Name: מדידת הישרדות שעה Brachionus Rotifers: סנכרון של תנאי האימהי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: למדו פרוטוקול למדידת זמן הישרדות של Brachionus rotifers עם סנכרון תנאי תרבית לאורך דורות. שיטה זו מסייעת לחוקרים בחקר הזדקנות ואקוטוקסיקולוגיה בדיוק גבוה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ג&#39;ורג ג&#39;רוויס, מרתה בוק, ובט היקוקס-לאה, במעבדה לביולוגיה ימית, על עזרתם הצילומים.

1. הכנת Media הערה: השתמש חצי מדולל Brujewicz מי ים מלאכותי של ppt המליחה 16.5 (PSU). Seawaters המלאכותית אחרת גם משמשת לעתים קרובות כדי rotifers תרבות Brachionus 25,26. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 454 מ&quot;מ NaCl, 26 מ&quot;מ MgCl 2, 27 mM MgSO 4, 10 מ&quot;מ KCl, ו -10 מ&quot;מ CaCl 2 כדי 4.5 ליטר של מים מזוקקים (נפח סופי יהיה 5 L). לחלופין, להשתמש במי דילול יונים במקום מים מזוקקים. להוסיף CaCl 2 לאחר המסת כל המלחים האחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את פתרון 3 מניות 0.48 M NaHCO (ריכוז 200x). הוסף 25 מ&quot;ל של אותו הפתרון לעיל. הריכוז הסופי של NaHCO 3 הוא 2.4 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן פתרון המניות 0.4 M NaBr (ריכוז 500x). הוסף 10 מ&quot;ל של אותו הפתרון לעיל. הריכוז הסופי של NaBr הוא 0.8 מ&quot;מ. הפוך עד 5 ליטר עם מים מזוקקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן את הפתרון עם מסנן הממברנה 0.45 מיקרומטר.לדלל אותו פעמיים עם מים סטריליים לפני השימוש (V / V). הערה: אפשר להכין ריכוז 2x של מי ים מלאכותי Brujewicz כפתרון מניות. </li></ol> 2. תנאי תרבות כלליות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות הגדלים במעבדה או rotifers בר-שנתפסו בכוס 100 מ&quot;ל סטרילי בין ג &#39;20 ו -30 מעלות. טמפרטורות גבוהות לגרום תוחלת חיים קצרות יותר ורבייה מואצת. השתמש 25 ° C לנוחיות ניסויים. צפיפות rotifer או הנפח של מי ים מלאכותי אינה בעיה גדולה כאן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיני תרבות microalgae תזונתיים במי ים מלאכותיים 11. ראה ואח סנל. (2014) לפרטים 11. בדרך כלל, להשתמש Tetraselmis tetrathele (~ 2 x 10 5 תאים / מ&quot;ל 27,28), צ &#39; suecica (~ 6 x 10 5 תאים / מ&quot;ל 25,29), ו Nannochloropsis oculata (~ 7 x 10 6 תאים / מ&quot;ל 30,31). מאז אצות דיאטה (מינים, קונדיט תרבותיונים, קומפוזיציות ביוכימי) משפיע זמן ההישרדות משמעותית של rotifers Brachionus, להשתמש באותו הרבה microalga בכל קבוצות הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור אוכלוסיית מניות של rotifers בתרבות תצווה על ידי האכלה והשינוי בתקשורת מדי פעם (למשל, להאכיל כל 2 ימים לחסן כל שבוע). רבים ילודים ומבוגרים נושאות 2-3 ביצים ניתן להבחין כאשר rotifers הם בתנאים אופטימליים. הערה: דרך חלופית להשיג rotifers ניסיוני היא לבקוע ביצים נחות. Rotifers בקע מן הביצים נחות נחשב להיות מסונכרנים היטב, ואת תוחלת החיים שלהם אינה שונה באופן מהותי מזו של rotifers בקע מן הביצים amictic 11. עם זאת, rotifers מביצים נח להתחיל רבייה מוקדם יותר מאלו מביצים amictic. לכן, זהירות נדרשת למדידות של תכונות הרבייה שלהם. </li></ol> סנכרון 3. rotifers ידי תרבות קדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר rotifer אחת מן stאוכלוסייה ותרבות Ock כמתוארת 2.1-2.3 להקים אוכלוסיית משנה אשר תשמש עבור ניסויים. בדרך כלל התרבות במשך שבועיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף rotifers נושאות הביצית מן האוכלוסייה משנה (לאסוף מספר כפול של אנשים אשר ישמשו לצורך הניסוי). תרבות בם עוקבה יחידה (צפיפות: ~ 50 אנשים / מיליליטר) בצלחת תרבות 6 היטב כמתואר 2.1-2.3 בתוך תקשורת טריה תחת האכלה כרצונך. שליטת צפיפות אוכלוסייה חשובה כי המדיום המותנה משפיע פיזיולוגית רבייה של rotifers Brachionus 32,33. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבר בילודים בקעו מן הביצים הראשונות של המבוגרים למדיה ותרבות מוכנים חדש. חזור על הליך זה על פני 2-3 דורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בילודים בקעו בתוך פרק זמן מסוים (למשל, &lt;3 שעות) למדידת זמן ההישרדות. כדי למנוע הטיות אפשריות בבחירת האדם היחיד, אם כי מאוד לא סביר, לבדוק שחזור באמצעות מספר indeתת-אוכלוסיות משתלשלות. הערה: כפי rotifers בדרך כלל לשחזר רק asexually תחת תנאי זה, להבטיח ללא זכרים נוכחים לאורך כל הניסוי. הזכרים קטנים יותר בילודים ובדרך כלל לנוע מהר יותר מאשר נקבות. לנקבות יש Mictic: אורך חיים שונים נקבות amictic בתנאים מסוימים 29. </li></ol> 4. מדידות של הישרדות זמן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בילודים מקום בצלחות פלסטיק (בדרך כלל 24 או צלחות 48-היטב, עם כל 1 מ&quot;ל המכיל גם של מי ים מלאכותיים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגיל 24 מרווחי hr, להעביר את rotifers למדיה ותרבות המוכנות חדש או ב 12 מרווחי hr אם בטמפרטורה גבוהה (30 ° C ומעלה). רשום את מספר הצאצאים והאם כל אדם חי או מת. רשום את rotifer כמת כאשר תנועת ריסים של העטרה הפסיקה לחלוטין. הערה: rotifers לעתים קרובות לצרף הקירות הצדדיים של בארות. pipetting העדין של המים מסייע למצוא אותם. אם rotifers לא נמצא או arדואר ניזוק באופן מקרי על ידי pipetting, להקליט אותם, כמו &quot;צנזורה&quot;, לא כמו &quot;מת&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סור בילודים כאשר rotifers הניסיון להתרבות באופן פעיל. ילודים לצמוח במהירות וזה לפעמים קשה להבדיל ביניהם לבין rotifers הניסיון. </li></ol> ניתוח 5. נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור את עקומת ההישרדות קפלן-מאייר (איורים 1 ו -2) על ידי התוויית שיעור ההישרדות המצטברת על ציר Y וזמן על ציר X. זהו הייצוג הנפוץ ביותר של נתוני הישרדות. השתמש בבדיקת הלא פרמטרית log-rank (נקרא גם מבחן מנטל-קוקס) עבור השוואה סטטיסטית של זמן ההישרדות 34. מבחן log-rank כלול גם חבילות סטטיסטיות מקובלות אחרות כגון JMP ור &#39; הערה: אל תשתמש מבחן t או הניתוח של סטודנטים שונים (ANOVA) ואחריו השוואה מרובה פרמטרית כי התפלגות נורמלית בדרך כלל לא פגשה נתוני הישרדות 35. כמו כן, אלה methods לא לוקח אנשים מצונזרים בחשבון. מאן-ויטני U הבדיקה יכולה לשמש אם אין נתונים מצונזרים. </li></ol>

