוצאות הניסוי שנעשו שימוש כדי לחקור את עקרונות העיצוב של חומרים ביולוגיים מגן.

אפיון של קשקשים דגים שכבתיים Multi-(<em&gt; מרית Atractosteus</em&gt;) באמצעות Nanoindentation, רנטגן CT, FTIR, וSEM

עובר דג הזברה הוא מודל מצוין למחקר בביולוגיה התפתחותית. במהלך עובר, דג הזברה מתפתחת עם מסת חלמון, אשר מציבה אתגרים תלת ממדים לתצפית מדגם וניתוח. פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור הכנות הר שטוחות דו ממדים של הר שלם באתרם דגימות (לוואי) מוכתמות דג הזברה עובר.

הר הכנה שטוחה לתצפית וניתוח של עובר דג הזברה דוגמאות ויטראז בהר שלם<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה

מניפולציות מהונדסות ועריכה הגנום הן קריטיים עבור תפקודית בדיקות התפקידים של גנים ואלמנטים רגולטורית cis. הנה פרוטוקול microinjection מפורט עבור הדור של שינויים גנומיים (כולל מבנים transgene כתב ניאון בתיווך Tol2, TALENs, ו CRISPRs) מוצג לגבי דגים המודל המתהווה, עוקצן threespine.

Microinjection עבור עריכת Transgenesis ו הגנום ב הקוצנים Threespine

ניתוח אלמנטים סופיים הוא כלי בשימוש תכוף לחקירת הביצועים המכניים של מבנים תחת עומס. כאן אנו מיישמים את השימוש בו למידול הביומכניקה של לסת דג הזברה.

בניית מודלים אלמנטים סופיים לחקור ביומכניקה לסת דג הזברה

כאן, אנו מציגים את הפרוטוקול לתרבות רקמות תלת-ממדית של ציר הגוף האחורי של דג הזברה, המאפשר מחקר חי של פילוח בעלי חוליות. מודל הסבר זה מספק שליטה על התארכות הציר, שינוי מקורות מורפוגן והדמיה חיה ברמת הרקמה בתת-תאיות.

תרבות הסבר זנב תלת-ממדית לחקר פילוח בעלי חוליות בזברהפיש

כאן, אנו מתארים כלים ושיטות חישוביות המאפשרים הדמיה וניתוח של נתוני תמונה תלת-ממדיים וארבעה מימדיים של עוברי עכבר בהקשר של התארכות צירית וסגמנטציה, המתקבלים על ידי טומוגרפיה של הקרנה אופטית טוטו, ועל ידי הדמיה חיה וכתם אימונופלואורסצנטי בהר שלם באמצעות מיקרוסקופיה רב-פוטונית.

גישות הדמיה וניתוח תלת-ממדיות וארבעה מימדים לחקר התארכות צירית וסגמנטציה צירית של בעלי חוליות

למדו את שיטת הפריסה השטוחה של שלד הזימים בקוצן שלוש-הקוצים לחקר ביולוגיה התפתחותית ואבולוציונית. טכניקה זו מאפשרת לחוקרים לחקור תכונות טרופיות ולהבין את הסתגלות בעלי חיים לסביבות חדשות.

Dissection ו-הרכבה שטוחה של שלד Threespine קוצן branchial

גלה סרטונים נוספים