<ol><li>Wallace, R. L., Snell, T. W., Ricci, C., Nogrady, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWallace%2C+RL+%22Rotifera+Vol.1%3A+Biology%2C+ecology+and+systematics%22">Rotifera Vol.1: Biology, ecology and systematics</a>. , 2nd edn, SPB Academic Publishing. (2006).</li>
<li>Segers, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSegers%2C+H+%22Annotated+checklist+of+the+rotifers+%28Phylum+Rotifera%29%2C+with+notes+on+nomenclature%2C+taxonomy+and+distribution%22">Annotated checklist of the rotifers (Phylum Rotifera), with notes on nomenclature, taxonomy and distribution</a>. , Magnolia Press. Auckland. (2007).</li>
<li>Mark Welch, D. B., Meselson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+the+evolution+of+bdelloid+rotifers+without+sexual+reproduction+or+genetic+exchange%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence for the evolution of bdelloid rotifers without sexual reproduction or genetic exchange.</a> Science. 288 (5469), 1211-1215 (2000).</li>
<li>Suga, K., Mark Welch, D., Tanaka, Y., Sakakura, Y., Hagiwara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+expressed+sequence+tags+of+the+cyclically+parthenogenetic+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Analysis of expressed sequence tags of the cyclically parthenogenetic rotifer Brachionus plicatilis.</a> PLoS ONE. 2, e671(2007).</li>
<li>Denekamp, N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+genes+associated+with+dormancy+in+the+monogonont+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Discovering genes associated with dormancy in the monogonont rotifer Brachionus plicatilis.</a> BMC Genomics. 10, 108(2009).</li>
<li>Lee, J. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequence+analysis+of+genomic+DNA+%28680+Mb%29+by+GS-FLX-Titanium+sequencer+in+the+monogonont+rotifer%2C+Brachionus+ibericus%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Sequence analysis of genomic DNA (680 Mb) by GS-FLX-Titanium sequencer in the monogonont rotifer, Brachionus ibericus.</a> Hydrobiologia. 662 (1), 65-75 (2010).</li>
<li>Flot, J. -F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+evidence+for+ameiotic+evolution+in+the+bdelloid+rotifer+Adineta+vaga%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genomic evidence for ameiotic evolution in the bdelloid rotifer Adineta vaga.</a> Nature. 500 (7463), 453-457 (2013).</li>
<li>Dunn, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broad+phylogenomic+sampling+improves+resolution+of+the+animal+tree+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Broad phylogenomic sampling improves resolution of the animal tree of life.</a> Nature. 452 (7188), 745-749 (2008).</li>
<li>Yoshinaga, T., Kaneko, G., Kinoshita, S., Tsukamoto, K., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+mechanisms+of+life+history+alterations+in+a+rotifer%3A+a+novel+approach+in+population+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+B+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The molecular mechanisms of life history alterations in a rotifer: a novel approach in population dynamics.</a> Comp. Biochem. Physiol. B Biochem. Mol. Biol. 136 (4), 715-722 (2003).</li>
<li>Dahms, H. -U., Hagiwara, A., Lee, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecotoxicology%2C+ecophysiology%2C+and+mechanistic+studies+with+rotifers%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Ecotoxicology, ecophysiology, and mechanistic studies with rotifers.</a> Aquat. Toxicol. 101 (1), 1-12 (2011).</li>
<li>Snell, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotifers+as+models+for+the+biology+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Hydrobiol%22%5BJournal%5D)">Rotifers as models for the biology of aging.</a> Int. Rev. Hydrobiol. 99 (1-2), 84-95 (2014).</li>
<li>Snell, T. W., Johnston, R. K., Gribble, K. E., Mark Welch, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotifers+as+experimental+tools+for+investigating+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Invertebr.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Rotifers as experimental tools for investigating aging.</a> Invertebr. Reprod. Dev. 59, Suppl 1. 5-10 (2015).</li>
<li>Kaneko, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+Mn-superoxide+dismutase+and+gene+expression+studies+in+dietary+restricted+Brachionus+plicatilis+rotifers%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of Mn-superoxide dismutase and gene expression studies in dietary restricted Brachionus plicatilis rotifers.</a> Hydrobiologia. 546, 117-123 (2005).</li>
<li>Yoshinaga, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-like+growth+factor+signaling+pathway+involved+in+regulating+longevity+of+rotifers%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Insulin-like growth factor signaling pathway involved in regulating longevity of rotifers.</a> Hydrobiologia. 546, 347-352 (2005).</li>
<li>Ozaki, Y., Kaneko, G., Yanagawa, Y., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorie+restriction+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+enhances+hypoxia+tolerance+in+association+with+the+increased+mRNA+levels+of+glycolytic+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Calorie restriction in the rotifer Brachionus plicatilis enhances hypoxia tolerance in association with the increased mRNA levels of glycolytic enzymes.</a> Hydrobiologia. 649 (1), 267-277 (2010).</li>
<li>Kailasam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+calorie+restriction+on+the+expression+of+manganese+superoxide+dismutase+and+catalase+under+oxidative+stress+conditions+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of calorie restriction on the expression of manganese superoxide dismutase and catalase under oxidative stress conditions in the rotifer Brachionus plicatilis.</a> Fish. Sci. 77 (3), 403-409 (2011).</li>
<li>Garcìa-Garcìa, G., Sarma, S., Núñez-Orti, A. R., Nandini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+mixture+of+two+endocrine+disruptors+%28ethinylestradiol+and+levonorgestrel%29+on+selected+ecological+endpoints+of+Anuraeopsis+fissa+and+Brachionus+calyciflorus+%28Rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Hydrobiol%22%5BJournal%5D)">Effects of the mixture of two endocrine disruptors (ethinylestradiol and levonorgestrel) on selected ecological endpoints of Anuraeopsis fissa and Brachionus calyciflorus (Rotifera).</a> Int. Rev. Hydrobiol. 99 (1-2), 166-172 (2014).</li>
<li>Yang, J., Mu, Y., Dong, S., Jiang, Q., Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+expression+of+four+heat+shock+proteins+during+the+aging+process+in+Brachionus+calyciflorus+%28rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress+Chaperones%22%5BJournal%5D)">Changes in the expression of four heat shock proteins during the aging process in Brachionus calyciflorus (rotifera).</a> Cell Stress Chaperones. 19 (1), 33-52 (2014).</li>
<li>Han, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublethal+gamma+irradiation+affects+reproductive+impairment+and+elevates+antioxidant+enzyme+and+DNA+repair+activities+in+the+monogonont+rotifer+Brachionus+koreanus%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Sublethal gamma irradiation affects reproductive impairment and elevates antioxidant enzyme and DNA repair activities in the monogonont rotifer Brachionus koreanus.</a> Aquat. Toxicol. 155, 101-109 (2014).</li>
<li>Gribble, K. E., Jarvis, G., Bock, M., Mark Welch, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+caloric+restriction+partially+rescues+the+deleterious+effects+of+advanced+maternal+age+on+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Maternal caloric restriction partially rescues the deleterious effects of advanced maternal age on offspring.</a> Aging Cell. 13 (4), 623-630 (2014).</li>
<li>Yoshinaga, T., Hagiwara, A., Tsukamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+periodical+starvation+on+the+survival+of+offspring+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of periodical starvation on the survival of offspring in the rotifer Brachionus plicatilis.</a> Fish. Sci. 67 (2), 373-374 (2001).</li>
<li>Kaneko, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorie+restriction-induced+maternal+longevity+is+transmitted+to+their+daughters+in+a+rotifer%5BTitle%5D)+AND+%22Funct.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Calorie restriction-induced maternal longevity is transmitted to their daughters in a rotifer.</a> Funct. Ecol. 25 (1), 209-216 (2011).</li>
<li>Lansing, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transmissible%2C+cumulative%2C+and+reversible+factor+in+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">A transmissible, cumulative, and reversible factor in aging.</a> J. Gerontol. 2 (3), 228-239 (1947).</li>
<li>Yoshinaga, T., Hagiwara, A., Tsukamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+periodical+starvation+on+the+life+history+of+Brachionus+plicatilis+O.+F.+M%C3%BCller+%28Rotifera%29%3A+a+possible+strategy+for+population+stability%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Mar.+Biol.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Effect of periodical starvation on the life history of Brachionus plicatilis O. F. Müller (Rotifera): a possible strategy for population stability.</a> J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 253 (2), 253-260 (2000).</li>
<li>Gribble, K. E., Kaido, O., Jarvis, G., Mark Welch, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+intraspecific+variability+in+the+response+to+caloric+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Patterns of intraspecific variability in the response to caloric restriction.</a> Exp. Gerontol. 51, 28-37 (2014).</li>
<li>Snell, T. W., Johnston, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycerol+extends+lifespan+of+Brachionus+manjavacas+%28Rotifera%29+and+protects+against+stressors%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Glycerol extends lifespan of Brachionus manjavacas (Rotifera) and protects against stressors.</a> Exp. Gerontol. 57, 47-56 (2014).</li>
<li>Kim, H. -J., Hagiwara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+female+aging+on+the+morphology+and+hatchability+of+resting+eggs+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+M%C3%BCller%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Effect of female aging on the morphology and hatchability of resting eggs in the rotifer Brachionus plicatilis Müller.</a> Hydrobiologia. 662 (1), 107-111 (2011).</li>
<li>Kim, H. -J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-dependent+transcriptional+events+during+resting+egg+hatching+of+the+rotifer+Brachionus+manjavacas%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Genomics%22%5BJournal%5D)">Light-dependent transcriptional events during resting egg hatching of the rotifer Brachionus manjavacas.</a> Mar. Genomics. 20, 25-31 (2015).</li>
<li>Gribble, K. E., Welch, D. B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life-span+extension+by+caloric+restriction+is+determined+by+type+and+level+of+food+reduction+and+by+reproductive+mode+in+Brachionus+manjavacas+%28Rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Life-span extension by caloric restriction is determined by type and level of food reduction and by reproductive mode in Brachionus manjavacas (Rotifera).</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 68 (4), 349-358 (2013).</li>
<li>Kaneko, G., Kinoshita, S., Yoshinaga, T., Tsukamoto, K., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+expression+patterns+of+stress+protein+genes+during+population+growth+of+the+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Sci%22%5BJournal%5D)">Changes in expression patterns of stress protein genes during population growth of the rotifer Brachionus plicatilis.</a> Fish. Sci. 68 (6), 1317-1323 (2002).</li>
<li>Kim, H. J., Sawada, C., Hagiwara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+and+reproduction+of+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+species+complex+under+different+light+wavelengths+and+intensities%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Hydrobiol%22%5BJournal%5D)">Behavior and reproduction of the rotifer Brachionus plicatilis species complex under different light wavelengths and intensities.</a> Int. Rev. Hydrobiol. 99 (1-2), 151-156 (2014).</li>
<li>Yoshinaga, T., Hagiwara, A., Tsukamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+conditioned+media+on+the+asexual+reproduction+of+the+monogonont+rotifer+Brachionus+plicatilis+O.+F.+M%C3%BCller%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Effect of conditioned media on the asexual reproduction of the monogonont rotifer Brachionus plicatilis O. F. Müller.</a> Hydrobiologia. 412, 103-110 (1999).</li>
<li>Ohmori, F., Kaneko, G., Saito, T., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+growth-promoting+protein+in+the+conditioned+media+from+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+at+an+early+exponential+growth+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">A novel growth-promoting protein in the conditioned media from the rotifer Brachionus plicatilis at an early exponential growth phase.</a> Hydrobiologia. 667 (1), 101-117 (2011).</li>
<li>GraphPad Statistics Guide. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.graphpad.com/guides/prism/6/statistics/">http://www.graphpad.com/guides/prism/6/statistics/</a> (2015).</li>
<li>Collet, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCollet%2C+D+%22Modelling+Survival+Data+in+Medical+Research%22">Modelling Survival Data in Medical Research</a>. , 2nd edn, Chapman & Hall/CRC. 151-193 (1993).</li>
<li>Bouliotis, G., Billingham, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossing+survival+curves%3A+alternatives+to+the+log-rank+test%5BTitle%5D)+AND+%22Trials%22%5BJournal%5D)">Crossing survival curves: alternatives to the log-rank test.</a> Trials. 12, Suppl 1. A137(2011).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+expression+of+manganese+superoxide+dismutase%2C+copper+and+zinc+superoxide+dismutase+and+catalase+in+Brachionus+calyciflorus+during+the+aging+process%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">Changes in expression of manganese superoxide dismutase, copper and zinc superoxide dismutase and catalase in Brachionus calyciflorus during the aging process.</a> PloS ONE. 8 (2), e57186(2013).</li>
<li>Snell, T. W., Johnston, R. K., Rabeneck, B., Zipperer, C., Teat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+inhibition+of+TOR+and+JNK+pathways+interacts+to+extend+the+lifespan+of+Brachionus+manjavacas+%28Rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Joint inhibition of TOR and JNK pathways interacts to extend the lifespan of Brachionus manjavacas (Rotifera).</a> Exp. Gerontol. 52, 55-69 (2014).</li>
<li>Klass, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+in+nematode+Caenorhabditis-elegans+-+major+biological+and+environmental-factors+influencing+life-span%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Ageing+Dev%22%5BJournal%5D)">Aging in nematode Caenorhabditis-elegans - major biological and environmental-factors influencing life-span.</a> Mech. Ageing Dev. 6 (6), 413-429 (1977).</li>
<li>Priest, N. K., Mackowiak, B., Promislow, D. E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+parental+age+effects+on+the+evolution+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">The role of parental age effects on the evolution of aging.</a> Evolution. 56 (5), 927-935 (2002).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה למדידת זמן ההישרדות rotifers Brachionus. השלב הקריטי הוא סנכרון תנאי rotifer במשך כמה דורות. כאשר rotifers ניסיוני מסונכרנים היטב, עקומת ההישרדות לי סוג טיפוסי הוא ציין עם תמותה מוקדמת מעט מאוד כפי שדווח בכמה מחקרים קודמים 18,24,37,38. סטיות התקן של זמן ההישרדות שלהם ולכן נעשים קטנות יותר לעומת rotifers המסונכרן היטב, וכתוצאה מכך הכח סטטיסטי גבוה. סנכרון צפוי גם להגדיל שחזור של מדידות זמן הישרדות - כי אמהות מתורבתות בתנאים אופטימליים,...

Rotifers הוא זואופלנקטון מיקרוסקופי קוסמופוליטית (&lt;1 מ&quot;מ) המהווה את המערכה Rotifera 1. יש להם תוכנית פשוטה הגוף מורכב כ -1,000 תאים סומטיים כמו גם מנגנון ריסי גלגל דמוי מאפיין שנקרא קורונה, אשר משמש לתנועה והאכלה. רוב rotifers שייכים כיתות Monogononta או Bdelloidea, המכילים כ -1,600 ו -500 מינים, בהתאמה 2. Rotifers Monogonont יש בדרך כלל שני שלבי רבייה מיניים מינית (בשכפול הגנטי מחזורי), בעוד rotifers bdelloid לשכפל בשכפול גנטי 3 חובה. בסך הכול אפשר להשיג אנשי rotifer זהים גנטי, אשר מבטיח שחזור גבוה בניסויים. בנוסף, יש להם כמה יתרונות אחרים כמו אורגניזמים מודל, כגון תוחלת חיים קצרה, קלות תרבות, זמינות של נתוני רצף גנומי transcriptomic 4-7, ו עמדת פילוגנטי ייחודית רחוקה מנקודהrthropods נמטודות 8. Rotifers ולכן מבטיח מודלים חסרי חוליות ב אקולוגית, טוקסיקולוגית, והזדקנות מחקרים 9-12. זמן ההישרדות תחת חשיפה ללחץ או כימיקלים סביבתיים הוא פרמטר נמדד לעתים קרובות בתחומי מחקר אלה 13-19. עם זאת, זהירות נדרשת כאשר מודד את זמן ההישרדות של rotifers כי זה רגיש לתנאי סביבה של האמהות שלהם. כלומר, בתוך manjavacas monogonont rotifer Brachionus, צאצא נקבה מאמהות בגילאי יש תוחלת חיים קצרה יותר מאשר אלו של אמהות צעירות; עם זאת, הגבלת קלוריות אימהיות (CR) מקזזת בחלקה את ההשפעות המזיקות של גיל האם מתקדם 20. ב B. plicatilis, אימהית CR מספק לאריכות הצאצאים, זמן ההישרדות הארוך תחת רעב והתנגדות סטרס חמצוני הגבוהות הכרוכות עם ביטוי מוגבר של אנזימים נוגדי חמצון 21,22. השפעת גיל האםגם נצפה rotifers bdelloid 23. לכן, תנאי rotifers ניסיוני צריכים להיות מתואמים היטב במשך כמה דורות לפני המדידות של זמן הישרדות. כאן אנו מספקים פרוטוקול מדידת זמן הישרדות rotifers Brachionus הבא סנכרון של תנאי תרבות במשך כמה דורות. צום לסירוגין (IF), וריאציה של CR איפה rotifers ניזונים מעת לעת, יושמה כדי לחשוף את השפעת הסנכרון בשל ההשפעות הידועות של IF על אריכות ימים 22,24.

<table><tbody><tr><td>נתרן כלורי</td><td>Wako</td><td>190-13921</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד</td><td>Wako</td><td>136-03995</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום גופרתי</td><td>Wako</td><td>131-00427</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>Wako</td><td>168-22111</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלורי</td><td>Wako</td><td>035-00455</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td>Wako</td><td>199-05985</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ברומיד</td><td>Wako</td><td>190-01515</td><td></td></tr><tr><td>מסנן ממברנה (0.45 ומיקרו; m גודל נקבוביות)</td>צלחת תרבית <td>HAWP04700</td><td></td> <td>Millipore</td></tr><tr><td>, 6 בארות, לא מטופלת</td><td>תומס סיינטיפיק</td><td>6902D01</td> צלחת תרבית <td>תחתונה</td></tr><tr><td>שטוחה, 48 בארות, לא מטופלת</td><td>תומאס סיינטיפיק</td><td>6902D07</td><td>תחתית שטוחה</td></tr><tr><td>Tetraselmis, חברת</td><td>אספקה ביולוגית של קרוליינה</td> חיה <td>152610</td><td></td></tr><tr><td>PRISM 6</td><td>תוכנת GraphPad</td><td>גרסה 6.0d</td><td></td></tr></tbody></table>

מדידת הישרדות שעה<em&gt; brachionus</em&gt; rotifers: סנכרון של תנאי האימהי

Measurement of Survival Time in Brachionus Rotifers: Synchronization of Maternal Conditions

הרוטיפרים הם זואופלנקטון קוסמופוליטיים מיקרוסקופיים המשמשים כמודלים במחקרים אקוטוקסיקולוגיים והזדקנות בשל יתרונותיהם הרבים כגון תוחלת חיים קצרה, קלות תרבית ופרתנוגנזה המאפשרת תרבית משובטת. עם זאת, נדרשת זהירות בעת מדידת זמן ההישרדות שלהם מכיוון שהוא מושפע מגיל האם ומתנאי האכלה של האם. כאן אנו מספקים פרוטוקול למדידה רבת עוצמה וניתנת לשחזור של זמן ההישרדות ברוטיפרים של ברכיונוס לאחר סנכרון קפדני של תנאי התרבית לאורך מספר דורות. מבחינה אמפירית, סנכרון לקוי מביא לתמותה מוקדמת ולירידה הדרגתית בשיעור ההישרדות, וכתוצאה מכך כוח סטטיסטי חלש. ואכן, בתנאים כאלה, הגבלת קלוריות (CR) לא הצליחה להאריך משמעותית את תוחלת החיים של B. plicatilis, אם כי אריכות ימים הנגרמת על ידי CR הוכחה עם דגימות רוטיפר מסונכרנות היטב במחקרים בעבר ובהווה. פרוטוקול זה כנראה שימושי עבור מודלים אחרים של חסרי חוליות, כולל זבוב הפירות Drosophila melanogaster והנמטודה Caenorhabditis elegans, מכיוון שדווחו גם השפעות גיל אימהיות במינים אלה.

איור 1 מציג עקומות הישרדות נציג של אוכלוסיות מסונכרנות היטב (מתוך שני משכפל). בניסוי זה, rotifers היו או היומיום הפד [כרצונך (AL) הקבוצה] או בכל יום אחר (IF קבוצה). חציון ההישרדות עמד על 13 ו -18 ימים באזור אל ואם קבוצות, בהתאמה. למרות זאת ידוע היטב שאם מרחיב את תוחלת החיים של rotifer, הניסוי הזה נכשל לזהות הבדל מובהק סטטיסטית בין תוחלת החיים של AL ואם קבוצות. מבחינה אמפירית, תוצאות סנכרון מספיק תמותה מוקדמת וירידות ...

רוטיפרים הם זואופלנקטון מיקרוסקופיים המשמשים כמודלים במחקרים אקוטוקסיקולוגיים והזדקנות. כאן אנו מספקים פרוטוקול למדידה עוצמתית וניתנת לשחזור של זמן ההישרדות ברוטיפרים של ברכיונוס. סנכרון תנאי התרבות לאורך מספר דורות הוא בעל חשיבות מיוחדת מכיוון שמצב האם משפיע על היסטוריית החיים של הצאצאים.

מדידת הישרדות שעה<em&gt; Brachionus</em&gt; Rotifers: סנכרון של תנאי האימהי

Rotifers are microscopic cosmopolitan zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies due to their several advantages such as short ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא למדוד במדויק את זמן ההישרדות של Rotifers מסוג Brachionus, תוך ביטול השפעות מזיקות אפשריות של דורות האם. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח במחקר על הזדקנות.על ידי אספקת דרך מהימנה למדידת זמן ההישרדות של רוטיפרים. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא ניתנת לשחזור ובעלת עוצמה סטטיסטית גבוהה. לתחילת הפעולה, ל-4.5 liters של מים מזוקקים או דיוניזים לדילול, יש להוסיף 454 millimolar sodium chloride, 26 millimolar magnesium chloride, 27 millimolar magnesium sulfate, ten millimolar potassium chloride, ו-ten millimolar calcium chloride.הכינו תמיסת מלאי של נתרן ביקרבונט בריכוז 0.48 מולרי. הוסיפו 25 מיליליטר ממנה לתמיסת המלח שהוכנה זה עתה. הכינו תמיסת מלאי של נתרן ברומיד בריכוז 0.4 מולרי.הוסיפו עשרה מיליליטר של התמיסה לתמיסת המלח. לאחר מכן, השלימו את נפח תמיסת המלח לחמישה ליטרים באמצעות מים מזוקקים. לבסוף, סננו את התמיסה באמצעות ממברנת סינון של 0.45 micrometer.כדי לגדל רטיפרוס שגודלו במעבדה או כאלה שנלכדו בטבע, הניחו אותם בכלי כימי סטרילי בנפח 100 milliliter של מי ים מלאכותיים. גדלו אותם בטמפרטורה של 25 degrees Celsius. בהתאם לשיטות של Snell, גדלו מיני מיקרו-אצות לתזונה במי ים מלאכותיים.יש לוודא שנעשה שימוש באותה סדרת מיקרו-אצות בכל הקבוצות הניסוייות. יש לתחזק אוכלוסיית מלאי של רטיפורים בתרבית אצוות (batch culture) על ידי האכלתם מדי יומיים והחלפת המצע מדי שבוע.ניתן להבחין בילודים רבים ובבוגרים הנושאים שתי עד שלוש ביצים כאשר רטיפורים נמצאים בתנאים אופטימליים. כדי לסנכרן רטיפורים באמצעות תרבית מקדימה, בחר רטיפור בודד מאוכלוסיית המקור. טפח אותו במי ים מלאכותיים בכלי כימי של 100 milliliter כפי שתוסבר לעיל, למשך כשבועיים.לאחר הדגירה, אספו רוטיפרים נושאי ביצים מתוך תת-האוכלוסייה. גדלו אותם כקוהורט יחיד על ידי הנחת כ-50 רוטיפרים למיליליטר של מי ים בבארות של פלטת שש בארות, והאכילו אותם ad libitum. כאשר הביצים יבקיעו, העבירו את הניאונטים למצע גידול שהוכן טרי.חזור על תהליכי הטיפוח וההעברה של הצאצאים לאורך שני עד שלושה דורות. כדי למדוד את זמן ההישרדות, מקם צאצאים שבקעו בטווח זמן של שלוש שעות בבארות של פלטות בעלות 24 או 48 בארות המכילות 1 ml של מי ים מלאכותיים. במרווחי זמן של 12 או 24 שעות, העבר את הרוטיפרים למצע גידול שהוכן טרי.רשמו את מספר הצאצאים, והאם כל פרט מת או חי. רשמו את הרוטיפר כמת כאשר תנועת הריסונים של ה-corona פסקה לחלוטין. כאשר הרוטיפרים הניסוייים מתרבים באופן פעיל, הסירו את הניאונטים (neonates) מכיוון שהם גדלים במהירות ולעיתים קשה להבדיל בינם לבין הרוטיפרים הניסוייים.בצעו את ניתוח הנתונים בהתאם לפרוטוקול הכתוב. איור זה מציג עקומות הישרדות משני חזרות של אוכלוסיות rotifer שסנכרונן באופן לקוי. הוזנו באופן ad libitum, כפי שמוצג ב-A-L, או בכל יום שני, כפי שמוצג כצום לסירוגין, I-F.חציון ההישרדות היה 13 ו-18 ימים, בהתאמה, בשתי הקבוצות. למרות שהדבר ידוע היטב, צום לסירוגין מאריך את תוחלת החיים של הרוטיפר, ההבדלים לא היו מובהקים סטטיסטית. בניסוי זה, תנאי הרוטיפר היו אופטימליים ומסונכרנים היטב.והבעליים נטו לשרוד עד לשלב המאוחר של הניסוי. הישרדות החציון הייתה 13 ימים עבור רטיפורים ב-AL, ו-20 ימים עבור קבוצות ה-IF. נתון זה היה מובהק סטטיסטית.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן סנכרון תנאי המחזור של הרוטיפרים. אנו מקווים שפרוטוקול זה ישפר את השימוש ברוטיפרים כתוספת, כהבסביב למחקר על אורגניזמי מודל ומחקר על הזדקנות.

measurement-survival-time-brachionus-rotifers-synchronization

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

במאמר זה אנו מציגים את פרוטוקול כללי למדידת אורך החיים של נמטודות שמרו על התקשורת עם מזון מוצק-UV הרג חיידקים.

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק

בסרטון זה אנו מראים שיטה ליצירת אוכלוסייה מסונכרנת התפתחותית של C. elegans בוגרים סטריליים. הפרוטוקול לדוגמה מסנכרן תולעים כדי לחקור את שיעורי צריכת החמצן בבעלי חיים חיים.

סנכרון נמטודות: שיטה להשגת אוכלוסיות של תולעים בשלבי התפתחות זהים

סרטון זה מתאר שיטה מסורתית מבוססת לוחות למדידת תוחלת החיים של C. elegans. הפרוטוקול לדוגמה מודד את תוחלת החיים של תולעים שטופלו ב-RNAi.

ניתוח תוחלת חיים: מדידת אריכות ימים של C. elegans

כאן אנו מפרטים פרוטוקולים שתוכננו במיוחד לניטור פגמים מורפוגניים המתרחשים בשלבים מוקדמים ומאוחרים של התארכות עוברית של הנמטודה Caenorhabditis elegans. בסופו של דבר, פרוטוקולים אלה נועדו לזהות גנים המווסתים את השלבים הללו ולאפיין את הדרישות הדיפרנציאליות שלהם לאורך הציר הקדמי-אחורי של העובר.

מדדי רומן לאפיון התארכות עוברית של נמטודות<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

מחקרים ארוכי טווח חיוניים להבנת תהליך האבולוציה ולא על מנגנוני הסתגלות. באופן כללי, מחקרים אלה דורשות התחייבויות מעבר חיים החוקרים. . הנה, שיטה חזקה מתואר באופן דרמטי ההתקדמות איסוף נתונים המדינה-of-the-art להפיק נתוני האורך בתוך מערכות טבעיות.

תחיית המתים של רדום דפניה מגנה: פרוטוקול ויישומים

כאן נתאר שיטת עותקים משוכפלים, גישה באופן כמותי מודדים C. elegans תוחלת החיים/הישרדות, healthspan באופן תפוקה גבוהה וחזק, ובכך לאפשר הקרנה של מצבים רבים מבלי להתפשר על איכות הנתונים. פרוטוקול זה מפרט את האסטרטגיה, ומספק כלי תוכנה לניתוח של נתונים המשוכפלים.

השיטה קבע עותק משוכפל: בגישה תפוקה גבוהה באופן כמותי מידה Caenorhabditis elegans תוחלת החיים

נשימה מיטוכונדריאלי חיוני להישרדות organismal; לכן, קצב צריכת החמצן היא מדד מצוין של בריאות מיטוכונדריאלי. פרוטוקול זה, אנו מתארים את השימוש respirometer זמינים מסחרית כדי למדוד הבזליים, שיעורי צריכת חמצן מירבית חיים, שלמים, ולא תאי בחופשיות Caenorhabditis elegans.

מדידה של קצב הצריכה של חמצן בשלם Caenorhabditis elegans

כאן, אנו מאפיינים את התגובות הסלולר מדגיש התגובה התאית ב-נמטודות C. אלגיה על ידי מדידת ההפעלה של כתבים פלורסנט ההמרה ולומר רגישות ללחץ פיזיולוגי.

מדידות התגובות הפיזיולוגיות של הלחץ בג. אלגיה

Caenorhabditis elegans משמשים כמערכת מודל מצוינת עם שיטות חזקות ובעלות נמוכה לסקר את תוחלת החיים, תוחלת החיים והחוסן ללחץ.

סקר שיטות בעלות נמוכה למדידת תוחלת החיים ותוחלת הבריאות ב - Caenorhabditis elegans

כאן, אנו מציגים שיטה כללית לקביעת הכדאיות העוברית והמספר הכולל של עוברים המיוצרים (brood) באמצעות אורגניזם המודל C. elegans.

מדידת כדאיות עוברית וגודל הברוד ב- Caenorhabditis elegans

למדו פרוטוקול למדידת זמן הישרדות של Brachionus rotifers עם סנכרון תנאי תרבית לאורך דורות. שיטה זו מסייעת לחוקרים בחקר הזדקנות ואקוטוקסיקולוגיה בדיוק גבוה.

מדידת הישרדות שעה

גלה סרטונים נוספים